UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN
MARCOS
(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Escuela profesional de Farmacia y Bioquímica
Informe N° 9 - FLAGELOS BACTERIANOS
Asignatura:
Biología celular
Docente:
RUIZ QUIROZ, Julio Reynaldo
Integrantes:
COTRINA CARMENES, Katiuska Elaine
TADEO PORTERO, Roberto Carlos
PAJUELO CERVANTES, Sheyla Sofía
CHAPOÑAN RIOJAS, Dania
TRUJILLO CAQUI, Renzo Giusepe
Ciclo:
2020 - I
Lima, Perú
2020
FLAGELOS BACTERIANOS
OBJETIVOS
● Reconocer los flagelos de una bacteria mediante el método de Leifson.
● Aprender a preparar colorante de Leifson para tinción de flagelos por método Leifson.
● Aprender a preparar colorante colorante alternativo y/o contraste para visualización de flagelos.
DIAGRAMA DE FLUJO
EXPERIMENTO 1: TINCIÓN DE FLAGELOS POR EL MÉTODO DE LEIFSON
RESULTADOS Y DISCUSIONES
RESULTADOS
EXPERIMENTO 1: TINCIÓN DE FLAGELOS POR EL MÉTODO DE LEIFSON
Con un aumento de 100X y la ayuda de mordientes quien hará que el flagelo de la bacteria aumente de
diámetro para una mejor observación a microscopio, se obtiene la coloración de dichas bacterias y sus
respectivos flagelos, identificando en ambos casos bacterias monotricas, deduciendo este resultado debido a
que de estas bacterias solo parte un solo flagelo de un solo lado de su estructura.
DISCUSIÓN
D1: En clase se realizó la tinción bacteriana de flagelos utilizando el método de Leifson, para ello se necesitó un
lápiz graso con el cual se formaría un círculo en el portaobjetos (de preferencia nuevo) el cual fue
desengrasado pasándolo varias veces por la flama. En este espacio se colocó entre 2 a 3 gotas de suspensión
bacteriana, cabe resaltar que el cultivo fue de bacterias jóvenes en etapa de crecimiento exponencial, que era
dejado resbalar hasta formar un frotis que se secaba de manera natural. Se procedía a agregar gotas del
colorante de Leifson preparado, luego era lavado, secado y posteriormente llevado al microscopio (100X) con
una gota de aceite de inmersión. Pero es necesario resaltar que el método utilizado en clase no es el único que
existe para poder realizar la tinción de flagelos bacterianos, por ello es necesario mencionar el método de
Gray, en el cual encontraremos ciertas semejanzas al igual que alguna diferencia al aplicar este método como
la preparación del cultivo, según una investigación. Este método, al igual que el método de Leifson es
mencionado en el libro “Laboratory Exercises in Microbiology”, como uno de los métodos utilizado para la
tinción y visualización de flagelos utilizando como mordiente el ácido tánico, alumbre de potasio, y tinción con
fucsina básica (1), mordiente que es muy similar al empleado en clase. Asimismo, en la investigación realizada
por Abet, H. con la ayuda del método de Gray, se menciona que se obtuvieron resultados satisfactorios, en
este caso se realizó 4 cuatro subcultivos de los organismos a teñir, utilizando agar nutriente recién preparado y
con abundante agua de condensación (preparado distinto al realizado en clase), asimismo, con respecto al
mordiente se utilizaron los mismos elementos, que fueron preparar dos soluciones; (1) 5 cc. de una solución
saturada de alumbre de potasio, 2 cc. de una solución saturada de mercuriopercloruro y 2 cc. de un 20 por
ciento. solución de ácido tánico; (2) 0,4 cc. de una solución alcohólica saturada de fucsina básica. Es necesario
recalcar que estas se mantendrán por algún tiempo por separado, pero no después de mezclar. Por último, se
menciona que la mezcla puede usarse sin tratamiento adicional; pero para obtener los mejores resultados,
debe filtrarse antes de su uso. (1)(2)
D2: En el experimento realizado en clase, reconocimiento de flagelos bacterianos, se empleó la tinción
Leifson. Sin embargo, existen más tipos de tinciones para lograr dicho reconocimiento.
La tinción Kodaka, según Paredes, consiste en suspender las bacterias y colocar la tinción en el borde del
cubreobjetos dejando reposar por 10 minutos a temperatura ambiente, ya que si se flamea la muestra la llama
destruiría la materia a observar. El colorante ingresa a la muestra a través de capilaridad actuando sobre los
flagelos y células. Entre las consideraciones para este tipo de tinción, se debe de cultivar las bacterias en
medios sin carbohidratos para evitar los efectos negativos de la acidez del colorante, además la muestra a
tomar debe de ser de un cultivo joven, el colorante actúa sobre los flagelos por deposición del colorante. La
tinción de Kodaka está constituida por 2 soluciones: 1) Mezcla de 10 mL de solución de ácido carbólico al 5%
más 2 g de ácido tánico (en polvo) y 10 mL de solución saturada de sulfato de aluminio potásico hidratado y 2)
Mezcla de solución saturada de cristal de violeta en etanol (12 g por 10 mL). La solución 1 cumple la función de
mordiente mientras que la solución 2 de colorar la muestra. La tinción de Kodaka está constituida por 10
partes de la solución 1 y una parte de la solución 2. La solución Kodaka a diferencia de otras tinciones se
caracteriza por ser estable y su almacenamiento no influye si se guarda mezclado entre las soluciones
conformantes o si no es el caso. Está tinción es una alternativa a la desarrollada a la práctica, tinción Leifson, la
cual puede ser utilizada para lograr el reconocimiento de flagelos bacterianos. (3,4)
CONCLUSIONES
● Se reconoció los flagelos de una bacteria mediante el método de Leifson.
● Se aprendió a preparar colorante de Leifson para tinción de flagelos por método Leifson.
● Se aprendió a preparar colorante colorante alternativo y/o contraste para visualización de flagelos.
CUESTIONARIO
1. De 2 ejemplos de bacterias de acuerdo al número y localización de sus flagelos.
Bacterias Monotricas:
- Vibrio cholerae
- Pseudomonas aeruginosa
Bacterias Lofotricas:
- Spirillum volutans
- Pseudomonas putida
Bacterias Anfitricas:
- Spirillum undulata
- Spirillum serpens
Bacterias Peritricas:
- Escherichia coli
- Citrobacter koseri (5)
2. ¿Se podrá observar los flagelos bacterianos in vivo?
En las preparaciones in vivo, no es posible detectar los flagelos individuales, esto es a causa de la
extrema delgadez de estos últimos. Incluso empleando la microscopía óptica de alta intensidad en
campo oscuro, estos flagelos no son apreciados con total Es por ello que lo más recomendable para
una mejor apreciación de los flagelos es que estos sean teñidos y se empleen combinaciones de
mordientes y metales que permitan engordarlos. (6)
3. Describa otros métodos de tinción para flagelos
En la técnica de tinción de Noland se utiliza una solución de 20 mg de cristal violeta, 80 mg de fenol,
20 ml de formaldehído al 40% y 4 ml de glicerol. El procedimiento es mezclar una gota de esta
solucion para observar los protozoarios en el microscopio a 100x con líquido de inmersión se teñiran
los flagelos de color azul. (7)
4. Diferenciar los flagelos bacterianos de los de células eucariotas.
Las principales diferencias son en la longitud 15- 20 micrómetros para las procariotas y 60
micrómetros para la eucariotas, en el diámetro 20nm para las procariotas y 200 nm para las
eucariotas, según su fuente de energía las procariotas usan H + o Na+ mientras las eucariotas utilizan la
moneda energética conocida como ATP. (8)
5. ¿Cómo podría observar flagelos eucariotas?
Se pudo observar en un estudio de identificación de espermatozoides y levaduras aplicando
microscopio con contraste de fases, luz polarizada y de fluorescencia.El procedimiento fue el
siguiente:
Se trabajó con las muestras de los grupos G 1 y G2 provenientes de diluciones de semen a las que se
agregó suspensión de levaduras. Como control de la observación microscópica se procesaron testigos
puros de espermatozoides (C E) y de levaduras (C L). Se tomaron 0.5 mL de cada muestra y se
centrifugaron 10 min a 250 xg. Se descartó el sobrenadante y se colocó una gota del sedimento entre
porta y cubre objeto, se aplicaron distintos recursos microscópicos.
Mediante microscopía con contraste de fases (CF) utilizando microscopio, se determinó el porcentaje
de elementos refringentes (espermatozoides) y opacos (levaduras).
Con microscopio óptico y colocando polarizadores en los oculares y en el objetivo, para generar luz
polarizada (LP), se identificaron espermatozoides y/o cabezas espermáticas. La técnica se fundamenta
en las características birrefringentes que presenta el espermatozoide como consecuencia de las
propiedades anisotrópicas de su textura protoplásmica interna. El análisis de birrefringencia de los
espermatozoides mediante la aplicación de microscopía con LP es una herramienta adicional que
permite evaluar la organización de los organelos situados en la cabeza y el flagelo espermático. (9)
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Harley P, Prescott LM. Laboratory Exercises in Microbiology. Fifth Edition. New York: The McGraw−Hill
Companies; 2002. [Recuperado 22 agosto 2020]. URL disponible en:
https://www.academia.edu/27326507/Laboratorium_Exercise_Microbiology
2. Abet H. Gray’s Method of Flagella-staining. Zentralblatt fur Bakteriol Parasitenkunde, Infekt und Hyg.
CABI. [Internet]. 1935. [Recuperado 22 agosto 2020]. 133:465-7. Disponible en:
https://www.cabdirect.org/cabdirect/abstract/19352701089
3. Jessica Paredes. Tinciones flagelares - Microbiología MCB - BUAP [Internet]. StuDocu. [recuperado 22
ago 2020]. Disponible en: https://www.studocu.com/es-mx/document/benemerita-universidad-
autonoma-de-puebla/microbiologia/ejercicios-obligatorios/tinciones-flagelares/4649412/view
4. Kodaka H, Armfield AY, Lombard GL, Dowell VR. Practical procedure for demonstrating bacterial
flagella. J Clin Microbiol. NCBI. [Internet]. 1 de noviembre de 1982. [Recuperado 22 ago 2020].
16(5):948-52. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC272507/
5. Struthers J. Westran R. Bacteriología clínica [Internet]. España: ELSEIVER; 2003. [Recuperado 23 ago
2020]. URL disponible en: https://books.google.com.pe/books?
id=Z6onofK2ToEC&pg=PA16&dq=ejemplos+de+bacterias+seg%C3%BAn+su+flagelo&hl=es-
419&sa=X&ved=2ahUKEwj2g5r147LrAhX-
H7kGHVGNClsQ6AEwAnoECAMQAQ#v=onepage&q=ejemplos%20de%20bacterias%20seg%C3%BAn
%20su%20flagelo&f=true
6. Pírez M, Mota M. Morfología y estructura bacteriana. Temas de Bacteriología y Virología Médica:
Morfología y Estructura Bacteriana.[Internet] 2 ed.Montevideo: Universidad de la República,
Departamento de Bacteriología y Virología, 2006; p. 23-42. [Recuperado el 23 Ago de 2020].
Disponible en: http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/MorfologiayEstructuraBacteriana.pdf
7. Dolores Salas M. Tinciones [ Internet] bibliotecagbs.com [ Recuperado 24 Ago 2020] Disponible en:
http://www.bibliotecagbs.com/archivos/033_036_CAP3_GBS.pdf
8. Gavin Marin R. "Caracterización genética y fenotípica del flagelo de Aeromonas" [ Tesis Doctoral]
Barcelona, España: Universitat de Barcelona; 2003 [ Recuperado 24 Ago 2020] Disponible
en:https://www.tesisenred.net/bitstream/handle/10803/2382/TESIGAVIN.pdf?
sequence=1&isAllowed=y
9. Reina Bouvet B. Pavesi Beatriz A. Paparella Vicenta C. Ombrella María A. Identificación de
espermatozoides humanos en muestras contaminadas con levaduras. CienciaUAT [Internet]. 2017
Dic [Recuperado 24 Ago 2020] ; 12( 1 ): 23-35. Disponible en: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S2007-78582017000200023&lng=es.
