MICROSCOPÍA

Practico de Histología 1 (PH1)

Medidas de longitud
en microscopía
 Estructura
Unidad de medida Valos de la unidad Método de estudio
visualizada

Milímetros Ojo Órganos, Tejidos,

-3
10 m
(mm) Lupa Células grandes

Micrómetro Tejidos, Células

10-6 m Microscopías ópticas
(µm) Organoides grandes

Microscopía Componentes
Nanómetro Electrónica subcelulares
10-9 m
(nm) Microscopía de Virus
Polarización Macromoléculas

Amstrong
10-10 m Microscopía
(Å) Estructura Moleculas
Electrónica

1mm = 1.000 µm = 1.000.000 nm = 10.000.000 Å

MICROSCOPÍA
 Microscopio
“Es un instrumento que sirve para visualizar diversas estructuras que escapan al límite de
resolución del ojo humano a través del aumento de los objetos observados”

COMPUESTOS
SIMPLES

Sistemas ópticos centrados

Una sola lente
FOTÓNICOS ELECTRÓNICOS
• Lupa

• Microscopio Óptico
• M.E.T.
• Microscopio de Campo Oscuro
• M.E.B.
• Microscopio de Fluorescencia
• Microscopio de Polarización
• Microscopio de Contraste de
Fases
• Microscopio de Interferencia
• Microscopio de Luz UV
 MICROSCOPIO ÓPTICO

Parte Mecánica Parte Óptica

• Pie • Aparato de Iluminación

• Columna - Condensador
- Tornillo micro y - Espejo
macrométrico
• Tubo - Diafragma Iris
- Soporta ocular • Objetivo
y revolver • Ocular
• Platina
•Subplatina

- Da
soporte al
aparato de
iluminación
 Formación de la imagen

IMAGEN FINAL: VIRTUAL, MAYOR e INVERTIDA

• Objetivos
CLASIFICACIÓN:
▪ Objetivos secos: el aire se
interpone directamente entre el
objeto y el objetivo. Según el
aumento: - Seco débil (10X);
- Seco fuerte (40X) 4X 10X 40X

▪ Objetivos de inmersión: entre el

objeto y el objetivo se interpone
un líquido de índice de refracción
superior al aire (agua, aceite de
cedro, etc.)
100X
 Aberraciones
El objetivo esta formado por mas de una lente diseñadas para corregir las
aberraciones cromática y de esfericidad; que se producen porque no todos los
rayos lumínicos refractan de la misma manera cuando atraviesan las lentes.
La aberración cromática se debe a que las lentes simples no pueden concentrar
en un solo punto los rayos de diferente longitudes de onda, de modo que forman
imágenes borrosas con halos coloreados. Ésta aberración se corrige utilizando
objetivos acromáticos, apocromáticos o semiapocromáticos que dan imágenes
claras y desprovistas de halos.

La aberración de esfericidad ocurre porque los rayos que inciden en la zona

periférica de la lente se refractan más que los próximos al eje óptico, lo cual forma
un foco ampliado en lugar de un foco puntiforme y la imagen resulta borrosa; se
corrige mediante el uso de objetivos aplanéticos.
APERTURA NUMÉRICA: es la cantidad de rayos luminosos
emergentes del preparado que son captados por el objetivo

Seno del
A.N.= N . Sen α semiángulo de
apertura
(valor máximo = 0,1)
Índice de refracción
del medio
interpuesto.
Ej.: Aire: 1
Vidrios: 1,52
Agua: 1,33
Aceite: 1,51

Semiángulo de Apertura: Es el semiángulo formado por los rayos mas

periféricos, que partiendo de la fuente luminosa penetran en el objetivo
PODER DE RESOLUCIÓN: es la capacidad de un sistema
óptico para mostrar separados dos puntos situados a muy
pequeña distancia entre sí.

1
PR = Longitud de onda
0,61 X λ de la luz empleada
LR =
AN Ej.: Blanca: 5550 Å
UV: 2500 Å
Electrón: 0,056 Å

LÍMITE DE RESOLUCIÓN: es la distancia mínima que

separa dos puntos para poder discriminarlos como tales
Resolución del ojo en comparación con la de los
microscopios

Distancia entre los puntos que se resuelven

Ojo humano 0,2 mm

M.O. de campo claro 0,2 µm

MEB 2,5
nm
MET
En Teoría 0,05 nm
En Práctica 1,0 nm
Microscopía de fuerza atómica 50 pm
 “Cuanto menor sea el LR de un microscopio, nos
dará mejores datos sobre la estructura del objeto
que queremos observar”
El LR puede disminuir:

• λ : Utilizando luz UV
• AN : Cambiando el medio interpuesto entre el objeto y el objetivo

Con Aceite de cedro:

0,61 X λ
A.N.= N . Sen α A.N. LR =
AN

Utilizando Luz UV: LR

0,61 X λ
λ LR =
AN
• Ocular Tiene como función aumentar la imagen dada
por el objetivo, actúa igual a una lupa.

PARA CALCULAR EL AUMENTO TOTAL, MULTIPLICAMOS EL AUMENTO DEL

OBJETIVO POR EL DEL OCULAR

Ej.:
45 X 10 = 450X
 MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

• Se basa en la propiedad que

tiene la luz de dispersarse por
los distintos índices de
refracción del objeto a observar
• Posee un condensador que
ilumina el objeto de manera
oblicua, haciéndolo brillar en
medio de un fondo oscuro
(efecto Tyndall)
• Es útil para observar células
vivas (movimiento de bacterias
y espermatozoides)
 MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

• Emplea luz UV
• El porta y cubreobjetos
deben ser de cuarzo y se
utiliza la glicina como medio
de inmersión
• Se utiliza en estudios
histoquímicos e
inmonuhistoquimicos
basados en el uso de
colorantes fluorescentes y
para localización de ácidos
nucleicos
Fibroblasto con anticuerpos marcados antiactina
MICROSCOPIO DE POLARIZACIÓN
• Se diferencia de los demás porque posee un
analizador (situado entre el observador y el
objetivo) y un polarizador (que se encuentra
por debajo del condensador), ambos poseen
cristales de Nicol que polarizan la luz,
haciéndola vibrar en un solo plano
• Se basa en el comportamiento de la luz
polarizada cuando atraviesa el objeto;
cuando lo atraviesa a la misma velocidad, se
dice que son isótropos o monorrefringente
(un solo índice de refracción); en cambio, si
los atraviesa a velocidades que varían según
el plano de incidencia de la luz, se dice que
son anisótropos o birrefringentes (distintos
índices de refracción)
• Los componentes que presentan
birrefringencia son: las fibras colágenas, los
tonofilamentos de las células epidérmicas y
las bandas A de las células musculares
estriadas
• Sirve para ver células vivas
MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE

• Se basa en las
diferencias en el índice
de refracción y la
absorción luminosa de
las distintas partes del
preparado
• Al ser muy escasas
éstas diferencias en
general, se colorean los
preparados para
aumentarlas
• Se utiliza para la
observación de células Células de la cresta neural en cultivo. La
preparación histológica no ha sido teñida
vivas
 MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA

• Se basa en principios
similares al microscopio de
contraste de fase, pero tiene
la ventaja de proporcionar
datos cuantitativos
• Se utiliza para observar
células vivas y la mas de los
elementos celulares
individuales

Células de la cresta neural en cultivo. La

preparación histológica no ha sido teñida
 MICROSCOPIO DE LUZ UV

• Utiliza luz UV, ya que la misma es invisible al ojo humano, la imagen se

debe registrar en una película fotográfica
• Utiliza lentes de cuarzo, ya que la luz UV no puede atravesar el vidrio
• Se utiliza para detectar ácidos nucleicos ya que revela las bases púricas y
pirimidínicas

Microfotografía de células de riñón de

hámster en
cultivo, teñidas con el colorante
naranja de acridina. Mediante
un microscopio de fluorescencia, el
ADN (en el interior de los
núcleos) emite una luz amarilla,
mientras que el citoplasma (con
abundante ARN) muestra una
coloración anaranjada. Gran aumento
 M.O. M.E.
FUENTE DE ENERGÍA Luz solar o artificial Filamentos de Tungsteno

TUBO Al aire Al vacío

Ocular-Objetivo-Condensad
LENTES Bobinas electromagnéticas
or
CAPTACIÓN DE LA Pantalla Fluoroscópica o
Ojo- cámara fotográfica
IMAGEN placa fotográfica

MONTAJE Vidrio (portaobjetos) Grilla de cobre

CÉLULAS Vivas o muertas Muertas

IMAGEN Color o B/N B/N

AUMENTO TOTAL 100X-450X-1000X-2000X 1.000.000X

MECANISMO DE
Absorción desigual de la luz
FORMACIÓN DE L Dispersión de electrones
por el preparado
AIMAGEN
NIVEL DE ESTUDIO Estructural Ultraestructural
 M.
E.
T.

Electromicrografía correspondiente a un macrófago. Se puede observar la presencia de

prolongaciones citoplásmicas abundantes (flechas) y un centríolo (C) en la parte central, rodeado por
vesículas del complejo de Golgi (G). En el citoplasma aparecen dispersos numerosos lisosomas
secundarios (L). 15.000 .
M.
E.
B.

Electromicrografía de barrido de eritrocitos humanos

normales. Obsérvese la forma bicóncava de estos
corpúsculos. 6.500 X.