Universidad de Panamá
Departamento de Bioquímica
Qm 250
Practica: cinética
Fecha de entrega: Miércoles 26 de mayo de 2021
Práctica de cinética enzimática que tiene como objetivo, afianzar el conocimiento de
los estudiantes en este tópico. Este trabajo tiene un valor de 30 puntos, cada
problema tiene una ponderación de 10 puntos.
Instrucciones: resuelva los siguientes problemas de manera nítida. El trabajo debe
ser entregado en la plataforma virtual (puede ser a mano), con todos los pasos y
cálculos utilizados en la resolución de los problemas. Donde no estén los cálculos
se les bajara puntos del puntaje total.
Problemas
1. Un grupo de investigación ha descubierto una nueva clase de la
happyase, llamada happyase*, la cual cataliza la siguiente reacción.
a) Cuando [Et] = 1 nM, Vmax = 0.4 µM s-1 y
la cuando la [HAPPY] es 30 µM, los investigadores encontraron que Vi =
300 nM s-1. ¿Cuál es el valor de Km de la happyase para su sustrato
HAPPY? Incluya las unidades apropiadas.
DESARROLLO
Datos:
1 µM
Vmax = 0.4µM/s [HAPPY] = [S] = 30µM/s Vi = 300 nM /s ( 1000 nM )
=0.3 µM / s
Ecuación:
V max [ S]
V i=
KM +[S ]
0.4 µM /s∗30 µM /s
0.3 µM /s=
KM +30 µM /s
0.3 µM /s ( KM +30 µM /s)=0.4 µM /s∗30 µM / s
0.3 µM /s . KM + 9 µ M 2 / s2=12 µ M 2 / s2
0.3 µM /s . KM =12 µ M 2 / s2−9 µ M 2 /s 2
0.3 µM /s . KM =3 µ M 2 /s 2
3 µ M 2 / s2
KM = =10 µM /s
0.3 µM / s
1000 nM
KM =10 µM / s( )=1 x 10 4 nM /s
1 µM
b) En otro experimento, con [Et] a 1 nM y [HAPPY] a 30 M, los investigadores
encontraron que Vi es 300 nM S -1. ¿Cuál es el Km medido de happyase *
para su sustrato HAPPY? (Incluya las unidades apropiadas).
DESARROLLO
Datos:
Vmax = 0.4µM/s [HAPPY] = [S] = 30 M ( 1 x110µM M )=3 x 10 µM /s
−6
7
1 µM
Vi = 300 nM /s ( 1000 nM )
=0.3 µM / s
Ecuación:
V max [ S]
V i=
KM +[S ]
0.4 µM /s∗3 x 107 µM /s
0.3 µM / s=
KM +3 x 107 µM / s
0.3 µM /s ( KM +3 x 107 µM / s)=0.4 µM /s∗3 x 107 µM /s
0.3 µM /s . KM + 9 x 106 µ M 2 /s2 =1.2 x 107 M 2 /s 2
0.3 µM /s . KM =1.2 x 107 µ M 2 /s2 −9 x 106 µ M 2 /s 2
0.3 µM / s . KM =3 x 106 µ M 2 /s 2
3 x 106 µ M 2 /s2 7
KM = =1 x 10 µM /s
0.3 µM /s
1000 nM
KM =1 x 107 µM / s( )=1 x 1010 nM /s
1 µM
2. Los siguientes datos experimentales se recopilaron durante un estudio de la
actividad catalítica de una peptidasa intestinal con el sustrato glicilglicina
Gliciglina + H2O 🡪 2 Glicina
[S] mM Vi µmol/min
1.5 0.21
2 0.24
3 0.28
4 0.33
8 0.4
16 0.45
Utilice un análisis gráfico (consulte las diapositivas) para determinar la Km y
la Vmax para esta preparación enzimática y su sustrato.
DESARROLLO
Calculamos el valor inverso de la concentración del sustrato y su preparación
enzimática:
Vi
[S] mM 1/[S] 1/Vi
µmol/min
1.5 0.21 0.667 4.762
2 0.24 0.500 4.167
3 0.28 0.333 3.571
4 0.33 0.250 3.030
8 0.4 0.125 2.500
16 0.45 0.063 2.222
Realizamos los gráficos:
Vi vs [S]
0.5
0.45
Vi ((µmol/L)/min) 0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
[S] mM
1/Vi vs 1/[S]
5.000
4.500 f(x) = 4.27 x + 2
4.000 R² = 0.99
1/Vi (/min/(µmol/L))
3.500
3.000
2.500
2.000
1.500
1.000
0.500
0.000
0.000 0.100 0.200 0.300 0.400 0.500 0.600 0.700 0.800
1/[S] (1/mM)
La ecuación del gráfico es: y=4.2663x+1.9978.
Según el gráfico podemos calcular Vmax de la siguiente manera:
1
b=
V max
mol
1
V max = =
1
b 1.9978
=0.50 ( )
µ
L
min
Para calcular KM utilizamos la pendiente del gráfico:
KM
m=
V max
KM =m∗V max =( 4.2663 )( 0.50 )=2.133 µmol / L
3. Las prostaglandinas son una clase de eicosanoides, derivados de ácidos
grasos con una variedad de acciones extremadamente potentes en los tejidos
de los vertebrados. Son los responsables de producir fiebre e inflamación y el
dolor asociado. Las prostaglandinas se derivan del ácido araquidónico de
ácido graso de 20 carbonos en una reacción catalizada por la enzima
prostaglandina endoperóxido sintasa.
Esta enzima, una ciclooxigenasa, usa oxígeno para convertir el ácido
araquidónico en PGG2, el precursor inmediato de muchas prostaglandinas
diferentes.
a) Los datos cinéticos que se dan a continuación son para la reacción catalizada
por la prostaglandina endoperóxido sintasa. Centrándose aquí en las dos
primeras columnas, determine la Vmax y la Km de la enzima.
Acido Vi de PPG2 Vi de PPG2 con 10
Araquidonico (mM/min) mg.mL de
(mM) ibuprofeno
(mM/min)
0.5 23.5 16.67
1 32.2 25.25
1.5 36.9 30.49
2.5 41.8 37.04
3.5 44 38.91
DESARROLLO:
Calculamos el valor inverso de la concentración del sustrato y su preparación
enzimática:
Acido Vi de Vi de 1/Acido 1/Vi de
Araquidoni PPG2 PPG2 Araquidoni PPG2
co (mM) (mM/mi con 10 co (1/mM) (min/m
mg.mL
de
ibuprofe
no
(mM/min
n) ) M)
0.5 23.5 16.67 2.0000 0.0426
1 32.2 25.25 1.0000 0.0311
1.5 36.9 30.49 0.6667 0.0271
2.5 41.8 37.04 0.4000 0.0239
3.5 44 38.91 0.2857 0.0227
Realizamos los gráficos:
Vi de PPG2 vs Á cido Aracquidó nico
50
45
Vi PPG2 (mM/min)
40
35
30
25
20
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4
Á cido Aracquidonico (mM)
1/Vi de PPG2 (min/mM) vs 1/A. Araquidonico (1/mM)
0.0450
0.0400 f(x) = 0.01 x + 0.02
1/Vi de PPG2 (min/mM) R² = 1
0.0350
0.0300
0.0250
0.0200
0.0150
00 00 00 00
0
00
0
00
0
00
0
00
0
00
0
00
0
00
0
.20 .40 .60 .8 .0 .2 .4 .6 .8 .0 .2
0 0 0 01/Acido 1 Araquidonico
1 1 (1/mM) 1 1 2 2
La ecuación del gráfico es: y=0.0116x+0.0194
Según el gráfico podemos calcular Vmax de la siguiente manera:
1
b=
V max
1 1 mM
V max = =
b 0.0194
=51.55
min ( )
Para calcular KM utilizamos la pendiente del gráfico:
KM
m=
V max
KM =m∗V max =( 0.0116 ) (51.55 )=0. 598 mM / L
b) El ibuprofeno es un inhibidor de la endoperóxido sintasa de prostaglandinas.
Al inhibir la síntesis de prostaglandinas, el ibuprofeno reduce la inflamación y
el dolor. Con los datos de la primera y tercera columnas de la tabla,
determine el tipo de inhibición que ejerce el ibuprofeno sobre la
prostaglandina endoperóxido sintasa.
DESARROLLO
Los datos de la tabla son los siguientes:
Vi de 1/Vi de
PPG2 PPG2
con 10 con 10
mg.mL mg.mL
de de
Vi de ibuprofen 1/Vi de ibuprofen
Acido PPG2 o 1/Acido PPG2 o
Araquidoni (mM/mi (mM/min Araquidoni (min/m (min/mM
co (mM) n) ) co (1/mM) M) )
0.5 23.5 16.67 2.0000 0.0426 0.0600
1 32.2 25.25 1.0000 0.0311 0.0396
1.5 36.9 30.49 0.6667 0.0271 0.0328
2.5 41.8 37.04 0.4000 0.0239 0.0270
3.5 44 38.91 0.2857 0.0227 0.0257
El gráfico resultante es:
1/Vi de PPG2 (min/mM) vs 1/A. Araquidonico (1/mM)
0.0650
0.0600
f(x) = 0.02 x + 0.02
0.0550 R² = 1
1/Vi de PPG2 (min/mM)
0.0500
0.0450 1/Vi de PPG2
Linear (1/Vi de PPG2)
0.0400 f(x) = 0.01 x + 0.02 1/Vi de PPG2 + 10 mg/L de
R² = 1 ibuprofeno
0.0350 Linear (1/Vi de PPG2 + 10 mg/L
de ibuprofeno)
0.0300
0.0250
0.0200
0.0150
0.0000 0.5000 1.0000 1.5000 2.0000 2.5000
1/Acido Araquidonico (1/mM)
Del gráfico anterior con inhibidor obtenemos la ecuación: y=0.0203x+0.0194
Según el gráfico podemos calcular Vmax de la siguiente manera:
1
b=
V max
1 1 mM
V max = =
b 0.0194
=51.55 ( )
min
Para calcular KM utilizamos la pendiente del gráfico:
KM
m=
V max
KM =m∗V max =( 0.0 203 ) ( 51.55 )=1.465 mM /L
En este problema KM sin inhibidor es menor que la resultante de KM con el inhibidor
(0.598 mM/L a 1.465 mM/L). El valor de Vmax permanece constante tanto en el
gráfico con inhibidor como sin inhibidor (51.55 mM/min). Podemos establecer que el
efecto sobre la cinética enzimática es de inhibición competitiva simple.
