Informe 7 Instrumental
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Maria Jose Huayamave RosadoInforme 7 Instrumental
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Maria Jose Huayamave RosadoUniversidad de Guayaquil
Facultad de Ciencias Químicas
Carrera: Química y Farmacia
INFORME DE LABORATORIO ANALISIS INSTRUMENTAL I
Número de la DETERMINACION CUANTITATIVA DE UN ANALITO
práctica # 7 EN UNA SOLUCIÓN MUESTRA
ANÁLISIS
INSTRUMENTAL Dra. Burbano Gómez Zoraida del Carmen, M.Sc
I
GRUPO DE PRÁCTICA: 1-C Jueves. 8 – 10 am
Estudiante Bravo Zambrano Carlos Alejandro
SEMESTRE: 6to
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA DE LABORATORIO
Realizar la lectura de las absorbancias de diluciones de permanganato de potasio para las
concentraciones de la muestra, mediante el uso del espectrofotómetro (GENESYS 20).
INSTRUCCIONES O CONSIDERACIONES PREVIAS
CURVA DE CALIBRADO
Un procedimiento muy utilizado en análisis cuantitativo es el llamado de calibración que implica la
construcción de una “curva de calibración”. Una curva de calibración es la representación gráfica
de una señal que se mide en función de la concentración de un analito. La calibración incluye la
selección de un modelo para estimar los parámetros que permitan determinar la linealidad de esa
curva. Y, en consecuencia, la capacidad de un método analítico para obtener resultados que sean
directamente proporcionales a la concentración de un compuesto en una muestra, dentro de un
determinado intervalo de trabajo.
En el procedimiento se compara una propiedad del analito con la de estándares de concentración
conocida del mismo analito (o de algún otro con propiedades muy similares a éste). Para realizar
la comparación se requiere utilizar métodos y equipos apropiados para la resolución del problema
de acuerdo al analito que se desee determinar. A partir de la curva de calibración (conjunto de
concentraciones que describen el intervalo en el cual se deberá cuantificar el compuesto por
analizar) y a fin de asegurar que la recta
encontrada con los puntos experimentales se
ajuste correctamente al modelo matemático de la
ecuación se calculan los valores de la ordenada al
origen, la pendiente y el coeficiente de
determinación (R2).
Por tener una buena exactitud y confiabilidad
estadística, el método más empleado para
encontrar los parámetros de la curva de calibrado
es el método de los mínimos cuadrados Este
método busca la recta del calibrado que haga que
la suma de los cuadrados de las distancias verticales entre cada punto experimental y la recta de
calibrado sea mínima o tienda a cero. A la distancia vertical entre cada punto experimental y la
recta de calibrado se le conoce como residual. En forma gráfica se representa como:
En la práctica para construir la curva de calibración se utilizan disoluciones que contienen
concentraciones conocidas de analito, llamadas disoluciones patrón o estándar. Los estándares o
disoluciones patrón para construir la recta de calibrado deben ser preparadas en forma
independiente, a partir de una o varias soluciones madre; el número de puntos a escoger
dependerá del uso que se dé a la recta de calibrado. Si bien con dos puntos se puede construir
una curva, estadísticamente se requieren por los menos tres para que la curva sea confiable; este
número se suele aplicar a métodos de rutina perfectamente establecidos y validados (proceso por
el cual se demuestra, por estudios de laboratorio, que la capacidad del método satisface los
requisitos para la aplicación analítica deseada).
Sin embargo, si el método está en una etapa de desarrollo, el número de puntos mínimo será de
cinco o seis para que la variabilidad sea mínima y el intervalo lineal sea suficiente. Hay que
considerar que un aumento en el número de puntos experimentales implicara mayor fiabilidad en
la recta de calibrado. La verificación del comportamiento de un analito mediante una curva de
calibración requiere un mínimo de cinco puntos para un intervalo de confianza del 95 % y de ocho
puntos para uno del 99 %.
Linealidad del sistema de medición
La linealidad de la curva de calibración (habilidad para asegurar que los resultados obtenidos
directamente o por medio de una transformación matemática definida) es un requerimiento
fundamental en la práctica del análisis químico cuando se realizan curvas de calibración. En
general la linealidad no se cuantifica, pero se observa por simple inspección o mediante pruebas
significativas de no linealidad. La no linealidad se elimina mediante la selección de un intervalo de
operación más restringido. Cabe mencionar que el intervalo lineal puede ser distinto para matrices
diferentes de acuerdo al efecto de las interferencias procedentes de la matriz. Como ya se
mencionó con anterioridad, para demostrar la linealidad se requieren cumplir ciertos criterios de
aceptación en la que estadísticamente se puede justificar esa linealidad; para ello es necesario
calcular:
la pendiente (m)
la ordenada al origen (b)
el coeficiente de determinación (R2)
Este cálculo se realiza fácilmente con una calculadora científica sencilla por lo que normalmente
no se recurre a las conocidas ecuaciones. Como criterio de aceptación de la linealidad a partir de
la curva de calibración (conjunto de concentraciones que describen el intervalo en el cual se
deberá cuantificar el compuesto por analizar) se considera R2 >0.98
Sensibilidad
La sensibilidad de método mide su capacidad para discriminar entre pequeñas diferencias en la
concentración del analito. Dos factores limitan la sensibilidad. La pendiente de la curva de
calibración y la precisión del sistema de medida. Para dos métodos que tengan igual precisión, el
que tenga la mayor pendiente será el más sensible; es importante señalar que para determinar la
pendiente de la curva se considera únicamente el intervalo lineal de la misma puesto que cuando
la curva pierde su linealidad la pendiente también es diferente. Por otra parte, es importante
mencionar que, al igual que la linealidad, también la pendiente de la curva puede ser distinta para
matrices diferentes; esto significa que la pendiente de la curva depende de todas las condiciones
de medida y que éstas deben ser iguales (o al menos similares) para los estándares y la muestra
problema.
Límite de detección (LD)
En general este término se define como la mínima concentración del analito detectable por el
método. Su determinación es importante (particularmente en análisis de trazas) pero los
problemas asociados con ella son diversos; estos problemas han sido estadísticamente estudiados
y varios criterios de decisión han sido propuestos. Aunque ninguno es universal uno de los más
aceptables es el de la concentración que correspondería a la medida del “promedio del blanco+
3s”. El blanco es la señal emitida por el instrumento con una disolución que contiene las mismas
especies que la muestra problema (pero sin el analito). Para fines de validación se considera que
deben hacerse 10 mediciones de blancos independientes El valor de 3s se refiere a tres veces la
desviación estándar al realizar la medición de estos blancos; cabe mencionar que la elección de
estos blancos no siempre es fácil.
Límite de cuantificación (LC)
Llamado también límite de determinación, se define como la más pequeña concentración del
analito que puede ser determinada con un nivel de exactitud y precisión aceptables. Dependiendo
del convenio utilizado se considera como la concentración de analito que corresponde al valor del
promedio del blanco más 5, 6 o 10 veces la desviación estándar del mismo (esta última es la más
común). Es importante hacer notar que ni LD ni el LC representan niveles a los cuales sea
imposible la cuantificación del analito; el significado es que el LC representa la mínima
concentración del analito que puede ser determinada con un aceptable nivel de incertidumbre.
Intervalo analítico
Está definido como el intervalo de concentración en que el analito puede ser determinado
mediante la utilización de la curva de calibración; se considera que es el comprendido entre el
límite de cuantificación hasta la concentración en la cual se pierde la linealidad de la curva. (Harris,
2015)
APLICACIONES DE LA CURVA DE CALIBRADO EN EL CONTROL DE CALIDAD
Control de calidad
La finalidad de un programa de control de calidad es que los resultados de los pacientes sean
precisos y exactos y evaluar el desempeño y la variación del instrumento a corto y largo plazo.
Existen dos tipos de programas: control de calidad interno y externo.
Control de calidad interno
Este es llevado a cabo por el laboratorio y consiste en verificar el funcionamiento del instrumento
diariamente.
Control de calidad externo
El control de calidad externo es realizado por un organismo o compañía externa. Para llevar a
cabo un programa de control de calidad se utilizan materiales comerciales de control. Los mismos
son utilizados exclusivamente para fines de control de calidad y no deben ser usados en
procedimientos de calibración pues no presentan grados definidos de incertidumbre. El material de
control a utilizar debe ser similar a las muestras, debe ser un material homogéneo y estable que
dure por lo menos un año. En la fase inicial de un programa de control de calidad lo que se debe
verificar es que la medida obtenida este dentro del rango aceptable que indica la caja del material
de control utilizado. Luego de tener varias mediciones se puede redefinir el valor objetivo y el
rango aceptable determinando el valor medio y la desviación estándar de las muestras obtenidas.
El problema que se presenta ahora es qué intervalo considerar aceptable pues si este es muy
pequeño, el programa de control de calidad indicará un resultado fuera de control a pesar de que
el instrumento se encontraría funcionando correctamente; mientras que, si elegimos un rango muy
grande, el sistema de control de calidad no será capaz de detectar una falla del instrumento. Por
esta razón, se suele elegir como intervalo de aceptabilidad a ±3 veces la desviación estándar.
A modo de ejemplo, en el caso de gases en sangre /pH se recomienda un mínimo de tres niveles
de control de calidad cada 24 horas, y se deben analizar muestras de control de calidad antes de
analizar muestras de pacientes cuando el instrumento ha recibido mantenimiento o ha funcionado
mal. Al realizar un programa de control de calidad, se deben almacenar los datos para un posterior
análisis visual o estadístico. A partir de estos análisis es posible detectar dos tipos de errores:
sistemáticos y aleatorios.
Los errores sistemáticos afectan a todas las muestras de igual manera y frecuencia, se presentan
de manera continua y definida. Estos se detectan al realizar un control de calidad interno y externo
y se puede corregir realizando una calibración. Mientras que los errores aleatorios son
impredecibles, pueden ser ocasionados por factores como fluctuaciones en la temperatura y
energía eléctrica. Los mismos se detectan realizando un control de calidad interno. (James, 2016)
REACTIVOS DE LABORATORIO
Solución 0.05 N KOH
Solución de Permanganato de potasio
Agua destilada
MATERIALES DE LABORATORIO
Matraces volumétricos
Pipetas volumétricas
Cubetas de espectrofotómetro
Equipos de laboratorio
Genesys 20
INSTRUCCIONES O CONSIDERACIONES PREVIAS
A partir de la solución entregada, determine la
concentración del ión presente en la muestra.
Utilice todas las herramientas que estén a
Muestras Absorbancias
su alcance, tales como: preparación de
A diluciones, curva 0.091
de calibrado, ecuación de
B la recta, herramientas
0.093estadísticas y demás
C 0.090
Recuerde trabajar la muestra por
triplicado.
PARTE INSTRUMENTAL
Encienda el instrumento
Seleccione la longitud de onda de 370 nm
Configure el instrumento utilizando solución 0.05 N KOH como blanco
Coloque en el recipiente de la muestra la cantidad necesaria de la dilución preparada,
lleve a la marcha de los rayos y realice las diferentes lecturas.
RESULTADOS
Cálculos
y= mx + b
y= 0.0153x – 0.0175
Concentraciones de diluciones
0.091+ 0.0175 ug
XA= =7.091 MnO=
0.0153 ml
0.093+0.0175 ug
XB= =7.222 MnO =
0.0153 ml
0.090+0.0175 ug
XC= =7.026 MnO =
0.0153 ml
Concentraciones de muestra
7.091∗25 ml ug
⟦ m A ⟧= =354.5 MnO=
0.5 ml ml
7.222∗25 ml ug
⟦ mB ⟧= =361.1 MnO =
0.5 ml ml
7.026∗25 ml ug
⟦ mC ⟧ = =351.3 MnO=
0.5 ml ml
Promedio
354.5+361.1+ 351.3 ug
X= =355.63 MnO=
3 ml
Desviación estándar
S= ( 354.5−355.63 ) 2+ (361.1−355.63 ) 2+ (351.3−355.63 ) 2= ¿ 4.99 ¿
√ 2
Coeficiente de variación
4.99
Cv= =1.40 %
355.63
CONCLUSIONES
Por lo tanto, se realizó la lectura de las absorbancias de las diluciones de permanganato de
potasio, para obtener las concentraciones de las muestras la cual dio un promedio de
ug
355.63 MnO =, y un coeficiente de variación de 1.40 %, de manera que está en el rango de
ml
cuantificación en la concentración de la muestra.
RECOMENDACIONES
1) Seguir el protocolo de bioseguridad para evitar accidentes.
2) Realizar la configuración del blanco con hidróxido de potasio antes de realizar cada una de las
mediciones.
3) Fijarse que el recipiente donde se coloca la muestra sea colocado de forma correcta dentro del
espectrofotómetro
BIBLIOGRAFIA
Harris Daniel C. “Análisis Químico Cuantitativo”, 2ª edición. Editorial Reverte, España 2015.
Miller James N., Miller Jane C. “Estadística y Quimiometria para Química Analítica”, 4ª edición,
Editorial Prentice Hall, España 2016.
