REVISTA CON-CIENCIA N°1/VOL.
1 (2013) 93-104
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Biodisponibilidad y bioequivalencia in vitro en cápsulas
de amoxicilina de 500 mg comercializados en Bolivia
DAZA CALDERÓN, MARIA LUISA1
Resumen Abstract
Los estudios de Biodisponibilidad y The Biodisponibility and Bioequiva-
Bioequivalencia permiten demostrar si el lence studies allow to demonstrate if the
principio activo tiene el mismo desem- active principle has the same pharmacoki-
peño farmacocinético en el medicamento netic performance in the generic drug as
genérico que en el innovador ó con el de the standard set up in a country, to con-
referencia establecido en un país, para así sider them interchangeable and to guar-
garantizar a través de estos estudios la in- antee through these tests that they must
tercambiabilidad, que deben ser desarrol- be developed as a demand to the gener-
ladas como una exigencia a los productos ic drugs. In this way to contribute to have
genéricos, como una verdadera Garantía a true Guarantee of Quality of drugs like
de Calidad de los medicamentos, así lo es- the Drugs Law and the Good Manufacture
tipula la Ley del Medicamento y las Buenas Practices were been approved in Bolivia of
Prácticas de Manufactura aprobadas en Bo- approved in Bolivia on December of 1996.
livia a partir de diciembre de 1996. The amoxycillin is an antibiotic of wide
La amoxicilina, antibiótico de amplio spectre very used in our country, it belongs
espectro muy utilizado en nuestro país, the first class in the Biopharmaceutical
pertenece a la clase I en el Sistema de Cla- Classification System (BCS), and therefore
sificación Biofarmacéutica y por tanto jus- the execution of in vitro Biodisponibility
tifica la realización de estudios de Biodis- and Bioequivalence studies by dissolution
1 1 Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, Universidad Mayor de San Andrés, La Paz-Bolivia, [email protected]
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ponibilidad y Bioequivalencia in vitro, por profiles have been justified.
medio de perfiles de disolución. An in vitro Biodisponibility and Bio-
Para este estudio se eligen cápsulas de equivalence study of the amoxycillin trihy-
500 mg de 4 laboratorios nacionales y ex- drate (capsules of 500 mg) of four national
tranjeros, de mayor venta en el mercado and foreign laboratories of more sale in the
boliviano en el año 2003. Bolivian market was carried out in this re-
A los 4 productos (3 lotes por produc- search, through an experimental and statis-
to) se realiza el protocolo de control de cal- tical design, set up in official documents of
idad. Luego para elegir los lotes que entran the United States Pharmacopoeia (USP).
al estudio de Bioequivalencia se realiza el To the four products (three lots for
Análisis Cinético de los perfiles de disolu- product) were made the analysis of quality
ción para determinar la constante de velo- control for solid oral pharmaceutical forms,
cidad de disolución intermedia de los tres then to choose the lots that enter to bio-
lotes y elegir el lote de comportamiento in- equivalence study it makes the Kinetic Anal-
termedio para que entre al estudio de Bio- ysis of the dissolution profiles of dissolved
equivalencia. Los perfiles de disolución de percentage accumulated versus time with a
los cuatro lotes elegidos se comparan a valuated method analytic, and these profiles
través del método estadístico Modelo Inde- are compared through the statistical meth-
pendiente con factor de similitud. Se con- od, Independent Model with the Similarity
cluye que los 4 son bioequivalentes e inter- Factor. It concludes that the products of the
cambiables entre sí. study are bioequivalent and interchange-
able to each other, since in our country the
innovative product is not marketed and it
doesn’t have a product of Reference settled
down by the competent authorities.
PALABRAS CLAVE KEY WORDS
Biodisponibilidad, Biodisponibility, Bioequivalence,
Bioequivalencia, Perfiles de dissolution profiles.
Disolución.
INTRODUCCIÓN
Biodisponibilidad y Bioequivalencia, dos conceptos muy utilizados en la
actualidad, están íntimamente ligados con el desarrollo de dos nuevas cien-
cias, la Biofarmacia y la Farmacocinética, que surgieron en la primera mitad
del siglo pasado, y alcanzaron su auge en las décadas de los 60 a 80 del si-
glo XX.
La Biodisponibilidad, se define como la velocidad y la cantidad de un fár-
maco que alcanza la circulación sistémica a partir de una forma farmacéutica.
El término de Bioequivalencia se refiere a la velocidad y proporción en
que el mismo principio activo, proveniente de dos medicamentos “iguales“
alcanza la circulación sistémica; por ende, un estudio de Bioequivalencia es
un estudio de Biodisponibilidad relativa, en el cual se compara la velocidad y
la cantidad absorbida de productos que contienen el mismo fármaco (misma
sal), la misma dosis, en la misma forma farmacéutica (Informe, 1994).
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Para ello, se deberá demostrar, que no existen diferencias estadísticamen-
te significativas en los productos provenientes de diferentes marcas, ó pro-
ductos genéricos, frente al producto innovador ó el producto de referencia.
El medicamento original o innovador es aquél que contiene un principio
activo nuevo y con el que se ha realizado una investigación y desarrollo com-
pleto, desde su síntesis química hasta su utilización clínica, es por tanto, el
primero, y a veces el único, que aporta datos propios de seguridad y eficacia
terapéutica del principio activo, administrado en una especialidad farmacéu-
tica concreta, a dosis determinada y con indicaciones específicas.
El producto de referencia es un producto farmacéutico en relación con el
cual el nuevo producto pretende ser intercambiable, se puede usar el pro-
ducto que sea líder el mercado y haya recibido autorización para comerciali-
zarse y estén documentados su eficacia, inocuidad y calidad (Center for Drug
Evaluation and Research CDER.FDA, 1997)
A nivel mundial se inicia un proceso de armonización con el propósito de
reducir requisitos innecesarios y duplicados para la aprobación de fármacos
para la venta, y para acelerar la disponibilidad y reducir el costo de los fárma-
cos (Informe, 1994).
Se instruye a la Agencia Europea para la Evaluación de Productos Medici-
nales (EMEA), como el organismo para regular, coordinar el proceso de armo-
nización con respecto a los requisitos de aprobación de productos medici-
nales y al Comité Internacional de Armonización (ICH), conformado entre la
Comunidad Europea, Japón y Estados Unidos y la Organización Panamerica-
na de la Salud (PAHO), para promover la organización en las Américas, a tra-
vés de la Red Panamericana de las Agencias Regulatorias de Fármacos, para
el Proceso de Armonización Regulatoria (PANDRA), con el objeto de coor-
dinar el proceso de armonización en las Américas, conformado por un gru-
po de trabajo que se encarga de temas relacionados a la Biodisponibilidad y
Bioequivalencia (BA/BE) (FDA, 2001).
El Comité de Expertos de la Organización Mundial de la Salud (OMS), en
Especificaciones para las Preparaciones Farmacéuticas, se reunió en Ginebra
el 28 de septiembre de 1994, para abordar la amplia variedad de asuntos re-
lativos a la garantía global de la calidad de los Productos Farmacéuticos. En el
Anexo 9 del Informe 34, se dan las directrices sobre los requisitos de registro
para establecer el carácter intercambiable del genérico frente al innovador
o de referencia (1). Posteriormente (2006) en el Anexo 7 del Informe 40 pre-
senta la Guía de los Requerimientos de Registro para establecer Intercambia-
bilidad. y la propuesta para obviar los requerimientos de Bioequivalencia in
vivo para formas de dosificación oral de la lista modelo de los medicamentos
esenciales de liberación inmediata (Informe 40, 2006).
Los productos genéricos deben satisfacer las mismas normas de calidad,
eficacia e inocuidad que el producto de origen. Además, se debe propor-
cionar una garantía razonable de que son clínicamente intercambiables con
productos existentes en el mercado y que son nominalmente equivalentes.
El carácter intercambiable, se garantiza suficientemente aplicando las Buenas
Prácticas de Manufactura y comprobando la observancia de las especificacio-
nes pertinentes de la farmacopea. Todas las formas farmacéuticas orales só-
lidas deben demostrar equivalencia terapéutica y los datos correspondientes
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se incluirán en la documentación presentada junto con la solicitud de autori-
zación de comercialización (Informe, 1994).
Los organismos de reglamentación deben exigir la documentación que
acredite que un producto farmacéutico genérico satisface los siguientes tres
conjuntos de criterios:
z Fabricación según Buenas Prácticas de Manufactura (BPM) y Control
de Calidad
z Características y etiquetado del producto
z Equivalencia terapéutica
La evaluación de la Bioequivalencia normalmente exigirá un estudio in
vivo, o una justificación de que dicho estudio no se requiere en un caso parti-
cular. Entre los tipos de estudios in vivo pueden mencionarse los estudios de
Bioequivalencia, los estudios farmacodinámicos y los ensayos clínicos compa-
rativos. En ciertos casos, los estudios in vitro pueden bastar para aportar equi-
valencia terapéutica (Informe, 1994).
La amoxicilina antibiótico de amplio espectro actúa bloqueando la activi-
dad transpeptidasa de las Proteínas Fijadoras de Penicilina en las bacterias en
fase de crecimiento, así, la síntesis de peptidoglucano (esencial en la pared
bacteriana) disminuye y la bacteria muere por efecto osmótico o digerida por
enzimas autolíticas (Martindale, 2005).
La amoxicilina trihidrato en cápsulas de 500 mg, producto genérico y
esencial, tanto de procedencia nacional como de importación comercializa-
do en Bolivia, debe cumplir los mismos criterios de calidad que el innovador,
porque, al carecer de ensayos clínicos propios, basan sus datos de seguridad
y eficacia terapéutica presentada en la documentación publicada que existe
sobre dicho principio activo del producto innovador.
En Bolivia, hace 25 años se inicia la comercialización de este producto, la
lista oficial de medicamentos con registro sanitario vigente, (año 2003), regis-
tra que se comercializa por 37 laboratorios, tanto producto de marca como
genérico de procedencia nacional y de importación. (Lista Nacional de Medi-
camentos con Registro Sanitario Vigente, 2004).
Como producto genérico existen 15 líneas de producción, 8 de laborato-
rios nacionales y 7 de importación, cuya calidad Biofarmacéutica no ha sido
avalada a través de pruebas de Bioequivalencia, requisito no exigido en los
formularios para el registro sanitario.
En la Clasificación Biofarmacéutica, Clase I están los fármacos que son: al-
tamente solubles y altamente permeables. Los estudios de bioequivalencia in
vitro, para ciertos medicamentos y formas farmacéuticas, pueden evaluarse
mediante pruebas de disolución, a través de la comparación de perfiles de di-
solución, como la amoxicilina en cápsulas de 500 mg (Informe 40, 2006).
PARTE EXPERIMENTAL
Metodología
z Se selecciona los 4 productos de mayor venta (IMS)
z Protocolo de control de calidad USP 26
z Validación del método analítico: especificidad, exactitud, precisión y
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linealidad
z Análisis estadístico ANOVA para verificación del comportamiento en-
tre lotes
z Perfiles de disolución, con siete puntos de muestreo
z Análisis cinético y estadístico para determinar K (constante de disolu-
ción)
z Elección del lote de K intermedia, de cada producto que entrará al es-
tudio de BE
z Diseño experimental para el estudio de Bioequivalencia con los 4 lotes
elegidos.
z Comparación de los perfiles de disolución por el método estadístico
Modelo Independiente con factor de similitud.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Resultados
Determinar los productos de mayor consumo de cápsulas de Amoxicilina
trihidrato de 500 mg, tanto de procedencia nacional como de importación en
Bolivia, con base en el reporte del Internacional Marketing Stadistic (IMS) de
los 4 productos de mayor venta en el año 2003.
De cada uno de los productos se han seleccionado tres lotes (A1, A2, A3;
B1, B2, B3; C1, C2, C3; D1, D2, D3) a los cuales se ha realizado el control de
calidad para formas farmacéuticas sólidas orales tales como: Verificación de
la rotulación, Prueba de hermeticidad del envase, Características organolép-
ticas, Pruebas de Identificación, Cuantificación del principio activo, Uniformi-
dad de contenido, Determinación de humedad y Prueba de disolución (USP
26, 2003).
Los resultados obtenidos de todos los lotes de los 4 productos cumplen
con los requerimientos de calidad especificados en la monografía correspon-
diente a cápsulas de amoxicilina de la farmacopea USP 26.
Posteriormente se valida el método analítico, para efectuar los perfiles de
Disolución de las cápsulas de Amoxicilina de 500 mg, teniendo en cuenta los
parámetros de especificidad, exactitud, precisión y linealidad, para el están-
dar y cada uno de los lotes (Rojas, 2003 y AEFI, 2001).
Una vez analizados los resultados de las pruebas de Control de Calidad de
los 4 productos con resultados que se ajustan a los requerimientos de la far-
macopea, se define pasar a la etapa de selección de los lotes que entran al
estudio de Bioequivalencia in vitro, (un lote de cada producto). Estos lotes se
seleccionaron primero sobre la base del análisis estadístico tipo ANOVA (mé-
todo FISHER) para determinar el comportamiento de los 3 lotes de cada pro-
ducto, no detectándose diferencias significativas entre los tres lotes, luego de
este análisis se procedió al análisis cinético para determinar las constantes de
disolución (K de disolución min-1), para elegir el lote de cada producto que
tenga un comportamiento intermedio, resultando A2, B1, C1 y D1 los lotes
elegidos para al estudio de Bioequivalencia in vitro.
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Perfiles de disolución y análisis cinético del producto A
Tiempo In (100-PDA)
(min) A1
0 4,61
10 3,99
20 3,39
30 2,70
45 1,98
60 1,07
Tiempo In (100-PDA)
(min) A2
0 4,61
10 4,01
20 3,31
30 2,63
45 2,04
60 0,96
Tiempo In (100-PDA)
(min) A3
0 4,61
10 3,81
20 3,15
30 2,53
45 1,78
60 1,28
75 0,61
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Perfiles de disolución y análisis cinético del producto B
Tiempo In (100-PDA)
(min) B1
0 4,61
10 3,92
20 3,47
30 2,91
45 2,05
60 1,53
75 1,23
90 1,28
Tiempo In (100-PDA)
(min) B2
0 4,61
10 3,82
20 3,32
30 2,73
45 2,02
60 1,43
75 1,15
90 1,12
Tiempo In (100-PDA)
(min) B3
0 4,61
10 3,99
20 3,59
30 3,18
45 2,77
60 2,41
75 2,16
90 1,97
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Perfiles de disolución y análisis cinético del producto C
Tiempo In (100-PDA)
(min) C1
0 4,61
10 3,68
20 3,08
30 2,51
45 1,43
60 0,34
Tiempo In (100-PDA)
(min) C2
0 4,61
10 3,69
20 3,04
30 2,26
45 1,51
60 0,59
75 0,27
Tiempo In (100-PDA)
(min) C3
0 4,61
10 3,67
20 2,95
30 2,27
45 1,21
60 0,63
100
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Perfiles de disolución y análisis cinético del producto D
Tiempo In (100-PDA)
(min) D1
0 4,61
10 3,82
20 3,25
30 2,57
45 1,56
60 0,57
Tiempo In (100-PDA)
(min) D2
0 4,61
10 3,96
20 3,36
30 2,83
45 2,20
60 0,97
Tiempo In (100-PDA)
(min) D3
0 4,61
10 3,72
20 3,11
30 2,49
45 1,57
60 0,32
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Selección de los lotes según el Método de las Pendientes
Lote K Disolución DS CV r2 Observaciones
Promedio
min-1
A1 -0.05618 0.01287 -22.90318 0.98500
A2 -0.04495 0.00515 -11.45112 0.93405 Entra al estudio
A3 -0.04488 0.00596 -13.28464 0.94350
B1 -0.04160 0.01112 -26.73993 0.91734 Entra al estudio
B2 -0.04668 0.02136 -45.75848 0.91642
B3 -0.03471 0.01388 -39.98876 0.92041
C1 -0.06165 0.00920 -14.92492 0.96650 Entra al estudio
C2 -0.04668 0.00726 -12.83154 0.95796
C3 -0.06225 0.00947 -15.20693 0.96327
D1 -0.05998 0.00882 -14.70452 0.98935 Entra al estudio
D2 -0.05173 0.00833 -16.10488 0.95444
D3 -0.06496 0.00804 -12.37056 0.98901
La detección de la Bioequivalencia in vitro entre los 4 productos se realizó
a través del análisis estadístico mediante el Modelo Independiente calculan-
do las ecuaciones para el factor de diferencia f1 y el factor de similitud f2 (5),
siendo los valores límite del f1 (0-15) y f2 (50-100). Los resultados obtenidos
de los cálculos de los factores de diferencia (f1) y similitud (f2) nos permiten
afirmar que los productos A, B, C y D, se pueden considerar bioequivalentes
e intercambiables entre sí, por los resultados obtenidos en los perfiles de di-
solución. (Cárcamo, 1981).
PRUEBA DE BIOEQUIVALENCIA in vitro ENTRE LOS PRODUCTOS A2, B1, C1 Y D1
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Valores de f1 y f2 para comparar A, B, C, y D
Relación A/B A/C A/D Relación A/B A/C A/D
f1 8.28 1.27 1.70 f2 57.88 82.21 83.74
Relación B/A B/C B/D Relación B/A B/C B/D
f1 9.03 9.63 8.28 f2 57.88 56.26 59.28
Relación C/A C/B C/D Relación C/A C/B C/D
f1 1.26 8.78 1.60 f2 82.21 56.26 84.44
Relación D/A D/B D/C Relación D/A D/B D/C
f1 1.72 7.65 1.62 f2 83.74 59.28 84.44
CONCLUSIONES
En el presente trabajo se demuestra la Bioequivalencia in vitro entre los
cuatro productos seleccionados para este estudio, bajo las mismas condicio-
nes de disolución y sobre la base de un protocolo realizado a partir de docu-
mentos internacionales que dan pautas sobre la realización de estos estudios.
Al hacer las comparaciones múltiples entre los diversos productos del es-
tudio, a través del Modelo Independiente se demuestra que:
• Los productos A, B, C y D, se pueden considerar bioequivalentes e
intercambiables, esta afirmación, se basa en la comparación de los per-
files de disolución y el correspondiente cálculo de los factores de dife-
rencia (f1) y similitud (f2) del Modelo Independiente, valores de f1 en-
tre 0 - 15 y valores de f2 entre 50 - 100.
• En los ensayos de control de calidad el producto B, si bien cumple con
las especificaciones, la variabilidad de los resultados representada por
el CV muestra valores ligeramente por encima de lo permitido en la
prueba de variación de peso y uniformidad de contenido, cuyos resul-
tados de CV están: para el lote B1 5,85%, para el lote B2 6.14%, y para
el lote B3 6.96%.
• El producto C, es el que presenta menor variabilidad en los resultados,
tanto para control de calidad como en el estudio de Bioequivalencia in
vitro, por lo que se podría proponer como Producto de Referencia.
• El sistema empleado para la selección de los productos que entraron al
estudio se puede considerar válido porque involucra diversos criterios
que permiten considerar aquellos productos que tiene mayor uso en la
103
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comunidad en general y por lo tanto un importante riesgo para la sa-
lud en caso de no cumplir con los parámetros de calidad.
• El protocolo desarrollado y el diseño experimental y estadístico utili-
zado para la selección de los lotes que entran al estudio de Bioequiva-
lencia in vitro proporciona un método sencillo para identificar el lote
de comportamiento intermedio de cada producto.
• La metodología y el tratamiento estadístico presentado en esta inves-
tigación ofrecen una herramienta muy útil en el desarrollo de estudios
de Bioequivalencia in vitro de medicamentos genéricos fabricados en
el país ó de importación, los cuales deben cumplir con esta exigencia,
para garantizar la calidad de los medicamentos que llegan a la pobla-
ción y su posible intercambiabilidad.
• Por su facilidad en el desarrollo y confiabilidad, se propone la acepta-
ción del procedimiento establecido en el presente trabajo de investi-
gación para evaluar la Bioequivalencia in vitro de medicamentos que
de acuerdo a la clasificación biofarmacéutica sean aceptados para este
tipo de ensayos.
REFERENCIAS
INFORME 34ª (1994) Comité de expertos LISTA NACIONAL DE MEDICAMENTOS
de la OMS en especificaciones para las CON REGISTRO SANITARIO VIGEN-
preparaciones farmacéuticas. Ginebra: TE. (2004) Dirección de Medicamentos
OMS. y Tecnología en Salud.
CENTER FOR DRUG EVALUATION AND RE- FARMACOPEA DE LOS ESTADOS UNIDOS
SEARCH CDER. FDA (1997) Guidan- DE AMÉRICA USP 26 (2003) USA.
ce for Industry. Dissolution Testing of J. ROJAS. (2003) Dossier del Curso Taller VA-
immediate Release Solid Oral Dosage LIDACIÓN DE METODOLOGÍAS ANA-
Form. Rockville, Disponible en: http:/ LÍTICAS La Paz: UMSA
www.fda.gov/cder/guidance.htm. USA. ASOCIACIÓN ESPAÑOLA DE FARMACÉU-
FDA. (2001) Curso regional de biodisponi- TICOS DE LA INDUSTRIA (AEFI). (2001).
bilidad y bioequivalencia Módulos 1 y Validación de Métodos Analíticos. AEFI:
2 Caracas Barcelona pp. 39-134.
INFORME 40 (2006) Comité de expertos EDISON CID CÁRCAMO. (1981) Cinética
de la OMS en especificaciones para las de Disolución de medicamentos. Secre-
preparaciones farmacéuticas. Ginebra: taría General de la Organización de los
OMS. Estados Americanos Washington,D.C.
MARTINDALE. (2005). Guía Completa de
Consulta Farmacoterapéutica. Barcelo-
na: Pharma Editors. Pp: 217-391
104
