Biología Celular, 1° UA, Facultad de Medicina
Taller 6, 2021
Taller 6 Biología Celular
Señalización
1) Vía de transducción de señales del Receptor de Insulina
La insulina es un péptido de 51 aminoácidos producido y secretado por células β de los
islotes pancreáticos con importante función señalizadora en múltiples tipos celulares y
tejidos. Si bien la insulina tiene la potencialidad de generar una notable variedad de
respuestas biológicas, uno de sus roles funcionales más relevantes es el de regulador de
procesos metabólicos en tejido hepático, adiposo y muscular.
Una de sus funciones más conocidas es la de promover la incorporación celular de glucosa
desde la sangre, así como se ilustra en el esquema o en este video1
Pero, ¿qué mecanismos moleculares intervienen en dicho proceso?
La señalización intercelular es un proceso fisiológico indispensable en la organización de un
sistema pluricelular, ya sea en procesos de supervivencia, muerte celular, diferenciación,
proliferación, etc. Cada uno de los fenotipos determinados por las diversas células de un
organismo va a encontrarse modulado tanto por las señales que haya en el entorno así
como por la propia capacidad de cada célula de percibir y responder a dichas señales.
El objetivo de este taller es profundizar en los mecanismos moleculares y celulares
empleados por las células con el fin de recibir, procesar y responder a señales.
I. ¿Qué implica en términos de señalización que la insulina sea un mensajero
endócrino y parácrino? ¿Qué otros tipos de señalización entre células puede
mencionar?
II. ¿Qué función cumplen los receptores celulares en las vías de transducción de
señales?¿Qué relación existe entre la naturaleza química de la molécula señal y la
localización celular de sus receptores?
1
Science Photo Gallery (https://www.sciencephoto.com/)
Biología Celular, 1° UA, Facultad de Medicina
Taller 6, 2021
Figura 1. Esquema de una de las vías de transducción de señales dependiente de insulina (modificado de
“Mecanismos Moleculares de la Resistencia a la Insulina: Una Actualización”, Gutierrez-Rodelo y
Colaboradores). p Y/T/S: fosforilación(p) en residuo Tirosina (Y), Treonina(T) o Serina (S). T308, S473: Residuos
en posición 308 y 473 de Akt, fosforilados por PDK1 (treonina 308) y mTORC2 (Serina 473)
III. El receptor de insulina (IR, de Insulin Receptor) pertenece a la familia de receptores
asociados a actividad tirosina-kinasa. ¿Qué características generales tienen estos
receptores, y qué similitudes/diferencias básicas presentan ante otros receptores
celulares?
IV. Una proteína adaptadora (o scaffold) denominada IRS (de insulin receptor substrate)
se encuentra asociada a IR, y resulta directamente fosforilada por el receptor en
caso de que este último se active. Sin desasociarse de IR, IRS fosforilada modula
positivamente la función de PI3K, una enzima cuyo sustrato es un fosfolípido
presente en membrana plasmática ¿Qué función o funciones cumplen las proteínas
adaptadoras, y cómo podría IRS estar siendo funcional a la vía en este caso?
V. El fosfolípido referido en IV) es denominado PIP22, y resulta fosforilado a PIP33 por
la acción kinasa de PI3K. PIP3 actúa como segundo mensajero, y tiene la facultad
de reclutar a la membrana plasmática a proteínas con dominio PH4. ¿Por qué se
denomina así a los segundos mensajeros?¿Qué los caracteriza respecto a otros
intermediarios de una vía de señalización?
2
Fosfatidilinositol 4,5 bifosfato (PIP2)
3
Fosfatidilinositol 3,4,5 trifosfato (PIP3)
4
De Pleckstrin homology domain (dominio PH), es un dominio proteico común en diversas proteínas, confiere
afinidad a macromoléculas específicas, como PIP2
Biología Celular, 1° UA, Facultad de Medicina
Taller 6, 2021
VI. Akt, mTORC2 y PDK1 son enzimas con dominio PH, las 3 con localización citosólica
y con actividad kinasa. Akt, si bien tiene múltiples sustratos intracelulares, precisa
ser fosforilada en dos residuos distintos por mTORC2 y PDK1 para adoptar su forma
activa, lo cual ocurre cuando es reclutada por PIP3. Dado que Akt ya se encontraba
en el mismo compartimento que sus kinasas correspondientes, ¿por qué se activa
sólo al activarse la señalización por PIP3?¿Existe riesgo de que Akt se active
independientemente de la llegada de Insulina en condiciones no patológicas?
En su forma activa, Akt se desprende de PIP3 y tiene la facultad de fosforilar múltiples
sustratos distintos río abajo en la cascada de señalización, regulando positivamente
distintos procesos asociados a la supervivencia y proliferación, promoviendo por ejemplo, la
llegada de transportadores de glucosa a la membrana, la síntesis de proteínas, la acción de
proteínas antiapoptóticas, cambios en la expresión génica. El hecho de que Akt esté o no
activada tiene un impacto muy elevado en el fenotipo celular, es por ello que existen
múltiples mecanismos celulares para modular su actividad.
VII. Indique y justifique cuál de los siguientes mecanismos de regulación resultan o no
coherentes en el contexto de la inactivación de la vía.
● Expresión constitutiva de W, una proteína fosfatasa cuyo sustrato es Akt
● Expresión de X, una proteína que se une a PDK1 restringiendo su dominio
PH
● La expresión de Z, una ubiquitin ligasa de Akt, que se activa al ser fosforilada
por Akt
● Endocitosis de los transportadores de glucosa promovidos por Akt
VIII. ¿Piensa que los mecanismos seleccionados se disparan por la activación de la vía
(feedback negativo) o que actúan constitutivamente en la célula?
Biología Celular, 1° UA, Facultad de Medicina
Taller 6, 2021
2) Resistencia a la insulina
La Diabetes es un trastorno endócrino de elevada relevancia epidemiológica, que se
caracteriza por presentar registros de alta glucemia, representando un riesgo progresivo
para la salud. En algunos casos, la causa de la hiperglucemia radica en la imposibilidad
parcial o total de expresar insulina por parte del/ de la paciente, y puede, generalmente,
tratarse con administraciones externas de insulina. Sin embargo, en los casos de la
Diabetes tipo 2 (DM2), el trastorno conlleva un cuadro denominado resistencia a insulina, el
cual implica una incapacidad a nivel celular de responder a niveles normales de insulina.
En este contexto, el grupo de Vazquez-Gimenez y colaboradores publicó un artículo5
científico durante 2021, el cual se centra en una proteína denominada RGS2 y su potencial
rol en la resistencia a insulina. Los investigadores parten de bases de datos que sugieren
una mayor expresión de RGS2 en pacientes de DM2 respecto a la población general, por lo
que en primer lugar buscan corroborar esta asociación mediante ensayos de western blot.
Para esto, con el consentimiento informado para recolección y uso de muestras biológicas
pertinente, consiguen extractos de plaquetas sanguíneas de voluntarios pacientes de DM2 y
de voluntarios sanos, realizan los western blots correspondientes, y comparan los niveles de
RGS2 en ambos grupos (Figura 2).
Figura 2. A) Cuantificación de la expresión de RGS2 en extractos de plaquetas de pacientes voluntarios con
DM2 y voluntarios sanos, en valores porcentuales relativizada a la expresión registrada en voluntarios sanos
(Healthy = Grupo Sanos; T2DM = Grupo DM2). B) Resultado de los western blot realizados en el diseño
descripto a partir de pacientes de DM2 y voluntarios sanos (Healthy = Grupo Sanos; T2DM = Grupo DM2)
I. ¿Qué conclusiones podría discutir a partir de este ensayo?¿Qué limitaciones o
salvedades deberían plantearse?
Pensando en modelos experimentales para estudiar a RGS2 y su rol en la resistencia a
insulina, los investigadores buscaron y corroboraron en bibliografía que se trata de una
proteína GAP (del inglés GTPase-activating proteins), y que su sustrato es una proteína G
trimérica.
5
“The Increased Expression of Regulator of G-Protein Signaling 2 (RGS2) Inhibits Insulin-Induced Akt
Phosphorylation and is Associated with Uncontrolled Glycemia in Patients with Type 2 Diabetes”. Metabolites
2021, 11, 91.
Biología Celular, 1° UA, Facultad de Medicina
Taller 6, 2021
II. ¿Qué tipo de proteínas son las proteínas G y qué rol juegan en las vías de
transducción de señales?¿De qué manera regulan las proteínas GAP a las proteínas
G?
Figura 3. Protocolo experimental esquematizado. Un grupo de cultivos fue transfectado con el cDNA de RGS2 mientras
que otro grupo se mantuvo sin transfectar. Luego, de cada grupo de cultivos, se estimuló con insulina un grupo mientras
que otro grupo se mantuvo sin estimular. Al cabo de 10 minutos desde el estímulo, se realizaron ensayos de western blot
a partir de lisados de los distintos cultivos utilizando los anticuerpos especificados (figura 4B).
A continuación, los investigadores desarrollan el protocolo experimental presentado en la
figura 3, el cual se basa en la estrategia de sobreexpresión6 de RGS2 en cultivos de células
endoteliales humanas (logrando una expresión de RGS2 de entre 5 y 6 veces mayor
que en células no transfectadas, Figura 3A). Luego de inducir o no con insulina, se utiliza
la fosforilación p-Akt-473 como indicador molecular de la activación de la vía de la insulina
descrita en 1).
III. Dado el diseño experimental: ¿Qué hipótesis tienen los investigadores en el contexto
biológico de la vía de transducción de señales de la insulina?¿Qué predicciones se
esperan bajo esta hipótesis?
6
La sobreexpresión se logra a través de la transfección con cDNA del gen de RGS2
Biología Celular, 1° UA, Facultad de Medicina
Taller 6, 2021
Biología Celular, 1° UA, Facultad de Medicina
Taller 6, 2021
Figura 4. A) Cuantificación de la expresión de RGS2 en los cultivos celulares ensayados, en valores
porcentuales relativizada a la expresión en cultivos no transfectados (C = Cultivos no transfectados; RGS2 =
Cultivos transfectados). B) Resultado de los western blot realizados en los cultivos celulares ensayados
(RGS2 = Cultivos transfectados; 100 nM ins = Estímulo con insulina, presente/ausente según +/-). C)
Cuantificación de la expresión de Akt en los cultivos celulares ensayados, en unidades porcentuales
relativizada a la expresión (RGS2 = Cultivos transfectados)
IV. Discuta respecto a la información que puede obtenerse a partir de los ensayos
realizados (figura 4) ¿Cómo responden los cultivos en presencia o ausencia de
insulina?¿Cómo varía esa respuesta en presencia o ausencia de transfección con
RGS2?
V. ¿Puede realizarse alguna conclusión respecto a la relación entre expresión de RGS2
y el rasgo “resistencia a insulina”?
