UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE
GROHMANN
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL BIOLOGIA – MICROBIOLOGIA
PRACTICA 04
ESTUDIANTE: Daysi Soledad Guerra Oscco
CODIGO: 2017 - 118002
DOCENTE: Luis LLoja Lozano
CURSO: Parasitología
GRUPO: Viernes 10:30 – 12:10
TACNA – PERU
2020
OBSERVACION DE FORMAS EVOLUTIVAS DE
Trypanosoma cruzi Y Leishmania sp
TECNICAS DE LABORATORIO PARA SU OBSERVACION
I. INTRODUCCION
El parásito Trypanosoma cruzi es el protozoo que causa la enfermedad
de Chagas. El parásito puede vivir en humanos, en más de 100 especies
de mamíferos y en el vector que transmite la infección por T. cruzi de un
huésped a otro, el chinche triatomino que habita en América Latina. El
mamífero infectado por T.cruzi presenta parásito circulante en sangre en
forma de tripomastigote. Cuando el chinche vector pica al mamífero y se
alimenta de su sangre infectada, los parásitos que ingiere sufren una
transformación madurativa en el intestino y son eliminados en las heces.
Una vez en el organismo del mamífero, el parásito invade las células
cercanas al sitio de inoculación adquiriendo la forma intracelular
(amastigote) que provocará daño directo e indirecto a los tejidos.
Sin embargo en el género Leishmania, presenta durante su ciclo dos
formas evolutivas: el estadio amastigote, forma no flagelada presente en
los macrófagos del hospedero mamífero y el estadio promastigote, forma
flagelada que involucra a varias especies del género Lutzomyia; es en el
intestino medio del vector donde los amastigotes se convierten de la
forma no flagelada e inmóvil a la forma flagelada como consecuencia del
cambio de condiciones de pH y temperatura se multiplican rápidamente
por división binaria y a los pocos días, inician el proceso de migración
hacia el intestino medio torácico y a la válvula cardiaca, adhiriéndose a
las microvellosidades del esófago y la faringe, por medio de su flagelo; en
este proceso, el parásito sufre cambios genéticos, bioquímicos y
morfológicos.
II. OBJETIVOS
Conocer las técnicas para el diagnóstico de especies de la familia
Tripanosomatidae.
Reconocer las formas evolutivas de Trypanosoma cruzi y
Leishmania sp
III. MATERIALES
3.1 DIAGNOSTICO DE Leishmanias
Laminas portaobjetos limpias y desengrasadas
Hoja de bisturí N° 20 o 21
Algodón y gasa estéril
Solución de colorante Giemsa
Alcohol 70%
Alcohol metílico
Solución buffer pH 7.2 – 7.4
Micro pipetas estériles (capilares sanguíneos aguzados en uno
de sus extremos)
Aceite de inmersión
Lápiz marcador
3.1.1 CULTIVO DE Leishmanias
Muestra de linfa
Jeringa estéril de 1ml (tuberculina) con aguja N° 23
de 1 pulgada
Alcohol 70%
Agua oxigenada
Suero fisiológico 0.85%
Sulfato de estreptomicina
Penicilina sódica 1000000 U
Tubos con medio de cultivo agar sangre, NNN o
Senekjie
Mechero de alcohol
3.2 DIAGNOSTICO DE Trypanosoma cruzi
3.2.1 EXAMEN DE SANGRE EN FRESCO
Guantes
Lanceta estéril
Algodón
Alcohol corriente
Laminas portaobjetos limpias y desengrasadas
3.2.2 GOTA GRUESA
Solución Giemsa stock
Solución amortiguadora
Probeta 10 ml
Varilla de coloración
3.2.3 XENODIAGNOSTICO
Material biológico de ninfas III o IV estado de
triatominos que proceden de criaderos en laboratorio.
Cajas de madera o plsatico apropiadas
Tul
Bandas elásticas
Sujetadores de tela
Pollos para alimentación de triatominos
Pinzas punta fina
Laminas portaobjetos
Laminillas cubreobjetos
IV. PROCEDIMIENTO
4.1 DIAGNOSTICO DE LEISHMANIAS
Fijar la lámina que contiene el frotis con alcohol metílico durante 3
minutos. Descartar el alcohol y dejar a temperatura ambiente.
Cubrir la lámina con solución de trabajo Giemsa (1 gota de solución
Giemsa stock por cada ml de solución buffer PH 7.2 – 7.4) por 30
minutos.
Descartar el colorante y lavar ligeramente con agua corriente
Secar al medio ambiente y hacer la lectura con lente de inmersión.
4.2 CULTIVO DE LEISHMANIAS
Lavar la lesión con agua y jabon
Desinfectar la zona elegida con alcohol 70% y agua oxigenada
Con una jeringa de tuberculina cargada previamente con 0.2 ml de
solución salina esteril mas antibióticos, se punza y se inyecta ell
contendo suavemente dentro del área decolorada de la papula o
dentro del margen necrotizado de la ulcera.
Luego, se aspira. La aguja y jeringa son retiradas aplicando ligera
presión hacia atrás all mismo tiempo que se gira suavemente hacia
derecha e izquierda. El procedimiento es indolor pero se puede
utilizar anestesia local.
Dos a tres gotas del material aspirado son inoculadas en tubos con
tapa de rosa que contienen medio de cultivo NNN, agar sangre o
Senekjie, a la cual se la añadido 0.1 ml de solución salina que
contiene 500 IU de pinicilina y 500 mg de estreptomicina.
Mantener los tubos de cultivo a 24°C y revisarlos diariamente. Si
no se dispusiera de estufa, los cultivos se pueden mantener a
temperatura ambiente, siempre que esta no exceda los 26° C
4.3 EXAMEN DE SANGRE EN FRESCO
Rotular tres laminas portaobjetos
Obtener la muestra de sangre capilar en lamina
Colocar una gota de sangre sobre cada lamina portaobjeto
rotulada.
Cubrir la muestra con una laminilla.
Conservar las preparaciones en cámara humedad hasta su
lectura.
4.4 GOTA GRUESA
Colocar una gota de sangre sobre la superficie limpia de una
lámina portaobjetos.
Empleando la esquina de otra lamina, realizamos movimientos
circulares, desde el centro de la gota, de modo que la sangre se
distribuya uniformemente.
Dejar secar a temperatura ambiente
Colorear con Giemsa
4.5 XENODIAGNOSTICO
Colocar en cada caja de cinco a diez ninfas de triatominos de III y
IV estadio, los que deben estar en ayuno por lo menos 15 dias.
Cubrir la caja con tul, asegurándolo con una banda elástica.
Rotular la caja con el numero de muestra, nombre y fecha de
aplicación.
Sujetar la caja sobre el brazo del sospechoso de infección mediant
una venda de tela permitiendo que los triatominos se alimenten por
20 minutos o hasta observar que las ninfas hayan aumentado su
volumen por la sangre ingerida.
Conservar la caja de triatominos a temperatura del laboratorio 25°
- 30° y 70% de humedad relativa.
Alimentarlos cada 15 dias, sujetando las cajas con las ninfas sobre
la piel desnuda de un ave.
A los 30 dias, examinar en el microscopio una muestra de heces
de los triatominos. Obtener la muestra sobre una lamina
portaobjetos por presión del abdomen del insecto con una pinza.
Cubrir la muestra con una laminilla para examinarla en el
microscopio. Se puede realizar el examen individual de cada
triatomino o una alícuota del contenido digestivo del triatomino a
los 60 dias.
V. RESULTADOS
5.1 DIAGNOSTICO DE LEISHMANIAS
NOMBRE DE LA ESPECIE:
Leishmania donovani
MUESTRA:
Frotis de lesión
OBSERVACIÓN:
Amastigoto. Se observa claramente su
nucleo y cinetoplasto además en el
interior de los macrófagos destruidos se
ve una impronta de tejido esplénico.
NOMBRE DE LA ESPECIE:
Leishmania panamensis
MUESTRA:
Frotis de lesión
OBSERVACIÓN:
promastigote. Se observa claramente su
nucleo además de un flagelo
5.2 CULTIVO DE LEISHMANIAS
NOMBRE DE LA ESPECIE:
Leishmania sp
MUESTRA:
Frotis de un Cultivo
OBSERVACIÓN:
Podemos visualizar los promastigotes que están
dispuestos de forma desordenada. El cinetoplasto
en forma de barra está situado por delante del
núcleo cerca del extremo anterior y el flagelo se
extiende considerablemente más allá de este
extremo.
5.3 DIAGNOSTICO DE Tripanosoma cruzi
5.3.1 EXAMEN DE SANGRE EN FRESCO
NOMBRE DE LA ESPECIE:
Tripanosoma cruzi
MUESTRA:
Sangre en fresco
OBSERVACIÓN:
no muestran el aspecto típico en forma de
C, características asociadas con la forma
gruesa.
5.3.2 GOTA GRUESA
NOMBRE DE LA ESPECIE:
Tripanosoma cruzi
MUESTRA:
Gota gruesa
OBSERVACIÓN:
Epimastigota, en este estadio, el cinetoplasto
se sitúa inmediatamente por delante del
núcleo. Tiene forma de C
E
s
a
p
r
e
c
i
5.3.3 FROTIS SANGUINEO a
e
l
n
NOMBRE DE LA ESPECIE:
ú
Tripanosoma cruzi m
e
MUESTRA: r
o
Frotis sanguineo
g
OBSERVACIÓN: r
a
Trypomastigote de Trypanosoma
n
cruzi en preparaciones de frotis y
d
gota gruesa de sangre circulante. Se
e
observa el cinetoplasto posterior al
d
núcleo central, la membrana
e
ondulante y el flagelo.
E
p
i
m
a
s
5.3.4 XENODIAGNOSTICO
NOMBRE DE LA ESPECIE:
Tripanosoma cruzi
MUESTRA:
xenodiagnóstico
OBSERVACIÓN:
Xenodiagnóstico positivo: Se
observan formas trypomastigotes
o epimastigotes de Trypanosoma
cruzi.
Xenodiagnóstico negativo: No
se observan tripanosomas o
epimastigotes.
5.4 FORMAS EVOLUTIVAS DE Trypanosoma cruzi
FORMA EVOLUTIVA:
Amastigote
OBSERVACION:
Forma redondeada con cinetplasto
en forma de barra o baston en la
región anterior del nucleo, flagelo
muy corto. Esta forma de encuentra
en las células de hospedadores
infectados asi como en cultivo
axenico.
FORMA EVOLUTIVA:
Trypomastigote
OBSERVACION:
forma elongada, fina y larga, el
flagelo emerge y se adhiere a lo
largo del cuerpo del parásito. Esta
forma es altamente infectante y
puede ser encontrada en el insecto
vector, sangre y espacio intercelular
de hospedadores vertebrados; en
glándulas anales de mamíferos.
VI. COMENTARIO
En esta práctica pudimos observar las diferentes técnicas de
diagnóstico que van desde las más simples hasta las más
complejas debido a transcurso del tiempo cada vez van
evolucionando los métodos.
Se logró reconocer las diferentes formas evolutivas de leishmania
y tripanosoma con los diferentes métodos de diagnóstico para
estos géneros.
