UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL
“FABIOLA SALAZAR LEGUÍA” DE BAGUA
Carrera Profesional de Biotecnología
REPLICACIÓN,
REPARACIÓN Y
RECOMBINACIÓN DEL
ADN
Profesora: Ms. C. Yesenia Melissa Santa Cruz Vásquez.
Año Académico: 2020-II
INTRODUCCIÓN
La información genética se
transfiere de una célula a otra
Replicación
La replicación se lleva a cabo en la fase
de síntesis o fase S del ciclo celular
El objetivo de la replicación es el de conservar la información genética.
CARACTERÍSTICAS GENERALES
La síntesis de las cadenas de ADN durante la replicación se lleva a cabo en dirección 5’ → 3’ tanto en eucariotes como
en procariotes.
Solamente el carbono de la posición 3’ de la pentosa posee un radical hidroxilo (OH) libre, con el que puede formar
un nuevo enlace fosfodiéster con otro desoxirribonucleótido y formar así la
Hebra creciente de ADN
La cadena de ADN sólo puede crecer en dirección 3’. A este proceso se le llama polimerización, que consiste en la
unión de un dNTP complementario a la hebra molde
La replicación del ADN cuenta con tres características que la definen y permiten entender el proceso:
SEMICONSERVADORA, BIDIRECCIONAL Y ANTIPARALELA.
Existían tres teorías que trataban de explicar el proceso de la replicación;
SEMICONSERVADORA. CONSERVADORA. DISPERSORA O DISPERSANTE.
En cada una de las moléculas hijas se Se sintetiza una molécula totalmente Las cadenas hijas constan de
conserva una de las cadenas nueva, copia de la original, por lo que fragmentos de la cadena antigua y
originales. tras la duplicación quedan, por un fragmentos de la
lado, las dos hebras antiguas juntas y, nueva.
por otro, las dos hebras nuevas.
Meselson y Stahl, en 1957
El experimento definitivo para dilucidar cuál
de estas tres hipótesis era la correcta
SEMICONSERVADORA
Se refiere a que en cada replicación una molécula de ADN recién sintetizada
conserva una de las cadenas originales y la otra es sintetizada de novo.
BIDIRECCIONAL
La replicación del ADN en eucariotes es bidireccional, ya que a partir del sitio de origen (ORI, también
llamados ARS en eucariotes), se sintetizan las dos cadenas en ambos sentidos, con dos puntos de
crecimiento que forman lo que se conoce como HORQUILLAS DE REPLICACIÓN
En organismos eucariotes, debido al gran tamaño del ADN, existen múltiples orígenes de replicación (sitios
ORI) por lo que a la replicación se la considera MULTIFOCAL
Los sitios ORI son secuencias específicas ricas A y T y controlan la replicación de una unidad de ADN llamada
REPLICÓN.
La presencia de bases A:T facilita la separación de las hebras y la formación de la BURBUJA DE REPLICACIÓN.
Los cromosomas de bacterias y virus existe un origen único
de replicación por molécula de ADN; este sitio ORI permite la
replicación de todo el ADN circular, por lo que se afirma que la
replicación es MONOFOCAL
La replicación siempre se produce en sentido 5’ → 3’, y el
DISCONTINUA extremo 3’-OH libre es el punto a partir del cual se produce la
elongación del ADN
Reiji Okazaki y Tsuneko Okazaki, 1960
PROTEÍNAS QUE PARTICIPAN EN LA REPLICACIÓN
La maquinaria encargada de la replicación del ADN es muy compleja y está formada por un grupo de
proteínas que actúan en conjunto con una secuencia de ADN específica.
HELICASA
Enzima encargada de separar las dos hebras del ADN mediante la rotura de los puentes de
hidrógeno que se establecen entre las bases nitrogenadas de las dos cadenas del ADN.
SSB
Proteínas de Evitan la formación de los puentes de hidrógeno entre las dos cadenas separadas por la helicasa y
unión a cadena permiten que se copien.
sencilla
Enzimas isomerasas que actúan sobre la topología del ADN, pueden cortar o formar enlaces
fosfodiéster ya sea una de las hebras (topoisomerasa I) o en las dos (topoisomerasa II) que
Topoisomerasas
forman el ADN. Esta escisión selectiva permite al ADN liberar la tensión contorsional, con lo que se
deshace el superenrollamiento, el cual en caso de persistir detendría la replicación.
Enzima que sintetiza pequeños fragmentos de ARN de entre 8 y 10 nucleótidos de longitud,
conocidos como cebadores o primers, complementarios a un fragmento del ADN. La unión de los
Primasa
cebadores al ADN proporciona un extremo 3´ necesario para que la ADN polimerasa lleve a cabo
su acción.
enzima encargada de retirar los cebadores de ARN durante la síntesis de los fragmentos de
Rnasa H1
Okazaki y en los procesos de reparación del ADN.
También llamada endonucleasa flAP 1 (flap endonuclease 1), se encarga de remover el
FEN1/RTH1
ribonucleotido 5’ del fragmento de Okazaki. El Nick (falta de enlace fosfodiéster entre dos
nucleótidos adyacentes) resultante Es sellado por la ADN ligasa..
LIGASA enzima que cataliza la formación del enlace fosfodiéster entre nucleótidos contiguos.
Es una ribonucleoproteína con actividad de ADN polimerasa dirigida por ARN (transcriptasa
TELOMERASA inversa) capaz de sintetizar una secuencia determinada de ADN que permite el alargamiento de los
telómeros (extremos de los cromosomas eucariotes).
Llamado es un homotrímero que forma una estructura de toroide, la cual es abierta
PCNA
transitoriamente por acción del factor de replicación C (RFC, replication factor C), lo que permite su
Antígeno nuclear
recircularización alrededor de la doble hélice del ADN a la altura del extremo del primer en la
de células en
cadena líder.
proliferación.
PCNA interactúa con la ADN polimerasa, sirviendo como una pinza que sostiene a la polimerasa
en el extremo del primer y le permite sintetizar la cadena de ADN.
principales enzimas en este proceso. Son capaces de sintetizar nuevas cadenas de ADN a partir de una hebra
ADN polimerasa patrón o molde y las unidades estructurales correspondientes (desoxirribonucleótidos).
Una característica importante de esta enzima es que añade los nucleótidos en la dirección 5’→ 3’ siempre y
cuando haya un extremo 3’ disponible.
En eucariotes se han descrito por lo menos cinco ADN polimerasas involucradas en la replicación del ADN,
cada una con una actividad específica: α, β, γ, δ y ε.
La polimerasa α (ADNpol α), también llamada primasa, inicia la síntesis del ADN mediante la formación de un cebador
ARN.
Las polimerasas δ y ε (ADNpol δ y ADNpol ε) son responsables de la mayor parte de la elongación de ambas hebras
del ADN.
La polimerasa β (ADNpol β) no interviene en la replicación y está involucrada en la reparación de errores o daños en el
ADN.
Es importante mencionar que las polimerasas α, β, δ y ε están involucradas en la replicación del ADN nuclear.
La polimerasa γ (ADN pol γ) lleva a cabo la replicación del ADN mitocondrial.
De las 5 polimerasas, sólo tres tienen la actividad de exonucleasa-3’ (pol δ, γ y ε)
La maquinaria para la replicación de los procariotes, sólo tres enzimas participan en la síntesis
Del ADN.
La polimerasa I es la única que tiene actividad de exonucleasa de 5’ a 3’.
Propiedades de la ADN polimerasa de eucariotes
Características de la polimerasa de procariotes.
FASES DE LA REPLICACIÓN
La mayoría de los procesos celulares la replicación se ha dividido en tres fases:
INICIO, ELONGACIÓN Y TERMINACIÓN
INICIO
Las zonas en el ADN donde se producen las burbujas de replicación no son aleatorias, se sabe que
existen secuencias de aproximadamente 300 pb que indican los lugares precisos donde ha de
comenzar la replicación.
Estos sitios son ricos en A y T y son reconocidos por una serie de proteínas llamadas, en conjunto,
proteínas de reconocimiento del sitio de origen. En eucariotes, los orígenes de replicación se llaman
secuencias de replicación autónoma (SRA).
Cada burbuja de replicación posee dos horquillas de
replicación, una de las cuales se desplaza hacia la derecha y otra
hacia la izquierda.
El proceso de replicación necesita, en primera instancia, que las
dos cadenas del ADN se separen.
La helicasa se unirá a la cadena de ADN e hidrolizará los puentes de hidrógeno.
La apertura de la doble hélice hace que las cadenas simples adquieran inestabilidad, que se
compensa por la unión de proteínas estabilizadoras RPA
La ADN polimerasa no puede iniciar la síntesis a partir de los desoxirribonucleótidos libres; por lo
tanto, necesita que la primasa sintetice un cebador, a partir del cual la ADN polimerasa
incorporará los nucleótidos en forma complementaria a las bases de la cadena patrón.
Graficar a mano el proceso de inicio de la replicación
5`TTTTTTATTAGCGTCCC3`
30 pares de bases (pb)
ELONGACIÓN
Es el proceso por el cual la ADN polimerasa añade nucleótidos uno por uno complementarios a la
cadena molde, a medida que avanza la horquilla, ayudada por PCNA.
Antígeno nuclear de células en proliferación.
La función del PCNA es mantener la ADN polimerasa en contacto con la cadena molde, con la
finalidad de que la lea y sintetice la cadena complementaria.
Una vez presente la maquinaria de inicio de la replicación, la horquilla avanza, aumentando la tensión por
delante de la cadena.
Para evitar que esta tensión impida el avance de la horquilla, las topoisomerasas (I y II) cortarán los enlaces
fosfodiéster de la doble hélice y volverán a unirla, lo que permitirá que se desenrolle una
vuelta si actúa la topoisomerasa I y dos si lo hace la topoisomerasa II.
Una de las consecuencias de la síntesis discontinua es que para la síntesis de cada fragmento de Okazaki se requiere de un
cebador intercalado entre estos fragmentos, mientras que en el caso de la cadena continua es necesaria la presencia de un
solo cebador. El proceso de elongación es similar en eucariotes que en procariotes
En el paso 1, el grupo e-amino de un residuo de
lisina en la ADN ligasa ataca al átomo de fósforo
unido al átomo de oxígeno en 5 de la parte de
adenosina en el NAD.
Graficar a mano el proceso de inicio de la replicación 5`TTTTTTATTAGCGTCCC3`
30 pares de bases (pb)
TERMINACIÓN
El final de la replicación se produce cuando la ADN polimerasa δ llega al extremo del
fragmento de ADN.
Se produce entonces el desacoplamiento de todo el
replisoma y la finalización de la replicación.
el proceso de terminación es completar la síntesis de la cadena retardada y unir los
MADURACIÓN fragmentos de Okazaki.
Requiere la eliminación de los cebadores, la elongación del fragmento de ADN adyacente para rellenar el
espacio que quedó por la eliminación del cebador y la unión de los extremos resultantes para formar una cadena
continua.
Para que esta maduración suceda, existe un sistema de nucleasas (FEN1/RTH1 + RNasa H1) encargado de
eliminar el cebador de ARN.
En consecuencia la ADNpol δ, o ADNpol ε, elonga el extremo 3’ del fragmento adyacente y rellena el lugar que
antes ocupaba el cebador hasta alcanza el extremo 5’ del fragmento contiguo.
Luego, la ADN ligasa I sella la mella resultante uniendo el 3’-P del primer fragmento con el 5’-P del segundo.
REPLICACIÓN de los telómeros
La fase final de la terminación de la replicación del ADN consiste
en la replicación de los telómeros de las cadenas de ADN.
Los telómeros son secuencias repetidas de 1-5 unidades T y G
en una de las cadenas, y por lo tanto, C y A en la
complementaria situadas en los extremos de los cromosomas
eucariotes (los procariotes no poseen telómeros porque su ADN
es circular).
La dinámica de replicación que requiere de un primer para polimerizar no permite completar la copia de los extremos de la
hebra de síntesis retrasada de ADN, al no poderse situar un cebador más allá del final de la secuencia.
al retirar todos los cebadores de las cadenas de ADN de síntesis retrasada recién sintetizadas; en cada una de las dos
moléculas de ADN uno de los extremos queda mas corto.
La telomerasa es una
transcriptasa
inversa formada por ARN
La telomerasa es una transcriptasa inversa formada por ARN (9 a 28 nucleótidos) y proteína que contiene un
fragmento de la secuencia de su ARN complementario a la secuencia de los telómeros.
Por lo tanto, en la replicación de los telómeros actúan las telomerasas, que se unen por complementariedad de
bases a los telómeros y sintetizan los extremos de los cromosomas más allá de su tamaño, tomando como molde
el ARN de la transcriptasa inversa.
La telomerasa sólo está presente en células somáticas, tejidos fetales y en ciertas células madre. En
eucariotes la presencia de la telomerasa en las células germinales garantiza la preservación de las largas
secuencias teloméricas.
La desaparición de la enzima en Las células somáticas condiciona la longitud de estas secuencias y puede
alterar la división celular correcta, el tiempo de vida de una célula y, por extensión, del organismo.
Función de la telomerasa en sus tres fases:
ELONGACIÓN, TRANSLOCACIÓN Y ELONGACIÓN.
La telomerasa se une a su respectiva
secuencia complementaria y alarga el
extremo saliente 3’, una vez que éste se
encuentra alargado.
Se produce un apareamiento de bases entre
el ADN telomérico y el ARN de la telomerasa.
Con este apareamiento empieza la primera
elongación.
La telomerasa cataliza la elongación del
extremo 3’ alargado, añadiendo dNTPs y
empleando como molde la
hebra de ARN de la propia telomerasa.
Una vez que se están añadiendo los
dNTPs, la telomerasa se desliza sobre el
extremo 3’ previamente elongado,
conservando la complementariedad gracias
a la repetición de secuencias, lo que se
conoce como translocación.
La telomerasa elonga nuevamente el
extremo 3’ saliente
Graficar a mano el proceso de inicio de la replicación 5`TTTTTTATTAGCGTCCC3`
30 pares de bases (pb)
REPLICACIÓN MITOCONDRIAL
La replicación del ADN mitocondrial en mamíferos se ajusta al modelo del lazo de desplazamiento o lazo D.
Las dos hebras del ADN mitocondrial se pueden diferenciar según su densidad, y existe una hebra ligera (L) y otra
pesada (H).
En primer lugar, se inicia la replicación o síntesis de la
nueva hebra L, sin que se comience la replicación de la
nueva hebra H.
El origen de replicación de la hebra L es diferente al de la hebra H, de forma que existen dos orígenes de replicación
diferentes, uno para cada una.
Además, una vez iniciada la replicación de la nueva hebra L, la síntesis es unidireccional y avanzan desplazando a la otra hebra.
Cuando se han sintetizado aproximadamente dos tercios de la
nueva hebra L, comienza la síntesis de la nueva hebra H, en una
sola dirección, opuesta a la de síntesis de la hebra ligera L.
La síntesis de la nueva hebra L termina antes que la de la nueva hebra H
TAREA
1. Describa las etapas de la replicación del ADN, identificando los elementos y la función que cumplen.
2. ¿Explique la importancia de la replicación del ADN en los organismos vivos?
3. Si una cadena de un fragmento de ADN tiene la siguiente secuencia: 3' ATTGGCATAGC 5' ¿Cuál es la
secuencia y polaridad de la otra cadena de la doble hélice?
4. Indique qué es un cebador y que enzima es la encargada de su síntesis.
5. Se dice que la SSB no tiene función enzimática. ¿Por qué es esencial para la replicación?
6. Describa los mecanismos de acción de las ADN polimerasas?
7. De acuerdo al video de PCR compara las similitudes y diferencias con el proceso de replicación.
GRACIAS
