Análisis cuantitativo: leyes de la absorción molecular
Ley de Lambert – Beer
La región ultravioleta-visible se ha utilizado ampliamente en análisis cuantitativo
y desde hace mucho más tiempo la región visible.
Las medidas se basan en la ley de Lambert- Beer que relaciona, en
determinadas condiciones, la absorción de la radiación con la concentración de
un compuesto en disolución.
El origen de esta ley se remonta a los trabajos del matemático francés Lambert
que estableció, en el siglo XVIII, las bases de la fotometría. Igualmente, Beer,
físico alemán del siglo XIX, estableció una ley que permite calcular la cantidad
de radiación transmitida por un compuesto en disolución en una matriz no
absorbente, después de su paso a través de un determinado espesor.
Así resulta la ley de Lambert-Beer: A = Ԑλ • l • c (1)
donde A representa la absorbancia, parámetro óptico adimensional registrado
por el espectrofotómetro, l es el espesor (en cm) de la disolución atravesada, c
es la concentración molar y Ԑλ el coeficiente de absortividad molar (L.mol-1.cm-1)
a la longitud de onda λ a la cual se realiza la medida. Este coeficiente (también
llamado coeficiente de extinción molar) es característico del compuesto
analizado y depende de la temperatura y del disolvente. Generalmente su valor
viene acompañado de la longitud de onda del máximo de absorción. Puede variar
en un amplio rango, que se extiende desde algunas unidades a más de 200,000.
A partir de esta expresión se establece la hipótesis de Lambert, según la cual la
intensidad I de una radiación monocromática presenta una disminución dI
(negativa) después de atravesar un espesor dx de un material cuyo coeficiente
de absorción es k a la longitud de onda seleccionada (figura …), es decir:
-dI/dx = k.Ix (2)
Denominando I0 la intensidad luminosa de la radiación incidente en el medio atravesado
de espesor l, la expresión (2) puede escribirse a modo de integral obteniendo la
intensidad transmitida I:
[ lnIX ]I = -k [X ]l
I0 0
de donde:
ln I/I0 = -k.l
o también:
Asignatura: Análisis Instrumental
Ing. Jorge S. García Blásquez Morote
I = I0.e-kl (3)
Figura 3. Absorción de la luz por un material homogéneo y representación del
porcentaje de transmitancia (%T) en función del espesor atravesado.
Referencia: Rouessac, Francis, R., Rouessac, A. (2003)
La luz que llega a la muestra puede ser transmitida, refractada, reflejada, difundida o
absorbida. Aquí sólo se considera la porción absorbida
La expresión (3) es más conocida mediante la expresión (1), en la que la
absorbancia A se representa por alguna de las expresiones equivalentes:
A = log I0/I o A = log 1/T
A = log 10/%T o A = 2-log (%T)
La Ley de Lambert-Beer se refiere a la fracción de la luz absorbida, se cumple
en las siguientes condiciones:
I. La luz utilizada debe ser monocromática
II. Las concentraciones deben ser bajas
III. La disolución no debe ser fluorescente ni heterogénea
IV. El soluto no debe sufrir transformaciones fotoquímicas
V. El soluto no debe originar asociaciones variables con el disolvente.
Aditividad de las absorbancias, la Ley de Lambert-Beer es aditiva. Esto
implica que la absorbancia A, de una mezcla de dos compuestos en disolución
1 y 2 en un mismo disolvente, medida en una cubeta de espesor l, será igual a
Asignatura: Análisis Instrumental
Ing. Jorge S. García Blásquez Morote
la absorbancia medida después del paso a través de dos cubetas de idéntico
espesor l, situadas una después de otra, conteniendo una de ellas el compuesto
1 (Absorbancia = A1), y la otra el compuesto 2 (Absorbancia = A2) (ambas en las
mismas concentraciones que en la mezcla inicial y atribuyendo el índice 1 al
compuesto 1 y el 2 al compuesto 2).
A = A1 + A2 = l.(Ԑ1.c1 + Ԑ2.c2) (3)
Figura 4. Aditividad de las absorbancias.
Fuente: Rouessac, Francis, R., Rouessac, A. (2003)
Para cualquier longitud de onda la absorbancia de una mezcla es igual a la suma de las
absorbancias de cada compuesto de la mezcla para la longitud de onda seleccionada
El fenómeno de los puntos isobésticos constituye una consecuencia de este
principio.
Considerando un compuesto A que se transforma mediante una reacción de
primer orden en un compuesto B. Suponiendo que los espectros de absorción,
realizados a la misma concentración, se cortan en un punto I cuando se
superponen (ver figura). Para la longitud de onda del punto I, las absorbancias
de las dos disoluciones son las mismas, y por lo tanto, los coeficientes ԐA y ԐB
son iguales (ԐA = ԐB = Ԑ). En este tipo de experiencia se tiene inicialmente
compuesto A puro, finalmente compuesto B puro y en los instantes
intermedios, mezclas de A y B para las cuales la concentración global no varía
(cA + cB = Cte), lo que se expresa como:
AI = ԐA. l. cA + ԐB. l.cB) = Ԑ.l(cA + cB) (4)
Asignatura: Análisis Instrumental
Ing. Jorge S. García Blásquez Morote
Figura 5. Punto isobéstico.
Fuente: Rouessac, Francis, R., Rouessac, A. (2003)
Hidrólisis alcalina a 25°C del salicilato de metilo. Superposición de espectros sucesivos
registrados entre 280 y 350 nm a intervalos de 10 min.
Todos los espectros de las mezclas A + B formadas con el transcurso del tiempo
pasarán por tanto por el punto I, denominado punto isobéstico, en el que la
absorbancia A conservará el mismo valor.
Tales curvas concurrentes se presentan durante el viraje de un indicador
coloreado en función del pH o en el estudio de una cinética de reacción.
Fuente: Rouessac, Francis, R., Rouessac, A. (2003) Análisis Químico Métodos y Técnicas
Instrumentales, Modernas Mac Graw Hill, España.
Análisis de un analito individual y control de la pureza
Experimentalmente se comienza por el establecimiento de una curva de
calibrado A = f(c), a partir de disoluciones de concentraciones conocidas del
analito, sometidas al mismo tratamiento que la muestra. Esta curva,
frecuentemente ajustada a una línea recta para disoluciones diluidas, permite
deducir la concentración cX de la disolución desconocida.
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En ciertos casos es posible preparar una única disolución patrón cuya
concentración cR se elige de modo que su absorbancia AR sea próxima o
ligeramente superior a la de la disolución desconocida AX (ver figura).
Figura 6. Curva de calibrado.
Referencia: Rouessac, Francis, R., Rouessac, A. (2003)
Si se prepara una única disolución de referencia, es posible considerar que la curva de
calibrado es una recta que pasa por el origen. La precisión del resultado será mejor
cuanto más próxima se encuentre la concentración desconocida de la concentración de
referencia (el resultado sew determina por interpolación)
La expresión siguiente permite calcular: cX = cR • AX/AR (5)
El cálculo clásico de la concentración de un analito mediante la expresión (5)
conduce a un resultado erróneo si la muestra contiene una impureza (ausente
en la disolución de referencia o estándar) que absorbe igualmente a la longitud
de onda de medida. Así, frecuentemente se recurre a un método denominado
análisis de confirmación.
Se parte de la base de qué para cualquier compuesto puro, la relación de
coeficientes de absortividad, determinados a dos longitudes de onda es
constante y característica del compuesto. De este modo, si se efectúan una o
dos medidas de absorbancia suplementarias desplazadas algunos nanómetros
respecto a la medida original, se podrán calcular las relaciones de absorbancia
Asignatura: Análisis Instrumental
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de la disolución de muestra y compararlas con las que fueron establecidas de la
misma manera con una referencia pura. Si estas relaciones diferentes, se
deducirá que existe una impureza (no siendo posible, por tanto, calcular su
concentración).
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