Universidad Mayor de San Andrés
Facultad de Ingeniería
Ingeniería Civil PREPARACION DE FROTIS BACTERIANO
MICROBIOLOGIA CIV - 358
Doc. Dra. Eufemia Briançon G. Aula: “ I S S ”
CURSO REGULAR: SEMESTRE I – 2018
Univ.: Velasco Huanca Roberto Fecha: 24/ 04 / 2018
LABORATORIO Nº3
EXAMEN MICROSCOPICO DE UN A PREPARACION EN SECO
1. OBJETIVOS
1.1 OBJETIVOS GENERALES
Aprender la preparación de un frotis bacteriano y su tinción por medio de colorantes para
observar con más detenimiento la morfología de la bacteria con ayuda del lente de inmersión.
1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
Aprender a realizar una muestra de preparado en seco a partir de un cultivo personal de una
huella digital.
Realizar la observación de la muestra para identificar los diferentes microorganismos que lo
componen.
Conocer el tamaño la forma y la morfología que presentan la diversa variedad de
microorganismos para su posterior identificación.
2. FUNDAMENTO TEORICO
Casi todos los microorganismos requieren, antes de ser examinados en un microscopio óptico, una
preparación especial; esto es debido a que poseen poco contraste natural. La preparación y la tinción
(tratamiento con colorantes) de un espécimen son fundamentales si se desea obtener buenas imágenes.
Muchas décadas de esfuerzos y errores han conducido a métodos generales de preparación que resultan
idóneos. A continuación describiremos la observación en fresco de microorganismos vivos y varios tipos de
tinciones.
Aumento
Microscopio Lente objetivo Lente ocular Ampliación total
Microscopios
ópticos
Débil seco 10x x 10x = l00x
Fuerte seco 40x x 10x = 400x
Aceite de inmersión 100x x 10x = 1000x
Figura 3.6 El camino de la luz en el microscopio compuesto. La fuente
de luz está en la base. El condensador enfoca el haz de luz sobre
el espécimen, donde parte se absorbe, parte se refracta, y parte se
transmite. La luz transmitida penetra en la lente objetivo, que
aumenta la imagen. El prisma hace que la imagen se forme en el tubo
del microscopio, haciendo la visión más cómoda. La lente ocular
vuelve a aumentar la imagen y la enfoca en el ojo.
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Preparación en Seco o Tinción
El microscopio de campo claro es más útil para la observación de especímenes teñidos. Los colorantes son
compuestos químicos utilizados para aumentar el contraste. Existen algunos, llamados colorantes vitales,
que pueden añadirse directamente a una preparación en fresco; por tanto, colorean células vivas. No
obstante, la mayoría de los colorantes son solamente efectivos después de que los microorganismos hayan
sido fijados, es decir, se encuentren muertos y adheridos al portaobjetos. Para la fijación por calor, se realiza
una fina extensión de una gota de muestra líquida sobre un portaobjetos y se deja secar al aire; a
continuación, se pasa la preparación de Forma rápida sobre la llama de un mechero. El calor de la llama mata
las células microbianas por desnaturalización de sus proteínas. Las proteínas coaguladas unen las células al
porta. Cuando se desea fijar especímenes delicados se utiliza la fijación química, va que es menos lesiva que
el calor. Para ello se añade una gota del fijador, por ejemplo, ácido ósmico, formaldehído, o glutaraldehído,
sobre la muestra líquida con los microorganismos.
La fijación posee algunos inconvenientes. Por ejemplo, a menudo distorsiona la apariencia real de las células,
lo cual dificulta la identificación; además, no permite la observación del movimiento de los microorganismos.
Después de la fijación, se añade el colorante, que debe permanecer el tiempo suficiente en contacto con el
espécimen, para que pueda ser absorbido. A continuación, se retira el exceso de colorante, normalmente
lavando con agua.
Tipos de colorantes Casi todos los colorantes son sales, compuestos formados por iones cargados. Los
colorantes básicos son aquellos en los cuales el agente que tiñe es el ion cargado positivamente, mientras
que en los ácidos, el colorante es el ion cargado negativamente. Los colorantes más utilizados son los de tipo
básico, va que la mayor parte de las células microbianas Poseen cargas débilmente negativas en su
superficie, lo cual facilita su unión. Entre los colorantes básicos más comunes se encuentran la safranina, la
fucsina básica, el cristal violeta y el azul de metileno. Los colorantes ácidos se unen a las partes de las células
cargadas positivamente. Se utilizan para teñir tejidos animales infectados con microorganismos. Entre los
más frecuentes están la eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo.
3. MATERIALES Y EQUIPO
Mesa desinfectada con Solución de hipoclorito(lavandina) al 10 %
Algodón
Pinzas
Frascos de recolección
Mechero Bunsen
Asa Bacteriológica
Lamina portaobjetos
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Cultivo de huella digital(preparado en la clase previa)
Agua destilada
Lápiz indeleble
Microscopio
Reactivos
Alcohol Acetona
Solución de Fucsina
Solución de Lugol
Solución de Cristal violeta
4. PROCEDIMIENTO
Para el procedimiento se indica lo siguiente:
a) Con ayuda de una pinza tome una lámina portaobjetos limpio y desengrasado del frasco de
placas con alcohol, pasera por el mechero hasta eliminar el exceso del mismo.
b) Identifique la lámina por la parte inferior con un lápiz demográfico.
c) Esterilice el asa al rojo para destruir los microorganismos contaminantes que se encuentran
adheridos a su superficie.
d) Con ayuda del asa coloque una gota de agua destilada estéril, en el centro de la lámina.
e) Tome una Caja que contenga el medio de cultivo con colonias, retire la tapa.
f) Esterilice el asa y enfríe en una esquina de la caja donde no hubo desarrollo o en la tapa de la
caja y recoja una cantidad mínima del crecimiento bacteriano.
g) Por medio del asa mezcle y emulsifique el material con la gota de agua colocada en la lámina.
h) Extienda esta suspensión en un área de más o menos una pulgada.
i) Flamee el asa al rojo vivo y colóquela en su sitio.
j) Proceda a fijar el frotis por el calor, pasando la lámina rápidamente de cuatro a cinco veces
sobre la parte superior de la llama.
k) De la misma manera prepárense frotis con las otras muestras.
l) Cubra los frotis con solución de cristal violeta durante un minuto.
m) Lavar la lámina con agua, desechar la misma.
n) Aplique solución de lugol o licor de Gram, déjelo durante un minuto.
o) Lavar con agua, desechar la misma.
p) Dejar caer gotas de alcohol acetona sobre la placa, dejar unos segundos hasta que se
decolore.
q) Lavar con agua, dejar algo del líquido.
r) Sobre el agua colocar el colorante de contraste, fucsina durante 30 segundos.
s) Lavar con agua y secar con papel filtro.
t) Observar al microscopio con el objetivo de mayor aumento colocando una gota de aceite de
cedro
5. RESULTADOS
Realizada la medición apropiada en la muestra de microorganismos se han identificado a los
siguientes:
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Muestra proporcionada por la Doctora
DATOS DEL CULTIVO: Color Plomizo-Blanquecino
RESULTADOS: Bacterias Gram Negativas
“Coco Bacilos”
Tonalidad Rosado Albaricoque
Estructura morfológica como la de un grano de arroz
Agrupación
Muestra Recogida del cultivo Personal “RV”
DATOS DEL CULTIVO: Color Amarillo Blanquecino
RESULTADOS: Bacterias Gran Positivas
“Estreptococos”
Tonalidad Lila-Malva
Estructura morfológica Círculo - Redondo
Agrupación cadenas
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Muestra Recogida del cultivo Personal “RV2 ”
DATOS DEL CULTIVO: Color Blanquecina
RESULTADOS: Bacterias Gran Positivas
“Estafilo cocos”
Tonalidad Morado - Violeta
Estructura morfológica Circular
Agrupación Racimo de uvas
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Muestra Recogida de los demás cultivos
DATOS DEL CULTIVOS: Color Plomizo-Blanquecino; Amarillos; Blanquecinos; Blancos totales
RESULTADOS: Bacterias Gran Positivas y Negativas
“Estafilococos”
“Estreptococos”
“Diplococos”
“Micrococos”
“Bacilos”
“Cocobacilos”
Tonalidad Rosada Albaricoque y Violetas
Estructura morfológica como la de un grano de arroz, granos alargados, Circulares, Granos
Amorfos entre otros.
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Fig. Muestras del grupo de laboratorio día “Martes”
6. CONCLUSIONES
Concluido el laboratorio se ha aprendido a realizar el frotis bacteriano con preparación en seco
así mismo se ha aprendido su utilidad y sus respectivas correcciones a futuro pues es un método muy
aplicativo y también demasiado eficaz si se hace correctamente el mismo puede servirnos para
estudiar por ejemplo el comportamiento de las enfermedades en una población una población y
promover de alguna manera el control de medio que los rodea para la implementación de
alcantarillado sanitario rellenos sanitarios sistemas de recolección de basura y todo lo que les pueda
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brindar higiene, así mismo en el campo de la microbiología puede dar indicadores o vectores de
enfermedades y la visualización de los microorganismos componentes en la muestra.
Se han aprendido los pasos y la manera correcta de la realización de un frotis bacteriano en
seco y la aplicación de sus componentes como la suspensión, extensión fijación y tinción con colorante
la solución colorante el mordiente y la solución decolorante.
Con ayuda del microscopio se han logrado visualizar a los diferentes microorganismos, y se
considera que en la muestra de los estudiantes existen muchas bacterias por lo cual se recomienda
realizar un proceso de higiene riguroso y constante pues puede llegar a dañar la salud de las personas.
Total de muestras
Cocos + -
Coco - Bacilos +
Bacilos +
Micrococos + -
Estreptococos +
Estafilococos +
En cuanto al tamaño de estos microorganismos muchos oscilan entre 0.8 y 1.5 micras de diámetro
el mismo se o puede apreciar en el microscopio con ayuda del lente de inmersión.
7. RECOMENDACIONES
En laboratorio se deberían contar con las siguientes recomendaciones:
Es muy importante sacar muestras de todos los colores disponibles en el cultivo que definan mejor el
estudio de los microorganismos.
Al momento de realizar la muestra se debe tener cuidado con acercar el frasco de recolección de
portaobjetos al mechero pues este cuenta con alcohol para su desinfección.
Para realizar el muestreo se deben tomar en cuenta el diámetro del frotis para tener una mejor
apreciación con el microscopio de los microorganismos pues un mal frotis no proporcionara ninguna
muestra.
Tener cuidado al momento de realizar la tinción en las muestras pues deben estar sobre una superficie
firme que permita escurrir el agua destilada.
Es importante empezar la medición aceite de cedro pues el lente no debe chocar con el microscopio
pues se puede llegar a dañar el ocular ocasionando altísimos daños económicos al instituto.
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Se debe realizar la observación de la muestra con mucho cuidado al momento de cambiar el revolver
pues no debe chocar con el portaobjetos esto se debe regular con el tornillo macro métrico.
Como una recomendación personal dependiendo de los resultados en el frotis se deberá proporcional
un refuerzo al aspecto de higiene personal pues la falta de la misma podría provocar grandes falencias
de salud en un futuro.
8. BIBLIOGRAFIA
Apuntes Microbiología Dra. Eufemia Briançon semestre I/2018
Guías de laboratorio Dra. Eufemia Briançon semestre I/2018
https://www.google.com/search?
q=agrupacion+de+cocos+y+bacilos&sa=X&biw=1024&bih=662&tbm=isch&source=iu&ictx=1&fir=nCFvl785l0Da
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%252C_&usg=__fu_Y6yL470MiWKtwZycijt667i4%3D&ved=0ahUKEwjHqLvXw87aAhVI0lMKHegpD8cQ9QEILDA
C#imgrc=nCFvl785l0DazM:
https://www.google.com/search?
q=bacterias+gram+positivas+color&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&ved=0ahUKEwjcy7-
Zxs7aAhVN7FMKHT1zCfgQsAQIew&biw=1024&bih=662#imgrc=fhsTZpxLrxlfLM :
http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/56/cap304.htm
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