Universidad de Guayaquil
Facultad de Ciencias Química
Química y Farmacia
Laboratorio de Análisis Químico Clínico II
Tema: DETERMINACIÓN DE GLUCOSA
Nombre: Rosado Loor Gabriela Grupo G1
Código 094 Fecha: 31/01/2021
OBJETIVOS
Especificar el principio y las consideraciones del procedimiento analítico para la determinación de
glucosa.
Determinar la glucosa en suero por el método enzimático específico.
INSTRUCCIONES O CONSIDERACIONES PREVIAS
Glucosa
La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a
través de la alimentación, y se almacena principalmente en el hígado, el cual tiene un papel primordial en
el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia). Para que esos niveles se mantengan y el
almacenamiento en el hígado sea adecuado, se precisa la ayuda de la insulina, sustancia producida por el
páncreas.
La glucosa es un hidrato de carbono presente en nuestro organismo, el aumento o disminución de sus
valores produce patologías relacionadas con el metabolismo de acuerdo con los alimentos que ingiere. El
diagnóstico precoz y el control de los pacientes diabéticos tiene por objeto evitar la cetoacidosis y las
complicaciones resultantes de la hiperglicemia, mediante el tratamiento adecuado.
La patología más común relacionada con el metabolismo de los hidratos de carbono es la diabetes
mellitus. El diagnóstico precoz y el control de los pacientes diabéticos tienen por objeto evitar la
cetoacidosis y las complicaciones resultantes de la hiperglicemia, mediante el tratamiento adecuado.
Dado que existen múltiples factores causales de hiper o hipoglicemia, debe considerarse en cada caso la
condición fisiológica y/o la patología presente en el paciente.
Fundamento del Método
La determinación de glucosa se presenta por la siguiente reacción:
Valores de referencia
Suero o plasma
Adultos: 74 - 106 mg/dl (4,11 - 5,89 mmol/l)
Niños: 60 - 100 mg/dl (3,33 - 5,55 mmol/l)
Neonatos: 1 día: 40 - 60 mg/dl (2,22 - 3,33 mmol/l)
Mayor a 1 día: 50 - 80 mg/dl (2,78 - 4,44 mmol/l)
Orina aislada fresca
1 - 15 mg/dl (0,06 - 0,83 mmol/l)
Orina de 24 horas
< 0,5 g/24 hs (< 2,78 mmol/24 hs)
LCR
Niños: 60 - 80 mg/dl (3,33 - 4,44 mmol/l)
Adultos: 40 - 70 mg/dl (2,22 - 3,89 mmol/l)
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia, teniendo en cuenta sexo,
edad hábitos alimenticios y otros factores.
REACTIVOS DE LABORATORIO
S. Standard*: solución de glucosa 100 mg/dl (1 g/l).
A. Reactivo A: solución conteniendo glucosa oxidasa(GOD), peroxidasa (POD), 4-aminofenazona
(4-AF), buffer fosfatos pH 7,0 y 4-hidroxibenzoato en las siguientes concentraciones:
GOD (microbiana).................................................≥ 10 kU/l
POD (rábano)..........................................................≥ 1 kU/l
4-AF.....................................................................0,5 mmol/l
Fosfatos.................................................100 mmol/l, pH 7,0
Hidroxibenzoato...................................................12 mmol/l
Calibrador A plus de Wiener lab.
MUESTRA
a) Suero o plasma: Recolección: se debe obtener suero de la manera usual o plasma recolectado
con anticoagulante.
b) Orina: si se trata de una muestra aislada, utilizar preferentemente orina fresca. En caso de no
poder realizar el ensayo de forma inmediata, conservar la muestra en refrigerador (2-10oC). Puede
realizarse el ensayo en orina de 24 horas. En este caso, recolectar la muestra en un recipiente
oscuro conteniendo 5 ml de ácido acético glacial y conservarlo en hielo.
c) LCR: en caso de utilizar LCR, el ensayo debe realizarse en forma inmediata a la obtención de la
muestra.
MATERIALES DE LABORATORIO
Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
Tubos o cubetas espectrofotométricas de caras paralelas.
Baño de agua a 37oC.
Reloj o timer.
ACTIVIDADES POR DESARROLLAR / TÉCNICA OPERATORIA
En tres tubos marcados B (Blanco) S (Standard) y D (Desconocido) colocar:
Reactivos & Muestra B S D
Estándar - 10ul -
Muestra - - 10ul
Reactivo A 1ml 1ml 1ml
Incubar 5 minutos en baño de agua a 37oC o 25 minutos a 15-25oC. Luego leer en espectrofotómetro a
505 nm o en fotocolorímetro con filtro verde (490-530 nm) llevando el aparato a cero con el blanco.
Estabilidad de la mezcla de reacción final
El color de reacción final es estable 30 minutos, por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de
este lapso.
Calculo de los Resultados
100mg /dl
glucosa ( mgdl )=D∗F F=
S
Condiciones de Reacción
Longitud de onda: 505 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro con filtro verde (490-530
nm).
Temperatura de reacción: 37oC
Tiempo de reacción: 5 minutos
Volumen de muestra: 10 ul
Volumen de Reactivo A: 1 ml
Volumen final de reacción: 1,01 ml
Los volúmenes de Muestra y de Reactivo A pueden variarse proporcionalmente (Ej.: 20 ul Muestra + 2
ml Reactivo A).
RESULTADOS OBTENIDOS
NO PROCEDE.
CONCLUSIONES
Mediante la revisión bibliográfica se prosiguió a definir el procedimiento analítico adecuado para
la determinación cuantitativa de glucosa, describiendo su importancia y técnica en el apartador de
instrucciones a considerar, comprendiendo que la glucosa es un hidrato de carbono presente en
nuestro organismo.
Describiendo una estructura adecuada se describió la técnica operatoria sobre la determinación de
glucosa, comprendiendo los pasos importantes en cada procedimiento a ejecutar, es de vital
importancia el manejo y almacenamiento de los reactivos.
RECOMENDACIONES
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
Linealidad: la reacción es lineal hasta 500 mg/dl. Para valores superiores, diluir la muestra con
solución salina y repetir el ensayo, multiplicando el resultado final por el factor de dilución.
Las muestras de suero deben estar libre de hemólisis y ser preferentemente frescas. Pueden
conservarse hasta 12 horas en refrigerador (2-10 °C).
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de
química clínica.
No se observan interferencias por bilirrubina hasta 55 mg/dl, ni hemólisis ligera (450 mg/dl) y
lipemia con una concentración aproximada de triglicéridos de 2000 mg/dl.
Manipular con precaución los equipos.
Medir correctamente las alícuotas indicadas.
Rotular los tubos donde va a realizar las determinaciones.
Durante el procedimiento leer cuidadosamente el inserto.
Usar el equipo de protección adecuado.
BIBLIOGRAFÍA
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enfermedades. Clínica Médica, III(1), 125-132.
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Conceptualización de la glucosa; importancia y control de su análisis. Nefrología, Xv(3), 350-362.
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