COLESTEROL
1. OBJETIVO: Determinar la concentración de colesterol en
sangre método enzimático por reacción del punto final.
2. DEFINICIONES:
Colesterol: El colesterol sanguíneo se presenta en forma
de esterol libre y en forma esterificada. El conocimiento
del nivel lipídico plasmático (colesterol y triglicéridos)
junto con el de las lipoproteínas de alta y baja densidad
(HDL y LDL) son de gran ayuda en la detección de muchas
condiciones ligadas a alteraciones metabólicas de alto
riesgo. El desequilibrio del nivel de lipoproteínas
plasmáticas conduce a las hiperlipoproteinemias, grupo de
desórdenes que afectan los niveles de lípidos séricos
causantes de la enfermedad cardíaca coronaria (ECC) y la
arterioesclerosis, en las que los niveles de colesterol son
importantes en su diagnóstico y clasificación.
3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:
Fundamento: Se basa en el uso de tres enzimas: colesterol
esterasa (CE), colesterol oxidasa (CO) y peroxidasa (POD). En
presencia de este último la mezcla de fenol y 4-aminoantipirina (4-
AA) se condensan por acción del peróxido de hidrógeno, formando
una quinonaimina coloreada proporcional a la concentración de
colesterol en la muestra y se mide a 500 nm. (Método colorimétrico
de punto final).
Esteres de colesterol colesterol Colesterol + ácidos grasos
Esterasa
Colesterol + O2 Colesterol colestenona + H2O2
Oxidasa
2 H2O2 + fenol + 4 AA peroxidasa Antipirilquinonimina + 4 H2O}
3.1.1. Muestra requerida: Suero
3.1.2. Cantidad de muestra:10 ul.
3.1.3. Requisitos que debe cumplir la muestra: No
hemolizado, limpio y fresco
3.2. Equipos, materiales y reactivos:
.
3.2.1. Equipos:
Centrifuga
Espectrofotómetro o fotocolorímetro 500 nm(+10)
Baño maría a 37ºC
Vortex
3.2.2. Materiales:
Micropipetas :10 a 100;100 a 1000 ul
Tubos de hemólisis (tubos de Stat fax)
Reloj marcador
3.2.3. Reactivos:
Estándar
Reactivo 1
3.3. Procedimiento:
Enumerar los tubos de la siguiente forma:
REACTIVOS BLANCO STANDAR DESCONOCIDO
Estándar - 10 uL -
Muestra - - 10 uL
Reactivo de 1 mL 1 mL 1 mL
trabajo
Mezclar en el vortex e incubar 5 minutos a Baño maría a 37ºC o 10
minutos
A temperatura ambiente.
Realizar la lectura comenzando por el blanco, estándar y muestra.
Luego leer en el STAT FAX: Nº de prueba ____
Registrar los resultados e informar.
3.3.1. Estabilidad de la mezcla de reacción final:
El color de la reacción final es estable 30 minutos por lo que la
absorbancia debe ser leída dentro de este lapso. Protegido de la
luz.
3.3.2. Valores de referencia:
Adultos : <200 mg/dL
Niños y Adolescentes: < 170 mg/dL
3.3.3. ANEXOS:
Anexo 1:
Sustancias interferentes conocidas:
Suero o plasma con hemólisis visible o intensa.
Lipemia (5 g/L) interfiere.
Bilirrubina (40 mg/dL) no interfiere.
Hemoglobina (> 1 g/L) puede afectar los resultados.
Otros medicamentos y sustancias pueden interferir3
Anexo 2:
Linealidad:
• La reacción es lineal hasta 600 mg/dl
• Para valores superiores, diluir 1:2 la solución coloreada final con el
reactivo y repetir la lectura multiplicando el resultado por 2.
Anexo 3:
Estabilidad y condiciones de almacenamiento:
•Conservar el estándar entre (2-30°C) y Reactivo 1 entre (2-8°C)
hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
• Una vez abiertos no deben permanecer destapados y fuera del
refrigerador durante lapsos prolongados.
• Evitar exposición a la luz solar directa, durante el manipuleo los
reactivos están sujetos a contaminaciones de naturaleza química y
microbiana que puedan provocar disminución de la estabilidad.
Anexo 4:
Almacenamiento y estabilidad del suero:
•El colesterol es estable 7 días entre (2-8C) y 6 meses congelado (-
20°C) sin agregados de conservante.
Anexo 5:
4. Cálculos de los resultados:
Colesterol mg/dl = D x F
5. CONCLUCIONES E INTERPRETACION:
