UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú , DECANA DE AMÉ RICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
E.P. DE TOXICOLOGÍA
Departamento Académico de Farmacología, Bromatología y Toxicología

TOXICOMETRÍA
PRÁCTIC CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA
A N° 4B TECNICA DE BAMBACH Y BURKEY

AÑO ACADÉMICO: 2020-II.

DEPARTAMENTO ACADÉMICO:
Departamento de Farmacología, Bromatología y
Toxicología.
GRUPO: 1
INTEGRANTES:
Aguinaga Gutierrez Romina 17040117
Uipan Gutierrez Felix 16040127
Rayme Gutierrez Robert 17040126

DOCENTE: Dr. Alfonso Apesteguía Infantes

Fecha: 25/11/ 20
Turno: Jueves 10 am a 2pm
[CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA TECNICA DE
BAMBACH Y BURKEY]

Marco Teórico
En el Perú, desde antes de los años cincuenta del siglo pasado, la preocupación por monitorear
la salud del trabajador expuesto a plomo con indicadores biológicos de exposición ha sido
constante. Entonces el plomo en sangre ya era útil, aún cuando su método analítico (Ditizona)
no era suficientemente fidedigno. Por entonces, el diagnóstico se complementaba con
indicadores que hoy están en desuso, como reticulocitosis, volumen globular de hematíes,
hemoglobina corpuscular media, punteado basófilo de hematíes y otros; de ellos aún usamos
con éxito la hemoglobina (Hb). Hoy existen otros IBE de uso más o menos común en la
monitorización del trabajador expuesto. Uno de los más importantes continúa siendo el Pb en
sangre analizado ahora por absorción atómica, pues nos da una visión bastante directa de
exposición reciente y de carga corporal. El antiguo BEI hemoglobina y el nuevo ZPP nos
informan del daño bioquímico producido por la exposición. Consideraciones económicas y la
disponibilidad de laboratorios calificados algunas veces entorpecen la indicación de estos BEIs;
sin embargo esas preocupaciones nunca deben ser antepuestas a la salud del trabajador.

Parte Experimental
Objetivos de la Práctica

 Adquirir destreza para extraer y cuantificar el plomo teniendo en cuenta las

medidas de bioseguridad.
 Cuantificar espectrofotométricamente mediante el método de Bambach y
Burkey la cantidad de plomo presente en una muestra de agua del río Ucayali.

Reactivos, materiales y equipos

1. Reactivos

 Rojo fenol
 Citrato NH4
 NH4OH ph (7-8)
 CNK 10%
 Hidroxilamina 20%
 Ditizona extractora
 Sol. Buffer pH 3.4
 Ditizona estándar

 NH4+ cianurada
2. Materiales

o Pipetas de 1,5 y 10 mL
[CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA TECNICA DE
BAMBACH Y BURKEY]

o Peras de separación de 100 mL

3. Equipos

o Espectrofotómetro UV Visible

4. NOMBRE DEL ENSAYO: TECNICA DE BAMBACH& BURKEY

FUNDAMENTO
Este método se basa en la reacción del Pb (II) con la ditizona (difeniltiocarbazona) para
formar un complejo de ditizonato plúmbico de color rojo, el cual se extrae con
cloroformo, en un medio ácido (pH 7-8), cuya intensidad se cuantifica
colorimétricamente a una longitud de onda de 520 nm.

TÉCNICA OPERATORIA:
Primera extracción:

- Llevar la muestra a la pera de bromo (20 o 25mL), agregar III gotas de rojo de
fenol, 15mL citrato de amonio 40%, 0.9 mL NH 4OH concentrado, 5mL KCN 10%,
[CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA TECNICA DE
BAMBACH Y BURKEY]

1mL hidroxilamina clorhidrato 20% y finalmente 5 mL de ditizona extractora.

Agitar y extraer la parte clorofórmica alcalina

Segunda extracción:

 Al extracto clorofórmico adicionar 50mL de sol. Buffer (pH 3.4)

 Agitar y extraer el extracto acuoso ácido.

Tercera extracción ( Purificacion):

- Al extracto acuoso ácida, adicionar 5mL de ditizona estándar, 7ml de sol.

Cianurada de amonio. Agitar vigorosamente.
- Leer a 520 nm(espectrofotómetro UV- Visible)
[CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA TECNICA DE
BAMBACH Y BURKEY]
[CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA TECNICA DE
BAMBACH Y BURKEY]

Mecanismo de reacción y ecuación química balanceada

La disolución de ditizona en tetracloruro de carbono o cloroformo cambia su color
verde por el rojo cuando se agita con otra disolución neutra o alcalina que contenga
Pb2+. Por lo que hay formación de un complejo coloreado de Ditizonato de Plomo, en
medio básico y se cuantifica por espectrofotometría a 520 nm.

Se origina un quelato de acuerdo con la reacción:

Esta forma de complejo, donde el Pb se enlaza con el azufre y al N, la presentan con

ditizona los cationes que tienen alta afinidad por el sulfuro.

Numerosos cationes, especialmente Ag+, Cu+2, Hg+2, Cd+2 y Zn+2, reaccionan con la
ditizona, pero su inestabilidad se evita con la adición de KCN, con lo que la reacción
resulta casi específica para el plomo.

REACCIÓN DE EXTRACCIÓN:
[CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA TECNICA DE
BAMBACH Y BURKEY]

Precauciones:

 A la muestra problema se añade Citrato de amonio para evitar la precipitación

de hidróxidos metálicos y la disolución de fosfatos.
 Se emplea el hidróxido de amonio, con la finalidad de crear el medio básico
para la reacción del indicador rojo de fenol.
 Se añaden iones CN- para evitar la formación de complejos coloreados de Bi,
Sn+2 y Tl+ con la ditizona.
 Se emplea el clorhidrato de hidroxilamina para evitar la oxidación de la ditizona
.

Resultados

Stándard Ppm Absorbancia

1 2 0.03
2 3 0.07
3 4 0.11
4 5 0. 15
[CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA TECNICA DE
BAMBACH Y BURKEY]

Cálculos:

Reemplazando en: Y= 0.04x - 0.05

Calcule Ud. el resultado que la concentración para 0.737 de absorbancia.

5 0.015
X = 24.56 Ppm
X 0.737

5. Discusión:

En el Perú, de acuerdo a la “Guía práctica clínica para el manejo de pacientes con

intoxicación por plomo” estable los siguientes valores como aceptados para plomo en
sangre: menor de 10 µg/dl en niños y gestantes, hasta 20 µg/dl en adultos no
expuestos ocupacionalmente y hasta 40 µg/dl en adultos expuestos
ocupacionalmente.1 La concentración hallada por espectrofotometría de la muestra
fue de 24.56 Ppm, no se puede saber con exactitud dentro de que rango permisible
está porque no se sabe la procedencia de la muestra y existe una gran margen entre
rangos.

El método de Banbach Burkey se basa en la extracción de plomo en medio alcalino con

ditizona. La ditizona a pH adecuado, forma compuestos  coloreados  con alrededor de
21 elementos metálicos. Esto lo hace un reactivo poco especifico; pero usando agentes
enmascarantes se pueden obtener resultados más precisos. Así mismo, cuando la
ditizona es disuelta en un líquido orgánico es agitada con una solución acuosa de un
metal pesado, se forma un complejo deditizonato metálico el que, dependiendo del
metal, exhibe diferentes colores (violeta, rojo, naranja o amarillo) y, generalmente, son
solubles en solventes orgánicos.2 En nuestra práctica se formó el ditizonato plomo.

Se utiliza CNK porque el CN- forma complejos con metales. 3 En el extracto clorofórmico
acido al mezclarse con una solución acuosa buffer a pH 3.4, el bismuto permanece
como ditizonato en la fase clorofórmica, mientras que el plomo se encuentra en la fase
acuosa y puede separarse y ser libre de bismuto. 4 Es por ello que en el último paso se
utilizó el extracto acuoso. 

6. Conclusiones:

 Se aprendió la manera adecuada para determinar plomo.

 El método Bambach y burkey es uno de los más adecuados para determinar
plomo en muestras de agua del río Ucayalí
[CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA TECNICA DE
BAMBACH Y BURKEY]

7. Cuestionario:

1.- Explique la función de cada reactivo en la técnica.

Reactivo Función

Citrato de amonio 40%

Se añade CNK para evitar que se formen
algunos complejos y no pase otros metales
KCN 10%

Cuando la ditizona es disuelta en un líquido

orgánico es agitada con una solución
acuosa de un metal pesado, se forma un
complejo deditizonato metálico el que,
Ditizona 16 mg% en CHCl3 dependiendo del metal, exhibe diferentes
colores (violeta, rojo, naranja o amarillo) y,
generalmente, son solubles en solventes
orgánicos.

Indicador para poder observar la

Rojo de fenol reaccion del medio basico causado
por el Hidroxido de amonio.

Se emplea Hidroxilamina que es un agente

Hidroxilamina clorhidrato 20% reductor y actuara en la Ditizona para evitar
la oxidación de esta.

Se emplea el NH4OH con la finalidad de

Hidróxido de amonio 20% crear el medio básico para la reacción del
indicador Rojo de Fenol.

2.- Valores normales y tóxicos de plomo

[CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA TECNICA DE
BAMBACH Y BURKEY]

Valores Normales de plomo

Se cree que las cantidades pequeñas de plomo en los adultos no son dañinas. Sin embargo,
incluso los niveles bajos de plomo pueden ser peligrosos para los bebés y los niños. Pueden
causar intoxicación por plomo que puede llevar a problemas de desarrollo mental.

Adultos:

 Menos de 10 microgramos por decilitro (µg/dL) o 0.48 micromoles por litro (µmol/L)
de plomo en la sangre.

Niños:

 Menos de 5 µg/dL o 0.24 µmol/L de plomo en la sangre.

 Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes
laboratorios. Hable con su proveedor de atención médica acerca del significado de los
resultados específicos de su examen.

Valores tóxicos de plomo

o Según la Organización Mundial de la Salud

El plomo es un metal pesado que no juega ningún papel en la fisiología
humana, por lo que su nivel ideal en sangre debería ser cero. La Organización
Mundial de la Salud define como intoxicación por plomo los valores de
plombemia de más de 15 μg/dl .

o Según el Center of Disease Control de los Estados Unidos

Para el Center of Disease Control de los Estados Unidos, cuando los valores son
mayores o iguales a 10 μg/dl se define como intoxicacion por plomo. 5

3.- Indique Ud. la tecnica espectrofotometrica de absorcion atomica para el plomo en

agua y plomo en sangre.

La información acerca de la concentración de plomo en muestras ambientales y biológicas es

de gran interés clínico, ambiental y ecológico. Se sabe desde hace mucho tiempo que este
metal es un elemento seriamente tóxico para la salud de los organismos vivientes, además de
que es un elemento al cual no se le ha detectado ninguna función vital, y sus efectos tóxicos
han ido en ascenso en los últimos años debido a su extenso uso en baterías, pinturas, gasolina
con plomo y otros productos derivados. Esto ha tenido un profundo impacto ambiental,
causando daños en el ecosistema y en humanos principalmente por ingestión en alimentos e
inhalación. La determinación de plomo en muestras biológicas como sangre y orina constituye
un importante indicador del grado de exposición al metal
[CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA TECNICA DE
BAMBACH Y BURKEY]

Por otra parte, es necesario también mejorar la metodología analítica y actualizarla en relación
con modificadores de matriz y programas cortos de temperatura (tiempos cortos de
tratamiento térmico), en lugar del empleo de programas largos de temperatura donde sólo la
temperatura de pirólisis es de 30 segundos o más (13). Por estas razones se consideró
conveniente hacer este estudio sistemático para la determinación de plomo en sangre por
ETAAS, que sumado a la optimización de la técnica, empleando un anticoagulante mejor para
el caso de la sangre, la digestión, la dilución y un surfactante mejor para disminuir la tensión
superficial, así como un modificador permanente y un programa de temperatura corto, ha
permitido desarrollar un método más actual y exitoso para la determinación de plomo en
sangre y orina por ETAAS en individuos expuestos o no al metal.

Para aplicar la TS-FF-AAS se empleó un espectrofotómetro de absorción atómica modelo GBC

902 y un espectrofotómetro de absorción atómica Perkin-Elmer "Aanalyst 300". Las
mediciones se realizaron conforme a las condiciones estándar recomendadas por el manual
del espectrofotómetro, es decir, longitudes de onda de 228,8 nm para Cd, 283,3 nm para Pb y
213,9 nm para Zn. En todas las mediciones se empleó como corrector de fondo una lámpara de
deuterio.

La implementación y arreglos experimentales de la TS-FF-AAS ha sido ampliamente discutida.

En este trabajo para emplear la TS-FF-AAS se procedió a inyectar y transportar por medio de
una bomba peristáltica a un flujo de 0,5 mL/min un volumen de muestra de 50 µL que pasa a
través de un tubo capilar cerámico y que confluye finalmente dentro de un tubo metálico, el
cuál actúa como fuente de atomización. El capilar posee un diámetro externo de 3,2 mm y dos
orificios de 0,5 mm de diámetro interno cada uno. El sistema de atomización consiste en un
tubo metálico (tubo "Inconel" ASTM B 167, con 74% m/m de Ni, 16% m/m de Cr, 0,15% m/m
de Al, 0,23% m/m de Ti y 0,050% m/m de Co) de 10 cm de largo y 10 mm de diámetro interno
dispuesto sobre la llama del AAS. En todas las mediciones se empleó una válvula de inyección
"Knauer" Modelo 2344 provisto con un bucle de volumen de muestra de 50 µL.

Para comparar los resultados obtenidos con la TS-FF-AAS y la nebulización neumática, se

realizó en éste último caso una simple conexión entre la válvula de inyección "Knauer" y el
nebulizador neumático para proceder a inyectar la muestra de forma similar a la TS-FF-AAS.

En el tratamiento de las señales analíticas el equipo de AAS fue conectado a un computador a

través de una interfase y utilizado un software de adquisición y procesamiento de datos que
permite realizar el registro de datos e integrar señales transientes tanto en área como en
altura. Para el análisis de contraste de significación entre los resultados de las determinaciones
de Cd, Pb y Zn obtenidos por TS-FF-AAS y los certificados se empleó el software de estadística
"Statistica® 5.1 '98 Edition".6

4.- Señale cual es el límite de detección y cuantificación de la técnica de Bambach y

Burkey para la determinación del plomo en agua de rio.
[CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA TECNICA DE
BAMBACH Y BURKEY]

Según el ministerio del ambiente en el Perú el limite máximo de Plomo en ríos es de

0,05 y depende de la sensibilidad del espectrofotómetro para saber el limite de
cuantificación de la técnica Bambach y Burkey.7

5.- Señale Ud. que celda utilizaria en la técnica de Bambach y Burkey para la
determinación del plomo en agua de rio.

Usaría una celda electrolítica , porque es la más adecuada para la técnica y

determinación del la muestra.8

6.- Indique ud. una prueba ditizonometrica que figura en alguna farmacopea reciente
o vigente.

Para la determinación de zinc o cobre en sulfato férrico.

7.- Indique Ud. para que realizamos la lectura del blanco de reactivo (en la muestra
problema y estándares) y detállelo, correspondiente a la técnica de Bambach y
Burkey para la determinación del plomo en agua de rio

Con el objetivo de tener un control para poder comparar los resultados con la muestra
contaminada, reducir interferencias y errores en la lectura así como del equipo. Con el
blanco solvente, se calibra y nos da un resultado las confiable.

8.- Señale Ud. el procedimiento del uso de espectrofotómetro UV-Visible desde que
se enciende, se hace la lectura de la absorbancia y se apaga.

Primero, encender el equipo, esperar a que calibre de manera automática. Luego,

realizar la lectura del blanco, seguido de las muestras y realizar un barrido. Finalmente,
lavar las cubetas, cerrar el equipos y apagar.

9.- Señale como se realiza la calibración dentro del laboratorio, del

espectrofotómetro UV-Visible.

Se coloca el blanco, que normalmente es el solvente de la muestra problema, dentro

una cubeta del equipo y se mide la absorbancia. Finalmente se coloca la opción
calibrar.

10.- Indique las pruebas toxicologicas que se pueden realizar en el

espectrofotómetro UV-Visible.

Todo tipo de pruebas de determinación que al reaccionar con el analito a determinar

forme un quelante solución coloreada, la cual sirve para poder medir la presencia y
concentración en la muestra problema.
[CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA TECNICA DE
BAMBACH Y BURKEY]

8. Referencia Bibliográfica:

1. Paúcar, R. Determinación de niveles de plomo en sangre en población

económicamente activa en la ciudad de Lima (Tesis de Maestría en Gestión y
Auditorías Ambientales). Universidad de Piura. Facultad de Ingeniería. Piura,
Perú. 2015.
2. Acuña Ruiz V. Determinación espectrofotométrica de plomo (II) con ditizona en
solución micelar aniónica [Internet]. Cybertesis.unmsm.edu.pe. Available from:
http://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/handle/cybertesis/3421/Acu
%F1a_rv.pdf?sequence=1
3. Arévalo Sánchez C. Control de efluentes cianurados mediante la oxidación con
Peroxido de Hidrogeno en un laboratorio de análisis de minerales [Internet].
Cybertesis.unmsm.edu.pe. 2011 Available from:
http://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/handle/cybertesis/551/Arevalo_sc.
pdf?sequence=1&isAllowed=y
4. Fuentes Zaldaña L. Elaboración de una guía de metodologías de análisis
fisicoquímicos y sensoriales para alimentos procesados según normativas
salvadoreñas [Internet]. Ri.ues.edu.sv. 2013. Available from:
http://ri.ues.edu.sv/5502/1/16103413.pdf
5. Rodríguez, Aurora; Espinal, Georgina.Niveles de plomo en sangre y factores de
riesgo asociados en niños de 2 a 10 años en el barrio villa francisca. Santo
Domingo. República Dominicana. Ciencia y Sociedad. vol. XXXIII, núm 4. 2008.
pp. 595-609.
6. Acuña Ruiz V. Determinación espectrofotométrica de plomo (II) con ditizona en
solución micelar aniónica [Internet]. Cybertesis.unmsm.edu.pe. Available from:
http://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/handle/cybertesis/3421/Acu
%F1a_rv.pdf?sequence=1

7. ECA de Agua [Internet]. Minam.gob.pe. 2020 [citado el 25 de noviembre 2020].

URL disponible en: http://www.minam.gob.pe/calidadambiental/wp-
content/uploads/sites/22/2013/10/ds_002_2008_eca_agua.pdf
8. Quero P, Zorrilla m, Morales s, Rodriguez m. DETERMINACIÓN DE LA
CONTAMINACIÓN POR METALES PESADOS EN SUELOS ALEDAÑOS A LA
EMPRESA ELECTROQUÍMICA DE SAGUA [Internet]. Scielo. 2020 [cited 26
November 2020]. Available from:
http://scielo.sld.cu/pdf/caz/v44n3/caz06317.pdf
[CUANTIFICACIÓN DE PLOMO POR LA TECNICA DE
BAMBACH Y BURKEY]