Contenido

2. ASPECTOS FUNDAMENTALES DE LA LIXIVIACIÓN BACTERIANA.....................1

2.1. GÉNEROS DE BACTERIAS IMPORTANTES........................................1
2.2. PRINCIPIOS BÁSICOS DEL FUNCIONAMIENTO CELULAR...........47
2.3. MORFOLOGÍA DEL THIOBACILLUS FERROOXIDANS....................49
2.4. IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS......................................................51
COLORACIÓN DE GRAM.......................................................................................51
PROCEDIMIENTO:.................................................................................................51
COLORACIÓN DE ZIEHL – NEELSEN..................................................................51
PROCEDIMIENTO..................................................................................................51
2.5. MECANISMO DE LA ACCIÓN BACTERIAL.........................................51
2.5.1. Oxidación de sulfuros...............................................................................51
2.5.2. Oxidación de fierro ferroso......................................................................53
Esquema de la cadena de citocromos que participa en la oxidación de Fe2+...................53
2.6. CULTIVOS BACTERIALES EN LABORATORIO..................................55
2.6.1. Procedimiento de aislamiento de cultivos...............................................55
2.6.2. Aislamiento de cultivos puros....................................................................57
2.6.3. Cultivo continuo de bacterias..................................................................59
2.7. POBLACIÓN BACTERIAL.....................................................................61
2.7.1. Número más probable..............................................................................61
Un ejemplo:.............................................................................................................63
La interpretación:.....................................................................................................63
2.7.2. Contraste de fases para el microscopio...................................................64
2.7.3. Poder resolutivo y aumento.....................................................................65
2.8. TRANSFERENCIA DE ENERGÍA EN SISTEMAS BIOLÓGICOS......66
2.9. ADAPTACIÓN DE BACTERIAS.............................................................67
2.10. FASE EXPONENCIAL............................................................................67
2.11. FASE MUERTA........................................................................................69
PROBLEMA.............................................................................................................69
SOLUCIÓN..............................................................................................................69
2.12. FACTORES QUE TIENEN INFLUENCIA EN LA ACTIVIDAD
BACTERIAL.............................................................................................71
2.12.1. Efecto del medio ambiente.......................................................................71
2.12.2. Sistema de energía – rH2.........................................................................72
3) Caso General............................................................................................72
El rH2 Máximo obtenible para dos electrones........................................................73
2.12.3. Fundamento teórico sobre reacciones redox...........................................74
EJEMPLO:...............................................................................................................76
SOLUCIÓN:.............................................................................................................76
2.12.4 Energía libre estándar y la constante de equilibrio...................................77
2.12.5 Electrodo de hidrógeno.............................................................................77
EJEMPLO ESPECÍFICO.........................................................................................78
2.12.6 Energía libre de reacciones y mediciones de voltaje...............................78
EJEMPLO:...............................................................................................................80
Ejemplo: 80
2.12.7 Diagrama Eh – pH....................................................................................81
MEDICIÓN DE Eh...................................................................................................82
CONSTRUCCIÓN DE LOS DIAGRAMAS Eh-pH...................................................83
Límite superior de estabilidad del agua...................................................................83
Límite inferior de estabilidad del agua.....................................................................84
EJEMPLO DE CÁLCULOS:....................................................................................88
SOLUCIÓN..............................................................................................................88
CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS DE ACUERDO A SU TEMPERATURA DE
CRECIMIENTO.........................................................................................90
MUERTE EN FRÍO..................................................................................................93
LA RADIACIÓN Y SUS EFECTOS BIOLÓGICOS..................................................95
2.12.9 Efecto del substrato..................................................................................95
DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA EXTRACCIÓN DE COBRE MEDIANTE
LIXIVIACIÓN BACTERIANA...................................................................100
2.12.10 Efecto del pH..........................................................................................101
2.12.11 Efectos de los nutrientes........................................................................101
2.12.12 Efecto del ión férrico...............................................................................103
2.12.13 Efecto del tamaño de partícula de mineral...........................................105
2.13. OXIDACIÓN BACTERIAL DE MINERALES.......................................105
2.13.1 Lixiviación de pirita, marcasita y pirrotita............................................105
2.13.2 Lixiviación de minerales sulfurados de cobre.........................................105
- Chalcopirita.........................................................................................................105
- Chalcosita y Covelita..............................................................................106
2.13.3 Lixiviación de sulfuros de níquel y cobalto.............................................106
2.13.4 Lixiviación de sulfuros de zinc................................................................107
2.13.5 Lixiviación de sulfuros de plomo, antimonio, molibdeno y arsénico.....107
2.13.6 Lixiviación de minerales de uranio.........................................................109
2.13.7 Compuestos de arsénico.......................................................................109
OXIDACIÓN..........................................................................................................109
- OXIDACIÓN DIRECTA...........................................................................111
- OXIDACIÓN INDIRECTA........................................................................111
REDUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE COMPUESTOS DE ARSENICO..............111
2.13.8 Solubilización de la sílice y del silicato...................................................112
2.13.9 Microorganismos y el manganeso.........................................................115
OXIDACIÓN DEL Mn2+ LIBRE.............................................................................117
OXIDACIÓN DEL Mn2+ LIGADO AL Mn4+..........................................................117
REDUCCIÓN MICROBIOLOGICA DEL Mn4+......................................................117
2.13.10 Nódulos marinos de ferromanganeso....................................................118
 2. ASPECTOS FUNDAMENTALES DE LA LIXIVIACIÓN BACTERIANA

El estudio adecuado de los microorganismos exige como requisito previo

poder cultivarlos en condiciones de laboratorio. Para ello es preciso conocer
los elementos nutritivos y las condiciones físicas favorables que necesitan
para su crecimiento.

La lixiviación bacteriana puede ser considerada como un proceso de

oxidación bioquímica que es catalizado por microorganismos. Este proceso
está representado por la siguiente ecuación simple:

(73)

donde M es un metal bivalente.

2.1. GÉNEROS DE BACTERIAS IMPORTANTES

Los microorganismos que son y pueden ser adaptados para la minería y la

obtención
de sus contenidos metálicos pueden ser ubicados en dos categorías:

1. Autotróficas: Son microorganismo que obtienen sus nutrientes y energía para

sus ciclos de vida de la materia inorgánica que los rodea.
2. Heterotróficas: Son aquellas que requieren de la disponibilidad
de materia orgánica para completar sus ciclos de vida.

De ambos grupos o categorías de bacterias se tienen especies que operan,

especialmente, en presencia de oxígeno. Estas son las bacterias aeróbicas
que ejecutan, en primer lugar, las reacciones de oxidación y tienen la
propiedad de oxidar los sulfuros metálicos a sulfatos solubles. En igual
importancia y magnitud están las bacterias anaeróbicas que
 pueden tener función y llevar sus ciclos de vida en ausencia de oxígeno.
Estas baterías ejecutan, primero, las reacciones de reducción. La
clasificación respectiva puede verse en la Fig. 20.

Los microorganismos usados en la lixiviación de metales a partir de

minerales y
concentrados se presenten en la Tabla 3.

Estos microorganismos son capaces de oxidar sulfuros y azufre o fierro

ferroso. Cuando se oxida este último se forma un oxidante poderoso
(sulfato férrico).

Fig. 20. Clasificación de los microorganismo y su relación a la presencia de oxígeno.

2.2. PRINCIPIOS BÁSICOS DEL FUNCIONAMIENTO CELULAR

La célula tiene cierta estructura, o sea cierta organización material,

donde se distingue diversos componentes.

Junto a su estructura aparece la función de la célula, función que

básicamente consiste en mantenerse viable, en desarrollarse y en
multiplicarse. Esta función de la célula está mediada por los diversos
componentes que la constituyen.

Para realizar su función de reproducirse, la célula necesita de ciertos

nutrientes que a través de una serie de reacciones bioquímicas,
denominadas metabolismo, le proporciona la energía y materias
necesarias para construir la nueva célula.
Se denominan reacciones bioquímicas a las reacciones químicas en las
que intervienen enzimas, que son moléculas de proteínas que catalizan los
diversos pasos metabólicos con una gran especificidad. Además de su
función catalítica las enzimas son las mediadoras de la importante
función de regulación metabólica, mediante la cual, cada reacción
bioquímica corre en el momento adecuado hasta alcanzar las
concentraciones adecuadas.

En una célula de microorganismos existen más de 1,500 enzimas diferentes que

catalizan otras tantas reacciones.

A continuación se discutirán brevemente los principales aspectos del

problema de cómo la célula ordena y controla las 1,500 o más
reacciones que pueden suceder, y de cómo la célula se reproduce a sí
misma.

La clave de la solución del primer problema está en las enzimas. Estas

son proteínas y macromoléculas formadas por cadenas lineales de
aminoácidos.
 Las propiedades catalíticas de la molécula de enzima están
determinadas por su secuencia de aminoácidos y por su configuración
espacial. Las reacciones metabólicas suceden todas a temperatura
ambiente, presión atmosférica y pH alrededor del neutro.

En la célula pese a estar los reactantes en contacto, las reacciones no

ocurren a menos que esté presente la enzima específica que cataliza
esa reacción.

Tal es el principio mediante el cual la célula consigue que de 1,500

reacciones posibles, solo corran las que precisan en cada momento;
controlando la presencia o la ausencia, la activación o la inactivación
de cada enzima.

El segundo problema a tratar es el de cómo la célula se reproduce a sí

misma. Para ello es necesario almacenar y transmitir cierta información,
que se encuentra en los cromosomas. Los cromosomas, son moléculas
de alto peso molecular de un tipo de ácido nucleído denominado
Desoxirribonucleico o DNA. La molécula de DNA está formada por
unidades de los nucleótidos de cuatro bases. El orden y secuencia en
que se ubican estos cuatro nucleótidos en la molécula de DNA es la
que determina cierta información.

Ya que todos los procesos celulares son gobernados por ciertos

enzimas específicos para cada reacción, si la célula hija tiene la misma
composición enzimática que la célula original, se estructurará y
comportará de forma análoga. La clave está entonces en las enzimas, y
la información genética o hereditaria contenida en el cromosoma es la
información necesaria para sintetizar de manera única todas las enzimas
involucradas.

2.3. MORFOLOGÍA DEL THIOBACILLUS FERROOXIDANS

El Thiobacillus Ferrooxidans es una bacteria de forma bacilar de 1-

2 micrones de longitud y 0.5 – 1 micrón de diámetro que presenta
un flagelo polar que le confiere actividad motriz, no forma esporas y
es Gram – Negativa, Su estructura submicroscópica ha sido estudiada
y no parece diferir, fundamentalmente, de otras bacterias del mismo
tipo.

En una célula bacterial típica podemos distinguir en cuanto a su estructura

los
siguientes componentes básicos.

- Cápsula, micro cápsula: Están, principalmente, compuestos de

complejos de proteínas polisacáridos.
- Pared celular: Consiste, principalmente, de macromoléculas de una
proteína compleja de polisacárido – lípido. La pared celular es
responsable de la forma y rigidez de la célula.

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 4

Minerales
 - Membrana celular: Consiste, básicamente, de 50% de
proteínas, 28% de lípidos y de 15 a 20% de carbohidratos. La
membrana es capaz de absorber selectivamente algunos
nutrientes en la célula.
- Ribosomas: Son los órganos para la síntesis de proteínas,
contiene aproximadamente 63% de RNA (ácido Ribonucleico) y
37% de proteínas.

5 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
- Material Nuclear: Está compuesto de DNA (Ácido Desoxirribonucleico). La
información genética reside en la molécula de DNA.
- Flagelo: Es responsable de la movilidad de la célula.

2.4. IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS

Para realizar la identificación de bacterias es muy importante hacer

uso de coloraciones del cuerpo del microorganismo para observar su
estructura interna o externa puesto que las bacterias son incoloras.

Las coloraciones pueden ser:

A.- Simples: Cuando sólo interviene un colorante.

B.- Compuesta: Cuando intervienen dos o más colorantes y se
efectúan en varios tiempos.

COLORACIÓN DE GRAM

Es una coloración indispensable en bacteriología, además es diferencial para los

microorganismos y son:

A.- Gram Positivas: Son aquellas bacterias que retienen el colorante

violeta de genciana y no se decoloran por el alcohol. Toman un
color violeta.

B.- Gram Negativas: Son aquellas bacterias que pierden el colorante

violeta de genciana por decoloración con alcohol y necesitan ser
teñidas por un colorante de contraste que es la safranina.
Adquieren una coloración roja.

Mediante esta técnica es posible diferenciar en dos grupos a las bacterias

de acuerdo a la constitución de su cubierta o membrana celular. Así,
en el caso de las Gram Negativas el colorante ácido safranina
reacciona con la gran cantidad de lípidos de la cubierta y forma un
complejo de color rojo.

PROCEDIMIENTO:

a) Prepara un frotis

b) Fijar la preparación a la llama.

 c) Hacer actuar violeta de genciana más cinco gotas de bicarbonato
de sodio en solución durante 1 minuto.

d) Lavar con agua corriente y cubrir la preparación con lugol por 3 minutos.
e) Lavar con agua corriente y decolorar con alcohol de 95° durante 8
segundos.
f) Cubrir el frotis con safranina 3 minutos.
g) Lavar con agua corriente, secar y observar al microscopio.

COLORACIÓN DE ZIEHL – NEELSEN

Es también una coloración diferente en bacteriología.

Hay bacterias que luego de colorearse forman un complejo difícil de

decolorar, ya sea con alcohol e incluso con alcohol ácido, por lo que
se les denomina: “ácidos resistentes”. Toda la cubierta externa de la
bacteria adquiere una coloración roja.

PROCEDIMIENTO

a) Preparación del frotis.

b) Fijar al calor.
c) Cubrir la preparación con colorante de Ziehl-Neelsen (Fucsina fenicada)
y
calentar hasta la aparición de vapores durante 5 minutos.
d) Lavar con agua de caño.
e) Decolorar con alcohol ácido (alcohol de 95° al 3% en HCl).
f) Lavar con agua y añadir azul de metileno por un minuto.
g) Lavar, secar y observar al microscopio.

Existen otros procedimientos de coloración que también se pueden emplear.

2.5. MECANISMO DE LA ACCIÓN BACTERIAL

Existen todavía diferentes opiniones sobre los conceptos básicos de las vías
de
oxidación. Sin embargo, se postulan básicamente dos tipos de oxidación.

2.5.1. Oxidación de sulfuros

Desde la década de los 50 se discute si el T. Ferrooxidans es

capaz de oxidar sulfuros directamente o si solamente puede
hacerlo a través de mecanismos indirectos. La polémica aún no
ha terminado, por lo que nos limitaremos a exponer las bases

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 5

Minerales
 experimentales con las que se cuenta.

Se debe, en primer lugar, distinguir entre experimentos realizados en

presencia de ión Fe3+. Es sabido que el Fe 3+ es un buen agente
lixiviante

5 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
de los sulfuros metálicos al menos de una gran parte de ellos. Siendo el
T. Ferrooxidans capaz de regenerar el ión Fe3+ resulta obvio
suponer que esta bacteria contribuirá a la lixiviación de los
sulfuros manteniendo una alta concentración de ión Fe3+ en
solución. Por otra parte, el ataque oxidante del ión Fe3+
produce S° como subproducto. Dicho S° permanece en la
superficie de las partículas del sulfuro formando, así, una
barrera de difusión tanto para el ión Fe3+, para cualquier otro
agente oxidante, o bien para la bacteria misma (en caso de
existir una forma de ataque directo de ésta al sulfuro). La
oxidación de esta capa de S° favorecería la disolución
facilitando la difusión en la interface del sulfuro con la solución.
En caso de no encontrarse Fe3+ en el cultivo la situación no
será del todo diferente ya que en presencia de O2 y bajo pH
ocurrirá una oxidación de la superficie del sulfuro en la cual se
liberarán cationes métalicos al igual que en el caso anterior. La
oxidación del S° por parte de las bacterias favorecerá los
procesos de difusión en la interface acelerando, así, la
disolución. Debe sí considerarse que la oxidación mediante ión
Fe3+ es mucho más importante cuantitativamente.

La posibilidad de un ataque directo a los sulfuros por parte de

las bacterias, aunque aún no puede rechazarse, no ha logrado
ser demostrada en forma completa. Más aún, dada la gran
variedad de sulfuros que pueden ser lixiviados
quimicobacterianamente, es difícil suponer que las bacterias
presenten un solo mecanismo metabólico capaz de reaccionar
frente a una variedad tan amplia de condiciones. Siendo, por otra
parte, el S° subproducto de la oxidación férrica o ácida de todos
los sulfuros, resulta plausible postular que es éste el substrato
utilizado por las bacterias.

Las situaciones antes señaladas pueden resumirse de la siguiente manera:

Lixiviación férrica con regeneración del ion Fe3+, mantención de la

concentración de ácido y mejoramiento de la difusión por consumo de S°.

(
7
4
)
(
7
donde M es un metal (Cu, Fe, Zn, etc.). 5
)

(
 76)

Lixiviación ácida con regeneración bacteriana del ácido consumido y

mejoramiento de la difusión por consumo de S°.

(77)
(78)
 Oxidación del sulfuro con reducción de O2, eliminación de la capa de
difusión
y recuperación de ácido.

(79)

(80)

Acción bacteriana directa (hipotética)

(81)

2.5.2. Oxidación de fierro ferroso

La oxidación del Fierro ferroso ha sido estudiada por muchos

investigadores
usando el T. ferrooxidans.

(82)

La oxidación del Fe2+ ocurre en la membrana celular y se

postula que el Fe+2 es complejado en solución con oxígeno y/o
sulfato ya que este anión es indispensable en la oxidación del
Fe2+. Dicho complejo se unirá a la membrana citoplasmática en
la cual la enzima Fe+2 citocromo c reductasa cataliza la
oxidación de Fe2+ a Fe3+. De esta manera, entra un electrón a
reducir la cadena transportadora de electrones compuesta por los
citocromos c, a y al enzima citocromo – oxidasa, los cuales
cumplen respectivos ciclos de óxido-reducción sintetizando una
molécula de ATP por cada electrón que atraviesa dicha cadena.

Esquema de la cadena de citocromos que participa en la oxidación de

Fe2+

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 5

Minerales
 La energía almacenada en forma de ATP durante la
fosforilación oxidativa es utilizada para mantener todos los
procesos fisiológicos que requieren de energía química,
especialmente aquellos que conducen a la síntesis de nuevos
componentes celulares.

5 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
2.6. CULTIVOS BACTERIALES EN LABORATORIO

2.6.1. Procedimiento de aislamiento de cultivos

El enriquecimiento de cultivos se lleva a cabo de una manera

efectiva en el laboratorio. Todos los microorganismos, incluyendo
los thermofílicos, pueden sobrevivir durante un tiempo en
muestras originales a temperatura ambiente.

Para la obtención de cultivos a partir de minerales y

soluciones pueden hacerse uso del medio nutriente 9k con
fierro ferroso, el cual sirve como substrato generador de
energía (para el T. Ferroxidans y Leptospirillum Ferrooxidans).
Así también puede ser el mismo medio con azufre en lugar de
fierro (para el T. Acidophillus) o con cualquier otro sulfuro (para
el Sulfobacillus Thermosulfidooxidans).

La composición del medio 9k (Silverman, Lundgren) se da a continuación:

PRIMERA SOLUCIÓN:

Los siguientes compuestos químicos son disueltos en 700 ml. de agua

destilada.

SEGUNDA SOLUCIÓN:

Los siguientes compuestos químicos son disueltos en 300 ml de agua

destilada.

Las soluciones son esterilizadas separadamente, la primera

solución a 1 atm. y la segunda a 0.5 atm. Antes de usar, ambas
soluciones se mezclan para obtener el pH deseable de 2.5 –
2.7.

En lugar de sulfato ferroso se puede usar sal de Mohr: FeSO4

(NH4)2SO4.6H2O, la cual se adiciona a la segunda solución en una
cantidad de 63g. En este caso, la concentración final de fierro
en el medio también alcanza a 9 g/l.
Los cultivos del T. Ferrooxidans y L. Ferrooxidans se llevan a cabo a una
temperatura de 28°C bajo condiciones aeróbicas. El crecimiento de estos
microorganismos se evalúa por la aparición de un color marrón en el medio debido a la
formación de fierro férrico. Para propósitos de comparación un frasco o un tubo de prueba se
deja sin inocular para servir como control (blanco). Los contenidos de fierro ferroso y férrico se
determinan químicamente.

En casos donde un sulfuro es usado como substrato se adiciona al

medio una
cantidad de 3 a 5 g por 100 ml. de agua.

Es esencial determinar la cantidad de sulfatos e iones de

metales que han entrado en solución. En casos donde el
azufre es usado como substrato en medio 9k, 1-2 g. de
azufre estéril se agrega para 100 ml. de medio. La
incubación de la bacteria sobre el medio se evalúa por la
aparición de turbidez y una marcada disminución de pH.

Para aislar los microorganismos oxidantes de compuestos reducidos de azufre a

altos pH´s se hace uso del medio Beijerinck. La composición se da a
continuación:

Para preparar un medio sólido se utiliza 20 g/l de agar. Es

mejor esterilizar Thiosulfato y Bicarbonato de Sodio
separadamente a 0.5 atm. en una pequeña cantidad de
agua y adicionarlos a la solución básica.

La evaluación del crecimiento de estas bacterias se hace por la

aparición de películas en la superficie del medio o por una
especie de arena sobre las paredes del tubo de prueba debido
a la precipitación de azufre elemental. La oxidación del
Thiosulfato se determina por titración. La turbidez del medio
es generalmente causado por la bacteria heterotrófica oxidante
de Tiosulfato o Tetrationato. Sobre medio sólido las bacterias
Thionic forman colonias no transparentes de un color
amarillento o blanco.

La bacteria comienza a desarrollarse en 3 a 5 días después de su

propagación. Los cultivos enriquecidos obtenidos son sometidos a

un análisis microscópico.

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 5

Minerales
 Un aparato de contraste de fase con inmersión se emplea en
microscopía.
Mediante esta técnica es posible obtener información de la
composición de las especies. Todas las bacterias Thionic
son de forma bacilar y el Leptospirillum puede ser distinguido
por un espiral de la célula. El Sulfolobus se caracteriza por su
forma redondeada y la disponibilidad de esporas es también
útil en la determinación de la composición de los
sulfobacillus.

5 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
2.6.2. Aislamiento de cultivos puros

Para obtener cultivos puros se hace uso de cultivos

enriquecidos estables que pueden ser obtenidos realizando
varias transferencias de un cultivo inicial a partir de muestras
originales. Desde que el agar contiene sustancias inhibitorias
para la incubación del T. Ferroooxidans, esta bacteria crece
pobremente sobre medios agarosos.

Las colonias se forman entre 5 a 10 días y son resembradas

en medio líquido Waksman con azufre. Una verificación de la
pureza del cultivo se realiza por inoculación sobre los
mismos medios mencionados en el caso de T.
Ferrooxidans.

La reacción del medio se lleva hasta pH 4.0

El azufre se introduce en un medio estéril y primero se

esteriliza separadamente con alcohol. Este azufre final se
pone en un frasco estéril con agua y el frasco se sella con un
tapón y por un espacio de 2 horas se mantiene en un
termostato o un secador a 50-60°C. Es mejor adicionar el
azufre estéril al medio esterilizado separadamente en cada
frasco o tubo de prueba. El medio con azufre puede también
ser esterilizado por una corriente de vapor durante 3 días.
Un cultivo puro se mantiene en este medio, las
transferencias se hacen una vez cada 3 ó 4 semanas.

Para los microorganismos citados anteriormente hay un número de

bacterias
Thionine que facilitan la oxidación de compuestos de azufre.
El T. Dinitrificans es la única bacteria Thionine capaz de crecer bajo
condiciones anaeróbicas a costa del oxígeno de nitratos.
Además, se cultiva sobre medio Baalsrud con Tiosulfato. Este
microorganismo es capaz de oxidar ciertos sulfuros tales como
Galena, y Antimonita pero solamente bajo condiciones aeróbicas.
El T. Intermedius, T. Perometabolis y el T. Organoparus se incuban
en un medio con tiosulfato y extracto de levadura, y el T.
Acidophilus es capaz de crecer en medio ácido con azufre
elemental y desarrollarse heterotróficamente utilizando ciertos
aminoácidos de azúcar y sales.

Los medios para los microorganismos termofílicos se dan a

continuación:

El pH de 3.0 se establece por adición de H2SO4 10 N

Es mejor emplear geles impregnados con medio 9k para

obtener colonias de T. Ferrooxidans. Colonias muy pequeñas de
color marrón rojizo aparecen sobre el gel en periodo de tiempo
entre 8 a 12 días. Algunas colonias son tomadas en fiolas o
tubos de prueba con una pequeña cantidad del medio.
Después aparece un color marrón por la formación del
fierro férrico, y se hacen transferencias en frascos con
medio 9K y sobre un medio con diferentes sustancias
orgánicas para chequear la pureza del cultivo.

Un cultivo puro de T. Ferrooxidans se puede también aislar por

el Método de Dilución. Un cultivo enriquecido se diluye 1 y 10
millones de veces tomando 1 ml de un tubo de prueba a otro,
cada vez. Consecuentemente, uno puede esperar que en 6 a
9 diluciones, solamente, células de T. Ferrooxidans ocurran,
mientras que en las dilusiones de 1 al 5 ocurren otras
especies.

En laboratorio el T. Ferrooxidans se mantiene en medio 9K después que

la

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 5

Minerales
 bacteria ha incubado. Los frascos son colocados en una refrigeradora a
4°
- 6° C. Para conservar el cultivo es necesario hacer transferencias sobre
un
medio fresco una vez al mes.

5 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
El aislamiento de un cultivo puro de T. Thioxidans se lleva a
cabo mediante la inoculación de un cultivo enriquecido en el
medio sólido Walksman conteniendo:

Extracto de levadura 0.1%

Azufre 10 g/l
Temperatura de cultivo 70°C

El microorganismo que está cercano al Sulfolobus

Acidocaldarios, llamado Sulfolobus Brierley y que es capaz
de oxidar azufre, fierro y minerales sulfurados, incluyendo la
molibdenita; es aislado y cultivado sobre medio Brierley
conteniendo:

El azufre o fierro es la fuente de energía. “Flores de azufre” o azufre coloidal se

esteriliza haciendo pasar una corriente de vapor 3 veces durante 30 minutos.

0.25 g de sustancia esterilizada se adiciona por cada 50 ml. de medio

básico.

Para preparar una solución de fierro, 25 g de FeSO4. 7H2O se

diluye en 95 ml de agua destilada, y se adiciona 5 ml de H2SO4
1N. La esterilización se lleva a cabo en autoclave, y 2 ml de
esta solución se agrega a 50 ml de solución básica de sal. La
temperatura de incubación es 35° C – 75°C y el óptimo es
de 60°C, el pH del medio con azufre es de 3. Las
inoculaciones deberán efectuarse cada 3 semanas. El
Sulfobacillus Thermosulfidooxidans se puede también cultivar en
medio Brierley con azufre, fierro o sulfuros. En este caso, la
temperatura óptima es de 50 – 60°C.

El aislamiento de un cultivo puro es el primer paso en la

identificación de un microorganismo. Hay una gran cantidad de
pruebas que permiten establecer a que especie pertenece un
microorganismo. Estas pruebas incluyen una determinación
bioquímica complicada. En la identificación de microorganismos que
se encuentran en los depósitos de minerales, pruebas más
simples pueden
 ser empleadas desde que la diversidad de estos
microorganismos es limitado. Estas pruebas consisten en la
determinación de la fuente de energía, pH óptimo, temperatura,
signos morfológicos, etc.

En la identificación del crecimiento de microorganismos sobre

azufre elemental debe tomarse en cuenta que el T. Ferrooxidans
puede también crecer en este medio. Por consiguiente es
necesario hacer inóculos en medios con Fe para chequear la
capacidad de los microorganismos para oxidar fierro. En cuanto
concierne al medio Walksman con azufre, la bacteria Thionine
Myxothrophic puede también desarrollar en él y, por consiguiente,
el crecimiento de un cultivo puro debe ser chequeado en azúcares,
aminoácidos y sales. El medio Beijerinck es el menos selectivo, el
grupo completo de bacterias Thionine pueden crecer en él.
Para su identificación es también esencial hacer inoculaciones en
medios con sustancias orgánicas y determinar la
concentración óptima de extracto de levadura y otras
sustancias orgánicas. Generalmente, en el aislamiento de un
microorganismo conocido es suficiente emplear pruebas simples
de identificación, mientras que la identificación y descripción de
un nuevo microorganismo requiere de pruebas más complicadas,
incluyendo identificaciones bioquímicas bosquejadas en
manuales especiales.

2.6.3. Cultivo continuo de bacterias

Con el propósito de disponer de volúmenes suficientes de

cultivos en forma continua para la inoculación de columnas y
pilas se desarrolló un sistema de cultivo continuo.

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 5

Minerales
 Fig. 22. Sistema de Cultivo continuo.

6 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
 El sistema básicamente consiste en un reactor en el cual se
puede disponer constantemente de cultivos de bacterias para
inoculación o preparación de concentrados de bacterias. La
disposición del equipo y secuencia de operaciones se muestra en la
Fig. 22. Un aspecto importante que debe tenerse en cuenta en el
sistema de cultivo continuo es la uniformidad, del pH a través de
todo el circuito. De esta manera, la pulpa preparada tendrá el
mismo pH de la pulpa del reactor para evitar problemas de
inhibición por un shock por cambio de pH.

Las etapas de crecimiento de las bacterias en un determinado

cultivo están representadas en forma genérica en la Fig. 23.

Fig. 23. Etapas de crecimiento de las bacterias en función del tiempo.

Como puede observarse, inicialmente las bacterias pasan por

un periodo de adaptación luego del cual su reproducción es
logarítmica. Su alta velocidad de reproducción y las condiciones
del medio llegan a limitar las características de su hábitat. Así
en algún momento su reproducción se detiene y se mantiene
estacionaria hasta que los subproductos de su propia actividad
envenenan su ambiente provocando su inhibición y posterior
muerte.

Esto indica que el punto adecuado de efectuar la transferencia de un cultivo

a otro está, precisamente, en la fase de crecimiento logarítmico.

2.7. POBLACIÓN BACTERIAL

Para la lixiviación bacteriana de sulfuros metálicos, normalmente, se

mantiene unos cultivos del género de Thiobacillus cuyas características
deben ser conocidas e investigadas.

Para la estandarización de las pruebas a nivel de laboratorio en

este campo de la biolixiviación es necesario, especialmente
durante el inicio de una prueba de la Lixiviación Bacteriana en
suspensiones (inoculación), conocer la cantidad de bacterias
presentes en un mililitro de cultivo. Es decir, su población.
Curvas de crecimiento de los microorganismos que caracterizan por
ejemplo los Bioreactores describen las poblaciones versus tiempo; y
demandan métodos rápidos para las determinaciones
correspondientes.

El método más conocido para la determinación de la población es

el método del Número Más Probable (NMP “most probable
number”); un método más rápido resulta por conteo de las
bacterias con la cámara de “Neubauer” o “Thoma”, facilitado por el
contraste de fases como accesorio de un microscopio.

2.7.1. Número más probable

- El grado de dilución,
- Una tabla estadística, y
- Una comprobación visual.

Son las necesidades e informaciones para averiguar el número más probable

de la cantidad de células / bacterias en un cultivo o en una dilución
respectiva.

McGrady ha desarrollado tablas estadísticas, por ejemplo, para

tres o cinco pruebas paralelas que sirven para encontrar el
NMP de la cantidad de bacterias por mililitro. Es necesaria
una secuencia de diluciones del cultivo en investigación hasta
que resulten pruebas que no contengan bacterias.

Los Thiobacillus Ferrooxidans utilizan la oxidación de Fe2+ a Fe3+

como fuente de energía para su metabolismo. Esta oxidación se
muestra en un cambio del color de la solución nutriente y se
comprueba, de este modo, el límite de la concentración para
la dilución de un cultivo.

La determinación del “título de gérmenes” se realiza

rutinariamente de igual forma como el método para el NMP, con
una secuencia de diluciones; pero el resultado lleva una gran
desviación estándar. Unas tres o cinco pruebas (tubos) para
cada dilución permiten reducir este error notablemente. Así con
tres diferentes grados de diluciones se encuentra el NMP (tabla
de McGrady) de bacterias por mililitro en la solución del
cultivo, o sea, la población respectiva. La influencia de la
casualidad que juega el rol decisivo en el “título de gérmenes”
no domina tanto el método del número más probable.

El procedimiento como se encuentra el NMP para la población

de bacterias/ ml para los cultivos del género Thiobacillus, se
muestra en la descripción siguiente:

- Se prepara una secuencia de diluciones de solución del cultivo

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 6

Minerales
 con la
solución nutriente de 9K (sin FeSO4);
- De cada dilución se prepara cinco tubos con solución nutriente de
9K
(10.0 g FeSO4 . 7H2O/ litro en vez de 44.22 g/l); pH 2.5;

6 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
- Se incuba los tubos con las diferentes diluciones hasta que
muestran por coloración el desarrollo de bacterias (hasta el
límite de la dilución). Temperatura 30-35°C;
- Se evalúa el crecimiento de Thiobacillus Ferrooxidans por
medio de la oxidación de Fe2+ a Fe3+. Es decir, el cambio
del color de la solución nutriente a amarillo o marrón
(efecto de concentración).
- Los resultados en los límites de las diluciones que se
reciben después de la incubación se utilizan para la
búsqueda del NMP según las tablas respectivas de
McGrady.

Un ejemplo:

- Cinco tubos paralelos de cada dilución (1:106 = 10-6 del cultivo original,
1:107 = 10-7 del cultivo original, 1:108 = 10-8 del cultivo original).
- Incubados durante un tiempo con 35°C muestran los resultados
siguientes:
- 5 tubos positivos de la dilución 10-6 5
- 2 tubos positivos de la dilución 10-7 2
- 0 tubos positivos de la dilución 10-8 0

El agrupamiento de los números de los resultados es 5 2 0.

Con este número compuesto se entra en la tabla
correspondiente de McGrady y se encuentra el número más
probable.

5.0

La interpretación:

- En la dilución 1:106 del cultivo original se encuentran como número más

probable 5.0 bacterias por mililitro.

El cálculo del NMP para el cultivo original se realiza por división por el factor
de la dilución o sea 10-6:

Mientras tanto existen programas para computadoras sobre la

base de fórmulas matemáticas de estadística con los cuales se
han desarrollado tablas para el NMP con diferentes límites de
confianza: Por ejemplo. 95% y 99%. Los resultados muestran
una pequeña discrepancia con respecto a la tabla de McGrady,
que se recomienda aquí para los casos de aplicación.
BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 6
Minerales
 Para la determinación de la población de cultivos puros de
Thiobacillus Thiooxidans se utiliza la formación de azufre que
se produce por medio del metabolismo con tiosulfato. Esto
sirve para reconocer la presencia de Thiooxidans en las
diluciones respectivas. La solución nutriente se muestra turbia
después del tiempo de incubación a ~35°C.

2.7.2. Contraste de fases para el microscopio

El contraste de fases para el Microscopio, según Zernike,

mejora mucho las observaciones de bacterias y el conteo de
poblaciones de cultivos.

Las bacterias como Thiobacillus Ferrooxidans son objetos tan

delgados y sin coloración especial, que resulta bastante difícil
la observación por luz trasmitida de estos microorganismos. La
absorción, la difracción de la luz y el índice de refracción de las
bacterias como objetos no son lo suficientemente fuertes para
la fácil observación respectiva.

El método de contraste de fases aprovecha la diferencia en la

densidad óptica (índice de refracción) del objeto (bacteria) y la
difracción de la luz por el objeto.

Por el condensador los objetos son iluminados con luz en

forma de un anillo concentrado. En el plano focal del objeto del
microscopio, donde está enfocado este anillo de iluminación del
condensador, se encuentra una pequeña placa de fase que
cambia la fase de la luz paralela, que es la que pasa sin contacto
con objetos.

El cambio de la fase de luz paralela (luz del fondo) por la placa

de fase resulta de modo que la diferencia de la fase de la luz
del objeto alcanza 180°. Por la coloración gris de la placa de
fase del objetivo se reduce la amplitud de la luz del fondo y
alcanza un valor parecido al de la luz del objeto. En el plano de
la imagen de interferencia resulta el objeto obscuro por la
interferencia de los vectores de la luz y el fondo resulta claro.
El mejor contraste de fases se recibiría con luz monocromática.
En la práctica se utiliza luz verde por la adaptación óptima al
sistema óptico del microscopio.
2.7.3. Poder resolutivo y aumento

La eficacia de un microscopio es caracterizada por los

parámetros del poder resolutivo y del aumento.

Para recibir una imagen de interferencia que permita la

observación de objetos, es necesario que el 1er. orden de la
luz difractado entre en la apertura del objeto.

Dos puntos de un objeto pueden ser observados separados

cuando su distancia es más grande que:

Donde

Mientras más grande es la longitud de onda utilizada para la

observación, más grande tiene que ser la distancia de dos
puntos que se quieren observar separados en una imagen.

La apertura numérica resulta hasta 1.0 para objetivos secos y

hasta 1.4 para objetivos de inmersión.

El poder resolutivo se define como

Resulta que no se puede separar estructuras que son

notablemente más pequeñas que la longitud de onda
aplicada para la observación.

El microscopio con luz visible tiene, de este modo, sus limitaciones con
~ 0.2 µm
de distancia de dos puntos.

Por la limitación del poder resolutivo solamente es útil el

aumento hasta un cierto límite. Este límite del aumento total
se encuentra entre 500 y 1000 veces la apertura numérica
del objetivo.

El objetivo de inmersión tiene una apertura numérica de A = 1.4

El aumento máximo que es útil en este caso para A, llega hasta 1400
BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 6
Minerales
 Un aumento mayor no sirve para el poder resolutivo y el
aumento de 1400 es provechoso sólo con aceite de inmersión
y el objetivo correspondiente.

2.8. TRANSFERENCIA DE ENERGÍA EN SISTEMAS BIOLÓGICOS

Un mayor problema de vida es la transferencia de energía desde una

fuente al organismo y la utilización de parte de esa energía para su
crecimiento, multiplicación y otros procesos biológicos. Los compuestos
fosforosos juegan un rol importante en los fenómenos de transferencia de
energía. El mantenimiento de sistemas biológicos, aproximadamente a
temperatura y presión constantes, requieren la transferencia de energía desde
reacciones exergónicas (exotérmicas) a reacciones endergónicas
(endotérmicas). Un mecanismo lógico para tales procesos incluye un
acoplamiento de las reacciones exergónicas y endergónicas por medio
de un compuesto común a ambas reacciones.

Es universalmente admitido que la energía metabólica de la oxidación

del substrato se transfiere al ATP (Adenosine Triphosphate). El ATP
“cargado”, entonces, transporta la energía bioquímica a todas partes
de la célula donde la energía puede ser requerida para la síntesis y
mantenimiento. La energía del ATP es utilizada en la célula para
trabajo de transporte, trabajo mecánico y de biosíntesis (ver Fig. 24). Y
en este proceso, el ATP es hidrolizado a ADP (Adenosine
Diphosphate) más fosfato inorgánico. La forma química del ADP y ATP
está dada en la Fig. 25. El ADP es la forma descargada de energía y
que luego retorna a la fuente de alimento para reponer energía y
convertirse otra vez en una molécula cargada de ATP. Una cierta
cantidad de energía perdida es atribuida a estos fenómenos de
transferencia de energía. Por ejemplo, pérdidas de energía pueden
ocurrir durante la transferencia de energía de los substratos al ATP y
durante la conversión del ATP a ADP.
Fig. 24. Utilización de energía por microorganismos.
 Fig. 25. Adenosine Phosphates.

2.9. ADAPTACIÓN DE BACTERIAS

La actividad bacterial se mejora efectuando repetidos cultivos sobre el

mismo
substrato. Este seguimiento está ilustrado

en la Fig. 26. Mediante una adaptación se

logra:

- Una disminución del tiempo muerto (tiempo improductivo)

- Aumento en el grado de extracción del metal
- Incremento de la velocidad de extracción
- Cuando las curvas de extracción están muy cercanas (ver curvas
IV y V), se puede considerar como que la adaptación ya
finalizó.
- La bacteria a partir de la prueba I es usada como inóculo para la prueba
II y así
sucesivamente.

Fig. 26. Curvas de adaptación de bacterias.

2.10. FASE EXPONENCIAL

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 67

Minerales
 Algunas veces la transición entre fases es muy pronunciada y, en otros
casos, hay fases intermedias. Es decir, una FASE DE ACELERACIÓN entre
las fases muerta y exponencial, y una FASE DE DESACELERACIÓN entre
la fase exponencial y la fase estacionaria.

6 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
 Fig. 27. Fases de crecimiento de las bacterias.

Durante la fase exponencial el logaritmo del número de células (ln X ó

Log X) aumenta linealmente con el tiempo.

(83)

donde k es la velocidad de crecimiento específico y la ecuación 83 se puede escribir

como

(
8
4
o como )

(
8
5
)

donde XO es el valor de X extrapolado a t = 0, según se muestra en la Fig. 28.

Solamente si no hay fase muerta, XO será el número actual de células al comienzo

del experimento.
Fig. 28. Ploteo del logaritmo del número de células, contra el tiempo, para la fase exponencial.
 Es conveniente definir el TIEMPO MEDIO DE GENERACIÓN, t2, que es el
tiempo que se toma para que el número de células se dupliquen
durante la fase exponencial. Esto es el tiempo correspondiente a:

(86)

de manera que a partir de la ecuación (85) llegamos a:

(87)

Si se observa una célula individual se verá que aumenta en tamaño y,

eventualmente, se divide en 2 células hijas. Cada una crece y luego
se divide. El tiempo entre una división de la célula y el siguiente es
el tiempo de generación, y varía muy ampliamente para un tipo de
célula dado. EL TIEMPO MEDIO DE GENERACIÓN es el tiempo medio
de división para todas las células en un cultivo bajo las condiciones
particulares del experimento.

2.11. FASE MUERTA

En el acápite anterior no se consideró la fase muerta y XO podría, por

consiguiente, tomarse como el número de células al comienzo del
experimento. Si hay una fase muerta el tiempo medio de generación
se debe calcular de los datos tomados dentro de la fase experimental.
Luego, la duración de la fase muerta puede ser calculada. El
procedimiento se ilustra mejor con un ejemplo.

PROBLEMA

Un medio de cultivo
4
(FeSO ) fue inoculado con 2 x 105 células de T.
Ferrooxidans x dm-3. Después de 27 horas el sistema ha entrado a la
fase exponencial y había 1.2 x
106 células x dm-3. Después de 3 días estuvo todavía en la fase exponencial y
había
3.5 x 107 células x dm-3.

Calcular (a) la velocidad de crecimiento específico, (b) el tiempo medio de

generación dentro de la fase exponencial y (c) la duración de la fase
muerta.

SOLUCIÓN

Podemos tratar con la fase exponencial cambiando la escala de tiempo,

considerando las 27 horas medidas como t = 0, y los 3 días medido
como t = (3 x 24 - 27). Luego la velocidad de crecimiento específica
será:

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 6

Minerales
7 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de
Minerales
el tiempo medio de generación:

Podemos obtener la duración de la fase muerta calculando el tiempo que

tomará 5 x 105 células x dm-3 para multiplicarse a 3.5 x 107 células x dm-
3
, si no ha habido fase muerta.

Este tiempo está dado por la ecuación (85)

Sin embargo, el crecimiento actualmente tomó (3 x 24) horas = (3 X 24) 60 =

4320 minutos. Así la duración de la fase muerta es:

Los cálculos realizados se ilustran mediante la Fig. 29.

Fig. 29. Representación Gráfica de resultados del problema.

2.12. FACTORES QUE TIENEN INFLUENCIA EN LA ACTIVIDAD BACTERIAL

La actividad metabólica de los microorganismos incluidos en la

lixiviación de sulfuros está afectada, considerablemente, por factores
ambientales. Entre ellos podemos mencionar: Eh, pH, rH2,
temperatura, presión, concentración de nutrien- tes, tamaño de
partículas o área de superficie del substrato y otros.

2.12.1. Efecto del medio ambiente

Los límites de la actividad bacterial en el ambiente natural se

han estudiado en términos del pH y el potencial de oxidación –
reducción. Este último está definido por:

(88)

donde K es la constante de equilibrio de la reacción. La escala Eh se

extiende
desde +850 a- 450 mv. mientras que los rangos de pH de 1.0 a 10.2.

Sin embargo, estos valores no representan los límites

extremos, la vida todavía existe fuera de ellos. Una indicación
más sensitiva del efecto del ambiente sobre la actividad de
los microorganismos está dado por:

(89)

donde aH2 es la actividad del hidrogeno molecular que puede ser definido
de
la siguiente ecuación:

(90)

A través de la aplicación de la ecuación (88) y la ecuación (89)

una relación entre Eh y rH2 se puede derivar:

(91)

Los valores de rH2 pueden estar en el rango desde 0 a 41.7 y están

directamente
relacionados al cambio de energía libre de Gibbs:

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 7

Minerales
 (92)

7 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
 además, está relacionado a la constante de equilibrio:

(93)

Los valores de corresponden a la cantidad máxima de

energía que está disponible para los microorganismos en
forma de ATP (Adenosine Triphosphate).

2.12.2. Sistema de energía – rH2

(94)

1)
(95)

(96)
(97)

(98)

(99)

Ecuación de Nernst (aplicado sobre la ecuación 94)

2) (100)

sustituyendo la ecuación (99), en la

ecuación (100)

(1
01
)

3) Caso General

(1
02
)
combinado la ecuación (101) y (102):

(103)

(104)

(105)

puede ser aplicado a cualquier reacción rédox.

El rH2 Máximo obtenible para dos electrones

OXIDACIÓN DEL Fe2+

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 7

Minerales
 Las concentraciones de Fe3+, Fe2+ y el pH deberán reemplazarse en al
ecuación

2.12.3. Fundamento teórico sobre reacciones redox

Una reacción electroquímica consiste de un par de reacciones:

oxidación y reducción acompañadas por pérdidas o ganancias
de electrones. Todas las reacciones de oxidación y reducción
pueden ser divididas en medias reacciones indicando el modo
de transferencia del electrón. En general, una media reacción
se puede expresar como:

(106)

y el potencial rédox de esta ecuación referido al electrodo estándar de

hidrógeno está dado por:

(107)

Los términos “Red” y “Ox” pueden representar respectivamente los

iones reducidos y oxidados de un par rédox en solución con su
potencial medido con un electrodo de platino. Cuando un electrodo se
comporta reversiblemente; es decir, la reacción es capaz de ocurrir en
ambas direcciones, no hay diferencia esencial, en principio, entre su
respuesta de electrodo.

Para la medición de potenciales de oxidación – reducción se usan comúnmente un

par de electrodos, consistente de un electrodo inerte y un electrodo de referencia.

El Electrodo Inerte: Funciona como un aceptor o donador de electrones

a los iones de solución. El platino es el que se usa mayormente como
electrodo inerte, aunque el Au, C, Ir, y otros son mencionados en la
literatura.

El Electrodo de Referencia: Electrodo saturado de Calomel (SCE) es

ampliamente usado para suministrar una F.e.m. conocida.

Electrodo de Primera Clase: Un metal en contacto con sus propios iones en solución.

Electrodo de Segunda Clase: (Electrodo de referencia) Un metal está

en contacto con su compuesto insoluble en un electrolito, teniendo
el mismo anión que su compuesto insoluble.
En el DIAGRAMA Eh-pH, el potencial está normalmente expresado como potencial
de
reducción, según la Convención de la International Union of Pure and Applied
Chemists:

(108)

donde A, B, C y D son solutos iónicos, moléculares o gaseosos. El cambio de la

energía
libre estándar asociado con esta reacción está dado por:

(109)

(110)

(111)

Si todas las sustancias excepto el H+ están en su estado estándar, el

potencial de electrodo se reduce a la simple expresión:

(112)

a) Así, a temperatura ambiente la pendiente de una línea

expresando Eh como una función de pH es:

b) Si no hay iones hidrógeno en la ecuación (m=0) la pendiente es cero.

c) Si hay iones hidrógeno, pero no electrones en la ecuación, la
línea es vertical y tiene valor de pH fijo.

Para obtener este pH, la ecuación (109) puede escribirse como (con
n=0):

(113)

(114)

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 7

Minerales
Valores de Eh cuando n≠0 y valores de pH cuando n=0 para
condiciones no estándar se puede obtener por elección de un valor
apropiado para el término:

Esto generalmente significa seleccionar una concentración para las especies

disueltas.

Cuando las actividades de los reactantes y productos (actividades del

estado inicial y final) son la unidad:

entonces:

EJEMPLO:

Considerar el sistema de oxidación – reducción para el Fe 2+ y Fe3+ en solución con

[Fe]=0.001 y [Fe3+]=0.01mol dm-3 La F.e.m. de la celda se puede representar por:

encontrar la F.e.m. de la celda a 25º C.

SOLUCIÓN:

Reacciones de media celda:

1)
(A)

2) (B)

Restando (B) de (A)= reacción de la

celda total.

(
C
 )

(D)
El valor de Ehref=0.245 a 25ºC
Para la media reacción (A), podemos
escribir:

(E)

Sustituyendo por los valores numéricos:

(F)

Sustituyendo la ecuación (F) en la

ecuación (D)
2.12.4 Ener
gía
libre
está
nda
ry
la
cons
tant
e de
equi
libri
o

E
c
m
i
d
e
e
í
l
e
e
á
d

e
l
s
m
d

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 7

Minerales
 energías libres de los productos
en sus estados estándar menos
las energías libres de los
reactantes en sus estados
estándar.

(115)

La energía libre estándar de una

reacción está relacionada a la
constante de equilibrio:

d
o
n
d (11
e 7)
:

(11
8)

2.12.5 Electrodo de
hidrógeno

La energía libre estándar de reacción de

la media celda de hidrógeno es cero.

(119)

7 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
Consecuentem
ente:
(1
20
)

C
u
a
l
q
u
i
e
r

r
e
a
c
c
i
ó
n

d
e

o
x
i
d
a
c
i
ó
n
-
r
e
d
u
c
c
i
ó
n
 se puede escribir como 2.12.6 Energía
dos reacciones de media libre de
celda con la media reaccione
reacción del hidrógeno sy
como la parte reducida u medicione
oxidada de dos pares, y el s de
cambio de energía libre voltaje
estándar atribuido
enteramente a la S
oxidación o reducción de u
media celda, ignorando la p
de los electrones. o
n
EJEMPLO ESPECÍFICO e
r
Considerar la
reacción: q
( u
1 e
2
1 n
Podemos escribir: ) o
s
o
t
r
(121-a) o
s
(121-b)
(121-c) t
(1 e
n
2 e
1 m
o
-
s
d
) u
n

( e
1 l
e
2 c
2 t
) r
o
d
o de cobre puro
sumergido en una
solución conteniendo
iones cúpricos con
actividad 1, y un electrodo
de hidrógeno consistente
de un electrodo de platino
inerte sumergido en una
solución de iones
hidrógeno con actividad 1,
y saturado con gas H2 a
una presión de 1 atm
(Fig. 30).

Fig. 30. Sistema para medir voltaje entre dos

electrodos.
Si se conectan los electrodos, los electrones fluirán a través
del circuito. El cobre será depositado en el electrodo de cobre,
según se muestra en la siguiente reacción:

(123)

y en el electrodo
2
de H , el hidrógeno liberará electrones para llegar a ser
H+:

(124)

así la reacción total será:

(125)

El voltaje entre los electrodos se puede medir al principio del proceso

antes
de que haya ocurrido cualquier cambio sensible en las actividades. Éste
es
0.337 volt. Según cómo la reacción procede hacia el equilibrio, el voltaje
disminuye y en el equilibrio llegará a ser cero.

Así, al principio de la reacción los potenciales correspondientes

son medidos a las condiciones estándar con todas las sustancias a
actividad 1. Al final, el voltaje desaparece cuando el cambio de
energía libre llega a ser cero. Esto sugiere una relación entre el
voltaje y el cambio de energía libre estándar, el cual es:

(126)

Se sabe también que:

(127)

de modo que podemos escribir:

(128)

y de aquí:

(129)

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 7

Minerales
EJEMPLO:

Considerar el electrodo estándar del ión Cu/Cu2+, su voltaje

medido contra el electrodo estándar de H2 es 0.337 volt. a
25ºC (298.15ºK) y donde 2 electrones son incluidos.

(130)

Para la reacción:

(1
31
Podemos escribir: )

(1
32
)

Para una reacción generalizada:

Ejemplo:

Consideremos Cu/Cu2 2+ // H+ (H ) Pt, donde la actividad del Cu2+ no es una

unidad.

Podemos escribir:
luego reemplazando los valores de las constantes a 25ºC.
 si el potencial medido es 0.1 volt., la actividad del Cuº es 1, el
número de
electrones incluido es 2, entonces tendremos:

En general, la reacción de media celda para todos los sistemas de

oxidación
– reducción se puede escribir como:

el potencial de media celda correspondiente es:

El electrodo de referencia simplemente actúa como una media

celda de potencial constante (a temperatura constante) y la
F.e.m. de la celda total está dado por:

2.12.7 Diagrama Eh – pH

Los diagramas originales de esta clase fueron desarrollados

por Marcel Pourbaix para definir la termodinámica de
sistemas de corrosión (M. Pouribaix: Atlas de Equilibrio
Electroquímico en solución acuosa; Pergamon Press, London
1966). Desde entonces, Garrells y Christ (R. Garrells and
C.L. Christ: Solution, Minerals and Equilibria; Harper and Row,
1967) han confeccionado diagramas similares desde un punto
de vista geológico. Los geológos están interesados con las
condiciones bajo las cuales los minerales son formados y
depositados a partir de soluciones o sistemas hidrotermales.
Estos diagramas también son útiles en la discusión y
entendimiento de problemas relacionados a la lixiviación
bacterial.

Baas Beching et, al (J. Geol.; 68 (3), 243-284- (1960)) definió

los límites de sistemas biológicos en términos de los

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 8

Minerales
 diagramas Eh- pH.

8 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
MEDICIÓN DE Eh

Fig. 31. Distribución de la medición Eh-pH de organismos importantes geológicamente.

Fig. 32. Áreas aproximadas de actividad de microorganismos, Diagrama Eh-pH

CONSTRUCCIÓN DE LOS DIAGRAMAS Eh-pH

La estabilidad del agua se puede expresar como una función de

las presiones parciales del hidrógeno y oxígeno, obteniendo la
constante de equilibrio para la reacción:

(133)

Límite superior de estabilidad del

agua

El límite superior de estabilidad del agua puede ser

determinado según el equilibrio entre el H2O y O2 a 1 atm de
presión. La siguiente reacción se puede usar para este
propósito:

(134)

luego podemos escribir:

(13
5)

(13
6)
sustituyendo:

(13
7)

Por consiguiente, el equilibrio entre el agua y el oxígeno a una

presión parcial de 1 atm es una línea recta en un ploteo Eh-
pH con pendiente =-0.0591 y tiene una inter sección con el
eje Eh igual a Eho. Para obtener el valor numérico de Eho
para la reacción 134, la energía libre estándar se obtiene y se
expresa a partir de:

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 8

Minerales
 (138)

8 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
de modo que:

(139)

La ecuación final para el límite superior de estabilidad

del agua es:
(140)

p
r
u
a
p
e
i
n
p
r
a
d
o
í
e
o
d
e
e
t
d
1
a
m
p
d
m
o
u
a
l
s
g
i
n
e
e
u
 ción:

(141)

a , el segundo término en la
ecuación (141) desaparecerá. Por
consiguiente, los contornos isobáricos del
oxígeno sobre un diagrama Eh-pH (O2 en
equilibrio con agua) son líneas rectas
paralelas con una pendiente de
-0.0591 volt/pH.

Fig. 33. Límite superior de estabilidad del agua

Límite inferior de estabilidad del agua

A causa de la reacción:
La presión parcial del hidrógeno también es fijada si la del
oxígeno es estipulado, así los contornos de son también
líneas rectas con la misma
pendiente. Sin embargo, valores para también se pueden derivar
escribiendo la reacción de media celda:

(142)

Esta media celda no incluye agua líquida pero su presencia está

implícita en
la aqforma H+ . La ecuación Eh es:

(143)

sustituyendo -pH = Log[H+]

(144)

el valor numérico de Eh0 se obtiene calculando y sustituyendo en

la relación:

(145)

(146)

puesto que Eho=0 la ecuación final es:

(147)

La ecuación (147) puede ser usada, para trazar líneas sobre el diagrama
E h-
pH para cualquier presión de H2 elegido. A . 1 atm, el
primer término de la ecuación (147) se reduce a cero y

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 8

Minerales
 podemos escribir:

Este describe el límite inferior de

estabilidad del agua (148)

8 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
 Fig. 34. Límites de estabilidad del agua.

DRIAGRAMA Eh-pH PARA ESPECIES DE AZUFRE

En esta presentación vamos a usar sólo las especies estables de azufre:

.

La disociación del H2S como una función de pH:

(149)

(150)

c c

u u

a a

n n

d d

o o
 (151)

(152)

de manera que los límites entre estas especies son líneas

verticales a pH= 7 y 14.
Similarmente, la oxidación de H2S a pH constante producirá y .
Las
reacciones y ecuaciones correspondientes de Eh son:

(153)

(154)

sustituyendo y resolviendo la ecuación (154) se obtiene:

(155)
(156)

(157)
(158)
(159)
(160)

(161)

Cuando las especies de azufre son iguales, es decir si [S2-] = [

], el término que contiene especies de azufre en las
ecuaciones de Eh llega a ser cero. De modo que las líneas
pueden ser trazadas solamente como funciones de Eh y pH,
las cuales son límites entre las especies dominantes.

El límite entre y se obtiene de la reacción:

(162)

(163)

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 8

Minerales
 Fig. 35. Distribución de equilibrio de especies de azufre en agua a 25oC y 1 atm de presión
total

EJEMPLO DE CÁLCULOS:

Dado:

(1)
(2)

Demostrar el desarrollo de una ecuación Eh completa para

cada una de las 2 reacciones dadas:

SOLUCIÓN
2.12.8. Efecto de la temperatura

La temperatura óptima para el T. Ferrooxidans está en el rango

de 25 a 45 °C. Para la oxidación del fierro ferroso la
temperatura fluctúa entre 28 a 36 °C y para la oxidación del
sulfuro metálico es 35°C.

La oxidación biológica de sulfuros metálicos por el T. Ferrooxidans cesa

alrededor de 50 °C y a mayor temperatura solo ocurre una oxidación

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 8

Minerales
 química.

9 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
Una temperatura mínima no ha sido establecida para el
crecimiento del T. Ferrooxidans, pero generalmente se acepta
que la actividad bacterial cesa en el punto de congelación del
medio de cultivo.

El rango de temperatura para el crecimiento y reproducción de

diferentes microorganismos se extiende desde -18 a sobre 100
°C (ver clasificación de bacterias según su temperatura de
crecimiento).

Algunas especies de organismos psychrophílicos se multiplican a

temperatura
debajo de-5 °C.

El rasgo principal que distingue a los organismos psychrophílicos es su

habilidad de crecer a temperaturas menores que 0 °C.

CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS DE ACUERDO A SU TEMPERATURA

DE CRECIMIENTO

SICRÓFILOS: Crecen bien a 0°C

MESÓFILOS: La mayoría de las bacterias comúnmente

estudiadas son mesofílicas. Éstas son activas
en el rango de temperatura de 10 a 50 °C y
tienen temperaturas óptimas entre 20 a 35 y
45 °C. el Thiobacillus Thiooxidans y el
Thiobacillus Ferrooxidans pertenecen a este
grupo de microorganismos.

TERMÓFILOS: Las bacterias termófilas prefieren

temperaturas de 40 a 120 °C, que son
intolerables por la mayoría de formas de vida
animal. Las células vegetativas de mesófilo que
no forman esporas mueren generalmente
dentro de unos cuantos minutos a 60 °C. La
mayoría de otras formas de vida también
mueren a esta temperatura.

Las termófilas poseen obviamente proteínas

raras o una situación físico-química rara que
permite y favorece la actividad fisiológica a
temperaturas que denaturan las proteínas y
otros organismos. La temperatura óptima de
varias enzimas de organismos termofílicos está
en el rango de 40 a 120 °C.

Entre ellos podemos mencionar a las siguientes:

- Sulfobacillus acidocaldarius 55 – 85
- Sulfolobus como Termophile °C
- Sulfobacillus 45 – 80
thermosulfidoxidans °C
50 – 120
°C
- Thiobacillus como TH3 45 – 70
°C
- Archaebacteria 85 – 110
°C
- Pyrodictum Accultum 70 – 110
°C
 La baja temperatura no necesariamente
destruye a la bacteria. La multiplicación cesa
debajo de la temperatura mínima de
crecimiento pero los organismos pueden
permanecer viables en tal condición,
frecuentemente, durante largos períodos. El
crecimiento y multiplicación pueden
reanudarse cuando la temperatura nuevamente
se eleva al rango normal.

La resistencia de la bacteria a la baja

temperatura provee un medio de preservación
de muchas especies para largos períodos sin
la necesidad de transferencias frecuentes.

La forma de la curva de la Fig. 36 es típica

para la dependencia de la temperatura de
las velocidades de reacción biológica.

El coeficiente de temperatura Q10 se puede

expresar como:

(164)

donde T1 y son temperaturas en o1K y V , son las velocidades de

2
T2 y V
reacción apropiada.

Fig. 36. Efecto de la temperatura sobre la velocidad de extracción del zinc a pH

2.5 y densidad de pulpa (concentrado de flotación de un sulfuro de
zinc) 5.3 %: T. Ferrooxidans.

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 9

Minerales
 Fig. 37. Curvas típicas de lixiviación

El coeficiente de temperatura para muchas reacciones

químicas es como 2; es decir, la velocidad de reacción
aproximadamente se duplica por cada 10 °C de aumento en
temperatura.

La energía de activación (-∆Ea) se puede determinar a partir de la ecuación

de Arrhenius.

(165)

donde A es el factor de frecuencia y K es la constante de velocidad de

reacción. A menudo K es reemplazado por V. (Fig. 38)

Fig. 38. Ploteo Arrhenius

- = Denaturacion de energía (muerte térmica)

(166)
“A” puede ser determinado de la intersección con el eje log K (o log
V).

En cuanto al efecto de la temperatura hay 2 factores a ser

considerados:

a) El aumento usual en la velocidad de reacción con un aumento en

la
temperatura (activación).
b) Un aumento en la velocidad de muerte térmica de
microorganismos (inactivación o desactivación) debido a la
denaturación de proteínas para la bacteria.

Esta reacción de denaturación conduce a un decaimiento en

la actividad biológica y, según la temperatura, aumenta la
denaturación y llega a ser mucho más rápida que la oxidación del
sulfuro, hasta que ocurra la muerte térmica de los
microorganismos.

TABLA - 4. Comparación de valores de Q , ∆E y ∆E , para la oxidación

de
10 a d
diferentes substratos por el T. Ferroxidans.

La fisiología de las Termófilas no ha sido completamente

investigada. Algunas modificaciones deben ocurrir en el sistema
de enzima para prevenir la fácil denaturación o para vencer los
efectos de esta inactivación. Aparentemente hay 2 métodos
distintos de controlar los efectos térmicos:

a) Algunos organismos tienen un conjunto particular de enzimas,

los cuales son simplemente más resistentes a altas
temperaturas (tienen una ligazón fuerte de hidrógeno para
prestar mayor estabilidad térmica a las proteínas).
b) Algunos organismos compensan la denaturación normal de
enzimas por el calor; es decir, requieren de cierta
temperatura para sintetizar las proteínas con mayor
velocidad.

MUERTE EN FRÍO

La muerte en frío ocurre debajo del punto de congelación. La

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 9

Minerales
 formación de
cristales de hielo dentro de la célula causa varios efectos:

a) El daño físico de los cristales de hielo a las enzimas pueden

causar daños
irreversibles a las membranas de lipoproteínas.
b) La remoción del agua activa por congelamiento causa
concentración de los electrolitos y metabolitos por encima
del rango normal fisiológico.

9 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
LA RADIACIÓN Y SUS EFECTOS BIOLÓGICOS

La existencia de vida es también dependiente de las radiaciones naturales

que
existen en el medio ambiente.

La radiación se puede clasificar en: natural, ionizado, ultravioleta y laser.

Estudios más recientes indican que la radiación puede ser dividida en

emisiones corpusculares, tales como:

- Partículas Beta
- Protones
- Deutrones
- Partículas Alfa
- Neutrones
- Radiaciones electromagnéticas.

Las partículas con capacidad penetrante en la célula, por

ejemplo, son dependientes del peso y carga, así como de la
velocidad con la cual la partícula se está moviendo. La
capacidad penetrante y la propiedad de inducción – potencial
de ionización están directamente relacionadas a los efectos
biológicos.

La onda electromagnética tiene 2 componentes que vibran a

90°, una a partir de la otra. Estos dos, elementos magnéticos y
eléctricos, vibran en la fase y oscilan cerca de un valor
promedio negativo. La frecuencia de oscilación y la longitud de
onda determinan la energía de la onda.
 Como la luz, todas las ondas electromagnéticas muestran ondas y
fenómenos de partícula. La clasificación de las ondas
electromagnéticas de acuerdo a su importancia biofísica es:

- Región infrarroja
- Región visible
- Región ultravioleta (fotoquímica)
- Región de ionización

El T. Ferrooxidans es sensitivo a la radiación y los mejores

resultados para su crecimiento se obtienen bajo oscuridad.

La luz ultravioleta puede resultar en mutación y muerte para estos

microorganismos.

2.12.9 Efecto del substrato

La Fig. 39 representa una curva típica del efecto de la densidad de

pulpa
(concentración del substrato):

Fig. 39. Curva típica del efecto de la densidad de pulpa

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 9

Minerales
A bajas densidades de pulpa la velocidad de extracción es
directamente proporcional a la densidad de pulpa, pero a
mayores densidades de pulpa la velocidad llega a ser
independiente de esta variable. Así a mayores valores de
densidad de pulpa la velocidad de extracción disminuye.

I: A concentraciones bajas de substrato la velocidad de

extracción está limitada por la cantidad de substrato
disponible (considerando como substrato el ZnS); es decir,
la velocidad de crecimiento de la bacteria está limitada por
la disponibilidad de fuente de energía.
II: A densidades de pulpa mayores hay un exceso de fuente
de energía y de la velocidad de crecimiento bacterial. Por
lo tanto, la velocidad de extracción del zinc se ve
limitada por otros factores.

Al respecto, la velocidad de transferencia del gas (O2 y CO2) se

podría haber reducido y por lo tanto podría llegar a ser
limitante. Las concentraciones altas de zinc (concentración
de producto) pueden llegar a ser tóxico a los
microorganismos.

Aumentando la presión parcial de CO2 en el aire durante la

aireación los siguientes cambios han sido obtenidos. (Fig.
40).

Con aire normal (0.03% CO2) la velocidad de extracción aumentó

linealmente con el incremento de la densidad de pulpa hasta
cerca del 10%. Esto implica que debajo de esta densidad de
pulpa, el crecimiento y, por lo tanto, la disolución de zinc
están limitados por la disponibilidad de substrato (ZnS). Puesto
que el enriquecimiento de aire con varios niveles de CO2
extiende la parte lineal de la curva en la Fig. 40. Se puede
concluir que con aire normal la concentración de fuentes de
carbón (CO2) llega a ser limitante alrededor de 10% de
densidad de pulpa.
Fig. 40. Efecto de la densidad de pulpa y el CO2.
A mayores concentraciones de CO2 en el aire, las cuales
conducen a mayor disponibilidad de CO2 en el medio líquido,
permitan que se extienda la porción lineal de la curva a una
densidad de pulpa de como 20%. Sin embargo, aumentando la
densidad de pulpa más allá de 20%, y la concentración de CO2
más allá de de 0.23% no es efectivo como para incrementar la
velocidad de lixiviación. Algunos otros factores, tales como la
concentración de zinc en solución y otros todavía no
identificados, estarían limitando la velocidad de extracción del
zinc.

La influencia de la densidad de pulpa y la molienda de un

concentrado de flotación de Chalcopirita sobre la actividad del T.
Ferrooxidans se muestra en la Fig.41.

Fig. 41. Efecto de la densidad de Pulpa y la molienda

Se puede observar que velocidades mayores se obtienen con las

fracciones de tamaño más pequeños. La velocidad más alta de
extracción de cobre lograda fue con 1650 mg dm-3 h-1, la cual
fue obtenida con una densidad de pulpa de 25%. Los
experimentos que se muestran en la Fig. 41 fueron llevados a
cabo a pH de 2.3 y temperaturas de 35 °C con aire normal
suministrado por aireación. La forma de las curvas de la Fig.
41 son similares a los mostrados en las Fig. 39 y 40.

Las extracciones finales (Cu, mg dm-3 ó %) después de 7 días

de lixiviación se muestran en las Fig. 42 A y 42 B,
respectivamente

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 9

Minerales
 Fig. 42a.

Fig. 42b. Extracción de cobre a diferentes tamaños de partícula.

En general, a densidades de pulpa menores la extracción de

Cu es casi completa. A densidades de pulpa más altas, después
que la concentración del ión férrico alcanza su nivel de
saturación, parcialmente se hidroliza y precipita como un sulfato
férrico básico del tipo Jarosita. La extracción de cobre está
dada por la siguiente reacción:

(167)

y la formación de Jarosita por:

(168)

El protón puede ser reemplazado por ,...; y se

determinó que la Jarosita interfiere con la actividad bacterial
por cubrir la superficie de la chalcopirita que no ha
reaccionado.
También es posible que la concentración alta de ión cúprico
(40-50 g dm-3) actúe como un inhibidor y contribuya a la
reducción de la actividad bacterial.

La hidrólisis del fierro también incluye las reacciones:

(169)
(170)

Las reacciones de hidrólisis mencionadas remueven fierro de

la solución y producen ácido sulfúrico. La concentración de
fierro férrico total remanente en solución es una función de la
constante de solubilidad de los hidróxidos, de la actividad del
ión hidrógeno y de la concentración del ión sulfato.

(171)

La química del fierro en la lixiviación microbiológica de los sulfuros

metálicos ha sido muy poco estudiada e investigaciones
adicionales deben efectuarse para ganar un mejor
entendimiento del rol de fierro en estos procesos.

El efecto de la precipitación del fierro se elimina parcialmente por

remolienda
del residuo lixiviado para liberar el substrato.

Fig. 43. Lixiviación del residuo lixiviado previamente sometido a remolienda.

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 9

Minerales
DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA EXTRACCIÓN DE
COBRE MEDIANTE LIXIVIACIÓN
BACTERIANA

Fig. 44. Presentación esquemática de un proceso de lixiviación bacterial para la

extracción de cobre a partir de un concentrado de flotación sometido a
molienda.

Fig. 45. Proceso de lixiviación cíclica continua generalizado para la extracción de cobre a
partir de
concentrados de sulfuros de cobre.
 Fig. 46. Sistema de lixiviación en contracorriente.

2.12.10 Efecto del pH

La oxidación biológica del ión ferroso y de los sulfuros incluye

movimiento de iones hidrógeno, así como de electrones. Por lo
tanto, el pH tiene un efecto definido sobre el metabolismo de
las bacterias.

La influencia del pH sobre la actividad del T. Ferrooxidans ha

sido estudiada por la mayoría de investigadores en el rango de
1 a 5. Fue reportado que los valores óptimos de pH están
situados entre 2.3 y 2.5 para la chalcopirita, sulfuro de zinc,
covelita y fierro ferroso.

El carácter acidofílico del T. Ferrooxidans es compartido por un

buen número de microorganismos. Sin embargo, no hay datos
disponibles para indicar las interacciones que pueden existir
entre dichos microorganismos y el T. Ferrooxidans durante la
lixiviación de los minerales sulfurados.

La apariencia simple del proceso bacterial tropieza, en la

práctica, con propiedades de los minerales y del medio
ambiente variables en un amplio rango. Cada yacimiento
constituya, así, un problema particular que requiere ser
estudiado separadamente.

2.12.11 Efectos de los nutrientes

Los nutrientes que requiere el T. Ferrooxidans son los mismos

que utiliza un autótrofo químiosintético y un gran número de
medios de cultivo pueden ser encontrados en la literatura.
Los medios líquidos que se usan más frecuentemente se
pueden ver en la Tabla 6.

El T. Ferrooxidans sintetiza sus materiales celulares a partir

de fuentes inorgánicas que son: Dióxido de Carbono (como

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 10

Minerales
 fuente de Carbono para el crecimiento de la célula), Sulfato de
Amonio y Fosfato ácido de Potasio (como fuente de nitrógeno y
fosfato), Cloruro de Potasio, Sulfato de Magnesio y Nitrato de
Calcio (como factores de crecimiento).

10 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
 (*) Medio de Cultivo 9K
(**) La fuente de energía utilizada para los cultivos stock es el ión ferroso. Para los
experimentos
de lixiviación se le reemplaza por un sulfuro.

Estudios sobre el efecto de la concentración de nutrientes en la

lixiviación microbiológica de un concentrado de sulfuro de
zinc indicaron que la concentración de amonio controlaba el
rendimiento, mientras que la concentración de fosfato
afectaba la velocidad de extracción del zinc. La concentración
de los factores de crecimiento no tuvo efectos detectables
sobre la oxidación del substrato.

En medio ácido de lixiviación de sulfuros la solubilidad del

oxígeno y el CO2 es baja, y una velocidad máxima de
transferencia de masa de estos gases se requiere para
mantener el crecimiento bacterial.

En la ecuación (73) se puede apreciar que la oxidación de un

mol de sulfuro requiere de 2 moles de oxígeno o, lo que es
lo mismo, un kilogramo de azufre del sulfuro requiere para su
oxidación de dos kilogramos de oxígeno. Dos kilogramos de
oxígeno en condiciones normales ocupan 1,400 litros y su
solubilidad en agua a 30 - 35 °C es del orden de 7 ppm por
lo que los 2 kg requerirán de unos 285,000 litros de
solución acuosa. Estas cifras indican que el problema de la
aireación en este proceso es importante y que debe ser
considerado preferencialmente. Desde luego, las cifras
parecen señalar que un sistema de lixiviación estática no es
adecuado, por lo tanto los esfuerzos deben estar encaminados
hacia el diseño de instalaciones con agitación y con
recirculación.
Estudiando el efecto del dióxido de carbono sobre la actividad
bacterial, se observó que la velocidad de oxidación de la pirita
por el T. Ferrooxidans gradualmente disminuyó. Esto sucedió
cuando se eliminó el CO2 del aire
 usado para aireación. Aumentando el contenido del CO2 del
aire se estimuló el crecimiento del T. Ferrooxidans usado
como substrato. Los mejores resultados para este proceso
de oxidación fueron obtenidos cuando el contenido de CO2
se aumentó a 2%.

Estudiando el efecto de la concentración de substrato sólido

(ZnS) a diferentes concentraciones de CO2, es decir, variando desde
0.03 a 7.92%, se encontró que la concentración óptima de CO2 es
0.2% en términos de velocidad más alta de extracción de zinc.
Sin embargo, todos los datos anteriores del efecto del CO2 sobre
el crecimiento del Thiobacillus Ferrooxidans son de carácter
preliminar.

La oxidación de fierro ferroso por el T. Ferrooxidans requiere la

presencia del ión sulfato, probablemente, como un agente
complejante. Cuando es cultivado sobre azufre elemental o
sulfuros la adición de sulfato externo no es necesaria, puesto
que el producto de la oxidación es el sulfato.

2.12.12 Efecto del ión férrico

La lixiviación microbiológica de los sulfuros es acelerada en

presencia del ión férrico, el cual se sabe que es un buen agente
oxidante. Este efecto catalítico se puede expresar como
sigue:

(172)

donde M es un metal bivalente. El azufre elemental que ha

sido dejado libre (ecuación 172) será oxidado a ácido
sulfúrico por el T. Ferrooxidans.

(173)

Similarmente, el fierro ferroso es oxidado por los microorganismos.

(174)

y, entonces, el ciclo rédox del fierro se repite. Varios

investigadores discutieron el efecto del fierro, aunque
determinaciones cuantitativas fueron reportados
recientemente. Estos estudios indicaron que los
microorganismos son capaces de oxidar substratos libres de
fierro (NiS, CoS, Cu2S y CuS); y en presencia de

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 10

Minerales
 concentraciones de ión férrico de 10-4 a 10-2 moles por litro la
velocidad de extracción del metal fue mucho mayor.
Concentraciones mayores de fierro no fueron efectivas en este
proceso. El potencial rédox del par Ferroso /Férrico a 25 °C
es:

(175)

10 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
 La ecuación (175) indica que soluciones conteniendo aún, una
parte de fierro férrico por partes por millón de fierro ferroso,
tienen un potencial de oxidación mayor que +0.4V y
consecuentemente, estas soluciones atacarán más sulfuros.

2.12.13 Efecto del tamaño de partícula de mineral

En suspensiones acuosas de partículas sólidas, los iones a ser

oxidados son suministrados por la superficie de mineral. La
concentración de estos iones está controlada por muchos
fenómenos; es decir, por el producto de solubilidad, las
reacciones de hidrólisis, la presencia de electrolitos inertes,
la tensión superficial, el tamaño de partículas o área de
superficie y el potencial rédox. Así, un mejor entendimiento de
estos fenómenos y la interacción entre ellos y los
microorganismos es necesario para lograr una ventaja
máxima de la conversión metabólica de los sulfuros
metálicos.

Uno de los mayores requerimientos para la oxidación de

sulfuros por la bacteria es la disponibilidad de substrato. La
condición ideal existe, cuando el substrato es soluble tal como el
sulfato ferroso (substrato). Para substratos insolubles, se requiere
una exposición adecuada de los minerales sulfurados. En el caso
del substrato insoluble, como es el mineral sulfurado, el factor
que realmente interesa e interviene directamente en la cinética
del proceso no es su concentración expresada como peso por
unidad de volumen de suspensión. Al ser el compuesto insoluble,
toda la materia que queda en el interior de la partícula no tiene
intervención en el proceso y sólo aquella porción en contacto
directo con el líquido, entonces la interfase sólido – líquido, se
ve involucrada en la lixiviación. Por lo tanto, el factor
concentración se ve reemplazado en este caso por el área de la
interfase sólido-líquido, expresada convenientemente como área
superficial por unidad de volumen.

Por lo tanto, un aumento en esa área, producido por un

mayor grado de molienda, deberá tener un efecto favorable en
la velocidad de solubilización. Los estudios realizados tanto
con minerales como con sistemas modelo confirman esta
predicción.

Usando diferentes fracciones de tamaño en una muestra de

pirita, los mejores resultados fueron obtenidos con la fracción
de partículas de tamaño más pequeño. Usando concentrados
de chalcopirita, se determinó que el cobre se extrae más
rápidamente de partículas finas que de partículas más grandes.

En la práctica, el tamaño óptimo de partícula tiene que ser

determinado para cada clase de mineral a ser lixiviado. Este
tamaño estará determinado para cada clase de mineral a ser
lixiviado. Este tamaño estará determinado por el aspecto
económico que estará basado sobre las dos alternativas
siguientes: las ganancias que resulten del incremento de la
velocidad de extracción por disminución en el tamaño de
partícula y los costos de molienda. Para operaciones in-situ a
gran escala, la exposición de los minerales sulfurados puede
ser realizada por voladura del cuerpo de mineral.
2.13. OXIDACIÓN BACTERIAL DE MINERALES

Con la finalidad de mostrar la forma en que la bacteria interviene en la

oxidación de diferentes sulfuros y compuestos, así como la velocidad
con que estos suceden, se ha realizado un breve análisis de estudios
de laboratorio efectuado por diferentes autores. Este estudio se ha
limitado a los Thiobacillus Thioxidans y a los Ferrooxidans asociados que
son comúnmente encontrados en aguas ácidas.

2.13.1 Lixiviación de pirita, marcasita y pirrotita

La presencia de T. Ferrooxidans acelera significativamente la

oxidación de todos estos minerales. Así, velocidades que
resultan también muy superiores a las obtenidas con reacciones
puramente químicas son logradas, habiéndose establecido en
laboratorio que éstas están entre 110 a 1,000 veces mayores.

Las reacciones que tienen lugar son:

(176)
(177)
(178)
(179)

Son reacciones de gran importancia en la disolución de

sulfuros y tienen lugar en las menas que los contiene. Las
soluciones impregnadas alcanzan valores de Eh sobre 700
mv.

2.13.2 Lixiviación de minerales sulfurados de cobre

Las velocidades de lixiviación de los sulfuros de cobre han sido

estudiadas experimentalmente variando notablemente los
resultados de un trabajo a otro. Sin embargo, existe
coincidencia en que el proceso bacterial posee mayor cinética
que los puramente químicos.

Las principales reacciones que tienen lugar en la oxidación de

sulfuros de cobre se presentan a continuación:

- Chalcopirita.

(180)
(181)
(182)

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 10

Minerales
 - Chalcosita y Covelita.

a) Con Oxígeno:

(183)
(184)
(185)

b) Con Sulfato Férrico:

(186)
(187)

La oxidación de la chalcopirita va acompañada con la formación

de sulfato férrico y ácido sulfúrico. Es destacable el notable
incremento de SO con las reacciones que utilizan O2, lo cual
podría causar concentraciones excesivas de sulfato en un circuito
cerrado, originando bleed-off o sangrías para controlar su nivel.
Parcialmente se puede ejercer este control limitando la aireación
de soluciones lixiviantes y asegurando la presencia de férrico.

2.13.3 Lixiviación de sulfuros de níquel y cobalto

La presencia de cobalto en sistemas biológicos es bien

conocida, dado que este metal es un elemento clave de vitamina
B12. Las primeras publicaciones indicaron que el T. Ferrooxidans
solubilizaba cobalto a partir de minerales que contienen sulfuro.
Estudios de laboratorio sobre lixiviación bacterial de sulfuros de
níquel reportaron rendimientos relativamente altos. Esto fue
atribuido al efecto ventajoso de los surfactantes. Además, se
encontró que la actividad bacterial fue grandemente inhibida
cuando se usaron cantidades deficientes de sales de nitrógeno y
fósforo en el medio de lixiviación para la oxidación de sulfuro de
níquel.

El mineral principal que contiene sulfuro de níquel en muchos

países es la Pentlandita, en la cual el níquel es reemplazado
por el cobalto en los radios de Ni: Co = 50:1 a 50:2. La
oxidación bacterial de este mineral puede ser indicada
como sigue:

(188)
 Basados en experimentos a escala semi-industrial usando un
mineral y un concentrado de Pentlandita, un proceso de
extracción microbiológica en batch cíclico ha sido sugerido
para la recuperación de Ni y Co. Este método incluye
remolienda del residuo lixiviado, la extracción de níquel
alcanza cerca de 50 a 60%. La extracción del níquel es, sin
embargo, completada en un segundo paso de lixiviación.
Velocidades de extracción de níquel tan alto como 222 mg l-1
h-1 han sido logradas.

2.13.4 Lixiviación de sulfuros de zinc

Para la oxidación del sulfuro de zinc, ocurre la siguiente ecuación

total:

(189)

La capacidad del T. Ferrooxidans para oxidar ZnS ha sido bien

demostrada usando minerales que contienen sulfuros, o
preparando un sulfuro sintético de zinc. Los estudios
realizados reportaron extracciones muy rápidas de zinc de
cerca de 1300 g l-1 h-1 y concentraciones de zinc disuelto tan
altos como 120 g l-1. Esta última solución de lixiviación estuvo
sujeta a estudios de electrodeposición. La eficiencia de
corriente reportó estar en 78%, lo cual es un tanto bajo
comparado a los niveles comerciales aceptables (90%). Se
sugirió que una modificación del procedimiento de purificación
previo a la electrodeposición puede vencer esta deficiencia.
Sin embargo, la calidad del zinc depositado fue considerada
como satisfactoria. Los costos de operación para la lixiviación
microbiológica de concentrados de sulfuro de zinc incluyendo
la recuperación de zinc por electrólisis, es comparable a un
sistema de lixiviación ácida a presión.

2.13.5 Lixiviación de sulfuros de plomo, antimonio, molibdeno y

arsénico

Como minerales adicionales a los anteriores que podríamos

denominar básicos, los yacimientos poseen contenidos variables
de Esfalerita (bajo contenido de fierro), Galena, Molibdenita y
Sulfoarseniuro / Antimoniuros de cobre.

Con referencia a la oxidación bacterial de estos compuestos se

han realizado pocos trabajos de investigación. El T.
Ferrooxidans tiene capacidad de oxidación sobre sulfuros de
plomo, formando sulfato de difícil lixiviación a condiciones
normales. Estudios recientes han demostrado que el T.
Ferrooxidans puede utilizar la galena como fuente de energía

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 10

Minerales
 aún en medios carentes de Fe.

Las reacciones de oxidación que tienen lugar son:

(190)
(191)

10 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
En presencia de fierro la oxidación de galena es mucho
mayor tanto en velocidad como en porcentaje total oxidado.
Del mismo modo, el T. Ferrooxidans tiene capacidad de
oxidar Oropimente As2S3, Arsenopirita AsFeS y Enargita Cu3(As,
Sb)S4. La oxidación de la arsenopirita está expresada por la
siguiente ecuación:

(192)

La extracción de Bismuto por estos microorganismos es

logrado por una forma indirecta, usando Fe+++ como agente
oxidante.

(193)

Luego el Fe2+ es reoxidado por el T. Ferroxidans según

la ecuación:
(194)

La lixiviación microbiológica de la Molibdenita está expresada en la

siguiente ecuación:

(195)

esta reacción reportó ser 7 veces más rápida en presencia de los

T.Ferrooxidans que aquellas realizadas con control estéril.

Ha sido encontrado que durante la oxidación de la Estibina por el

T. Ferrooixidans las siguientes ecuaciones tienen lugar:

(196)

El sulfato de antimonio III es parcialmente hidrolizado para

producir un sulfato de óxido de antimonio III:

(197)

Además, el sulfato de antimonio III es parcialmente oxidado

a sulfato de antimonio V:
(198)
 Además, el sulfato de Antimonio V es hidrolizado a sulfato
de bióxido de antimonio insoluble V:

(199)

La concentración del total de antimonio disuelto fue

expresado por:
(200)

2.13.6 Lixiviación de minerales de uranio

La lixiviación bacterial de minerales de Uranio es un proceso

de uso actual y con importantes beneficios económicos para
la industria minera.

El principal mecanismo de oxidación que se conoce es el indirecto

por oxidación del ión ferroso o férrico referido anteriormente.
Este producto permite la oxidación del Uranio tetravalente,
cuya presencia en yacimientos porfiríticos de cobre es común y
se está tornando en una regla general, aunque en bajas
concentraciones.

Las reacciones que tienen lugar en la oxidación de minerales de

Uranio son
las siguientes:

(201)
(202)

La utilización práctica del proceso en minerales de baja ley

se ha hecho posible debido al desarrollo de técnicas
extractivas hidrometalúrgicas. Estas logran de manera eficiente
a un bajo costo la recuperación de U3O8 contenido en
soluciones aún de baja ley en el orden de ppm.

2.13.7 Compuestos de arsénico

Los compuestos de arsénico son tóxicos para la mayoría de

organismos vivientes. Sin embargo, si es que la bacteria es
sometida sucesivamente a más y más altas concentraciones de
arsénico, puede desarrollar una resistividad natural (plásmido
específico). Además de la tolerancia al arsénico, estos
organismos genéticamente resistentes, pueden también metabolizar
algunos de los compuestos orgánicos.

OXIDACIÓN

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 10

Minerales
 El Thiobacillus Ferrooxidans es capaz de oxidar arsenopirita (Fe As
S), y
enargita (Cu3 As S4).

11 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
- OXIDACIÓN DIRECTA
(203)

La arsenopirita está asociada frecuentemente con pirita, la cual también es

oxidado por la bacteria lixiviante

(204)

- OXIDACIÓN INDIRECTA

(205)

Además, la siguiente reacción ocurrirá en la mezcla de solución de

lixiviación bacterial:

(206)

La oxidación de la enargita está dada por la siguiente

ecuación:

(207)

Ejemplos de aplicación industrial de las reacciones

indicadas:

a) Lixiviación de minerales de oro y plata con bacteria para

liberar oro y plata desde la pirita y arsenopirita. Luego
lixiviación con cianuro o thiourea.
b) Lixiviación de minerales y concentrados de Cu- Sn- As.

REDUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE COMPUESTOS DE ARSENICO

Se sabe que algunas bacterias, hongos y algas son capaces de

reducir compuestos de arsénico.

Por ejemplo, los hongos Scopulariopsis Brevicaulis han demostrado que

convierten el arsenito a trimetilarsina.
La reducción bacterial de arsenato (AS O3- ) a arsenito (AsO- ) por el
4 2
Micrococcus Aerogenos con arsina como producto final (AsH3) está
dado por
la siguiente ecuación:

La siguiente figura resume las reacciones de compuestos de arsénico

en las
que intervienen las bacterias:

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 11

Minerales
2.13.8 Solubilización de la sílice y del silicato

Algunas bacterias y hongos juegan un rol importante en la

movilización de la sílice y del silicato en la naturaleza. Parte
de su participación está en el intemperismo de varios silicatos,
incluyendo los aluminosilicatos. Su acción es indirecta para la
producción de quelatos o la producción de ácido (ácidos
orgánicos o minerales), o para la producción de álcali (ejemplo
la producción de amoniaco o aminas).

Debajo de un pH de 9.0 el silicio está presente en solución solo como ácido

silícico en el estado monomérico, H4SiO4.

Encima de un pH de 9.0 se disocia a H SiO- y . Desde que el pH de

3 4
la mayoría de medios naturales está por debajo de pH 9.0, la mayoría
de reacciones, incluyendo el silicio, están gobernados por la química del
ácido silícico.

La concentración de ácido silícico en los ríos y lagos está entre

10-3 y 10-5 mol dm-3 y el promedio es de 2.2x 10-4 mol dm-3.
En el océano el rango está por debajo (2 x 10-4 a 10-6 mol dm-
3
). La solubilidad físico química de la sílice sigue la siguiente
reacción:

(208)

La constante de equilibrio a 25 °C es aproximadamente: K= 2 x 10 -3

La polimerización de la sílice disuelta puede ser explicada

biológicamente, pero también reacciones físico - químicas
pueden conducir a la sílice polimerizada. Generalmente, las
reacciones hidrolíticas pueden ser catalizadas fácilmente
por varios grupos:
La ocurrencia de siloxonas es, por lo tanto, una reacción muy
probable en el ambiente natural. Los silanos y siliconas son
compuestos que generarán productos técnicos o reacciones
biológicas específicas.

El silicio constituye el 28% de la composición elemental de la

corteza terrestre y es el elemento más abundante después
del oxígeno (47%).

Los silicatos y compuestos que contienen SiO4 tetrahedra

en la red del cristal indican cómo están conformados, cerca de
una tercera parte, de las especies de minerales conocidos; y
cerca del 95 % de la corteza terrestre.

En vista de esto, quizás, no sorprende que los organismos hayan encontrado

numerosas formas de interactuar con materiales silicosos.

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 11

Minerales
Los niveles químicos o bioquímicos, los modos de
interacción entre organismos y materiales silicosos pueden
ser caracterizados por una variedad de reacciones. Por
ejemplo:

(a)

(b)

En la reacción (a), la sílice soluble es el producto, y éste puede ser

polimerizado.

La segunda reacción corresponde a un mineral que contiene

iones metálicos (Me), los cuales son llevados en solución, junto
con la sílice, por degradación biológica. En ello involucran la
extrusión de ácidos orgánicos. Reacciones comparables que
incluyen minerales con iones metálicos en otros estados de
valencia son también posibles.

Generalmente, las reacciones indicadas líneas arriba en sistemas

biológicos son más complejas y pueden cambiar a
organosilicatos intermedios (tales como ésteres
organosilíceos):

(c)

(d)
 (e)

La reacción (c) ilustra una reacción entre un ácido carboxílico y un

ortosilicato.

Adicionalmente, de acuerdo a las ecuaciones de (a) a la (e)

pueden producirse compuestos con un gran número de enlaces de
ester o eter C-O-Si, o moléculas en las cuales el siliceo forma
vínculos entre dos compuestos orgánicos, comparable a la
función del fósforo en fosfolípidos o nucleótidos.

La síntesis de compuestos de organosilíceos es fundamental

para lograr la utilización de materiales silicosos. Esta clase de
estudios proporciona comprensión de los mecanismos por los
cuales tales procesos operan. Y ellos ofrecen una base para
inferir o deducir la historia evolucionaria de ciertos modos
de interacción de la biósfera.

2.13.9 Microorganismos y el manganeso

La corteza terrestre contiene aproximadamente 0.1% de

BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de 11

Minerales
 manganeso. Las plantas y animales utilizan este elemento en
muchos procesos bioquímicos.

11 BIOLIXIVIACIÓN, Tecnología de la Lixiviación Bacteriana de

Minerales
En la naturaleza los sulfuros de manganeso (Albandita: MnS) no son tan
comunes como los sulfuros de fierro (pirita).

Las formas de manganeso bivalente tienen la más grande

movilidad en la naturaleza. La oxidación del MnO no es una
reacción que produce una alta energía.

(209)

La oxidación bacterial del manganeso fue realizada con

varios microorganismos, tales como:

- Bacillus Manganicus
- Cory nebacterium- Chromobacterium
- Melallogenium Symbioticum

La oxidación enzimática del manganeso por la bacteria

procede por lo menos por 3 diferentes mecanismos. Dos
incluyen la oxidación de iones Mn2+ libre y uno incluye la
oxidación del Mn2+ ligado al óxido Mn4+.

OXIDACIÓN DEL Mn2+ LIBRE

a) (210)

En esta reacción, la enzima manganeso oxidasa de los

organismos, transporta electrones al oxígeno por una vía de
citocromo.

b) La oxidación de iones de Mn2+ libre pueden también ser

catalizadas por la enzima catalase en una reacción en la
cual el H2O2 es producido metabólicamente:

(211)

OXIDACIÓN DEL Mn2+ LIGADO AL Mn4+

(212)
Esta reacción es catalizada por una enzima manganeso
oxidasa que deriva electrones al oxígeno por una vía de
citocromo. Este manganeso oxidasa es incapaz de oxidar el
Mn2+ libre:

1. Los organismos que oxidan el

Mn2+ libre son: Leptotrix

discophora
Arthrobacter B
Arthrobacter
citreus
Hyphomicrobiu
m T37
Pseudomonas
spp

2. Los organismos que oxidan Mn2+

preligado son: Arthrobacter 37

Oceanospirillum
Vibrio

3. Las bacterias y hongos que oxidan Mn2+ por un mecanismo

indirecto, todavía no conocido, son numerosas.

Metallogeniu
m sp
Bacillus sp
Acrobacter
} Bacterias

sp

Cladosporium
sp
Aspergillus
} Hongos

sp
Trichocladium
sp

REDUCCIÓN MICROBIOLOGICA DEL Mn4+

Se sabe que muchas bacterias aisladas desde el ambiente

marino son capaces de reducir el MnO2 (como Bacillus)

Glucosa bact nē +nH+ + productos finales

(213)

(214)
 La acidificación no es necesaria desde que el ácido es producido a partir
de la glucosa por la bacteria.

2.13.10 Nódulos marinos de ferromanganeso

Los óxidos de manganeso (IV) ocurren en grandes cantidades en

concreciones
e incrustaciones en la interface sedimento – agua del mar.

La composición típica de los nódulos de mar está conformada por los

siguientes elementos:

La oxidación del Mn2+ por la bacteria desde los nódulos de

ferromanganeso es realizada sobre Mn2+ previamente unido al
Mn4+ o a partículas de sedimento cubierto con ión férrico. Los
óxidos de Mn4+ a pH neutro y alcalino actúan como
transportadores de cationes. En esta forma los nódulos continúan
creciendo:

(215)