UNIDAD II: PRINCIPIOS DE LA TEORIA CELULAR
2.1.1. HISTORIA DEL MICROSCOPIO
La historia del microscopio empieza con la invención del microscopio compuesto,
es decir, con la idea de combinar más de una lente para observar objetos de 52
forma aumentada. Acorde con esta definición, la historia del microscopio
empezaría a finales del siglo XVI, posiblemente con el diseño de Zacharias
Janssen.
Sin embargo, es importante tener en cuenta que antes de la invención del
microscopio ya era común la utilización de lentes de aumento, también
conocidas como lupas. Las lupas son también un tipo de microscopio llamado
microscopio simple. No obstante, cuando se habla del invento del microscopio se
hace generalmente referencia a la idea del microscopio compuesto.
2.1.1.1 EL DESCUBRIMIENTO DE LAS LENTES DE AUMENTO
Las primeras lentes de las cuales se tiene conocimiento fueron fabricadas por
civilizaciones antiguas. A parte de permitir observar objetos de forma aumentada,
estas lentes eran a menudo utilizadas para concentrar los rayos de luz en un
punto y poder hacer fuego. Algunas también tenían funciones decorativas.
La lente más antigua que se ha conservado es la lente de Nimrud, fabricada en el
imperio asirio alrededor del año 750 a. C.
BIOLOGÍA
También las civilizaciones egipcias, griega y babilónica conocían las propiedades
de las lentes. Una de las técnicas que se utilizaba en la antigua Roma era llenar
esferas de vidrio con agua. Esto permitía observar objetos de forma aumentada al
mirarlos a través de la esfera. Otra técnica parecida se desarrolló en China,
donde se utilizaban tubos que se podían rellenar con distintos niveles de agua 53
para obtener distintos aumentos.
Aunque el uso de estas primeras lentes estaba extendido, su poder de aumento
era muy limitado. Esto hizo que el verdadero desarrollo en el campo de la óptica
no empezara hasta finales del siglo XIII, cuando en Italia se empiezan a fabricar
las primeras lentes para ser utilizadas como gafas. A partir de esta época, la
mejora en las técnicas de fabricación de lentes acaba dando lugar a la
invención de instrumentos como el telescopio y el microscopio.
2.1.1.2 LA INVENCIÓN DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
No es posible afirmar con absoluta certeza quién fue el verdadero inventor del
microscopio. Existen bastantes fuentes que señalan a Zacharias Janssen como
legítimo inventor del microscopio compuesto en el año 1590. Sin embargo, otros
indicios indican que el verdadero inventor podría haber sido Hans Lippershey.
También Galileo Galilei presentó su microscopio óptico en 1609 utilizando un
diseño basado en la combinación de una lente cóncava junto con una lente
convexa. Galileo Galilei llegó a este resultado modificando uno de sus telescopios
y quizá sin tener conocimiento del instrumento inventado por Zacharias Janssen.
En 1619 Cornelius Drebbel presentó su diseño con dos lentes convexas. Esto hace
pensar que también alguno de ellos dos podría haber inventado el microscopio
antes que Zacharias Janssen.
En cualquiera de los casos parece claro que el microscopio compuesto fue
inventado en algún momento entre los años 1590 y 1620. En 1625 Giovanni Faber
es la primera persona en referirse a este nuevo invento como microscopio.
BIOLOGÍA
2.1.1.3 EL MICROSCOPIO DE ZACHARIAS JANSSEN
En 1590 Zacharias Janssen trabajaba junto con su padre, Hans Martens, como
fabricante de anteojos. Durante sus trabajos en el taller tuvo en algún momento la
idea de conectar dos lentes mediante un tubo. Con este simple montaje
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Zacharias Janssen se dio cuenta de que podía observar objetos con aumentos
significativamente mayores que los que conseguía con una sola lente. Según los
documentos de la época el aumento obtenido con este microscopio variaba
entre 3x y 9x según cual fuera la distancia entre las lentes.
Aunque este tipo de microscopio es muy distinto a los que se usan actualmente,
su estructura básica es la misma, con una lente actuando como objetivo y la otra
como ocular. Lente objetivo, situada muy cerca del objeto. Lente ocular, al otro
extremo del tubo, está situada más cerca del ojo y hace la función de lupa sobre
la imagen que produce el lente objetivo.
Este instrumento demostró que la imagen aumentada con una sola lente puede
ser a la vez aumentada con una segunda lente.
2.1.1.4 LAS OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS DE ROBERT HOOKE
Es posible que ni Zacharias Janssen ni su padre Hans Martens fueran conscientes
del potencial científico del microscopio. Uno de los primeros científicos en utilizar
el microscopio con fines científicos fue Robert Hooke, quien en 1665 publicó una
de sus obras más importantes titulada Micrographia.
BIOLOGÍA
El libro Micrographia presentó ilustraciones de las observaciones realizadas por
Robert Hooke mediante un microscopio compuesto, incluyendo insectos, plantas,
etc. que por primera vez se pudieron ver a gran escala. Una de las aportaciones
más importantes de Robert Hooke fue introducir la palabra célula para describir
las estructuras que observó en una muestra de corcho. 55
Algunas de las ilustraciones incluidas en Micrographia alcanzaban un aumento de
hasta 50x. También es importante destacar que Hooke introdujo la iluminación de
las muestras mediante una vela. Esto permitió observar las muestras con mejor
claridad y es equivalente al sistema utilizado actualmente mediante un foco y un
condensador de luz.
2.1.1.5 EL MICROSCOPIO DE ANTONIE VAN LEEUWENHOEK
Antonie Van Leeuwenhoek (1632-1723) hizo un paso importante en el campo de
la microscopía al descubrir una nueva técnica de fabricación de lentes que le
permitió alcanzar aumentos de hasta 200x.
Antonie van Leeuwenhoek trabajaba inicialmente como comerciante de telas. Su
interés por la microscopía empezó con el objetivo de fabricar mejores lentes para
analizar la calidad de las telas con las que comerciaba.
Los microscopios construidos por Antonie van Leeuwenhoek eran microscopios
simples, es decir, de una sola lente. Su avanzada técnica de fabricación le
permitía obtener lentes de gran aumento a la vez que evitaba las aberraciones
de la luz que tenían todos los microscopios compuestos del momento. Esto lo
permitió observar el mundo a un nivel de aumento inalcanzado hasta el
momento.
Antonie van Leeuwenhoek mantuvo en secreto sus técnicas de fabricación de
lentes, pero no sus descubrimientos. Durante años publicó los resultados de sus
observaciones que incluyeron todo tipo de fenómenos microscópicos. Algunas de
las observaciones más importantes que documentó incluyen las fibras musculares,
distintos tipos de bacterias y los glóbulos rojos de la sangre. Su contribución a la
ciencia hizo que todavía hoy se le conozca como el padre de la microbiología.
BIOLOGÍA
2.1.1.6 EL DESARROLLO MODERNO DEL MICROSCOPIO
A medida que el microscopio fue ganando popularidad, el número de empresas
dedicadas a la fabricación de microscopios fue aumentando. La mayoría de ellas
estaban en un principio establecidas en Inglaterra y Alemania, fue allí donde se
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produjeron las innovaciones más importantes en el campo de los microscopios
durante los siglos XVIII y XIX.
En 1776 el británico Jeremiah Sisson construyó el primer revólver para microscopios
que permitía cambiar el objetivo con el que se observaba la muestra. Este
elemento fue introducido en seguida por los fabricantes más importantes de
microscopios. Entre ellos destacaron la empresa Leitz, fundada por el empresario
Ernst Leitz, que acabaría dando lugar a la empresa hoy en día llamada Leica y
que también es conocida por sus cámaras fotográficas. Una de las innovaciones
más importantes de Leica fue construir un microscopio binocular en 1913 que
igualaba en términos de calidad de imagen los microscopios monoculares del
momento.
La otra gran empresa fabricante de microscopios, también en Alemania, es
conocida como Carl Zeiss AG y fue fundada en 1846 por el óptico Carl Zeiss. La
empresa Carl Zeiss fue capaz de revolucionar el campo de la microscopía gracias
a los avances de uno de sus investigadores, el físico Ernst Abbe. Ernst Abbe sentó
las bases para la teoría de la óptica moderna. Esto permitió sistematizar la
construcción de microscopios que hasta el momento habían sido siempre
construidos mediante ensayo y error. La teoría de Abbe permitió también mejorar
la calidad de los objetivos de inmersión.
Otro factor clave de esta época fue la invención de nuevos tipos de vidrio por
parte de Otto Schott. Estos nuevos vidrios permitieron fabricar lentes para llevar a
la práctica algunos de los conceptos teóricos desarrollados por Ernst Abbe. En
1884, Otto Schott junto con Carl Zeiss, Rodrich Zeiss y Ernst Abbe fundaron la
empresa Schott AG para producir lentes de alta calidad que sirvieron para
mejorar los microscopios de Carl Zeiss.
El desarrollo durante el siglo XX se centró en nuevas técnicas de microscopía
basadas en iluminar la muestra con otras técnicas en lugar de con luz visible.
2.1.1.7 NUEVAS FORMAS DE MICROSCOPÍA
Uno de los descubrimientos más importantes de Ernst Abbe fue demostrar que la
resolución del microscopio óptico es inversamente proporcional a la longitud de
onda de la luz, es decir, a menor longitud de onda, mayor poder de resolución.
Gracias a este descubrimiento Ernst Abbe pudo calcular que la mínima distancia
que puede distinguirse en un microscopio óptico es aproximadamente 0.25
micrómetros.
BIOLOGÍA
Por este motivo si quiere construirse un microscopio capaz de distinguir distancias
menores a 0.25 micrómetros es necesario iluminar la muestra con señales de baja
longitud de onda (esto incluye rayos UV, rayos X e incluso electrones).
En 1904 la empresa Carl Zeiss empezó a comercializar el primer microscopio de
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rayos ultravioleta capaz de doblar la resolución de los microscopios ópticos.
El interés por el microscopio de rayos X empezó después de la segunda guerra
mundial. No fue hasta 1951 que los físicos Ellis Coslett y William Nixon pudieron
construir un microscopio de este tipo que ofrecía mejor resolución que el
microscopio óptico.
Sin embargo, el mejor avance en el campo de la microscopía durante el siglo XX
fue el microscopio electrónico. En este microscopio la muestra es iluminada con
un haz de electrones en lugar de con luz visible. El primer prototipo de
microscopio electrónico fue construido en 1931 por el físico Ernst Ruska y el
ingeniero eléctrico Max Knoll. Dos años más tarde fueron capaces de construir el
primer microscopio electrónico que superaba en resolución al microscopio
óptico. Dado que la longitud de onda de un electrón puede llegar a ser 100 000
más pequeña que la de la luz, el microscopio electrónico es capaz de alcanzar
una resolución increíblemente superior a la del microscopio óptico.
2.1.2 MICROSCOPIO ÓPTICO Y ELECTRÓNICO
2.1.2.1 MICROSCOPIO ÓPTICO
El microscopio es un instrumento que permite observar objetos no perceptibles a
simple vista. Esto se logra mediante un sistema óptico compuesto por lentes, que,
al ser atravesadas por la imagen del objeto, la amplifican. El término, surge en el
siglo XVII y deriva de las palabras griegas mikrós (pequeño) y skopéoo (observar).
Según el número y la posición de las lentes se distinguen dos tipos de
microscopios:
➢ Microscopio simple: comúnmente llamado lupa. Está constituido por una
lente, o un sistema de lentes que actúan como si fuera una lente simple.
➢ Microscopio compuesto: está constituido por la combinación de dos
sistemas de lentes convergentes: uno, próximo al ojo del observador, el
ocular, y otro próximo al objeto, denominado objetivo. Se distinguen las
siguientes partes.
Sistema mecánico
Dentro del sistema mecánico se incluyen todos los elementos estructurales que
dan estabilidad al microscopio y mantienen los elementos ópticos correctamente
alineados.
BIOLOGÍA
➢ Base o pie: Es la pieza que se encuentra en la parte inferior del microscopio
y sobre la cual se montan el resto de los elementos. Acostumbra a ser la
parte más pesante para proporcionar suficiente equilibrio y estabilidad al
microscopio. Es habitual que incluya algunos topes de goma para evitar
que el microscopio se deslice sobre la superficie donde se encuentra. 58
➢ Brazo: El brazo constituye el esqueleto del microscopio. Es la pieza
intermedia del microscopio que conecta todas sus partes. Principalmente
conecta la superficie donde se coloca la muestra, con el ocular por donde
ésta se puede observar. Tanto las lentes del objetivo como del ocular se
encuentran también conectadas al brazo del microscopio.
➢ Platina: Esta es la superficie donde se coloca la muestra que se quiere
observar. Su posición vertical con respecto a las lentes del objetivo se
puede regular mediante dos tornillos para generar una imagen enfocada.
La platina tiene un agujero en el centro a través del cual se ilumina la
muestra. Generalmente hay dos pinzas unidas a la platina que permiten
mantener la muestra en posición fija.
➢ Pinzas: Las pinzas tienen la función de mantener fija la preparación una vez
esta se ha colocado sobre la platina.
➢ Tornillo macrométrico: Este tornillo permite ajustar la posición vertical de la
muestra respecto el objetivo de forma rápida. Se utiliza para obtener un
primer enfoque que es ajustado posteriormente mediante el tornillo
micrométrico
➢ Tornillo micrométrico: El tornillo micrométrico se utiliza para conseguir un
enfoque más preciso de la muestra. Mediante este tornillo se ajusta de
forma lenta y con gran precisión el desplazamiento vertical de la platina.
➢ Revólver: El revólver es una pieza giratoria donde se montan los objetivos.
Cada objetivo tiene proporciona un aumento distinto, el revólver permite
seleccionar el más adecuado a cada aplicación. Habitualmente el
revólver permite escoger entre tres o cuatro objetivos distintos.
➢ Tubo: El tubo es una pieza estructural unida al brazo del telescopio o
microscopio que conecta el ocular con los objetivos. Es un elemento
esencial para mantener una correcta alineación entre los elementos
ópticos.
Sistema óptico
El sistema óptico incluye todos los elementos necesarios para generar y desviar la
luz en las direcciones necesarias y así acabar generando una imagen
aumentada de la muestra.
➢ Foco o fuente de luz: Este es un elemento esencial que genera un haz de
luz dirigido hacia la muestra. En algunos casos el haz de luz es primero
dirigido hacia un espejo que a su vez lo desvía hacia la muestra. La
posición del foco en el microscopio depende de si se trata de un
microscopio de luz transmitida o de luz reflejada.
BIOLOGÍA
➢ Condensador: El condensador es el elemento encargado de concentrar
los rayos de luz provenientes del foco a la muestra. En general, los rayos de
luz provenientes del foco son divergentes. El condensador consiste en un
seguido de lentes que cambian la dirección de estos rayos de modo que
pasen a ser paralelos o incluso convergentes. 59
➢ Diafragma: El diafragma es una pieza que permite regular la cantidad de
luz incidente a la muestra. Normalmente se encuentra situado justo debajo
la platina. Regulando la luz incidente es posible variar el contraste con el
que se observa la muestra. El punto óptimo del diafragma depende del
tipo de muestra observada y de su transparencia.
➢ Objetivo: El objetivo es el conjunto de lentes que se encuentran más cerca
de la muestra y que producen la primera etapa de aumento. El objetivo
suele tener una distancia focal muy corta. En los microscopios modernos
distintos objetivos están montados en el revólver. Este permite seleccionar
el objetivo adecuado para el aumento deseado. El aumento del objetivo
junto con su apertura numérica suele estar escrito en su parte lateral.
➢ Ocular: Este es el elemento óptico que proporciona la segunda etapa de
ampliación de imagen. El ocular amplía la imagen que ha sido
previamente aumentada mediante el objetivo. En general, el aumento
aportado por el ocular es inferior al del objetivo. Es a través del ocular que
el usuario observa la muestra. En función del número de oculares se puede
distinguir entre microscopios monoculares, binoculares e incluso
trinoculares. La combinación de objetivo y ocular determina el aumento
total del microscopio.
➢ Prisma óptico: Algunos microscopios incluyen también prismas en su interior
para corregir la dirección de la luz. Por ejemplo, esto es imprescindible en el
caso de los microscopios binoculares, donde un prisma divide el haz de luz
proveniente del objetivo para dirigirlo hacia dos oculares distintos.
BIOLOGÍA
2.1.2.2 MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
El microscopio electrónico es un instrumento de gran utilidad en la investigación
científica gracias a su gran poder de aumento. Mediante este tipo de
microscopio es posible aumentar imágenes de muestras hasta niveles muy
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superiores a los del microscopio óptico.
El principio de funcionamiento de un microscopio electrónico se basa en utilizar
electrones en lugar de luz visible. La longitud de onda con la que se mueve un
electrón es inversamente proporcional a su velocidad. Esto significa que si los
electrones son acelerados a altas velocidades pueden obtenerse longitudes de
onda muy cortas.
Los microscopios ópticos pueden clasificarse entre microscopios de luz transmitida
y microscopios de luz reflejada. De un modo similar, dependiendo de la técnica
utilizada en los microscopios electrónicos, puede distinguirse entre microscopios
electrónicos de transmisión y microscopios electrónicos de barrido.
La ventaja principal de este tipo de microscopio es que puede obtenerse un nivel
de aumento muy superior al del resto de microscopios. Sin embargo, es necesario
preparar la muestra y colocarla en una cámara de vacío de modo que no es
posible observar muestras biológicas vivas.
2.1.2.2.1 PARTES DEL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
Las partes principales de un microscopio electrónico incluyen aquellos elementos
utilizados para generar electrones y dirigirlos hacia la muestra. Esto incluye:
➢ FUENTE DE ELECTRONES
Es equivalente a la fuente de luz en un microscopio óptico. En este caso es
necesario disponer de un emisor de electrones. En general se utiliza un filamento
de tungsteno. Este filamento es calentado de modo que la energía de sus átomos
y electrones aumenta. A partir de un cierto nivel energético los electrones poseen
suficiente energía para escapar de sus átomos. Estos electrones libres son a
continuación dirigidos hacia la muestra.
➢ LENTES ELECTROMAGNÉTICAS
Los microscopios ópticos utilizan lentes convergentes y divergentes para desviar
los rayos de luz y aumentar así la imagen de la muestra. Este mismo procedimiento
no puede ser aplicado para desviar la trayectoria de los electrones. En lugar de
utilizar lentes de vidrio, los microscopios electrónicos utilizan lentes
electromagnéticas. Estas lentes generan campos eléctricos y magnéticos de
modo que su interacción con los electrones hace que sus trayectorias diverjan o
converjan en un punto.
BIOLOGÍA
➢ CÁMARA DE VACÍO
El procedimiento expuesto anteriormente debe llevarse a cabo dentro de una
cámara de vacío. De lo contrario, los electrones interactuarían con las moléculas
del aire y no sería posible determinar sus trayectorias adecuadamente. La
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muestra que se observa debe colocarse también dentro de la cámara de vacío.
Este es uno de los motivos por el cual no es posible observar muestras vivas con un
microscopio electrónico.
➢ DETECTOR (PANTALLA FLUORESCENTE)
Una vez los electrones han impactado contra la muestra es necesario medir algún
tipo de información para poder reconstruir la imagen de la muestra. Una opción
consiste en utilizar una pantalla fluorescente. Esta pantalla reacciona de modo
distinto según cual sea el número de electrones que impactan en ella. De este
modo es posible detectar las zonas donde impactan más o menos electrones y
deducir así la imagen de la muestra.
A continuación, la información capturada por la pantalla fluorescente es
transmitida a un ordenador que puede asignar colores artificiales a la imagen
obtenida. En los microscopios ópticos estos componentes no son necesarios
porque la luz proveniente de la muestra es directamente observada con el ojo
humano. Dado que nuestros ojos no están preparados para detectar electrones
debemos incorporar este elemento detector en un microscopio electrónico.
BIOLOGÍA
