BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO
CLINICO
BIOQUIMICA I
TEMA: ESPECTROFOTOMETRIA
INTRODUCCION
La espectrofotometría es el método más utilizado en la actualidad para medir elementos en
solución en el laboratorio clínico, se basan en La espectroscopia que es el estudio del espectro de
la luz que emiten los cuerpos, sustancias y elementos.
METODOLOGIA: PARTICIPACION VOLUNTARIA.
OBJETIVOS GENERAL: Explicar la fundamentación teórica de los equipos espectrofotométricos
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
Describir cómo se utiliza la composición de la luz para la medición de los equipos
espectrofotométricos.
Diferenciar la absorbancia y transmitancia
Diferenciar las partes de los equipos espectrofotométricos
Categorizar los diferentes tipos de equipos que hay para las mediciones
espectrofotométricas.
Trabajo independiente:
Responder cada uno de los siguientes puntos, de manera individual y a mano:
1. Que es la espectrofotometría
2. Que es un espectro de luz
3. Que es una longitud de onda, cual es la unidad de medición.
4. Cuantos rangos de longitudes de onda tiene la luz.
5. Que es la ley de Beer.
6. Que es transmitancia y absorbancia
7. Cuantos son los tipos de espectrofotómetros que existen en la actualidad
8. Qué diferencia hay entre un espectrofotómetro y fotómetro.
9. Esquematice un espectrofotómetro y diga cuales son las partes del internas y externas
para su funcionamiento
METODOLOGIA DE LA CLASE TEORIA : Duración 100 minutos
1. Reunirse en grupo de 4 y socializar cada uno de los conceptos resueltos de la guía.
Duración 30 minutos.
2. Luego elegir un representante del grupo, que será vocero ante las preguntas que deba
resolver del tema. 5min
3. El docente de manera aleatoria y equitativamente distribuye los puntos de la guía de
trabajo independiente y le da 5 minutos a cada grupo para que concierten la respuesta
4. Cada representante hace su exposición del tema. Duración 60 minutos
METODOLOGIA DE LA CLASE LABORATORIO: Duración 150 minutos
TEMA: MANEJO Y CONTROL DE CALIDAD DE ESPECTROFOTOMETROS Y FOTOMETROS
OBJETIVO:
Conocer el manejo y las partes del espectrofotómetro.
Realizar el control de calidad de espectrofotómetros.
LOGROS: diferencia cada una de las partes del espectrofotómetro, aplica los parámetros de
control de calidad que verifican el buen funcionamiento del equipo.
Consideraciones generales para el manejo de espectrofotómetros:
Debido a la sensibilidad de estos equipos, deben estar conectados a un estabilizador de
voltaje.
Anotar en el cuadro de control la fecha de cambio de lámpara del equipo, así como las
horas de vida de las mismas.
Encender el equipo el tiempo indicado por la casa comercial o por lo menos 15 minutos
antes de proceder con las mediciones fotométricas.
PROCEDIMEINTO:
1. Identificar las partes del equipo espectronic 20 D:
-Encienda el equipo y espere que se estabilice por 15 minutos
-Ajuste a 0 % de transmitancia.
- Ajuste a 100% de trasnmitancia con agua destilada
-señale las partes del espectronic y diga la función de cada una
CONTROL DE CALIDAD:
1. Limpieza del pozo de cubeta: debe realizarse diario, se realiza con un escobillón
humedecido con agua destilada. Tener cuidado de no tocar ninguna parte óptica
2. Pareamiento de cubetas
3. Calibración de la longitud de onda
4. Comprobación de la exactitud de absorbancia
5. Prueba de linealidad
6. Estabilidad del equipo. Ruido y deriva.
DIARIO:
1. Apareamiento de cubetas:
En espectofotómetros : debe realizarse diario
Colocar la aguja en la mitad de la escala 50%T, en 500 nm o un filtro cercano a esta longitud de
onda.
Colocar una cubeta como blanco (H2O)y anotar el 50%T.
Luego leer la otra cubeta y anotar la lectura en %T.
Pasar estos dos datos a absorbancia y establecer la diferencia que no debe ser mayor de 0,005.
2. Calibración de la longitud de onda: diario.
-Ajustar el equipo en 400nm, llevar a cero de de transmitancia con ácido clorhídrico HCL al
1%, colocar la solución de sulfato de níquel (NiSO4.H2O) en la cubeta y anotar %T.
-Realizar la misma operación en cada uno de los filtros de 460,510, 550, 620 y 700 nm.
- Elaborar una gráfica colocando en el eje de las X los filtros y en el de las Y el porcentaje
de transmitancia . La gráfica normal tiene forma de campana.
400 nm: menos de 4% T.
460 nm: 52,5 +/- 2 %
510 nm: 87% T o mayor
550 nm: menos de 2% T
620 nm:menos de 2%T
700nm
Interpretación de los resultados:
Las lecturas a 400 y 700 nm permiten detectar luz extraña ( se observa elevación con respecto al
eje de la X). Una vez hecha la gráfica, el control diario se hará leyendo el filtro que presente la
mayor tramitancia. Un valor por encima del 3% del valor inicial en cualquiera de las dos longitudes
de onda demanda corrección del equipo.
Causas solución
Lámpara vieja, oscurecida o sucia Limpiar o reemplazar la lámpara y controlar
nuevamente la calibración.
Polvo en los lentes de salida del sistema Limpiar los lentes.
óptico
La lectura a 510 nm sirve para detectar los siguientes problemas:
Causas Solución
Torsión o curvatura del filamento de la Cambiar la lámpara y revisar nuevamente la
lámpara calibración.
Apertura de salida dañada en el orificio de las Necesita servicio profesional
cubetas
Las lecturas a 460 nm 550 nm están relacionadas entre sí y permiten detectar los siguientes
errores
Causas Solución
Las lecturas a 460 y 550 nm cambian en Ajuste la calibración de la longitud de onda
direcciones opuestas con el tornillo para obtener la lectura a 550
nm. La lectura a 460 debe corregirse hasta
más o menos 1,5 % T de su valor original.
Cambios en las lecturas pero no en dirección Necesita servicio profesional
opuesta
CONTROL MENSUAL:
3. Linealidad: Este control puede realizarse con las soluciones de comprobación de exactitud
de la absorbancia en la siguiente forma:
Sulfato de cobre ( CuSO4.5H2O).
Solución stock, concentración 2g/dl o 80 mmol/L
Tomar 5 ml de la solución stock y completar a 10 ml en volumétrico aforado con H2SO4 al 1%.
Esta solución equivale a una concentración de 1 g/dl o 40 mmol/L.
Tomar 2,5 ml. De la solución stock y completar a 10 ml en volumétrico aforado con H2SO4 al 1 % .
Esta Solución equivale a una concentración de 0,5 g/dl 0 20 mmol/L.
Leer cada una de las soluciones frente al blanco de H2SO4 al 1% a la longitud de onda donde se
obtenga mayor absorbancia con las soluciones stock concentrada.
La absorbancia de estas 3 soluciones debe estar en la relación 1:2:4.
