Extracción en fase sólida.

SEPARACION DE COLORANTES SINTÉTICOS

GUERRERO ROBLES, NATIVIDAD

* Departamento de Química Orgánica de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Instituto Politécnico Nacional

RESUMEN

La extracción en fase solida es una técnica que se aplica para purificar las muestras
mezcladas, se requiere poca cantidad de muestra y de disolvente y los rendimientos son
muy altos.

Para el presente esperimento se utilizo una columna SPE consistente en un lecho de

adsorbente de partículas gruesas mantenido entre dos discos porosos en un tubo
desechable, este permite la preconcentración de la muestra con un riesgo mínimo de
pérdida o contaminación de la misma.

El componente de interés resulta retenido en una fase sólida mientras que los
contaminantes de la matriz se eluyen.

INTRODUCCION

La separación de los compuestos presentes en una muestra se basan en los principios

que rigen las técnicas cromatografías. La técnica consiste en aplicar una muestra disuelta
en un disolvente apropiado sobre un cartucho de polipropileno que contiene un
adsorbente. La elección del adsorbente dependerá del tipo de solvente que se desea
separar y de la matriz en la que se encuentre , generalmente se trata de gel de sílice o
gel de sílice modificado con grupos polares, no polares o iónicos.

La cromatografía es una técnica analítica que permite separar compuestos que se

encuentran formando una mezcla compleja. Todas las formas de cromatografía constan
de dos fases, una fase móvil y otra estacionaria . La técnica de cromatografía puede ser
definida como un proceso de migración diferencial de los componente de la mezcla
porque son detenidos en grados diferentes por la fase estacionaria.

1
PRACTICA 3

Cuando una muestra y la fase móvil son forzados a atravesar la fase estacionaria, entran
en juego distintos tipos , de interacciones moleculares de cada uno de los componentes:
Interacciones hidrofobias, interacciones de puente de hidrogeno, interacciones dipolares
e interacción electrostáticas las cuales son responsables de la mayor o menor afinidad
de cada uno de los componentes de la muestra por la fase móvil o por la fase
estacionaria. Así, el componente mas afín a la fase móvil se retiene menos y eluye antes.

Las técnicas de cromatografías se

clasifican según:
OBJETIVO
a) La forma en que se ponen en
contacto la fase estacionaria y la
fase móvil:
Nuestro objetivo es separar una mezcla
b) Según el mecanismo de de colorante sintéticos que se usan en
separación implicado: alimentos, por extracción de fase sólida,
Cromatografía de adsorción o aplicando la cromatografía en fase
liquido-solido, cromatografía de reversa.
adsorción o de partición (liquido-
Comprobar eficiencia de la separación
líquido y de fases unidas
por medio de la cromatografía en capa
químicamente), cromatografía de
fina sobre gel de sílice.
intercambio iónico, cromatografía
de exclusión, y cromatografía de
afinidad.
METODOS Y MATERIALES
c) Estado físico de las fases:
Cromatografía de líquidos, gases Para poner de manifiesto el método de
y de fluidos supercríticos. extracción en fase sólida, se realizó la
utilización de dos operaciones unitarias
d) Según la polaridad relativa de la distintas, una basada en los
fase móvil y de la fase fundamentos de la cromatografía y el
estacionaria implicadas , en el grado de retención del analito, para su
método cromatografico : separación y otra que es la extracción
cromatografía en fase normal y aplicada tanto en la retención como en la
reversa. En la fase normal, el elución posterior de este en la fase
componente menos polar eluye sólida.
primero y el aumento en la
polaridad de la fase móvil, Material por quipo:
disminuye el tiempo de elución.
en fase reversa, el componente Unas pinzas universales con nuez
10 tubos de ensayo de 10 mL
más polar avanza primero y un
1 probeta de 10 mL
aumento en la polaridad en la 1 vaso de precipitados de 100 mL
fase móvil, aumenta el tiempo de
elución.

3
1 columna cromatografía empacada con 1 evaporador rotatorio con bomba de
500 mg de fase solida de gel de sílice vacío.
modificada con octadecilo
1 soporte de fierro 1 gradilla REACTIVOS.
4 pipetas graduadas de 5 mL por 20 mL Metanol (R.A.)
sección. 20mL Mezcla Metanol/agua (50:50)
1 capilar de vidrio. 20 Ml Acido acético glacial.
1 cámara de cromatografía. 1 mL de mezcla de colorantes sintéticos
1 placa de cromatografía de gel de sílice para alimentos al 0.01 % en agua
de 3x 5 cm. 10 mL Metanol al 10 % en agua
4 mL Butanol (R.A.)
APARATOS POR GRUPO 50mL Agua destilada.
Lámpara de luz ultravioleta de onda
corta (254 nm)

Diagrama de Flujo

COLUNMA SPE
ELUSION. Los colorantes adsorbidos
ACONDICIONAMIENTO: sujetar la sobre la gel de sílice modificada son
columna con una pinza a un eluidos con un gradiente de
soporte universal de tal forma . metanol/agua de la forma siguiente:
que este perpendicular. Pasar a primero 5 mL de metanol al 10 %,
través de la columna 5 mL de seguido de 15 mL de metanol al 50% y
metanol, al termino de esto y finalmente 10 mL de metanol A.A.
sin dejar secar la columna. colectar eluatos de 5mL. Terminada la
Agregar 5mL de agua destilada elución de la columna, comprobar la
y desechar estos eluatos.

APLICACIÓN DE LA MUESTRA:
una vez que han pasado los 5mL
de agua ,agregar 1 mL de la
CROMATOGRAFIA EN CAPAFINA
mezcla de colorantes.

Sobre una placa de cromatografía de

gel sílice 3 X % cm, marcar con lápiz
una línea tenue a una distancia de
LAVADO. Los compuestos no 0.5 cm del borde inferior de la placa,
adsorbidos sobre la gel de sílice señalar 4 puntos equidistantes y
modificada, se lavan con numerarlos.
suficiente agua hasta que el
eluato este incoloro. En el numero 1 aplicar la muestra de
colorante en el numero 2, 3 4, aplicar
los eluatos obtenidos anteriormente,
dejar secar y eluir en la cámara
cromatografía, saturada previamente
3
con la fase móvil, formada por:
butanol /acido acético /agua (4:2:1)
hasta 0.5 cm. Antes del borde
superior de la placa cromatografía.
PRACTICA 3

Por lo que se deduce que el rojo #3

es un compuesto orgánico no tan
polar como lo es la trartracina y de
mayor afinidad hacia la fase
orgánica, unida a la fase estacionaria
de la columna.

2. Para el caso de la cromatografía

en capa fina, se observa la
elución primeramente del rojo #3
y una mayor retención de la
tartrazina quedando esta mas
cerca del punto de aplicación de
estos, por lo que se reitera que la
trartracina es un compuesto mas
polar ya que tiene mayor afinidad
por la fase estacionaria que esta
vez es polar, y te el rojo #3 es un
compuesto de carácter menos
polar que eluye a una velocidad
similar al disolvente no tan polar,
el cual contiene butanol/ac.
acetico/agua (4:2:1)

Mancha Rf

Mezcla de .
colorantes 175-.663
Eluato al 10% ---
Eluato al 50% .70
Eluato metanol RA .7125

RESULTADOS
Cromatograma
1. El orden de elución de los
colorantes presentes en la
mezcla, en la columna de SPE fue
primero la tartrazina y
posteriormente el rojo #3,
viéndose el primer eluyente
amarillo y el segundo un rojo
intenso.

3
 CUESTIONARIO:

a) Definir los siguientes conceptos

ELUIR separación por medio de un

lavado progresivo con un liquido
3. Para la realización de los apropiado, de substancias absorbidas
espectros de absorbancia de los por un cuerpo.
eluatos, solo pudimos ealizar la
del eluyente 50% metanol, 50% ELUYENTE sustancia (puede ser puro,
agua obteniendo la siguiente mezcla de varias o disolución) que se
grafica: añade en una columna cromatografía
para "hacer correr" nuestro producto de
GRAFICO 1 Elusión de colorantes con metano/agua
50%
interés.

ELUATO sustancia que se separa o sale

de la columna después de cada
DESCRIP 1 Curva tipo de absorbancias obtenidas extracción.
de la elusión de la mezcla de colorantes (tartrazina
y rojo # 3) con metanol-agua 5o%, a intervalos de
longitud de onda de 5 nm. EXCLUCION La cromatografía de
exclusión molecular, también conocida
Encontrando que la absorbancia máxima como cromatografía por filtración en gel,
de este segundo eluato es a los 523nm, separa las partículas de la muestra en
muy cercano al del compuesto Rojo #3 función de su tamaño. Generalmente se
(527nm reportado para este trata de una cromatografía de baja
experimento) resolución de forma que se suele utilizar
en los pasos finales del proceso de
purificación. También es muy útil para la
CONCLUSIONES determinación de la estructura terciaria
y la estructura cuaternaria de las
• Se observa en la técnica de proteínas purificadas.
extracción en fase solida un
método útil, practico, económico INTERCAMBIO IONICO En la
y eficaz para la separación y cromatografía de intercambio iónico, la
purificación de componentes de retención se basa en la atracción
una mezcla liquida basado en electrostática entre los iones en solución
fenómenos de interacción y las cargas inmovilizadas a la fase
intermoleculares como lo son estacionaria. Los iones de la misma
fuerzas de London, Van der carga son excluidos mientras que los de
Waals, grado de solubilidad y del carga opuesta son retenidos por la
coeficiente de partición. columna.

5
PRACTICA 3

FLUIDO SUPERCRITICO. es cualquier – una introducción. Merck .

sustancia que se encuentre en España.
condiciones de presión y temperatura
superiores a su punto crítico. • http://www.ucm.es/info/ucmp/con
t/descargas/documento15962.pdf
Poseen unas propiedades típicas, lo que
habitualmente se denomina como “un
híbrido entre un líquido y un gas”, es
decir, puede difundir como un gas, y
disolver materiales como un líquido. Los
FSC se caracterizan por el amplio rango
de densidades que pueden adoptar. Por
encima de las condiciones críticas,
pequeños cambios en la presión y la
temperatura producen grandes cambios
en la densidad.

BIBLIOGRAFIA

• K. Bauer, L. Gros y W. Sauer.

1992. Cromatografia de capafina

3