Carrera: Ingeniería Química
Materia: Análisis Instrumental
Actividad: Cuadro comparativo Cromatografía de gases y líquidos
Nombre del Alumno: Viviana Sierra Flores 19280196
Fecha de entrega: 29/06/2021
Cromatografía de gases y líquidos
Cromatografía de gases (GC) Cromatografía de líquidos (CL)
Fundamento de la Técnica de separación en la cual los componentes La cromatografía líquida (HPLC), es una técnica
técnica de la muestra se distribuyen entre dos fases de utilizada para separar los componentes de una
diferente naturaleza, como consecuencia de la mezcla. Consiste en una fase estacionaria no polar
variación de velocidad que se establece al ser (columna) y una fase móvil.
arrastrados por una fase móvil, líquida o gaseosa, La fase estacionaria es sílica que se ha tratado con
a través de una fase estacionaria, sólida o líquida. Me2SiCl. La fase móvil actúa de portador de la
muestra. La muestra en solución es inyectada en la
fase móvil. Los componentes de la solución emigran
de acuerdo a las interacciones no-covalentes de los
compuestos con la columna. Estas interacciones
químicas, determinan la separación de los
contenidos en la muestra.
Instrumentación 1) Fase móvil 1)Reservorio de solventes
analítica 2) Sistema de inyección 2)Desgasificador
3)Columna 3)Bomba
4)Detector 4)Inyector automático
5) Amplificador electrónico de señal 5)Termostato de columna
6) Registrador de señal 6)Detectores
1) Fase móvil 1) Reservorios de la fase móvil
La fase móvil en cromatografía de gases es un gas Un aparto moderno de HPLC se equipa con uno o
inerte, es decir, no interacciona con las moléculas más recipientes de vidrio, cada uno de los cuales
de analito, sólo las transporta a través de la fase contiene unos 500 mL de un disolvente.
estacionaria. Las propiedades comunes a los diversos
disolventes que se emplean son:
2) Sistemas de inyección de muestra ▪ Alta pureza (calidad HPLC)
▪ Inactividad frente a la fase estacionaria
El modo estándar, adecuado para ▪ Baja viscosidad
aproximadamente 95% de las aplicaciones de ▪ Compatibles con la muestra
las columnas empacadas (o empaquetadas), es la ▪ Compatibilidad con el sistema de detección
inyección directa. La muestra es ▪ Precio razonable
inyectada con una jeringa hipodérmica a través de
un séptum de goma (o hule) de Los recipientes a menudo se equipan con un
silicona autosellante, a un alineador de vidrio (glass sistema de desgasificación para eliminar los gases
insert) contenido en un bloque
metálico, donde es vaporizada y barrida hacia la disueltos que interfieren formando burbujas en los
columna. El bloque se calienta a una temperatura sistemas de detección. Puede consistir en un
que se fija en un valor suficientemente alto para sistema de bombeo por vacío, un sistema de
convertir prácticamente en forma instantánea la destilación, dispositivos para calentar y agitar los
muestra líquida en vapor. La cantidad de muestra disolventes o con frecuencia estos sistemas
inyectada es del orden de µL para líquidos y algo también contienen un dispositivo para la filtración
superior para gases. del polvo y de las partículas sólidas en suspensión
de los disolventes.
2) Desgasificador
3) Columnas
Métodos comunes usados para desgasificar
En cromatografía de gases se usan dos tipos
solventes en HPLC previos a su uso:
generales de columnas, las
empaquetadas, o de relleno y las tubulares
SOIFICAZIÓN. Se usa un baño de ultrasonido, los
abiertas, o capilares.
solventes en consecuencia de esto convierten gases
Parece probable que, en un futuro próximo, excepto
disueltos en burbujas diminutas que flotan a la
para ciertas aplicaciones especiales, las columnas
superficie del solvente y se eliminan.
de relleno serán sustituidas por las más eficaces y
rápidas columnas capilares.
HELIO SPARGING. En este método se hace
burbujear gas de helio de alta pureza en el depósito
Las columnas cromatográficas varían en longitud solvente. El helio desplaza los gases disueltos que
desde menos de 2 hasta 50 m, están emitió en el espacio de la cabeza del depósito
o más. Se construyen de acero inoxidable, vidrio, solvente, donde se dispersan en la atmósfera.
sílice fundida, o Teflón. A fin de
poder colocarse en el interior de un termostato, DEGASIFICACION ELECTRONICA
normalmente se configuran como EN LINEA DEL FLUJO. Es el método más nuevo
helicoides con diámetros de 10 a 30 cm. disponible para desgasificar solventes en HPLC. Se
sitúa la unidad de desgasificación entre el depósito
solvente y la entrada a la bomba de HPLC.
3) Bomba
Se utilizan tres tipos de bombas, cada una con sus
propias ventajas y desventajas: bombas recíprocas,
bombas de jeringa o de desplazamiento y bombas
neumáticas o de presión constante. Las bombas
recíprocas, que se utilizan en aproximadamente el
90% de los sistemas de HPLC comercializados,
consisten, por lo general, en una pequeña cámara en
la que el disolvente es impelido por el movimiento de
vaivén de un pistón accionado por un motor. Dos
válvulas con cierre de bola, que se abren y cierran
alternativamente, controlan el flujo del disolvente
4) Detector hacia dentro y hacia afuera de un cilindro. Las
bombas recíprocas tienen la desventaja de que
Dispositivo que examina y registra los componentes producen un flujo con pulsaciones, las cuales se han
que emergen de la coluna y producen una señal de amortiguar dado que su presencia se manifiesta
proporcional a la cantidad de materia que pasa por como ruido en la línea base en el cromatograma.
él, generando una señal eléctrica. Entre las ventajas de las bombas recíprocas se
pueden citar su pequeño volumen interno (35 a 400
mL), sus altas presiones de salida (por encima de los
500 kg/cm2), su fácil adaptación a la elución con
gradiente, y sus caudales constantes, que son
prácticamente independientes de la contrapresión de
la columna y de la viscosidad del disolvente.
Funciones de la bomba:
Proveer al sistema un flujo exacto y constante.
Proveer una fase móvil de composición exacta
Proveer la fuerza necesaria para impulsar la fase
móvil a través de la columna
Un detector ideal tiene las siguientes
características:
1. Adecuada sensibilidad. Lo que constituye una
adecuada sensibilidad no se puede
evaluar de forma cuantitativa.
En general, las sensibilidades de los detectores
actuales se encuentran en el intervalo de 10-8 a 10-
15 g de analito/s.
4) Inyector automático
2. Buena estabilidad y reproducibilidad.
Sistemas de inyección de muestra
3. Una respuesta lineal para los analitos que se En cromatografía de líquidos el método más
extienda a varios órdenes de magnitud. ampliamente utilizado para la introducción de la
muestra utiliza bucles de muestra, como el que se
4. Un intervalo de temperaturas de trabajo muestra en la Figura. Estos dispositivos están
comprendido desde la temperatura ambiente hasta normalmente integrados en el equipo cromatográfico
al menos 400ºC. y hay bucles intercambiables que permiten la
elección de tamaños de muestra desde 5 a 500 µL.
Con bucles de este tipo se puede introducir la
5. Un tiempo de respuesta corto que lo haga muestra a presiones de hasta 500 kg/cm2 con una
independiente del caudal. precisión relativa de unas décimas por ciento.
También existen válvulas de inyección de micro
6. Alta fiabilidad y manejo sencillo. Hasta el punto muestras, con bucles con volúmenes de 0,5 a 5 µL.
de estar a prueba de la impericia de
operadores inexpertos.
7. Respuesta semejante para todos los analitos, o,
por el contrario, una respuesta
selectiva y altamente predecible para una o más
clases de analitos.
8. No destructivo de la muestra.
Detectores más importantes: 5)Termostato de columna
➢ Detector de conductividad térmica: DCT o Columnas para cromatografía de líquidos
TCD se basa en los cambios en la Las columnas para cromatografía de líquidos se
conductividad térmica de la corriente de gas construyen de ordinario con tubo de acero inoxidable
ocasionados por la presencia de las de diámetro interno uniforme. Cientos de columnas
moléculas de analito. Este dispositivo se empaquetadas que difieren en tamaño y relleno se
denomina a veces un catarómetro. comercializan por distintos fabricantes y su coste
oscila, por lo general, de 30 000 a 100 000 pesetas.
➢ Detector de ionización a la flama: DIF o FID
En un quemador, el efluente de la columna
se mezcla con hidrógeno y con aire para
luego encenderse eléctricamente.
➢ Detector de captura de electrones: DCE o
ECD En este caso el efluente de la columna
pasa sobre un emisor β, como níquel-63 o
tritio (adsorbido sobre una lámina de platino
o de titanio). Un electrón del emisor provoca Termostatos
la ionización del gas portador (con En muchas aplicaciones no se necesita un control
frecuencia se trata de nitrógeno) y la estricto de la temperatura, y las columnas trabajan a
producción de una ráfaga de electrones. temperatura ambiente. Sin embargo, muchas veces
si se controla la temperatura de la columna en unas
pocas décimas de grado centígrado, se obtienen
5) Amplificador electrónico de señal mejores cromatogramas. La mayoría de los
instrumentos comerciales llevan actualmente hornos
para las columnas que controlan la temperatura de la
columna a las décimas de grado, desde la
La corriente generada es baja, por lo tanto, debe temperatura ambiente hasta 150 ºC. Para poder
ser amplificada mediante un amplificador de alta controlar con precisión la temperatura, las columnas
impedancia. también se pueden colocar en camisas con agua que
provenga de un baño a temperatura constante.
6)Detectores
6) Registrador de señal
Un detector para cromatografía de líquidos no es
Altura del Pico: Medida que se efectúa, para cada necesario que sea sensible en un intervalo tan
pico de interés, desde la línea base hasta el grande de temperaturas. Además, un detector de
máximo del pico. HPLC debe tener un volumen interno mínimo a fin de
Los errores de malas mediciones se pueden reducir el ensanchamiento de banda.
atribuir a: Los detectores en cromatografía de líquidos son de
Insuficiente Resolución dos tipos básicos. Los detectores basados en una
Variaciones en la línea base propiedad de la disolución responden a una
Picos extremadamente pequeños propiedad de la fase móvil, tal como el índice de
Las desviaciones en la línea base se pueden refracción, la constante dieléctrica, o la densidad,
compensar por interpolación de ésta entre el que se modifica por la presencia de los analitos. Por
principio y el final del pico. contraste, los detectores basados en una propiedad
del soluto responden a alguna de las propiedades del
soluto, como la absorbancia UV, fluorescencia, o
intensidad de difusión, que no son propias de la fase
móvil.
Clasificación de los detectores:
Detectores de absorbancia ultravioleta con
filtros. Los detectores de absorción UV más simples
son los fotómetros de filtros con una lámpara de
mercurio como fuente. Lo más común en estos casos
es aislar la línea intensa a 254 nm por medio de
filtros; en algunos equipos también se pueden utilizar
las líneas a 250, 313, 334 y 365 nm empleando otros
filtros. Resulta obvio que este tipo de detector se
utiliza de forma restringida para aquellos solutos que
absorben a alguna de estas longitudes de onda.
Detectores de fluorescencia
Los detectores de fluorescencia para HPLC son
semejantes en diseño a los fluorímetros y
espectrofluorímetros. En la mayoría de ellos, la
fluorescencia se detecta por medio de un detector
fotoeléctrico colocado perpendicularmente respecto
al haz de excitación. Los detectores más sencillos
utilizan una fuente de excitación de mercurio, y uno
o más filtros para aislar la radiación fluorescente.
Una ventaja inherente a los métodos de
fluorescencia es su alta sensibilidad.
Detectores electroquímicos
Estos dispositivos se basan en cuatro métodos
electro analíticos que incluyen la amperometría, la
voltamperometría, y la conductimetría.
Detectores de índice de refracción
Estos detectores miden la diferencia de índice de
refracción, entre el disolvente que en su camino
hacia la columna pasa a través de una mitad de la
cubeta y el efluente de la columna que pasa por la
otra mitad.
Ventajas y
desventajas Ventajas Ventajas
▪ Disponer de detectores mucho más • Permite la separación de sustancias
universales (por ejemplo, el de ionización termolábiles
de llama). • Se puede lograr resolución de sustancias con
▪ Para numerosas aplicaciones, los métodos peso molecular de 54 a 450
son más simples, más rápidos y más ▪ Elevada sensibilidad.
sensibles.
▪ Alta Resolución: La CG puede generar ▪ Elevada aplicabilidad.
miles de platos teóricos en unos pocos
Minutos. Los isómeros con puntos de ▪ Alta resolución
ebullición muy próximos que no pueden
Separarse por destilación se separan ▪ Permite realizar análisis cualitativos exactos.
fácilmente mediante la cromatografía de
Gases. ▪ Velocidad de análisis.
▪ La CG se presta a usos más variados que
la mejor columna de Destilación, ya que la ▪ Amplio espectro de aplicaciones.
columna cromatografía puede sustituirse ▪ Es adecuada para la separación de especies
fácilmente. termolábiles y no volátiles.
▪ Velocidad: Normalmente, el análisis por CG
tarda unos minutos; muchas separaciones ▪ Obtener separaciones en minutos e inclusive
útiles se completan en 10 minutos. Con en algunos casos en segundos.
altas presiones se han terminado análisis
completos en apenas unos segundos. ▪ Ventajas en el análisis cualitativo: Separa
▪ Sensibilidad: Una de las razones principales materiales para su examen por medio de
por las que se usa ampliamente la CG en otras técnicas.
los análisis es la sensibilidad conseguida.
▪ Fácilmente mide nano gramos (10−9 g), y ▪ Ventajas en el análisis cuantitativo: Aplicación
los detectores más selectivos como el de amplia a los materiales menos volátiles,
captura de electrones y el detector análisis de multicomponentes.
fotométrico de llama alcanzan los picos
gramos (10−12 g) debido a esta ▪ Aplicabilidad a sustancias de interés general
sensibilidad, la CG es un método preferido (industria, salud, medioambiente).
para el análisis de trazas, particularmente
plaguicidas, herbicidas y contaminantes
orgánicos en el aire y del agua. Desventajas
▪ Sencillez: La instrumentación requerida
para cromatografía de gases es mucho más ▪ Instrumentación costosa.
sencilla y económica.
▪ No existe detector universal.
▪ Resultados Cuantitativos: Una ventaja
importante de la CG es que permite obtener ▪ Limitaciones del método: Se tarda en
muy buenos resultados cuantitativos. desarrollar el método.
▪ Limitaciones para la muestra: Ninguna
▪ Elevado costo de operación
Desventajas ▪ Alto costo de mantenimiento de los equipos
▪ Falta de experiencia del operador.
La influencia de la temperatura sobre la
distribución del equilibrio es considerable. Por ello, ▪ Calentamiento y enfriamiento de la fase móvil.
la cromatografía de gases presenta limitaciones.
Se debe evaluar la estabilidad térmica de los
• Las principales limitaciones son: solo compuestos
pueden manipularse muestras volátiles; a
menudo es necesario eliminar
interferencias en la muestra; es una técnica
“deficiente” para análisis cualitativos.
• Solo Muestras Volátiles: Todas las
muestras deben ser volátiles; de lo
contrario, no pasaran a través de la
columna. Con la CG es difícil tratar
compuestos iónicos, compuestos de
elevada polaridad y compuestos de peso
molecular superior a 600.
• La inyección de la muestra debe ser exacta
y las condiciones del sistema no deben
cambiar de una inyección a otra. Las
inyecciones exactas se logran más con un
sistema automatizado de inyección o con el
uso de válvulas de inyección manuales con
lazo de volúmenes exactos.
Usos y Las áreas de aplicación son variadas y entre ellas Aplicaciones principales:
aplicaciones se encuentran:
▪ Medioambientales: Análisis de pesticidas y ▪ Fármacos: Antibióticos, sedantes esteroides,
herbicidas, análisis de hidrocarburos, analgésicos
semivolátiles y volátiles, análisis del aire,
etc. ▪ Bioquímica: Aminoácidos, proteínas,
carbohidratos, lípidos.
▪ Alimentos y aromas: fragancias y aromas,
aceites, bebidas, ácidos orgánicos, ▪ Productos de alimentación: Edulcorantes
azúcares, ésteres metílicos, triglicéridos, artificiales, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos.
alcoholes, etc.
▪ Productos de la industria química:
Aromáticos condensados, tensoactivos,
▪ Química Industrial: alcoholes, ácidos propulsores, colorantes.
orgánicos, aminas, aldehídos y cetonas,
ésteres y glicoles, hidrocarburos, ▪ Contaminantes: fenoles, Pesticidas,
disolventes, anilinas, gases inorgánicos, herbicidas.
etc.
▪ Química forense: Drogas, venenos, alcohol
▪ Biociencia: drogas, fármacos, alcoholes y en sangre, narcóticos.
contaminantes en sangre, disolventes
residuales, etc. ▪ Medicina clínica: Ácidos biliares, metabolitos
de drogas, extractos de orina, estrógenos.
▪ Derivadas del petróleo: gas natural, gases ▪ Esta técnica está indicada para la separación
permanentes, gas de refinería, gasolinas, de compuestos orgánicos semi volátiles.
gasóleos, parafinas, etc.
▪ Hidrocarburos Poliaromáticos (PAHs),
Aminoácidos: OTA, Ácido Fólico, Herbicidas,
▪ Separar mezclas orgánicas complejas, Vitaminas, Acido tenuazonico,
compuestos organometálicos y sistemas Formaldehído…etc.
bioquímicos.
▪ Técnica de separación para los materiales
menos volátiles e iónicos; análisis cuantitativo
▪ Método para determinar cuantitativa y de multicomponentes.
cualitativamente los componentes de la
muestra. ▪ Determinaciones de
Compuestos iónicos, como aminoácidos,
sales inorgánicas, ácidos orgánicos, etc.
▪ Control de calidad de materia prima y
producto terminado, monitoreo y ▪ Compuestos de alto peso molecular, como
optimización de procesos químicos, análisis polímeros, hidrocarburos polinucleares,
forense, control ambiental, medicina productos naturales, etc.
fotoquímica, por mencionar algunas.
▪ Compuestos termolábiles y no volátiles, como
vitaminas, pesticidas, esteroides,
plastificantes, drogas y un producto muy
▪ En estudios de contaminantes del agua: grande de otros productos farmacéuticos.
insecticidas en agua, pesticidas en agua de
lagos, lagunas, ríos, desechos industriales
descargados en rio y lagunas. ▪ Determinación de hidrocarburos aromáticos
▪ polinucleares que son contaminantes
atmosféricos muy importantes.
▪ Aplicación en la industria:
Se enfoca principalmente a evaluar la ▪ El análisis de compuestos vitamínicos es
pureza de los reactantes y productos de la posible en corto tiempo.
reacción o bien a monitorear la secuencia
de la reacción, para los fabricantes de
reactivos químicos su aplicación para la
determinación de la pureza es lo más ▪ El análisis de medicamentos: determinación
importante. de los componentes activos de una tableta
analgésica. También en el análisis de
barbitúricos, anticonceptivos, etc.
▪ Aplicaciones en los campos de la bioquímica,
química analítica, productos farmacéuticos,
ciencia forense, investigación alimentaria y
otras áreas.
▪ Se utiliza en las pruebas de sustancias
prohibidas en atletas.
▪ Separación y purificación de metabolitos
▪ Separación y purificación de los metabolitos
de las drogas procedentes de muestras de
orina.
▪ Purificación y separación de enantiómeros.
▪ Purificación de compuestos naturales.
▪ Purificación y caracterización de enzimas y
proteínas
Fuentes de consulta
• Skoog, Douglas A. y Leary, James J. (1994). Análisis Instrumental. Armenia: McGraw-Hill.
• Payan, D.,Genesis, O.,Lagos , T., & Reyes,V.. (2013). Cromatografia de gases presentación. Junio 28,2021, de
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• 2020. (Ozores,MI.). Cromatografía de líquidos. Junio 29,2021, de Laboratorio de Técnicas Instrumentales UVa Sitio
web: [Link]
• BURGET, C.A.; GREEN, L.E. and BONELLI, E.J. Chromatographic Methods in Gas Analysis. Hewlett Packard. USA.
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• CRIPPEN, Raymond C. Identification of Organic Compounds with Aid of Gas Chromatography. Mc Graw-Hill. USA.
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