UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MANABÍ
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE LABORATORIO CLÍNICO
GRUPO A1
INTEGRANTES:
BEN ADELAN TALLEDO GENESIS VALERIA
CANDELA BAZURTO PIERINA NICOLE
FARFÁN BRAVO CELSO FERNANDO
SALDARRIAGA DELGADO DIANA ALEXANDRA
SOLÓRZANO SOLÓRZANO KARINA LILIBETH
VELIZ MENDOZA JOHANNA JAMILETH
MATERIA:
INMUNOLOGÍA II
DOCENTE:
DRA. GRACIELA UZCANGA URBINA
NIVEL/PARALELO:
QUINTO SEMESTRE “A”
PERIODO:
MAYO 2021 – SEPTIEMBRE 2021
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
PRIMERA PARTE
Usted pertenece a las cuadrillas de la alcaldía de Portoviejo encargadas de tomar muestras para la
detección de COVID-19 en el cantón y luego debe procesar estas muestras en el laboratorio.
Recibe la llamada de un paciente que tiene un día con fiebre mayor de 38,5 grados Celsius, ha
perdido el olfato y el gusto. Le piden que vaya a su domicilio para realizarle una prueba de
inmunocromatografía o mal llamada prueba rápida, le tome una muestra nasofaríngea para RT-
PCR y realice las pruebas.
Explique el protocolo que aplicaría para la toma de estas muestras y todas las medidas de
bioseguridad paso a paso que debe usar.
Para la toma de la muestra deben cumplirse los estándares de equipo de protección personal que
constan de:
a) Cofia para cubrir la cabeza.
b) Lentes de protección ocular.
c) Cubre bocas N95 o FFP2.
d) Bata quirúrgica desechable.
e) Doble guante desechable
f) Botas desechables.
Deben cumplirse los protocolos del CDC (Centers for Disease Control and Prevention, USA) y
el INDRE (Instituto Nacional de Diagnóstico y Referencia Epidemiológica) para el vestido y
retiro del equipo de protección mencionado1.
Explique bajo qué condiciones debe manipular estas muestras en el laboratorio para
procesar las muestras.
Mantener al mínimo el número de personas involucradas con el manejo de la muestra.
Todo el personal no esencial debe desocupar el área dónde se trabajará la muestra.
El personal de laboratorio que trata las muestras deberá usar los elementos de protección
personal (EPP) recomendados para la toma de muestra incluyendo gafas con protección
lateral, gorro de laboratorio, mascarillas N95, cubierta impermeable de zapatos y batas
(mandiles) anti fluidos (desechables, en lo posible).
te identificada, acompañada por el formulario respectivo correctamente lleno, firmado y
con sello del establecimiento responsable del muestreo, con el objetivo de garantizar la
trazabilidad de resultados.
La muestra debe ser inactivada y manipulada únicamente por profesionales debidamente
entrenados y capacitados para el manejo de especímenes potencialmente infecciosos.
Al dejar el laboratorio, asegúrese de retirar todos los materiales desechables utilizados y
colocarlos en bolsa de riesgo biológico para continuar los procesos de esterilización
regulares2.
Explique el fundamento de la prueba de inmunocromatografía.
Todo el mecanismo se realiza sobre una membrana, que normalmente es de nitrocelulosa o nylon,
en la línea de reacción de este se encuentran los anticuerpos específicos del antígeno del cual
vamos a verificar su presencia y alado la línea de control que tendrá anticuerpos anticonjugados
y el mecanismo es el siguiente: al verter la muestra en cuestión en la región S o de muestra, esta
avanzará por la membrana por acción de la capilaridad, con la primera región que tendrá contacto
la muestra será con la región G que tendrá los anticuerpos específicos para el antígeno que va a
estar unido a una partícula de oro coloidal, a este punto se creará un complejo Ag-Ac, el mismo
seguirá avanzando hacia la región T que tendrá otro anticuerpo para el antígeno a identificar, esto
hará que se forme un sándwich del antígeno en medio de los dos anticuerpos ya mencionados,
esta unión provocará una reacción que se expresa con el cambio de color de la membrana; el
exceso de anticuerpos con oro coloidal que no se unió al antígeno, seguirá migrando por
capilaridad hacia la región C que tendrán ligandos para el anticuerpo con el oro coloidal, esta
unión va a hacer que esta región también cambie de color, verificando que la prueba es certera.
La región C es el control y por lo tanto siempre se va a manifestar un cambio de color, haya o no
la presencia del antígeno de interés, el mecanismo se muestra en la siguiente imagen. Estas
pruebas son rápidos y los resultados están listos de 15 a 30 minutos3.
Al salir de la casa del paciente usted se lleva el siguiente resultado. Como usted ha
sido un excelente estudiante de inmunología usted concluye lo siguiente:
a. El paciente ya ha desarrollado una respuesta
inmune adaptativa humoral antiviral con
cambio de isotipo, así que debe haberse
infectado hace más de 15 días.
b. El paciente ya ha desarrollado una respuesta
inmune adaptativa humoral antiviral primaria
sin haber ocurrido el cambio de isotipo, así
que debe haberse infectado recientemente.
c. El paciente no tiene COVID-19 porque respuesta inmune adaptativa humoral
antiviral lo defendió y ya tiene anticuerpos circulantes.
d. El ensayo no arrojó un resultado concluyente porque no se reveló la banda de IgG
Usted realizó la prueba de RT-PCR, explique el procedimiento que usó y qué secuencias
amplificó.
Para detectar la infección por SARS-CoV-2 mediante RT-PCR, se debe realizar la conversión del
ARN monocatenario viral en ADNc. Esto es la reacción en cadena de la polimerasa con
transcriptasa inversa (RT-PCR), esta es la prueba que se está implementando contra COVID19, y
con buenas razones. Es un diagnóstico específico y sensible, lo que significa que las personas que
dan positivo realmente tienen la enfermedad y ninguna de las personas portadoras del virus pasa
la prueba como un falso negativo, a menos que la muestra tomada no contenga el virus (muestra
nasal cuando la infección ya está avanzada, y ya está en los pulmones), o se halla alterado por
alguna razón. Aun así, la RT-PCR cumple con dos criterios importantes: tasas de especificidad y
sensibilidad de 90 % o más4. Se obtiene la muestra de un hisopado en la parte nasal o posterior
de la garganta, se debe de extraer el ARN viral, purificarlo y luego transcribirlo a ADNc, que es
el material con que él se va a trabajar, luego este ADNc se mezcla con cebadores específicos para
una región constante del genoma viral, esto hará que se obtenga millones de copias de este
fragmento, además de sondas con fluorescencia que se unen al material genético amplificado, este
procedimiento se puede detectar por la cantidad de copias de ADNc con fluorescencia que se ha
producido, generando así una curva ascendente que denotara el resultado positivo 4.
Los genes dianas más usados para el diagnóstico de Covid son los siguientes:
El gen E, recomendado por la OMS.
El gen RdRp para estudio y confirmación
El gen N también para confirmación
El gen Orf1ab
Usted hizo el procedimiento dos veces, ya que la primera vez le dio negativo y sospecha que
cometió un error en el laboratorio o la muestra no estaba en buenas condiciones. ¿Cuáles
son las posibles causas para que obtenga un falso negativo?
Las causas de que se obtengan falsos negativos son:
-Toma errónea de la muestra.
-Manipulación inadecuada de la muestra.
-Contaminación cruzada de la muestra.
-Alguna mal calibración del termociclador.
-Kits de identificación de Covid-19 defectuoso o expirado.
¿Qué es una prueba de antígeno para COVID 19?
Esta prueba para COVID 19 detecta ciertas proteínas en el virus. Se utiliza un isopo largo para
tomar una muestra de fluido de la nariz y las pruebas de antígeno pueden dar resultado en minutos.
Se pueden enviar otras muestras de laboratorio para su análisis. El resultado positivo de una
prueba de antígeno se considera exacto cuando las instrucciones se siguen cuidadosamente, pero
hay más probabilidades de tener un falso negativo lo que significa que es posible estar infectado
con el virus, pero tener un resultado negativo. Según la situación, el medico puede recomendar
una prueba PCR para confirmar un resultado negativo de la prueba de antígeno 5.
El resultado de la prueba le dio negativo. ¿Por qué?
Los diferentes criterios que pueden considerarse cuando la prueba de antígeno sale negativa
podrían ser varias, entre ellas: en primer lugar, la persona no está infectada con el virus, otra razón
podría ser la ausencia del mismo en la zona donde se toma de muestra ya que puede que la muestra
sea tomada en la zona nasal solamente en lugar de la zona nasofaríngea, que es lo recomendable,
otra de las circunstancias en la que la prueba pueda presentarse negativa es la toma de la muestra
muy prematuramente o por el lado contrario, muy tarde de la infección.
Por lo que decidió repetir la prueba de RT PCR, esta vez la prueba le dio positivo. ¿Explique
qué demuestra una prueba de RT-PCR positiva para COVID-19?
La RT-PCR demuestra que el ARN viral si está presente en el organismo del paciente. Lo hace
amplificando regiones del material genético del virus transcrito a ADNc. El resultado de la RT
PCR indica el número de ciclos necesario para detectar un umbral de detección del ADNc, de tal
forma que, a más virus presente en la muestra, menor número de ciclosnecesarios para obtener la
señal6.
Investigue y explique cómo se interpreta un resultado de RT-PCR. ¿Cuáles son los controles
y qué implican?
La interpretación adecuada de los resultados obtenidos en cualquier tipo de ensayo laboratorial
debe ser realizada cuidadosamente mediante controles de calidad aceptables. La confirmación
diagnóstica de Covid-19 está basada en la detección molecular del genoma viral. Esto implica
tener en cuenta la dinámica de la infección (momento en que se toma una muestra y la calidad de
dicha muestra) debido a que muchos de los resultados obtenidos dependen de la permanencia que
ha tenido el virus además de la suficiente cantidad de muestra y es en este punto en donde la carga
viral toma fuerza y de esto depende que un resultado salga falsamente negativo cuando si
contamos con la infección, pero con baja carga viral. Otro punto que puede ser significativo a la
hora del diagnóstico es la experiencia y la habilidad de poder desarrollar la práctica de
diagnóstico, es decir, saber utilizar y realizar la técnica para que el resultado sea lo más cercano
a la realidad.
Dado que usted conoce el progreso de la infección viral y de la respuesta inmune frente a los
virus. ¿Podrían ustedes explicar en qué fase de la infección está el paciente?
En lo que respecta a la inmunidad contra los virus, tenemos la inmunidad innata esta mediada por
IFN tipo I, que evitan la infección y linfocitos NK, que elimina las células infectadas, en la
autoinmunidad adaptativa esta mediada por anticuerpos y CTL, que realizan las mismas
funciones7.
En la segunda etapa del coronavirus, los investigadores señalan que es habitual la multiplicación
viral y la inflamación localizada en el pulmón. Los pacientes que llegan hasta esta etapa
desarrollan una neumonía viral, con tos, fiebre y probablemente hipoxia. Respecto al caso
tenemos que los síntomas del paciente son: fiebre de 38,5 grados Celsius, con una pérdida del
gusto y el olfato, como podemos ver en la segunda fase o etapa de la infección se produce una
inflamación localizada en el pulmón, los cual nos da una respuesta a la perdida de olfato y gusto
ya que estas se producen por la inflamación crónica de la nariz y los senos paranasales.
Además el virus SARS-CoV-2 infecta las células nerviosas de la cavidad nasal (células gliales) y
no a las neuronas. las neuronas sensoriales olfativas no expresan el gen que codifica la proteína
del receptor ACE2, que el coronavirus utiliza para entrar en las células. En cambio, sí que se
expresa en las células de soporte de las neuronas sensoriales olfativas, las células gliales, así como
en ciertas poblaciones de células madre y células de los vasos sanguíneos8.
Desde el momento en el que se contrae el virus pueden pasar varios días antes de la aparición de
algún síntoma; este intervalo es lo que se conoce como periodo de incubación, el período medio
de incubación es de 5-6 días, después se generan respuestas especificas contra el virus lo que da
como resultado algunos síntomas.
REFERENCIA BIBLIOGRAFICA
1. Díaz I. Interpretación de las pruebas diagnósticas del virus SARS-CoV-2. Acta Pediatr
Mex. 2020; 41(1).
2. Escámez T, Ma M, Fortuño A, Máximo C, Fraga Rodríguez F, Gallart L, et al. GUÍA DE
LA RED NACIONAL DE BIOBANCOS PARA EL MANEJO DE MUESTRAS
HUMANAS EN INVESTIGACIÓN BIOMÉDICA RECOMENDACIONES ANTE LA
PANDEMIA DE COVID-19 Documento elaborado por [Internet]. ; [cited 2021 Jun 21].
Available from: [Link]
RNBB-Bioseguridad-COVID-19-vfinal-3_revISCIII.pdf
3. Alonso C, Bartolomé R, Domínguez J, Matas L, Rabella N. Procedimientos en
Microbiología Clínica. [Online]; 2005. Acceso 12 de Diciembrede 2020. Disponible en:
[Link]
[Link].
4. RECIMUNDO. (Marzo de 2020). La PCR como prueba para confirmar casos vigentes de
COVID 19. RECIMUNDO, 22(2).
5. Mayo Clinic. [Online]; 2016. Acceso 21 de 06de 2020. Disponible en:
[Link]
20488900.
6. KhanAcademy. (Mayo de 2020). PCR. Khan Academy.
7. ELSEVIER. Inmunidad contra los virus y sus mecanismos de evasión. [Internet] 2019
[21 de junio del 2021]. Disponible en: [Link]
es/connect/medicina/inmunidad-contra-los-virus-y-sus-mecanismos-de-evasion
8. Altiorem. Infección por Coronavirus (COVID-19). [Internet] 2021 [21 de junio del 2021].
Disponible en: [Link]
