PRÁCTICA 5.
DETERMINACIÓN DEL COEFICENTE CONVECTIVO DE
TRANSFERENCIA DE OXÍGENO (kLa) Y DEL COEFICIENTE DE
CONSUMO DE O2 POR MICROORGANISMOS (QO2)
OBJETIVO
Obtener experimentalmente los valores de coeficiente de transferencia de O 2 aparente (kLa) en
agua destilada, así como el kLa y el coeficiente respiratorio (QO2) de un cultivo microbiano.
INTRODUCCIÓN
Los organismos aerobios requieren oxígeno para el desarrollo de sus funciones vitales
(crecimiento, reproducción, etc.) y para la obtención de energía. En el cultivo sumergido, el oxígeno
disponible para los microorganismos se encuentra disuelto en el agua (o en el medio de cultivo). El
buen desarrollo de los cultivos microbianos depende, entre otros factores, de la concentración de
O2 disuelto. El O2 se disuelve por el contacto del aire con la superficie del agua, hasta alcanzar el
punto de saturación, que depende de la temperatura y de la concentración de solutos disueltos en
el agua. Así, a 0 °C, el punto de saturación de O2 disuelto en agua pura es de 14.8 ppm. Esta
concentración disminuye al aumentar la temperatura del agua, por ejemplo, a 15 °C la
concentración de O2 disuelto es de 10.4 ppm.
Existen dos aspectos importantes de considerar en los sistemas aireados. La demanda de O 2 por
los microorganismos y la limitación que impone su transferencia desde las burbujas de gas hacia el
líquido y posteriormente hacia los microorganismos. La magnitud del coeficiente de transferencia
de O2 (kLa) y del coeficiente respiratorio (o demanda de oxígeno, QO 2), indicará las limitaciones del
proceso y dará la pauta para resolver problemas de diseño y escalamiento de bioprocesos. Ambos
coeficientes pueden determinarse mediante el método dinámico en pequeños intervalos de tiempo
durante el estado transitorio en un fermentador, para lo cual se requiere registrar el cambio de
concentración del O2 disuelto (OD) con respecto al tiempo.
El coeficiente de transferencia de O2 (kLa), es una medida de la capacidad de transferencia de O 2
en un reactor e interviene directamente en su productividad. El valor de k La depende de muchos
factores, entre los cuales se pueden mencionar la capacidad de aireación, la operación y
geometría del reactor, así como de la composición del medio de cultivo. El k La se puede calcular en
un sistema abiótico a partir de la ecuación de balance de O2
dc/dt = (kLa) (CS* - CL) Ecuación 1
Donde:
CS* es la concentración de O2 disuelto en la saturación
CL es la concentración de O2 disuelto en el seno del líquido en un tiempo dado
La demanda de O2 de los microorganismos para la respiración es un indicador de la actividad
microbiana. Este coeficiente respiratorio puede ser calculado en un cultivo microbiano junto con el
kLa mediante la siguiente ecuación de balance:
dC/dt = (kLa) (CS* - CL) - QO2 X Ecuación 2
Donde:
dC/dt = cambio de concentración de oxígeno con el tiempo, mg O 2/L h
-1
kLa = coeficiente convectivo de transferencia de masa, t
CS* es la concentración de O2 disuelto en la saturación, mg/L
CL es la concentración de O2 disuelto en el seno del líquido en un tiempo dado, mg/L
QO2 = coeficiente respiratorio, mg O2/ g células h
X = biomasa, g/L
MATERIAL
Parte A
MATERIAL REACTIVOS
1 vaso de precipitados de 2 L Fluido: agua destilada
EQUIPO
1 reactor con medidor y electrodo de O2 disuelto
1 tanque de nitrógeno con regulador
Parte B
MATERIAL EQUIPO
1 vaso de precipitados de 2 L 1 reactor con medidor y electrodo de O2 disuelto
1 termómetro
1 desecador Cultivo viable de Saccharomyces cerevisiae
pinzas Bomba de vacío
2 Discos de fibra de vidrio Horno de calentamiento a 70 C
1 Matraz quitasato de 125 mL
PROCEDIMIENTO
I. Calibración del electrodo de oxígeno
Previo al desarrollo de la práctica, se debe calibrar el electrodo de oxígeno disuelto (OD) con agua
destilada. El procedimiento es el siguiente.
a. Calibrar a cero el electrodo, para lo cual se deberá eliminar completamente el OD del agua.
Esto se puede lograr mediante la adición de sulfito o a través del desplazamiento del
oxígeno con una corriente de nitrógeno.
b. Esperar a que el registrador de OD se estabilice en el valor más bajo.
c. Una vez estable, ajustar en el registrador el cero electrónico. Esto se realiza con un
desarmador.
d. Ya calibrado el cero, se procede a calibrar el 100% de OD, para lo cual se airea el fluido.
Se espera a que el registrador se estabilice en el valor máximo y se ajusta al 100%
electrónico.
II. Determinación del kLa aparente
Para determinar el kLa aparente se realiza el siguiente procedimiento:
a. Llenar el reactor con 2 L de agua destilada.
b. Establecer una velocidad de agitación (100 – 700 rpm) y un flujo de aireación de trabajo
(996 – 2469 mL/min).
c. A las condiciones de experimentación establecidas, registrar la concentración de OD
mediante el electrodo, usando varios intervalos de tiempo durante al menos 2 min. Esta
zona corresponderá a la Zona I.
d. Cortar el suministro de aire al reactor.
e. Remover el OD en el agua hasta alcanzar 0% (con adición de sulfito o por desplazamiento
con una corriente de nitrógeno). Registrar la concentración de OD a varios intervalos de
tiempo hasta alcanzar el cero. Esta zona corresponderá a la Zona II.
f. Reanudar la agitación y suministrar nuevamente aire al fermentador y registrar la
concentración de OD a varios intervalos de tiempo y hasta alcanzar al menos 90% de la
saturación. Esta zona corresponderá a la Zona III.
-1
g. Calcular el kLa [h ] mediante la gráfica logarítmica de la concentración de OD (ln1-CL/C*L)
contra el tiempo (utilizar los datos obtenidos en la zona III), de manera que:
ln(1-CL/C*L) = - kLa t
h. Repetir los pasos (b) - (g) usando el mismo volumen de agua con otra velocidad de
agitación y flujo de aire para los mismos tiempos.
III. Determinación dinámica del kLa y QO2 de un cultivo microbiano
1. Preparar 2 L de medio de cultivo para Saccharomyces cerevisiae (Anexo I). Inocular el reactor
con 1 g/L de levadura seca y operar el reactor con agitación y aireación.
2. Medir el kLa y QO2 de la siguiente forma:
a. Establecer un flujo de aire (996 – 2469 mL/min) y una velocidad de agitación (100 – 700
rpm). En este momento se registra la concentración de OD en el reactor, la cual se
mantendrá constante a varios intervalos de tiempo durante al menos 2 min (Zona I).
b. Suspender el flujo de aire y la agitación. Registrar la concentración de OD en el reactor con
respecto al tiempo hasta alcanzar un valor cercano a la concentración crítica de oxígeno
para este microorganismo. Es importante registrar estos datos en intervalos de tiempo no
mayores a 10 segundos (Zona II).
c. Reanudar la aireación y la agitación hasta restablecer una concentración de OD similar a la
inicial (Zona I). Registrar el aumento en intervalos de tiempo de 3 a 5 seg (Zona III).
d. Repetir los pasos (a) - (c) usando el mismo cultivo con otra velocidad de agitación y flujo de
aire para los mismos tiempos.
IV. Determinación de biomasa
a. Poner a peso constante el papel filtro en una estufa a 70°C.
b. Dejar enfriar el papel filtro en un desecador y tomar el peso final.
c. Filtrar a vacío un volumen conocido (35 mL) de la muestra a través del papel filtro a peso
constante.
d. Meter el papel filtro con la biomasa a la estufa a 70°C durante 24 h.
e. Dejar enfriar en un desecador y determinar el peso seco de cada papel filtro con biomasa.
f. Calcular la concentración de biomasa (peso seco) para cada muestra, mediante la relación
de pesos entre el papel filtro con y sin biomasa. Para calcular la concentración de biomasa,
debe relacionarse el peso seco de la biomasa con el volumen de suspensión filtrado.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
1. Presentar las figuras de CL vs tiempo para cada condición de trabajo.
2. Reportar en la Tabla 14 los valores de k La aparentes.
3. Presentar las figuras de CL vs tiempo para cada condición de trabajo. Determinar el valor de
kLa (utilizando los datos de la zona III) y QO 2 (utilizando los datos de la zona II), mediante el
método dinámico y numérico. Presentar los datos en la Tabla 15.
4. Comparar los valores de QO2 obtenidos experimentalmente con los valores reportados en la
literatura para levaduras y discutir las diferencias.
5. Discutir los resultados comparando con lo reportado en la literatura.
Tabla 14. Valores de kLa aparentes a diferentes velocidades de agitación y flujos
de aireación.
Reactor 1 Reactor 2
Vel. de agitación
Flujo de aire (mL/min)
(rpm)
Q1 = 996 Q2 = 2469 Q1 = 996 Q2 = 2469
N1 = 100
N2 = 400
N3 = 700
Tabla 15. Valores de kLa y QO2 a diferentes velocidades de agitación y flujos de
aireación.
Reactor 1 Reactor 2
Vel. de agitación
Flujo de aire (mL/min)
(rpm)
Q1 = 1480 Q2 = 2469 Q1 = 1480 Q2 = 2469
N1 = 300
N2 = 500
N3 = 700
CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se afecta el valor del kLa con respecto a la agitación?
2. ¿Cómo se puede aumentar el valor del k La en un reactor?
3. ¿Qué métodos experimentales existen para determinar el k La y QO2, cuál es su principio y
cuáles son sus ventajas y desventajas?
4. Diga qué correlaciones teóricas se pueden utilizar para el cálculo del k La.
5. Si la cinética de consumo de oxígeno por los microorganismos siguiera una cinética de tipo
Monod, explique cómo sería la ecuación que describa este comportamiento y qué significado
tendrían los parámetros incluidos.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
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