DR. BILO CALZIN.
INTEGRANTES:
LUIS BUSTAMANTE MURILLO
LIDIA CARLOS ANCCA
Es una técnica utilizada para separar, identificar
y cuantificar los componentes de una mezcla.
Basándose en diferentes tipos de interacciones
químicas las interacciones entre las sustancias
analizadas y columna cromatografica (FM y FE).
Es un tipo de cromatografía en columna utilizada
frecuentemente en bioquímica y química analítica.
Compuestos iónicos:
como aminoácidos, sales
inorgánicas, ácidos
orgánicos, etc.
Compuestos de alto peso
molecular: como
polímeros, hidrocarburos
polinucleares, productos
naturales, etc.
Compuestos no volátiles:
Como vitaminas, pesticidas,
esteroides plastificantes,
drogas y una parte grande de
otros productos
farmacéuticos
* ANALITO : Susbstancia componente de una mezcla.
* CROMATOGRAFO : Instrumento empleado para realizar una separación
cromatografíca.
* CROMATOGRAMA : Representación grafica de la composición de los solutos que
salen de una columna cromatografíca en función al tiempo.
* DISOLVENTE: A veces se denomina a la fase estacionaria liquida, en cromatografia
de reparto.
* ELUYENTE: Corriente liquida.
* ELUCION : proceso por el cual los solutos abandonan las columnas
* FASE ESTACIONARIA (FE) : Columna cromatografica que es silica.
* FASE MOVIL (FM) : Es un liquido o mezcla de líquidos que empuja a los solutos
atravesando la FE.
* MUESTRA: Es un determinado numero de componentes cuya separación alcanza
en FE
* DETECTOR : Aparato que registra una propiedad físico químico del material eluido,
detectores CL: índice de refracción; espectrofotometría UV-Vis.
* SOLUBILIDAD: es una sustancia que esta determinado por el equilibrio de fuerzas
intermoleculares entre el solvente y el soluto.
* SOLUTO : designa a los componentes de una muestra en cromatografía de reparto
CLASIFICACION DE LA CROMATOGRAFIA LIQUIDA:
realizada en base a la naturaleza de la fase estacionaria, ya que es ésta la
que impone fundamentalmente el mecanismo de separación; de este
modo, se pueden enumerar 4 tipos de técnicas:
Nombre de la Fase Fase móvil Desplazamien Mecanismo de
técnica estacionaria to fase móvil separación
C. Liquida de Solidos Liquido Presión • Adsorción
alta Eficiencia diversos y • Reparto
(HPLC) líquidos • Intercambi
absorbidos en o iónico
soporte solido • Exclusión
molecular
(Solido - Liquido).
* La fase estacionaria es un adsorbente y la separación se basa
en repetidas etapas de adsorción-desorción. se establece una
competencia entre las moléculas del soluto y las moléculas de
la fase móvil por ocupar los sitios activos de la superficie de la
sílice (grupos silanol).
*La separación se basa fundamentalmente en las
diferencias aquellos que tienen la capacidad de
forman puentes de hidrogeno (solubilidad) serán
retenidos en la fase estacionaria liquida
*En este caso, la porosidad en la superficie de la
sílice retiene la fase estacionaria líquida
*cromatografía en fase inversa es la que tiene más
aplicación ya que muchas muestras de interés
actual tienen naturaleza hidrofílica.
* Fundamento de separación: intercambio
reversible de iones entre el analito y la FE
funcionalizada. Intervienen fuerzas electrostáticas.
* Fase estacionaria: resinas y geles de intercambio
iónico, intercambiadores iónicos inorgánicos
* Fase móvil: ácidos y bases inorgánicos y orgánicos
(KOH, NaOH, HClO4, HCl, ácidos tartárico, dipiconílico,
metanosulfónico, etc), sales (carbonato de sodio, perclorato
de sodio, etc.), con o sin mezcla de solventes orgánicos
(metanol, acetonitrilo, etc.)
* Detector: conductímetro
Fase estacionaria puede ser:
Resina con grupos sulfónicos (cargas negativas)
Resina con aminas cuaternarias (cargas positivas)
cationes
FE: resina con carga positiva
Intercambiadora de aniones
aniones
Fundamento de separación:
separación en base a forma y tamaño del analito
* Fase estacionaria: geles hidrofílicos (Sephadex), geles de
poliacrilamida (biogeles), geles rígidos de sílica son un material
poroso de tamaño de poro controlado, que permite la entrada
de ciertas moléculas de manera selectiva, dejando fuera otras de
mayor tamaño.
El mecanismo de retención en los dos primeros casos es similar,
variando únicamente el
división cromatografía atendiendo a polaridad de la fase
estacionaria:
Fase Normal Fase Inversa
P - Hexano * Agua - P
O
O Benceno L
L A
A Cloroformo R
I
R D
I Acetato de etilo A
D D
A Metanol * Metanol
D * Acetonitrilo +
+ Agua
PLANEAMIENTO A SEGUIR:
* Tubos de acero inoxidable.
* Rectas (10 – 30 cm de longitud) y 4 – 10 mm d.i.
* tamaño partículas de relleno: 5 – 10 micrometros.
* Columnas termostatizadas: en general se trabaja a
T ambiente. La T constante mejora el
cromatograma
* Generación de altas presiones (1000 – 6000 psi)
* Flujo de fase móvil libre de pulsaciones.
* Caudales 0.1 – 10 mL / min
* Componentes resistentes a la corrosión (su
interior es de acero inoxidable o de teflón).
* químicamente inertes, no reaccionar con la fase
móvil ni con los solutos
(0.5 PPM)
* Basados en la medida de una propiedad del
eluyente (índice de refracción, constante
dieléctrica, densidad)
* Basados en la medida de una propiedad del
soluto (absorbancia, fluorescencia, corriente
limite)
1.- El compuesto pasa por la
columna cromatografía a
través de la fase estacionaria
mediante el bombeo de
liquido (fase móvil) a alta
presión a través de la
columna.
2.- La muestra a analizar es
introducida en pequeñas
cantidades y sus componentes
se retrasan diferencialmente
dependiendo de las
interacciones químicas y
físicas con la fase estacionaria
a medida que adelantan por la
columna.
(El grado de retención de los
componentes de la muestra
depende de la naturaleza del
compuesto, de la composición
de la fase estacionaria y de la
fase móvil)
3.-despues los componentes
pasan por un detector que
genera una señal
(dependiendo de la
concentración y del tipo de
compuesto).
4.- se utilizara una bomba
para impulsar a la fase móvil
con velocidad y presión
constante.
5.- Luego llegan a las
columnas en donde hay unos
detectores que no hacen mas
que indicar el momento de
aparición de los distintos
componentes que constituyen
la muestra
Trabaja con particulas muy pequeñas (< 10
micrometros).
Picos angostos (alta eficiencia).
rapida
separa compuestos no volatiles o termicamente
inestables.
presiones de 1000 – 6000 psi (pounds square
inch = libras por pulgada cuadrada, 1 atmosf =
psi 14.7).
*
