REAL FARMACOPEA ESPAÑOLA, 3.ª edición 2.8.3.

Estomas e índice estomático

2.8. MÉTODOS DE FARMACOGNOSIA

2.8. Métodos de farmacognosia ...................... 237 2.8.9. Residuo de evaporación de los

2. Métodos
analíticos
2.8.1. Cenizas insolubles en ácido clor- aceites esenciales ........................ 239
hídrico ........................................ 237 2.8.10. Solubilidad de los aceites esen-
2.8.2. Elementos extraños .................... 237 ciales en alcohol ......................... 239
2.8.3. Estomas e índice estomático ...... 237 2.8.11. Valoración del 1,8-cineol en los
2.8.4. Índice de hinchamiento .............. 238 aceites esenciales ........................ 239
2.8.12. Determinación de aceites esen-
2.8.5. Agua en los aceites esenciales ... 238
ciales en drogas vegetales .......... 240
2.8.6. Ésteres extraños en los aceites
2.8.13. Residuos de pesticidas ............... 241
esenciales ................................... 238 2.8.14. Determinación de taninos en
2.8.7. Aceites grasos y aceites esenciales drogas vegetales ......................... 244
resinificados en los aceites esen– 2.8.15. Índice de amargor ....................... 245
ciales ........................................... 238 2.8.16. Residuo seco de extractos .......... 246
2.8.8. Olor y sabor de los aceites esen– 2.8.17. Pérdida por desecación de ex-
ciales ........................................... 238 tractos. ......................................... 246

2.8. MÉTODOS Salvo indicación contraria, el nivel de elementos extraños

no es superior al 2 por ciento m/m.
DE FARMACOGNOSIA
Los elementos extraños están constituidos, en su totalidad o
en parte, por:
01/2005, 20801
1. partes extrañas: todo elemento que procede de la planta
originaria pero no constituye la droga,
2.8.1. CENIZAS INSOLUBLES EN ÁCIDO 2. materias extrañas: todo elemento ajeno a la planta de
origen, de procedencia vegetal o mineral.
CLORHÍDRICO

Las cenizas insolubles en ácido clorhídrico están formadas DETERMINACIÓN DE LOS ELEMENTOS
por el residuo obtenido tras extracción de las cenizas sulfú- EXTRAÑOS
ricas o de las cenizas totales con ácido clorhídrico, y se
expresan con respecto a 100 g de droga. Pesar de 100 a 500 g de la muestra, o la cantidad mínima
En el crisol, añadir al residuo obtenido en la determinación indicada en la monografía, y extenderla en una capa delga-
de cenizas sulfúricas o totales 15 ml de agua R y 10 ml de da. Los elementos extraños se detectan por inspección a
ácido clorhídrico R. Cubrir con un vidrio de reloj, hervir simple vista o con ayuda de una lupa (× 6). Separar los
suavemente durante 10 min y dejar enfriar. Filtrar el residuo elementos extraños, pesarlos y calcular el porcentaje que
con un filtro sin cenizas y lavar con agua R caliente hasta representan.
que el filtrado sea neutro. Desecar, calcinar al rojo oscuro,
dejar enfriar en el desecador y pesar. Repetir la calcinación
hasta que la diferencia entre dos pesadas sucesivas no sea
superior a 1 mg.
01/2005, 20803

01/2005, 20802 2.8.3. ESTOMAS E ÍNDICE ESTOMÁTICO

2.8.2. ELEMENTOS EXTRAÑOS ESTOMAS

Las drogas vegetales deben estar exentas de enmoheci- Entre los tipos de estomas, que se distinguen por la forma y
miento, de insectos y de otras contaminaciones de origen la disposición de las células que los rodean (véase Figura
animal. 2.8.3.-1), pueden encontrarse:

Las Normas generales (1) son aplicables a todos los textos y monografías 237
 2.8.4. Índice de hinchamiento REAL FARMACOPEA ESPAÑOLA, 3.ª edición

25 ml de agua R. Tapar la probeta. Agitar enérgicamente

cada 10 min durante un período de 1 h. Dejar en reposo
durante 3 h 90 min después del inicio del ensayo, eliminar
por rotación alrededor del eje vertical la mayor parte posible
2. Métodos
analíticos

del líquido retenido al nivel de la droga y las partículas de la

misma que flotan en la superficie del líquido. Medir el volu-
men ocupado por la droga, incluyendo el mucílago que
pueda estar adherido a la misma. Efectuar 3 ensayos simul-
táneos.
El índice de hinchamiento es la media de los 3 ensayos.

01/2005, 20805

2.8.5. AGUA EN LOS ACEITES ESENCIALES

Figura 2.8.3.-1 Mezclar 10 gotas de aceite esencial con 1 ml de sulfuro de
(1) El tipo anomocítico (células irregulares); los estomas carbono R. La disolución, mantenida en reposo, permanece
están rodeados de un número variable de células que no límpida.
difieren en ningún aspecto de las células de la epider-
mis en general,
(2) el tipo anisocítico (células desiguales); los estomas
suelen estar rodeados por 3 células anejas de las que 01/2005, 20806
una es claramente más pequeña que las restantes,
(3) el tipo diacítico (células transversales); los estomas
están acompañados de 2 células anejas cuyas paredes 2.8.6. ÉSTERES EXTRAÑOS
comunes forman un ángulo recto con las células de EN LOS ACEITES ESENCIALES
guarda del estoma,
(4) el tipo paracítico (células paralelas); los estomas presentan
una o más células anejas a cada lado, paralelas al eje longi- Calentar en un baño de agua durante 2 min una mezcla de
tudinal del ostiolo y de las células de guarda del estoma. 1 ml de aceite esencial y 3,0 ml de una disolución extempo-
ránea de hidróxido de potasio R de 100 g/l en alcohol R. No
ÍNDICE ESTOMÁTICO se forman cristales en los 30 minutos siguientes, incluso tras
enfriar.

100 × S
Índice estomático = ±±±±±
E+S 01/2005, 20807

S = el número de estomas en un área dada de la hoja, 2.8.7. ACEITES GRASOS Y ACEITES

E = el número de células epidérmicas (incluyendo los trico- ESENCIALES RESINIFICADOS
mas) para esta misma superficie. EN LOS ACEITES ESENCIALES
Para cada muestra de hojas, calcular la media de 10 determi-
naciones como mínimo. Dejar caer una gota de aceite esencial sobre un papel de fil-
tro; la gota se evapora por completo en 24 h, sin dejar una
mancha translúcida o de grasa.
01/2005, 20804

2.8.4. ÍNDICE DE HINCHAMIENTO 01/2005, 20808

El índice de hinchamiento es el volumen en mililitros ocu- 2.8.8. OLOR Y SABOR DE LOS ACEITES
pado por 1 gramo de la droga, incluyendo cualquier mucíla-
go adherido a la misma, después de sometida a un proceso ESENCIALES
de hinchamiento en un líquido acuoso durante 4 h.
En una probeta graduada de 25 ml con tapón esmerilado, Mezclar 3 gotas de aceite esencial con 5 ml de alcohol del
cuya graduación, dividida en 0,5 ml, cubre una altura de 125 90 por ciento V/V R y agitar con 10 g de sacarosa R pulveri-
± 5 mm, introducir 1,0 g de la droga entera o en el estado de zada. El olor y el sabor son semejantes a los de la planta o
división prescrito en la monografía. Salvo indicación con- las partes de la misma a partir de la que se ha obtenido el
traria, humedecer la droga con 1,0 ml de alcohol R y añadir aceite esencial.

238 Véase la nota informativa sobre Monografías generales

REAL FARMACOPEA ESPAÑOLA, 3.ª edición 2.8.11. Valoración del 1,8-cineol...

01/2005, 20809 gicamente y con frecuencia. Anotar el volumen de alcohol

consumido para lograr una disolución transparente y, si la
disolución se enturbia o se torna opalescente antes de que el
2.8.9. RESIDUO DE EVAPORACIÓN volumen añadido alcance los 20 ml, anotar asimismo el

2. Métodos
DE LOS ACEITES ESENCIALES volumen consumido en el momento de la aparición de la

analíticos
turbidez u opalescencia y, en caso de que ocurra, en el
El residuo de evaporación de un aceite esencial es el porcen- momento en que esta turbidez u opalescencia vuelve a des-
taje en masa del mismo que queda después de evaporar en aparecer.
un baño de agua, en las condiciones indicadas a continua- Si no se obtiene una disolución límpida tras la adición de
ción. 20 ml de alcohol de la graduación prescrita, repetir el ensa-
yo empleando alcohol de graduación más elevada.
Equipo (véase la Figura 2.8.9.-1). Está formado por:
Se dice que un aceite esencial es soluble en n volúmenes o
— un baño de agua cuya tapa presenta perforaciones de más de alcohol de una graduación g dada si la disolución
70 mm de diámetro, límpida en n volúmenes permanece transparente, compara-
— una cápsula de evaporación de vidrio resistente al calor, da con el aceite esencial no diluido, después de la adición
inerte frente al contenido, progresiva de más alcohol de la misma graduación, hasta
alcanzar los 20 volúmenes de alcohol.
— un desecador.
Se dice que un aceite esencial es soluble en n volúmenes de
Procedimiento. Pesar la cápsula de evaporación tras haber- alcohol de una graduación g dada, enturbiándose al diluir
la calentado en un baño de agua durante 1 h y haberla deja- si la disolución límpida en n volúmenes se vuelve turbia en
do enfriar en el desecador. Introducir en la cápsula 5,00 g de n1 volúmenes (n1 inferior a 20) y permanece así después de
aceite esencial, salvo que se indique otra cantidad. Evaporar la adición progresiva de más alcohol de la misma gradua-
en un baño de agua hirviente, protegido de las corrientes de ción, hasta alcanzar los 20 volúmenes de alcohol.
aire, durante el tiempo prescrito. Dejar enfriar en el deseca-
dor y pesar. Se dice que un aceite esencial es soluble en n volúmenes
de alcohol de una graduación g dada, con enturbiamiento
entre n1 y n2 volúmenes, si la disolución límpida en n volú-
menes se vuelve turbia en n1 volúmenes (n1 inferior a 20) y
permanece así después de la adición progresiva de más alco-
hol de la misma graduación, hasta alcanzar los n2 volúme-
nes de alcohol, en que la disolución vuelve a ser límpida (n2
inferior a 20).
Se dice que un aceite esencial es soluble con opalescencia si
la disolución alcohólica presenta el mismo tono azulado que
una disolución opalescente preparada extemporáneamente
del modo siguiente: mezclar 0,5 ml de disolución de nitrato
de plata R2 con 0,05 ml de ácido nítrico R. Añadir 50 ml de
una disolución de cloruro de sodio R de 12 mg/l. Mezclar y
dejar en reposo, protegida de la luz, durante 5 min.

01/2005, 20811
Figura 2.8.9.-1
Dimensiones en milímetros 2.8.11. VALORACIÓN DEL 1,8-CINEOL
EN LOS ACEITES ESENCIALES
Durante el ensayo, el nivel del agua en el baño debe perma-
necer constante, a unos 50 mm por debajo del nivel de la En un tubo bien seco, pesar 3,00 g de aceite esencial deseca-
tapa. do recientemente sobre sulfato de sodio anhidro R. Añadir
2,10 g de cresol R fundido. Disponer el tubo en un aparato
para la determinación del punto de solidificación (2.2.18) y
dejar que la mezcla cristalice, enfriando y removiendo
01/2005, 20810 mediante el agitador. Cuando tiene lugar la cristalización, se
produce un ligero aumento de la temperatura. Anotar el
2.8.10. SOLUBILIDAD DE LOS ACEITES valor máximo t1 obtenido. Fundir de nuevo la mezcla en un
baño de agua, calentando a una temperatura que no rebase t1
ESENCIALES EN ALCOHOL en más de 5 °C. Situar el tubo en el aparato y mantener la
temperatura 5 °C por encima del valor t1. Cuando la cristali-
En una probeta con tapón esmerilado, de 25 ml a 30 ml, zación comienza o cuando la temperatura de la mezcla ha
introducir 1,0 ml del aceite esencial a examinar. Situar en un descendido hasta 3 °C por encima del valor t1, remover la
calefactor termostatizado a 20 ± 0,2 °C. Mediante una mezcla mediante el agitador. Anotar la temperatura máxima
bureta de al menos 20 ml, añadir el alcohol cuya graduación t2 a la que la mezcla cristaliza. Repetir la operación hasta
se prescribe en la monografía, en fracciones de 0,1 ml, hasta que los dos valores máximos obtenidos para t2 no difieran
disolución completa. Proseguir la adición del disolvente, en en más de 0,2 °C. En caso de que ocurra una sobrefusión,
fracciones de 0,5 ml, hasta un total de 20 ml, agitando enér- cebar la cristalización por adición de un pequeño cristal del

Las Normas generales (1) son aplicables a todos los textos y monografías 239
 2.8.12. Determinación de acites esenciales... REAL FARMACOPEA ESPAÑOLA, 3.ª edición

complejo formado por 3,00 g de cineol R y 2,10 g de cresol — el tapón (K’) está perforado y la tubuladura (K), de
R fundido. Si el valor t2 es inferior a 27,4 °C, repetir la valo- 10 mm de diámetro interior en la parte más ancha
ración tras haber añadido 5,10 g del complejo. del tubo esmerilado, está provista de un orificio que
se corresponde, de un diámetro aproximado de
2. Métodos

En la Tabla 2.8.11.-1 se indica el contenido en cineol que

analíticos

corresponde a la temperatura máxima t2 observada. Si se 1 mm,

han añadido los 5,10 g del complejo, calcular el contenido — una dilatación en forma de peonza (J) de 3 ml,
en cineol de una muestra, expresada en porcentaje m/m, con
ayuda de la relación: — el tubo graduado (JL) dividido en 0,01 ml,
2 (A – 50) — la dilatación (L) de forma esférica y de unos 2 ml,
en la que A es el valor indicado en la Tabla 2.8.11.-1. — la llave de 3 vías (M),
Si es necesario, el contenido en cineol que corresponde a la — la junta (B) situada 20 mm por encima de la parte
temperatura t2 observada se puede obtener por interpola- superior de la graduación;
ción.
(c) un dispositivo de calefacción apropiado, capaz de una
Tabla 2.8.11.-1
regulación precisa;
t2 °C porcen- t2 °C porcen- t2 °C porcen- t2 °C porcen- (d) un soporte vertical con un anillo horizontal cubierto
taje de taje de taje de taje de
cineol cineol cineol cineol con material aislante.
m/m m/m m/m m/m
Procedimiento. Utilizar un aparato perfectamente limpio.
24 45,5 32 56,0 40 67,0 48 82,0 Proceder a la valoración según la naturaleza de la droga a
25 47,0 33 57,0 41 68,5 49 84,0 examinar. En el matraz, introducir el volumen del líquido
26 48,5 34 58,5 42 70,0 50 86,0 prescrito para el arrastre de vapor y algunos fragmentos de
27 49,5 35 60,0 43 72,5 51 88,5
28 50,5 36 61,0 44 74,0 52 91,0 porcelana porosa. Adaptar el condensador al matraz. Verter
29 52,0 37 62,5 45 76,0 53 93,5 agua R por el tubo de llenado (N) hasta que rebose en (B).
30 53,5 38 63,5 46 78,0 54 96,0 Retirar el tapón (K’) e introducir la cantidad prescrita de
31 54,5 39 65,0 47 80,0 55 99,0 xileno R con una pipeta, apoyando la punta sobre el fondo
de la tubuladura (K). Tapar de nuevo con el tapón (K’), cui-
dando de que los dos orificios coincidan. Calentar el líquido
del matraz hasta que se inicie la ebullición y destilar a una
01/2005, 20812 velocidad de 2 ml a 3 ml por minuto, salvo indicación con-
traria.
2.8.12. DETERMINACIÓN DE ACEITES Para determinar la velocidad de destilación, durante la
ESENCIALES EN DROGAS misma y por medio de la llave de 3 vías hacer que descienda
el nivel del agua, de modo que el menisco se sitúe en el
VEGETALES enrase inferior (a) (véase la Figura 2.8.12.-2). Cerrar la llave
y cronometrar el tiempo necesario para que el tubo se llene
La determinación de aceites esenciales en las drogas vegeta- hasta el enrase superior (b). Abrir la llave y proseguir la
les se realiza por arrastre con vapor de agua, en un aparato destilación. Modificar la intensidad de calefacción para
especial y en las condiciones que se especifican a continua- regular la velocidad de destilación. Destilar durante 30 min.
ción. El destilado se recoge en el tubo graduado, en presen- Detener la calefacción, dejar transcurrir al menos 10 min y
cia de xileno para fijar el aceite esencial, mientras que la
fracción acuosa vuelve automáticamente al matraz que leer el volumen de xileno en el tubo graduado.
genera el vapor. En el matraz, introducir la cantidad de droga prescrita y
Equipo. El equipo comprende: proceder al arrastre de vapor, como se ha prescrito anterior-
mente, durante el tiempo y a la velocidad indicadas. Detener
(a) un matraz esférico apropiado, de cuello corto y provisto la calefacción y, después de 10 min, leer el volumen de
de un esmerilado de diámetro interior aproximadamen- líquido recogido en el tubo graduado. Restar del volumen
te 29 mm en su parte más ancha; total el volumen de xileno determinado anteriormente. La
(b) un condensador (véase la Figura 2.8.12.-1) que se diferencia representa la cantidad de aceite esencial en la
adapta exactamente al matraz y que comprende varias muestra. Calcular el resultado en mililitros por kilogramo
partes soldadas de vidrio de baja dilatación: de droga.

240 Véase la nota informativa sobre Monografías generales

REAL FARMACOPEA ESPAÑOLA, 3.ª edición 2.8.13. Residuos de pesticidas

2. Métodos
analíticos
Figura 2.8.12.-1.±Aparato para la determinación de aceites esenciales en las drogas vegetales.
Dimensiones en milímetros

01/2005, 20813

2.8.13. RESIDUOS DE PESTICIDAS

Definición. Para los fines de la Farmacopea, se conside-

ra un pesticida toda sustancia o asociación de sustancias
que se destine a rechazar, destruir o combatir las plagas y
las especies no deseadas de plantas y de animales, que
causan daños o resultan perjudiciales para la producción,
Figura 2.8.12.-2
la transformación, el almacenaje, el transporte o la
comercialización de las sustancias medicinales de origen
Cuando el aceite esencial vaya a destinarse a otras opera- vegetal. El término incluye las sustancias destinadas a la
ciones analíticas, la mezcla del mismo con xileno, libre regulación del crecimiento de las plantas, los agentes defo-
de agua, puede recuperarse del modo siguiente: retirar el liantes, los agentes desecantes y los productos aplicados a
tapón (K’) e introducir 0,1 ml de una disolución de fluo- los cultivos, sea antes o después de la cosecha, para prote-
resceinato de sodio R de 1 g/l y 0,5 ml de agua R. Redu- ger los productos frente al deterioro durante el almacenaje
cir el nivel de la mezcla xileno-aceite esencial en el y el transporte.
engrosamiento (L), mediante la llave de 3 vías. Dejar en
reposo durante 5 min y seguidamente dejar que la mezcla Límites. Salvo indicación contraria en la monografía, la
fluya lentamente, justo hasta el nivel de la llave (M). droga a examinar satisface como mínimo los límites indica-
Abrir dicha llave en sentido inverso a las agujas del reloj, dos en la Tabla 2.8.13.-1. Los límites aplicables a los pesti-
de modo que el agua pueda fluir del tubo de comunica- cidas que no figuran en la Tabla 2.8.13.-1 y cuya presencia
ción (BM). Enjuagar este último con acetona R y luego puede sospecharse por algún motivo se establecen a partir
con un poco de tolueno R, vertidos por el tubo de llenado de los límites fijados por las directivas de las Comunidades
(N). Girar de nuevo la llave de tres vías, en el mismo sen- europeas 76/895 y 90/642, incluyendo sus anexos y las
tido, para recoger la mezcla xileno-aceite esencial en un actualizaciones sucesivas. Los límites que se aplican a los
envase adecuado. pesticidas que no figuran ni en la Tabla 2.8.13.-1 ni en las

Las Normas generales (1) son aplicables a todos los textos y monografías 241
 2.8.13. Residuos de pesticidas REAL FARMACOPEA ESPAÑOLA, 3.ª edición

directivas comunitarias europeas se calculan mediante la En casos excepcionales, pueden autorizarse límites más
expresión: elevados, sobre todo cuando una planta exige un modo de
cultivo particular o presenta un metabolismo o una estructu-
DDA × M ra que pueden dar lugar a un contenido en pesticidas supe-
2. Métodos

±±±±±±
analíticos

rior al normal.
MDD × 100
La autoridad competente puede conceder una exención total
DDA = dosis diaria admisible de la FAO/OMS, en mili- o parcial del ensayo cuando se conocen y pueden compro-
gramos por kilogramo de masa corporal, barse de forma precisa todos los datos retrospectivos del
tratamiento (naturaleza y cantidad de los pesticidas emplea-
M = masa corporal en kilogramos (60 kg), dos, fecha de cada tratamiento durante el cultivo y tras la
MDD = consumo diario de la droga, en kilogramos. cosecha) para un lote determinado.
Cuando la droga se destine a la preparación de extractos,
tinturas u otras formas farmacéuticas cuyo modo de prepa- Toma de la muestra a analizar
ración puede modificar el contenido en pesticidas del pro- Método. Para los envases de contenido inferior a 1 kg,
ducto acabado, los límites se calculan mediante la expre- homogeneizar cuidadosamente la totalidad del mismo y
sión: tomar una muestra suficiente para la realización de los ensa-
DDA × M × E yos requeridos. Para los envases de contenido entre 1 kg y
±±±±±±±±± 5 kg, tomar una muestra de las partes superior, media e infe-
MDD × 100 rior del envase, siendo las tres muestras de un volumen
prácticamente idéntico y suficiente para la realización de los
E= coeficiente de extracción, relacionado con el ensayos requeridos. Mezclar cuidadosamente las tres mues-
método de preparación empleado y determinado tras. Tomar una muestra de la mezcla, suficiente para la
experimentalmente. realización de los ensayos requeridos. Para los envases de
contenido superior a 5 kg, tomar una muestra de al menos
250 g de las partes superior, media e inferior del envase.
Tabla 2.8.13.-1 Mezclar cuidadosamente las tres muestras. Tomar una
muestra de la mezcla, suficiente para la realización de los
Sustancia Límite mg/kg ensayos requeridos.
Número de muestras. Si el número (n) de envases es inferior o
Alaclor 0,02 igual a 3, tomar muestras de cada envases, siguiendo el proce-
Aldrín y Dieldrín (suma de ambos) 0,05
dimiento descrito en Método. Si el número de envases es–supe-
Azinfos - metilo 1,0
rior a 3, llevar a cabo el muestreo según la fórmula 3n + 1,
Bromopropilato 3,0
redondeando al número entero inmediatamente superior.
Clordane (suma de los isómeros cis-, trans-
y oxiclordane) 0,05 Con objeto de evitar toda modificación física o química de
Clorfenvinfos 0,5 la muestra, ésta debe analizarse de inmediato. Si ello no es
Clorpirifos 0,2 posible, conservar la muestra en envases herméticos, de
Clorpirifos - metilo 0,1 calidad alimentaria, protegidos de la luz y a una temperatura
Cipermetrina (e isómeros) 1,0 inferior a 0 °C.
DDT (suma de p,p’-DDT, o,p’-DDT, p,p’- Reactivos. Los reactivos y los disolventes deben estar
DDE y p,p’-TDE) 1,0
exentos de cualquier contaminante, en especial de pestici-
Deltametrina 0,5
das, que sea susceptible de interferir con los resultados del
Diazinon 0,5
análisis. A menudo es preciso emplear disolventes de cali-
Diclorvos 1,0
dad especial o, en su defecto, recientemente destilados en
Ditiocarbamatos (en CS2) 2,0
un aparato totalmente de vidrio. En cualquier caso, deben
Endosulfán (suma de los isómeros y del sul-
realizarse los ensayos en blanco apropiados.
fato de endosulfán) 3,0
Endrín 0,05 Equipo. Limpiar los aparatos y, en especial, el material de
Etión 2,0 vidrio de forma que se elimine cualquier traza de pesticidas,
Fenitrotión 0,5 por ejemplo sumergiéndolos durante 16 h en una disolución
Fenvalerato
1 1,5 de detergente libre de fosfatos, aclarando con abundante
Fonofos 0,05 agua destilada R y finalmente lavando con acetona y con
Heptaclor (suma de heptaclor y de heptaclor-epóxido) 0,05 hexano o heptano.
Hexaclorobenceno 0,1
Análisis cualitativo y cuantitativo de los residuos de
Hexaclorociclohexano - Isómeros (distintos del a) 0,3
pesticidas. Los procedimientos analíticos utilizados deben
Lindano (a-Hexaclorociclohexano) 0,6
validarse según las regulaciones vigentes. En particular,
Malatión 1,0
Metidatión 0,2
satisfacen los criterios siguientes:
Paratión 0,5 — el método escogido, particularmente las etapas de puri-
Paratión - metilo 0,2 ficación, son adecuados para la combinación del residuo
Permetrina 1,0 de pesticida con la sustancia a examinar y no está sujeto
Fosalona 0,1 a interferencias con otras sustancias extraídas en el pro-
Butóxido de piperonilo 3,0 ceso: deben conocerse los límites de detección y de
Pirimfos - metilo 4,0 cuantificación para cada combinación de pesticida y
Piretrinas (suma de las) 3,0 matriz que se analice,
Quintoceno (suma de quintoceno, pentacloroanilina
— la recuperación es del 70 por ciento al 110 por ciento
y pentaclorofenilsulfuro de metilo) 1,0
para cada pesticida,

242 Véase la nota informativa sobre Monografías generales

REAL FARMACOPEA ESPAÑOLA, 3.ª edición 2.8.13. Residuos de pesticidas

— la repetibilidad del método no es inferior a los valores La cromatografía se realiza utilizando:

indicados en la Tabla 2.8.13.-2,
— una columna de acero inoxidable, de 0,30 m de longitud
— la concentración de las disoluciones problema y de las y 7,8 mm de diámetro interior, rellena de copolímero
estireno-divinilbenceno R (5 μm),

2. Métodos
disoluciones de referencia, así como los ajustes del apa-

analíticos
rato, son tales que los picos se encuentran en la parte
— como fase móvil, a un caudal de 1 ml por minuto, tolue-
lineal de la respuesta del detector.
no R.
Tabla 2.8.13-2 Eficacia de la columna. Inyectar 100 μl de una disolución
que contiene 0,5 g/l de rojo de metilo R y 0,5 g/l de azul
Concentración del Repetibilidad Reproducibilidad oracet 2R R en tolueno R y proceder a la cromatografía. La
analito (mg/kg) (Diferencia, ± mg/kg) (Diferencia, ± mg/kg) columna sólo es adecuada si el color del eluato cambia del
0,010 0,005 0,01
anaranjado al azul después de un volumen de elución de
0,100 0,025 0,05 10,3 ml aproximadamente. Si fuese preciso, calibrar la
1,000 0,125 0,25 columna realizando la cromatografía de una mezcla de los
insecticidas a analizar, disuelta en tolueno R a la concentra-
ción apropiada, escogiendo aquél que tenga la masa mole-
Las sección siguiente se da a título de información. cular más baja (por ejemplo, el diclorvos) y el de masa
molecular más elevada (por ejemplo, la deltametrina).
Determinar la fracción del eluato que contiene estos insecti-
Métodos de análisis de los residuos cidas.
de pesticidas
Purificación de la disolución a examinar. Inyectar un
volumen apropiados de la disolución A (100 μl a 500 μl) y
INSECTICIDAS ORGANOFOSFORADOS, proceder a la cromatografía. Recoger la fracción determina-
ORGANOCLORADOS da como se ha indicado anteriormente (disolución B). Los
Y PIRETROIDES insecticidas organofosforados eluyen normalmente entre
8,8 ml y 10,9 ml, y los insecticidas organoclorados y los
Los métodos analíticos que se describen seguidamente pue- piretroides entre 8,5 ml y 10,3 ml.
den utilizarse para una determinación de pesticidas tal como
se ha descrito en las secciones anteriores. Según cuál sea la 2.2. Insecticidas organoclorados y piretroides. En
sustancia examinada, puede ser necesario realizar modifica- una columna cromatográfica de 0,10 m de longitud y 5 mm
ciones, en ocasiones importantes, del procedimiento descri- de diámetro interior, introducir un fragmento de algodón
to. En cualquier caso, puede ser preciso utilizar además otra hidrófilo desengrasado y 0,5 g de gel de sílice preparado del
columna de polaridad distinta u otro método de detección modo siguiente: calentar gel de sílice para cromatografía R
(como espectrometría de masas), e incluso una técnica ana- en la estufa a 150 °C durante no menos de 4 h. Dejar enfriar
lítica distinta (métodos inmunoquímicos, etc.) para confir- y verter sobre el mismo, gota a gota, una cantidad de agua R
mar los resultados obtenidos. correspondiente al 1,5 por ciento de la masa del gel de sílice
empleado; agitar enérgicamente hasta la eliminación de
El procedimiento siguiente sólo se aplica a las drogas vege- grumos y proseguir la agitación durante 2 h, utilizando un
tales cuyo contenido en agua no sea superior al 15 por cien- agitador mecánico. Acondicionar la columna con 1,5 ml de
to. Las drogas vegetales con mayor contenido en agua pue- hexano R. Pueden utilizarse columnas ya llenas, listas para
den desecarse, siempre que se haya demostrado que el el uso, que contengan alrededor de 0,5 g de gel de sílice,
proceso de secado empleado no afecta significativamente al siempre que se hayan validado previamente.
contenido en pesticidas.
Concentrar la disolución B en una corriente de helio para
cromatografía R o de nitrógeno exento de oxígeno R hasta
1. EXTRACCIÓN casi sequedad y disolver el residuo en un volumen adecuado
de tolueno R (de 200 μl a 1 ml, según el volumen inyectado
Poner en maceración 10 g de la droga a examinar, en polvo en la preparación de la disolución B). Transferir cuantitati-
grueso, en 100 ml de acetona R durante 20 min. Añadir 1 ml vamente a la columna y proceder a la cromatografía utili-
de una disolución de 1,8 μg/ml de carbofenotión R en tolue- zando 1,8 ml de tolueno R como fase móvil. Recoger el
no R. Homogeneizar con ayuda de un mezclador rápido eluato (disolución C).
durante 3 min. Filtrar y lavar el filtro y su contenido con 2
porciones de 25 ml de acetona R. Reunir el filtrado y los
disolventes de lavado y evaporar hasta casi sequedad utili- 3. ANÁLISIS CUANTITATIVO
zando un evaporador rotatorio, a una temperatura no supe-
rior a los 40 °C. Añadir algunos mililitros de tolueno R y 3.1. Insecticidas organofosforados. Examinar por cro-
evaporar de nuevo, hasta eliminar por completo la acetona. matografía de gases (2.2.28), utilizando el carbofenotión R
Disolver el residuo en 8 ml de tolueno R. Filtrar por un filtro como patrón interno. Puede ser necesario el uso de un
segundo patrón interno, para detectar posibles interferencias
de membrana (45 μm), enjuagar el matraz y el filtro con
con el pico del carbofenotión.
tolueno R y completar hasta 10,0 ml con el mismo disolven-
te (disolución A). Disolución problema. Concentrar la disolución B bajo una
corriente de helio para cromatografía R hasta casi sequedad
y disolver el residuo en 100 μl de tolueno R.
2. PURIFICACIÓN
Disolución de referencia. Preparar al menos 3 disolucio-
2.1. Insecticidas organofosforados, organoclorados y nes en tolueno R que contengan el insecticida o los insecti-
piretroides. Operar mediante cromatografía de exclusión cidas a analizar y carbofenotión, a las concentraciones
(2.2.30). apropiadas para la construcción de una curva de calibrado.

Las Normas generales (1) son aplicables a todos los textos y monografías 243
 2.8.14. Determinación de taninos… REAL FARMACOPEA ESPAÑOLA, 3.ª edición

El método cromatográfico puede llevarse a cabo utilizando: recubierta de una capa de 0,25 μm de poli(dimetil)
(difenil)siloxano R,
— una columna de sílice fundida, de 30 m de longitud y
0,32 mm de diámetro interior, cuya pared interior está — como gas portador, hidrógeno para cromatografía R;
2. Métodos

recubierta de una capa de 0,25 μm de poli(dimetil)silo- pueden utilizarse también otros gases portadores como
analíticos

xano R, el helio para cromatografía R o el nitrógeno para cro-

— como gas portador, hidrógeno para cromatografía R; matografía R, siempre que se valide adecuadamente el
pueden utilizarse también otros gases portadores como método,
el helio para cromatografía R o el nitrógeno para cro- — un detector de captura de electrones,
matografía R, siempre que se valide adecuadamente el
método, — un inyector que permita la inyección directa sobre la
columna, en frío.
— un detector de ionización en llama de nitrógeno-fósforo
o un detector de espectrometría de emisión atómica. La temperatura del bloque de inyección se mantiene a
250 °C y la del detector a 275 °C. La temperatura de la
La temperatura del bloque de inyección se mantiene a columna se programa del modo siguiente: mantener la tem-
250 °C y la del detector a 275 °C. La temperatura de la peratura a 80 °C durante 1 min, elevarla hasta 150 °C a
columna se programa del modo siguiente: mantener la tem- razón de 30 °C por minuto y mantener esta temperatura
peratura a 80 °C durante 1 min, elevarla hasta 150 °C a durante 3 min; seguidamente, elevar la temperatura hasta
razón de 30 °C por minuto y mantener esta temperatura 280 °C a razón de 4 °C por minuto y mantener esta tempera-
durante 3 min; seguidamente, elevar la temperatura hasta
tura durante 1 min.
280 °C a razón de 4 °C por minuto y mantener esta tempera-
tura durante 1 min. Inyectar el volumen escogido de cada disolución. Cuando
los cromatogramas se registran en las condiciones prescri-
Inyectar el volumen escogido de cada disolución. Cuando
los cromatogramas se registran en las condiciones prescri- tas, los tiempos de retención relativos son aproximadamente
tas, los tiempos de retención relativos son aproximadamente los indicados en la Tabla 2.8.13.-4. Calcular el contenido de
los indicados en la Tabla 2.8.13.-3. Calcular el contenido de cada pesticida a partir del área de los picos y de la concen-
cada pesticida a partir del área de los picos y de la concen- tración de las disoluciones.
tración de las disoluciones. Tabla 2.8.13.-4
Sustancia Tiempo de retención relativo
Tabla 2.8.13.-3
_-Hexaclorociclohexano 0,44
Sustancia Tiempo de retención relativo
Hexaclorobenceno 0,45
Diclorvos 0,20 `-Hexaclorociclohexano 0,49
Fonofos 0,50 Lindane 0,49
Diazinon 0,52 b-Hexaclorociclohexano 0,54
Paratión - metilo 0,59 ¡-Hexaclorociclohexano 0,56
Clorpirifos - metilo 0,60 Heptaclor 0,61
Pirimfos - metilo 0,66 Aldrín 0,68
Malatión 0,67 cis-Heptaclor - epóxido 0,76
Paratión 0,69 o,p’-DDE 0,81
Clorpirifos 0,70 _-Endosulfán 0,82
Metidatión 0,78 Dieldrín 0,87
Etión 0,96 p,p’-DDE 0,87
Carbofenotión 1,00 o,p’-DDD 0,89
Azinfos - metilo 1,17
Endrín 0,91
Fosalona 1,18
`-Endosulfán 0,92
o,p’-DDT 0,95
Carbofenotión 1,00
3.2. Insecticidas organoclorados y piretroides. Exa- p,p’-DDT 1,02
minar por cromatografía de gases (2.2.28) utilizando el cis-Permetrina 1,29
carbofenotión R como patrón interno. Puede ser necesario trans-Permetrina 1,31
el uso de un segundo patrón interno, para detectar posibles Cipermetrina * 1,40
Fenvalerato * 1,47 y 1,49
interferencias con el pico del carbofenotión.
Deltametrina 1,54
Disolución problema. Evaporar con cuidado la disolución
C bajo una corriente de helio para cromatografía R o de * La sustancia presenta numerosos picos.
nitrógeno exento de oxígeno para cromatografía R hasta
casi sequedad y disolver el residuo en 500 μl de tolueno R.
Disolución de referencia. Preparar al menos 3 disolucio- 01/2005, 20814
nes en tolueno R que contengan el insecticida o los insecti-
cidas a analizar y carbofenotión, a las concentraciones 2.8.14. DETERMINACIÓN DE TANINOS
apropiadas para la construcción de una curva de calibrado.
EN DROGAS VEGETALES
El método cromatográfico puede llevarse a cabo utilizando:
— una columna de sílice fundida, de 30 m de longitud y Realizar todas las operaciones de extracción y dilución
0,32 mm de diámetro interior, cuya pared interior está protegidas de la luz.

244 Véase la nota informativa sobre Monografías generales

REAL FARMACOPEA ESPAÑOLA, 3.ª edición 2.8.15. Índice de amargor

En el caso de droga vegetal o extracto seco, introducir la Determinación del factor de corrección
cantidad prescrita de droga pulverizada (180) o del extrac-
to en un matraz de fondo redondo de 250 ml y añadir 150 Se recomienda la utilización de un panel de expertos en sa-
ml de agua R. Calentar en un baño de agua durante 30 min. bor constituido por al menos 6 personas. Deben enjuagarse

2. Métodos
la boca con agua R antes del ensayo.

analíticos
Enfriar en agua corriente y transferir cuantitativamente a
un matraz aforado de 250 ml. Lavar el matraz de fondo Para corregir las diferencias individuales en la percepción
redondo y reunir los líquidos de lavado en el matraz afora- del amargor entre los miembros del panel es necesario de-
do, luego diluir hasta 250 ml con agua R. Dejar decantar terminar un factor de corrección para cada miembro.
los sólidos y filtrar el líquido a través de un filtro de papel
de 125 mm de diámero. Desechar los primeros 50 ml del Disolución madre. Disolver 0,100 g de hidrocloruro de
filtrado. quinina R en agua R y diluir hasta 100,0 ml con el mismo
disolvente. Diluir 1,0 ml de esta disolución hasta 100,0 ml
En el caso de extracto líquido o tintura, diluir la cantidad con agua R.
prescrita del extracto líquido o tintura hasta 250,0 ml
con agua R. Filtrar la mezcla por un filtro de papel de Disoluciones de referencia. Preparar una serie de dilucio-
125 mm de diámetro. Desechar los primeros 50 ml del nes colocando en un primer tubo 3,6 ml de la disolución
filtrado. madre y aumentando progresivamente el volumen 0,2 ml en
cada tubo siguiente hasta un total de 5,8 ml; diluir el conte-
Polifenoles totales. Diluir 5,0 ml del filtrado hasta nido de cada tubo hasta 10,0 ml con agua R.
25,0 ml con agua R. Mezclar 2,0 ml de esta disolución con
1,0 ml de reactivo fosfomolibdowolfrámico R y 10,0 ml de Determinar como sigue la dilución correspondiente a la
agua R y diluir hasta 25,0 ml con una disolución de 290 g/l menor concentración que todavía conserve un sabor amar-
de carbonato de sodio R. Dejar transcurrir 30 min y medir la go. Introducir en la boca 10,0 ml de la disolución más dilui-
absorbancia (2.2.25) a 760 nm (A1), utilizando agua R como da y durante 30 s hacerla pasar de un lado a otro sobre la
líquido de compensación. lengua. Si se encuentra que la disolución no es amarga dese-
charla y esperar 1 min. Enjuagar la boca con agua R. Des-
Polifenoles no adsorbidos sobre polvo de piel. A pués de 10 min, utilizar la siguiente dilución en orden de
10,0 ml del filtrado, añadir 0,10 g de polvo de piel SQR y
concentración creciente.
agitar fuertemente durante 60 min. Filtrar y diluir 5,0 ml del
filtrado hasta 25,0 ml con agua R. Mezclar 2,0 ml de esta Calcular el factor de corrección k para cada miembro del
disolución con 1,0 ml de reactivo fosfomolibdowolfrámico panel a partir de la expresión:
R y 10,0 ml de agua R y diluir hasta 25,0 ml con una disolu-
ción de 290 g/l de carbonato de sodio R. Dejar transcurrir n
30 min y medir la absorbancia (2.2.25) a 760 nm (A2), utili- k = ———
zando agua R como líquido de compensación. 5,00

Referencia. Disolver inmediatamente antes del uso n = número de mililitros de la disolución madre conteni-
50,0 mg de pirogalol R en agua R y diluir hasta 100,0 ml dos en la dilución con menor concentración calificada
con el mismo disolvente. Diluir 5,0 ml de la disolución como amarga.
hasta 100,0 ml con agua R. Mezclar 2,0 ml de esta disolu-
ción con 1,0 ml de reactivo fosfomolibdowolfrámico R y Las personas que no perciban un sabor amargo cuando se
10,0 ml de agua R y diluir hasta 25,0 ml con una disolución utiliza la disolución de referencia preparada a partir de 5,8
de 290 g/l de carbonato de sodio R. Dejar transcurrir 30 min ml de disolución madre han de ser excluidas del panel.
y medir la absorbancia (2.2.25) a 760 nm (A3), utilizando
agua R como líquido de compensación. Preparación de la muestra
Calcular el contenido en porcentaje de taninos expresado Si es necesario, reducir la muestra a polvo (710). A 1,0 g de
como pirogalol utilizando la expresión: la muestra añadir 100 ml de agua R hirviendo. Calentar so-
62,5 (A1 < A2)m2 bre un baño de agua durante 30 min agitando continuamen-
———————— te. Dejar enfriar y diluir hasta 100 ml con agua R. Agitar
A3 × m1 enérgicamente y filtrar, desechando los primeros 2 ml del
filtrado. El filtrado se etiqueta C-1 y tiene un factor de dilu-
m1 = masa de la muestra a examinar, en gramos, ción (FD) de 100.

m2 = masa de pirogalol, en gramos. Si la sustancia a examinar es un líquido, se diluye 1 ml de

dicho líquido con un disolvente adecuado hasta 100 ml y se
denomina C-1.
Determinación del índice de amargor
01/2005, 20815
Disoluciones problemas:
2.8.15. ÍNDICE DE AMARGOR 10,0 ml de C-1 se diluyen con agua R (DF = 1000)
hasta 100 ml: C-2
El índice de amargor de un compuesto, un líquido o un ex- 10,0 ml de C-2 se diluyen con agua R (DF = 10.000)
tracto es el valor inverso de la dilución de dicho compuesto, hasta 100 ml: C-3
líquido o extracto que todavía conserva un sabor amargo. Se
determina por comparación con el hidrocloruro de quinina, 20,0 ml de C-3 se diluyen con agua R (DF = 50.000)
cuyo índice de amargor se fija en 200.000. hasta 100 ml: C-3A

Las Normas generales (1) son aplicables a todos los textos y monografías 245
 2.8.16. Residuo seco de extractos REAL FARMACOPEA ESPAÑOLA, 3.ª edición

10,0 ml de C-3 se diluyen con agua R (DF = 100.000) 01/2005, 20816

hasta 100 ml: C-4
Comenzando con la dilución C-4 cada miembro del panel 2.8.16. RESIDUO SECO DE EXTRACTOS
determina la dilución que conserva todavía un sabor amar-
2. Métodos
analíticos

go. Esta disolución se denomina D. Denominar Y al FD de En una cápsula de fondo plano de aproximadamente 50 mm
la disolución D. de diámetro y aproximadamente 30 mm de altura, introducir
Comenzando con la disolución D preparar las siguientes rápidamente 2,00 g o 2,0 ml del extracto a examinar. Evapo-
secuencias de diluciones: rar hasta sequedad sobre un baño de agua y secar en una
estufa a 100-105 ºC durante 3 h. Dejar enfriar en un deseca-
dor sobre pentóxido de difósforo R o gel de sílice anhidra R
Disolución D (ml) 1,2 1,5 2,0 3,0 6,0 8,0 y pesar. Calcular el resultado como porcentaje m/m o en
gramos por litro.
agua R (ml) 8,8 8,5 8,0 7,0 4,0 2,0

01/2005, 20817
Determinar el número de mililitros de la disolución D que,
cuando se diluye hasta 10,0 ml con agua R, todavía conser-
va un sabor amargo (X). 2.8.17. PÉRDIDA POR DESECACIÓN
Calcular el índice de amargor para cada miembro del panel DE EXTRACTOS
por la expresión:
En una cápsula de fondo plano de aproximadamente 50 mm
Y×k de diámetro y aproximadamente 30 mm de altura, pesar rá-
—————— pidamente 0,50 g del extracto a examinar, finamente pulve-
X × 0,1 rizado. Desecar en una estufa a 100-105 ºC durante 3 h.
Dejar enfriar en un desecador sobre pentóxido de difósforo
Calcular el índice de amargor de la muestra a examinar R o gel de sílice anhidra R y pesar. Calcular el resultado
como el valor medio de todos los miembros del panel. como un porcentaje m/m.

246 Véase la nota informativa sobre Monografías generales