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Clostridium

Este documento describe el método AOAC 976.30 (2012) para contar Clostridium perfringens en una muestra. Se pesan 50 g de muestra y se homogenizan en caldo de preenriquecimiento. Se realizan diluciones sucesivas y se siembran alícuotas en placas. Tras incubación, se observan colonias características y se seleccionan para sembrar en caldo tioglucanato para confirmar la identidad.

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Este documento describe el método AOAC 976.30 (2012) para contar Clostridium perfringens en una muestra. Se pesan 50 g de muestra y se homogenizan en caldo de preenriquecimiento. Se realizan diluciones sucesivas y se siembran alícuotas en placas. Tras incubación, se observan colonias características y se seleccionan para sembrar en caldo tioglucanato para confirmar la identidad.

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RECUENTO DE Clostridium perfringes

(AOAC 976.30 (2012))

15
121/ ’
TSC

-1
2622 - A
7. Mezclar el contenido de las placas con movimientos de
9

1. Pesar asepticamente 50 g de balanceo y de rotación. Dejar que solidifique la mezcla (5-


10.0 g
muestra en una bolsa stomacher
2622 - A 10 minutos) sobre una superficie nivelada.

TSC
2622 - A

-1 9
TSC
2622 - A

-1 9
8. Cubrir la superficie de las placas con otros 20 ml del
2. Añadir 450 ml de caldo de preenre- mismo agar
quecimiento
TSC
2622 - A

-1 9

TSC

-1
2622 - A
9. Mezclar el contenido de las placas con movimientos de
9
balanceo y de rotación. Dejar que solidifique la mezcla (5-
10 minutos) sobre una superficie nivelada.

3. Homogenizar en el stomacher du-


rante 120 segundos (Stomacher con
13000 rpm).

10. Colocar las placas sin invertir en la jarra de ana-


erobiosis
1 ml

4. Realizar diluciones sucesivas apartir -2

de la suspensión inicial (10-1) inoculan-


do 1 ml en 9 ml de Agua peptonada al
0.1%. Realizar las diluciones que sean
necesarias. 20 hr 11. Incubar a 35 °C durante 20 horas.

VRBA
35 ± 1°C
2622 - A

5. Pipetear por duplicado, en placas -1 9

de Petri esteriles, alícuotas de 1 ml


12. Observar si hay crecimiento de colonias negras
dé las diluciones
TSC
2622 - A
TSC
2622 A
-1
redondeadas de halos opacos. Elegir 10 colonias
2622 - A
-1 9 -1 9
10/4
15
121/ ’
caracteristicas y sembrarlas en caldo tioglucanato.
TSC
control
15
121/ ’
9

6. Templar el medio a 44-46 °C, agre- 8m


l
D-cicloserina
gar la d-cicloserina y verter inmedia- 100 ml
TSC
0.5%
TSC
tamente en las placas de Petri el me- 2622 - A

9
dio fundido y templado. TSC
2622 - A

-1 9 13. Incubar las los tubos a 35 °C por 24 horas


24 hr

35 ± 1°C

2622 A
-1
10/4

Gram

Cultivo puros Cultivos mixtos

2622 A

Pasar a la confirmación bioquímica -1


10/4

2622 A
-1
10/4

Estriar en Agar TSC con yema de huevo

24 hr
Incubar las los tubos a 35 °C por 24 horas

35 ± 1°C

Confirmación bioquimica
15
121/ ’ 15
121/ ’
15
121/ ’
Polip Ex Lev Alm.

Tiogl Fosf. d Sulf M.

15
15
121/ ’ 121/ ’

15
121/ ’

Poli. Ext. L NaCl


20 g 5g 5g

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