Plásmido

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Dibujo esquemático de un plásmido en una bacteria: en rojo, el ADN del cromosoma; en azul, los
plásmidos.

Los plásmidos son moléculas de ADN extracromosómico generalmente circular

que se replican de manera autónoma y se transmiten (esto último por un proceso
llamado conjugación) independientemente del ADN cromosómico.12 Están
presentes principalmente en los procariotas (bacterias y arqueas).1 En
los eucariotas solo se encuentran en las levaduras, pero también se han detectado
plásmidos inactivos en las mitocondrias y los cloroplastos, puesto que
estos orgánulos son de origen bacteriano.3 No son infecciosos (patógenos). Son
ejemplos de elementos genéticos móviles; junto con los transposones y
los virus constituyen vehículos para la transferencia horizontal de genes.
Los plásmidos están físicamente separados del cromosoma del huésped. Tienen
un tamaño de 3 a 10 kb y pueden portar un número de 30 a 100 genes. El número
de plásmidos por célula puede variar, dependiendo del tipo, desde una sola copia
hasta algunos cientos. Los vectores plasmídicos permiten clonar ligandos de ADN
exógeno (exterior a la célula) de hasta 4 kb ya que un tamaño mayor a este
dificulta la clonación en estos vectores.
Los plásmidos son entidades acelulares, de esta manera son similares a
los virus y viroides en tener el mismo comportamiento replicativo, transmisión
entre huéspedes y ser vectores de genes. A pesar de que los plásmidos, virus y
viroides sean "replicadores" y evolucionen generalmente no se clasifican
como seres vivos.4 En comparación con los virus y viroides que dependen del
genoma del huésped para ser replicados, los plásmidos se replican
independientemente del genoma, por tanto los plásmidos cumplirían con un
atributo de vida: la reproducción. Los plásmidos están filogenéticamente
emparentados con los virus de ADN como Monodnaviria y algunos virus satélites
de ADN puesto que ambos comparten una proteína única denominada Rep que
les permite una replicación en círculo rodante y que no tiene homología con
proteínas celulares, lo que sugiere que los plásmidos y los virus pueden tener
orígenes anteriores a las células. También es posible según análisis de la proteína
Rep que algunos plásmidos sean precursores de los virus de ADN del
taxón Monodnaviria con la obtención de proteínas de ciertos virus para fabricar
la cápside.5 Algunos plásmidos también pudieron evolucionar de virus de ADN
según análisis filogenéticos.5
En contraste con los virus y viroides que son parásitos intracelulares, los
plásmidos son endosimbiontes mutualistas. A veces establecen relaciones
beneficiosas con su célula huésped pero manteniendo su independencia en la
replicación. No obstante en otras ocasiones pueden originar tumores. Portan
genes de resistencia a antibióticos. A pesar de que se les considere un elemento
genético de sus huéspedes, no siempre suelen estar dentro de ellos.
El término plásmido fue introducido por el biólogo molecular
norteamericano Joshua Lederberg en 1952.6Hubo que ir afinando la definición con
el tiempo, ya que en un principio se había descrito de tal manera que incluía a
los bacteriófagos.7Los plásmidos solo pueden coexistir como una o más copias en
cada bacteria, debido a la división celular pueden perderse en una de las bacterias
segregadas.8
Pueden ser introducidos en las células bacterianas por un proceso de
transformación, por eso se utilizan como vectores de clonación.
Todos los vectores de clonación deben contener, al menos:

 Un origen de replicación para poder tener más de una copia del mismo en

la célula infectada.
 Dos genes que confieran resistencia a diferentes antibióticos
(cloranfenicol y ampicilina), lo que permite la identificación de las células que
portan a dicho vector.

Las moléculas de ADN plasmídico, adoptan una conformación tipo doble hélice al

igual que el ADN de los cromosomas, aunque, por definición, se encuentran fuera
de los mismos. Se han encontrado plásmidos en casi todas las bacterias. A
diferencia del ADN cromosómico, los plásmidos no tienen proteínas asociadas. 9
En general, no contienen información esencial, sino que confieren ventajas al
hospedador en condiciones de crecimiento determinadas. El ejemplo más común
es el de los plásmidos que contienen genes de resistencia a un determinado
antibiótico, de manera que el plásmido únicamente supondrá una ventaja en
presencia de ese antibiótico.10
Hay algunos plásmidos integrativos, es decir, plásmidos que tienen la capacidad
de insertarse en el cromosoma bacteriano. Estos rompen momentáneamente el
cromosoma y se sitúan en su interior, con lo cual la maquinaria celular también
reproduce el plásmido automáticamente. Cuando ese plásmido se ha insertado se
les da el nombre de episoma.[cita  requerida]
Los plásmidos se utilizan como vectores de clonación en ingeniería genética por
su capacidad de reproducirse de manera independiente del ADN cromosomal así
como también porque es relativamente fácil manipularlos e insertar en ellos
nuevas secuencias genéticas.
 Los plásmidos usados en ingeniería genética suelen contener uno o
dos genes que les confieren resistencia a antibióticos y permiten seleccionar
clones recombinantes. Hay otros métodos de selección además de la resistencia a
antibióticos, como los basados en fluorescencia o en proteínas que destruyen las
células sin uso de antibióticos. Estos nuevos métodos de selección de plásmidos
son de uso frecuente en la agrobiotecnología, debido a la fuerte crítica de grupos
ecologistas por la posibilidad de que haya antibióticos en los organismos
modificados genéticamente.11
Algunos plásmidos incluyen un sistema de adición o sistema de muerte
postsegregacional (PSK, de postsegregational killing system). Estos producen en
conjunto un veneno de larga vida y un antídoto de vida corta. 1213 Las células hija
que retienen una copia del plásmido sobreviven, mientras que una célula hija que
falla al integrar el plásmido muere o sufre una reducida tasa de crecimiento debido
al veneno que obtuvo de la célula progenitora. Este es un ejemplo de plásmidos
como el ADN replicante.14

Índice

 1Epísomas
 2Tipos
o 2.1Plásmidos de fertilidad
o 2.2Plásmidos de resistencia
o 2.3Col-plásmidos
o 2.4Plásmidos degradativos
o 2.5Plásmidos virulentos
o 2.6Plásmidos metabólicos
 3Conformaciones
o 3.1Mellado abierto circular
o 3.2Lineal
o 3.3Circular relajado
o 3.4Superespiral desnaturalizado
o 3.5ADN superespiral
 4Aplicaciones
o 4.1Clonación del ADN
 4.1.1Clonación de ADN eucariota en plásmidos bacterianos
o 4.2Genética
 4.2.1Extracción del ADN plasmídico
 5Resistencia a los antibióticos
 6Véase también
 7Referencias
o 7.1Bibliografía
 8Enlaces externos

Epísomas[editar]
Episoma plásmido

Un epísoma es un plásmido que puede integrarse por sí mismo

al ADN cromosomal del organismo huésped.15 Por esta razón, puede mantenerse
en contacto por un largo tiempo, ser duplicado en cada división celular
del huésped y volverse parte básica de su mapa genético. Este término no se usa
más en plásmidos, debido a que ahora está claro que una región homóloga con
el cromosoma elabora un plásmido dentro de un epísoma. 16
Los plásmidos usados en ingeniería genética se denominan “vectores”. Se utilizan
para transferir genes desde un organismo a otro y típicamente contienen un
marcador genético confiriendo un fenotipo el cual puede ser seleccionado a favor
o en contra.17 La mayoría también contienen un polivinculador o sitio de clonado
múltiple (MCS),18 el cual es una pequeña región que contiene los sitios de
restricción más comúnmente usados, permitiendo una fácil inserción de
fragmentos de ADN en ese lugar.19

Tipos[editar]
Una forma de agrupar plásmidos es por su habilidad de transferirse a otra
bacteria.20 Los plásmidos conjugativos contienen “tra-genes”, los cuales ejecutan
complejos procesos de conjugación, como la transferencia sexual de plásmidos a
otra bacteria. Los plásmidos no-conjugativos, son incapaces de iniciar una
conjugación, de allí que ellos pueden transferirse únicamente con la asistencia de
los plásmidos conjugativos y lo hacen “por accidente”. Una clase intermedia de
plásmidos son los “movilizables” los cuales llevan solo un subtipo de genes
requeridos para la transferencia. Ellos pueden “parasitar” un plásmido conjugativo,
transfiriéndose a una alta frecuencia solo en su presencia.
Es posible para plásmidos de diferentes tipos el coexistir en una célula simple.
Siete tipos diferentes de plásmidos han sido encontrados en [Link]. Pero
normalmente plásmidos relacionados son incompatibles, en el sentido de que solo
uno de ellos sobrevive en la línea celular, debido a la regulación de las funciones
vitales de los plásmidos. Por lo tanto, los plásmidos pueden ser diferenciados de
acuerdo a grupos de compatibilidad.
Otra forma de clasificar plásmidos es por función. Hay 6 clases principales:
Plásmidos de fertilidad[editar]
También se conocen como factores F16 los cuales contienen tra-genes, son
capaces de conjugarse. Desempeña un importante papel con la conjugación de E.
coli. además de haber sido el primero en ser descrito tiene una longitud
aproximada de 10 Kb. contiene genes responsables de la unión a la célula, y de la
transferencia del plásmido ubicado entre cepas bacterianas específicas en el
proceso de conjugación. Gran parte del conjunto de la información para la
transferencia de plásmidos se encuentra ubicada en el operón tra, el cual contiene
menos de 28 genes. Estos genes dirigen la formación de pili sexuales que unen a
una célula donadora, a una receptora, otros genes en cambio colaboran en la
transferencia de ADN. También contienen segmentos denominados secuencias de
inserción, colaboran en la inserción del plásmido en el cromosoma y en la célula
del huésped, por lo que puede existir fuera del cromosoma bacteriano o estar
integrado en él.
Plásmidos de resistencia[editar]

Bacterias en proceso de conjugación por medio de pili sexual. Una con plásmido R y otra receptora.

Se conocen como factores R, otorgan resistencia a ciertos antibióticos a los

huéspedes,21 contienen de manera singular genes que codifican enzimas capaces
de destruir o modificar antibióticos, normalmente no están integrados en el
cromosoma de la bacteria que lo contiene, se han encontrado en los plásmidos
genes que codifican la resistencia a antibióticos como la ampicilina, el
cloranfenicol y la kanamicina, entre otros, algunos plásmidos R contienen un solo
gen de resistencia otros en cambio llegan a tener hasta 8, con frecuencia los
genes de resistencia se encuentran en un elemento de transposición de forma que
las cepas bacterianas se pueden desarrollar con rapidez plásmido que codifican
resistencias múltiples. Como muchos plásmidos de resistencia son a su vez
plásmidos de conjugación pueden propagarse por toda una población aunque con
menor rapidez que el plásmido de fertilidad. Con frecuencia, los factores R no
conjugativos, pasan de una bacteria a otra durante la conjugación promovida por
otro plásmido, con este método toda una población puede hacerse resistente a los
antibióticos. De hecho el que algunos de estos plásmidos se puedan transferir
fácilmente entre especies, promueve aún más la propagación de resistencias.
Cuando el huésped consume grandes cantidades de antibióticos se selecciona
bacterias con factores R y se hacen más prevalentes, los factores R pueden
entonces ser transferidos a géneros más patógenos como Salmonella entre otros
producir mayores problemas de salud pública.
Col-plásmidos[editar]
Las bacterias también albergan plásmidos con genes que les proporcionan una
ventaja competitiva, en el mundo de los microbios, las bacteriocinas son proteínas
que destruyen otras bacterias, pueden actuar solamente contra cepas
estrechamente relacionadas, o en ocasiones destruyen las células generando
poros en la membrana plasmática o degenerando la pared celular, provocando de
este modo que se incremente su permeabilidad, otro proceso para destruir la
célula es degradando el ADN Y ARN o atacando al peptidoglicano, los plásmidos
col22 contienen genes para la síntesis de bacteriocinas conocidas como colicinas
que están dirigidas contra la e coli, existen plásmidos con características
parecidas, las cuales contienen genes que codifican bacteriocinas dirigidas contra
otras especias por ejemplo producen cloacinas que destruyen especies
de enterobacter, el huésped no se ve afectado por las bacteriocinas que produce.
Algunos plásmidos Col son conjugativos y contienen genes de resistencia.
Plásmidos degradativos[editar]
Estos plásmidos habilitan la digestión de sustancias inusuales
como tolueno o ácido salicílico.[cita  requerida]
Plásmidos virulentos[editar]
Estos plásmidos convierten la bacteria en un patógeno. Son capaces de producir
dos tipos de toxinas, una toxina termolábil (LT) que es una proteína de gran
tamaño muy similar en cuanto a estructura y a mecanismo de acción a la toxina
del cólera, y una toxina termoestable (ST),
Plásmidos metabólicos[editar]
Poseen genes para que algunas cepas de rizhobium induzcan a la nodulación de
las legumbres y lleven a cabo la fijación del nitrógeno.

Conformaciones[editar]
El ADN plásmido puede aparecer en uno de cinco conformaciones, las cuales
(para un tamaño dado) corren a diferentes velocidades en un gel durante
electroforesis.23 Las conformaciones se muestran abajo en orden de movilidad
electroforética (velocidad para un voltaje dado), del más lento al más rápido:
Mellado abierto circular[editar]
El ADN tiene un solo corte filamentario.
Lineal[editar]
El ADN tiene terminales libres, ya sea porque los filamentos fueron cortados o
porque el ADN era linear in vivo. Usted puede modelar este como un cordón que
no se ha conectado a sí mismo.
Circular relajado[editar]
El ADN que interactúa completamente con ambos filamentos sin cortar, pero que
ha sido enzimáticamente “relajado”. Usted puede modelar este dejando un cordón
relajado y luego conectándolo a sí mismo.
Superespiral desnaturalizado[editar]
El ADN como el ADN superespiral o superenrollado, pero que tiene regiones sin
unir que lo hacen ligeramente menos compacto; esto resulta de una excesiva
alcalinidad durante la preparación del plásmido.
ADN superespiral[editar]
Es un ADN totalmente intacto con los filamentos sin cortar, y con forma de
remolino, resultando en una forma compacta.
La tasa de migración de pequeños fragmentos lineales es directamente
proporcional al voltaje aplicado (en el caso de voltajes bajos). En el caso de altos
voltajes, grandes fragmentos migran continuamente a diferentes tasas. Por lo
tanto, la resolución del gel decrece con el incremento del voltaje.
A un bajo voltaje determinado, la migración de un pequeño fragmento lineal de
ADN está en función de su longitud. Fragmentos lineales largos (de 20kb) migran
a cierta tasa sin importar la longitud. Esto es debido a que las moléculas “reptan”
desde el centro de la molécula siguiendo el sentido de la matriz de gel.
La digestión restrictiva se usa frecuentemente para analizar fragmentos
purificados de plásmidos. Estas enzimas rompen específicamente el ADN en
ciertas secuencias cortas.

Aplicaciones[editar]
Clonación del ADN[editar]
Dibujo del mecanismo de clonación de un gen con una bacteria y plásmidos

La clonación del ADN es una técnica fundamental para la obtención de grandes

cantidades de un fragmento de ADN concreto, este fragmento primero debe ser
unido a un ADN vector antes de ser clonado. El ADN vector es un vehículo que se
utiliza para transportar ADN extraño a una célula huésped, el vector contiene
secuencias que le permiten duplicarse dentro de esta célula huésped.
En una técnica el segmento de ADN que va a ser clonado es introducido a un
plásmido y luego unido a una célula bacteriana, en ese momento la bacteria capta
el plásmido del medio. En otra técnica alternativa el segmento de ADN se une a un
fragmento del genoma del virus bacteriano lambda, luego este virus infecta a un
cultivo de células bacterianas, obteniendo así una gran cantidad de virus, siendo
cada virus contenedor del fragmento de ADN extraño.
En cualquiera de las dos técnicas mencionadas, una vez que el fragmento de ADN
extraño se encuentra en el interior de la bacteria será duplicado junto con el ADN
bacteriano o viral, y repartido a las células hijas. De este modo el número de
moléculas de ADN recombinante aumenta en proporción al número de células que
se forman. De modo que si iniciáramos con una sola célula en poco tiempo
tendríamos millones de copias de ADN. Cuando se alcanza la cantidad de copias
necesarias se puede purificar el ADN recombinante y este podrá ser utilizado en
otros procesos. Además de proporcionar un medio para amplificar la cantidad de
secuencia de ADN particular la clonación también puede ser utilizada como
técnica para aislar en forma pura cualquier fragmento de ADN específico en una
población heterogénea de moléculas de ADN.
Clonación de ADN eucariota en plásmidos bacterianos[editar]
El ADN extraño que debe clonarse es introducido en el plásmido para formar una
molécula de ADN recombinante, los plásmidos usados para la clonación de ADN
son versiones modificadas, de los que se pueden observar en las células
bacterianas. De la misma manera sus contrapartes naturales de las cuales
derivan, poseen una origen de duplicación y uno o más genes que confieren a la
célula receptora resistencia a antibióticos, la resistencia los antibióticos permite
selecciona las células que contienen el plásmido recombinante. 24
Las bacterias que pueden captar el ADN de un medio constituyen una base para
la clonación de plásmidos en células bacterianas. En este procedimiento a un
cultivo que ha sido pretratado con iones de calcio se le adicionan plásmidos
recombinantes. Cuando el plásmido ha sido captado este se duplica de manera
autónoma en el interior de la célula receptora. Las células bacterianas que
contienen el plásmido se pueden seleccionar porque se desarrollan en presencia
del antibiótico contra el cual deben ser resistentes. Cuando se alcanza la cantidad
de amplificación deseada se extrae el ADN, el cual puede ser separado con
facilidad del plásmido de ADN recombinante. Además pueden tratarse plásmidos
recombinantes aislados con la misma enzima restrictiva que se utilizó en su
síntesis, la cual libera los segmentos de ADN clonados del resto de ADN que sirvió
como Vector. Posteriormente el ADN clonado se puede separar del plásmido. 25
Uno de los principales beneficios de la clonación del ADN es que además de
producir grandes cantidades un una parte específica de ADN permite separar
diferentes ADN en una mezcla. Inicialmente se notó que las bacterias que poseen
plásmidos se pueden separar con tratamientos con antibióticos, cuando se realiza
este tratamiento se pueden sedimentar a baja densidad en placas Petri de tal
manera que la progenie de una célula permanece separa de la progenie de otra
célula. Como existe una gran cantidad de plásmidos recombinantes, las diferentes
células sobre el plato el plato de cultivo poseen diversos fragmentos de ADN
extraños.
En los platos de cultivos que poseen las colonias bacterianas se investiga la
presencia de una secuencia de ADN particular, empleando técnicas combinadas
de duplicación de placas e hibridación in situ. Esta duplicación permite la
preparación de un gran número de platos de cultivos que contienen colonias
representativas de una misma célula bacteriana, y están posicionadas de la misma
manera en cada plato. Se utiliza una de las réplicas para la localización de una
secuencia de ADN, en este procedimiento se requiere lisar las células y fijar el
ADN sobre la superficie, de un filtro cuando el ADN se encuentra fijado el ADN se
desnaturaliza para la hibridación in situ, durante el cual el filtro es incubado con
una sonda de ADN marcado que posee la secuencia complementaria buscada,
posteriormente con la sonda no hibridad se lava y se determina la localización de
los híbridos marcados mediante autorradiografía, solo entonces se seleccionaran
los representativos identificados vivientes de la clonación.
Pese a que es fácil la búsqueda de un solo gen humano usando este
procedimiento, no se trata de un gen práctico debido a que se requiere de cientos
de placas de Petri preparadas.
Genética[editar]

Diagrama de un vector de clonación simple derivado de un plásmido, una molécula de ADN de doble
cadena circular que puede replicarse dentro de una célula.

Los plásmidos sirven como una importante herramienta en laboratorios de

genética e ingeniería bioquímica, donde son comúnmente usados para multiplicar
(hacer muchas copias de) o como genes particulares expresos. Muchos plásmidos
están disponibles comercialmente para dichos usos. 2627
El gen que va a replicarse se inserta en copias de un plásmido el cual contiene
genes que hacen células resistentes a un antibiótico en particular. En el paso
siguiente el plásmido es insertado en la bacteria por medio de un proceso llamado
transformación. Luego, la bacteria es expuesta a un antibiótico particular. Solo la
bacteria que toma copias del plásmido sobrevive al antibiótico debido a que el
plásmido lo hace resistente.27 En particular, los genes protectores son expresados
(usados para hacer proteína) y la proteína expresada evita la acción del
antibiótico. De esta forma, los antibióticos actúan como un filtro que seleccionan
únicamente la bacteria modificada. Ahora, estas bacterias pueden ser cultivadas
en largas cantidades, cosechadas y el plásmido de interés puede ser aislado.
Otro uso importante de los plásmidos es fabricar grandes cantidades de proteínas.
En este se deja crecer la bacteria que contiene el plásmido que encierra al gen de
interés. Solo como la bacteria produce la proteína que le confiere si resistencia a
los antibióticos, este también puede ser usado para producir proteínas en grandes
cantidades desde el gen insertado. Esta es una forma barata y fácil de producir
genes o proteínas que este codifica de forma masiva, como por ejemplo insulina, o
inclusive antibióticos.
Extracción del ADN plasmídico[editar]
En el maxiprep se cultivan volúmenes mucho más grandes de bacterias en
suspensión. Esencialmente, este es un escalado de la preparación mini-prep, el
cual es seguido por una purificación adicional. Esto resulta en una cantidad
relativamente grande (0,5 -1 mg) de ADN plásmido muy puro. 28
En los últimos tiempos muchos kits comerciales han sido creados para realizar la
extracción plasmídica a varias escalas, purezas y niveles de automatización.

Resistencia a los antibióticos[editar]

Los plásmidos a menudo contienen genes o paquetes de genes que les confieren
una ventaja selectiva, lo que les da la habilidad de hacer a la bacteria resistente a
uno o varios antibióticos. Cada plásmido contiene al menos una secuencia de
ADN que sirve como un origen de replicación u ORI (un punto inicial para
la replicación del ADN), lo cual habilita al ADN para ser duplicado
independientemente del ADN cromosomal.
La adquisición de genes necesarios para elaborar estos mecanismos de defensa
se ve favorecida por una variedad de sistemas en los que se transfiere genes de
manera mezclada, tales como plásmidos conjugativos bacterianos, elementos
transponibles y sistemas integrón, que mueven genes de un sistema de ADN a
otro y de una célula bacteriana a otra, sin necesidad de que exista una relación
con el donante de los genes.29
Los plásmidos bacterianos sirven como el andamio sobre el cual están montados
arreglos de genes de resistencia a antibióticos, por transposición (elementos
transponibles y transposición mediada por ISCR) y mecanismos de recombinación
específicos de sitio (casetes de genes integrón).30