FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Departamento Académico de Farmacia y
Bioquímica
BIOQUÍMICA I Semestre 2021-I
ACTIVIDAD O SESIÓN DE APRENDIZAJE ASINCRONICA DE
PRÁCTICA N° 01 TEMA: FRACCIONAMIENTO CELULAR Y
EXTRACCIÓN DE BIOMOLÉCULAS
Docente: Q.F. Wilfredo Oswaldo Gutiérrez Alvarado
Fecha: 27 y 28 de Julio del 2021 Horario: 13:00 a 15:00 y de 15:00 a
17:00 h. Alumna: AHUANARI RICOPA ZAMAHARA SARAI
DETALLE DE LAS ACTIVIDADES.
- El docente realizará presentaciones de bioseguridad.
- El alumno deberá completar una tarea en el aula virtual donde desarrolle
y/o describa los siguientes puntos:
a) Soluciones empleadas en los procesos de homogenización y perfusión de
órganos.
b) El procedimiento de centrifugación diferencial para obtener ribosomas,
mitocondrias, retículo endoplasmático y citosol.
c) Cuáles son las tinciones utilizadas para identificar organelos celulares y
como visualizamos estos organelos.
SOLUCIONES EMPLEADAS EN LOS PROCESOS DE HOMOGENIZACION Y
PERFUSION DE ORGANOS
Esta técnica trata de disgregar los tejidos y romper las células, con el menor daño a
la plasmática. Se denomina así a una operación intensiva de mezclado de
diferentes fases insolubles (a veces con la inclusión de una sustancia tensoactiva) con
el objeto de obtener una suspensión soluble o emulsión.
Se emplean:
❖ Cloruro de potasio
❖ aguas peptonadas
❖ agua destilada
❖ agua de dilución tampón de fosfatos (A,P,H,A)
❖ Potasio de hidrogeno fosfato
❖ Solución Stock A Y B.
❖ Solución de NaCl 0.85%
❖ Solución de sacarosa 0.2%
❖ Solución de KCl 0,154 M
PROCEDIMIENTO DE CENTRIFUGACIÓN PARA LA OBTENCIOS DE
RIBOSOMAS, MITOCONDRIAS RETÍCULO ENDOPLASMATICOSY CITOSOL.
METODO – PROCEDIMIENTO 1.
❖ Preparado del Homogeneizado celular.
❖ Con el hígado ya obtenido colocarlo en un vaso de precipitación conteniendo
solución de NaCl al 0.85% o solución de sacarosa.
❖ Lavar y luego perfundir con la misma solución utilizada.
❖ Coloque el tejido en un mortero.
❖ Luego realice cortes del hígado lo más pequeño y delgado posibles.
❖ Colocar en un vaso de precipitación conteniendo 20 ml de la solución de NaCl o
sacarosa.
❖ Realizamos un homogenado con la batidora. Teniendo cuidado de que esta no
roce con el fondo ni las paredes del vaso.
TINCIONES UTILIZADAS PARA IDENTIFICAR ORGANELOS CELULARES Y
COMO VISUALIZAMOS ESTOS ORGANELO
En bioquímica, esto implica agregar un colorante específico (esto significa que se una
de manera selectiva ya sea a ADN, proteínas, lípidos, carbohidratos, etc.) a un sustrato
para cualificar o cuantificar la presencia de un determinado compuesto. Tanto la
tinción como el marcado fluorescente pueden servir para los mismos propósitos.
Diferentes tipos de tinciones biológicas son utilizadas también para marcar células
en citometría de flujo y para marcar proteínas ó ácidos nucleicos en electroforesis en
gel.
Tinción Características
Tinción de
Tiñe el ADN y los cromosomas de color rojo-violeta.
Feulgen
Naranja de Tiñe ADN y cromosomas de color verde fluorescente, ARN y ribosomas
acridina en color rojo fluorescente.
DAPI Tiñe ADN de color azul-celeste fluorescente.
Bromuro de
etidio
