RESUMEN
En la práctica de laboratorio se observó las propiedades de las proteínas
logrando dicha manera poder identificarlas. Se inició la práctica empleando 2
ml de albumina, se añadió 2 gotas de hidróxido de sodio (NaOH al 20%), se
agito la mezcla, luego se añadió 2 gotas de sulfato de cobre (CuSO4 al 0.5%),
observamos que la solución tuvo una consistencia muy viscosa y de tonalidad
blanco lechoso. Consecutivamente, se hizo reaccionar a 2 ml de albumina con
3 gotas de ácido nítrico concentrado, después se calentó dicha mezcla,
notamos que la dicha mezcla cambio de coloración a una tonalidad violeta.
Posteriormente, se empleó 2 ml de albumina, se añadió 3 gotas de Ninhidrina,
se calentó en baño maría, se notó que la mezcla viro a una tonalidad azul
intenso. Consecutivamente, se usó 2 ml de albumina se agito fuertemente con
lo cual la solución se volvió bifásica, en la parte superior presentaba una
tonalidad blanquecino lechoso y en la parte inferior transparente blanquecino.
Después, se calentó en baño maría 2 ml de albumina, se visualizó que mezcla
se volvió bifásica, la parte superior de consistencia viscosa y tonalidad blanco
lechoso y la parte inferior transparente blanquecino. Posteriormente, se usó 2
ml de albumina se le añadió 10 gotas de éter, la solución se tornó a una
tonalidad blanco lechoso. Consecutivamente, se empleó 2 ml de albumina, se
añadió 10 gotas de sulfato de cobre, notamos que la mezcla se tornaba una
tonalidad celeste blanquecino. Posteriormente, se hizo reaccionar 2 ml de
albumina, se añadió 10 gotas de ácido clorhídrico, observamos que en dicha
mezcla se formó un precipitado blanquecino.
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INDICE
1. INTRODUCCION ................................................................................................................ 3
2. PRINCIPIOS TEÓRICOS .................................................................................................. 4
3. DETALLES EXPERIMENTALES ..................................................................................... 5
3.1. IDENTIFICACION DE PROTEÍNAS ........................................................................ 5
3.2. REACCIÓN XANTOPROTEICA ............................................................................. 5
3.3. REACCIÓN CON LA NINHIDRINA ........................................................................ 6
3.4. REACCIONES DE DESNATURALIZACION DE PROTEINAS ........................... 6
4. REACCIONES QUIMICAS................................................................................................ 9
5. DISCUSION DE RESULTADOS .................................................................................... 10
6. CONCLUSIONES ............................................................................................................. 12
7. RECOMENDACIONES.................................................................................................... 13
8. APENDICE ........................................................................................................................ 14
9. BIBLIOGRAFIA ................................................................................................................. 17
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1. INTRODUCCION
Las proteínas son biopolímeros de α-aminoácidos, su composición
consta de carbono, hidrógeno, nitrógeno y oxígeno además de otros
elementos como azufre, hierro, fósforo y cinc. Las proteínas suponen
aproximadamente la mitad del peso de los tejidos del organismo, y están
presentes en todas las células del cuerpo, además de participar en
prácticamente todos los procesos biológicos que se producen. Las
propiedades físicas y químicas de las proteínas se determinan a partir de
los aminoácidos que las forman. Las proteínas son las moléculas
orgánicas más abundantes en los animales, y juegan un papel
importante en todos los aspectos de la estructura y funciones de la
célula.
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2. PRINCIPIOS TEÓRICOS
Las proteínas son moléculas formadas por aminoácidos que están unidos
por un tipo de enlaces conocidos como enlaces peptídicos, poseen
una estructura química central que consiste en una cadena lineal
de aminoácidos plegada de forma que muestra una estructura
tridimensional, esto les permite a las proteínas realizar sus funciones. En
las proteínas se codifica el material genético de cada organismo y en él
se especifica su secuencia de aminoácidos, estas secuencias de
aminoácidos se sintetizan por los ribosomas. Existen 20 aminoácidos
diferentes que se combinan entre ellos de múltiples maneras para formar
cada tipo de proteínas. Los aminoácidos pueden dividirse en 2
tipos: Aminoácidos esenciales que son 9 y que se obtienen de alimentos
y aminoácidos no esenciales que son 11 y se producen en nuestro
cuerpo.
Las proteínas desempeñan un papel fundamental en el organismo.
Son esenciales para el crecimiento, gracias a su contenido de nitrógeno, que
no está presente en otras moléculas como grasas o hidratos de carbono.
También lo son para las síntesis y mantenimiento de diversos tejidos o
componentes del cuerpo, como los jugos gástricos, la hemoglobina, las
vitaminas, las hormonas y las enzimas (estas últimas actúan como
catalizadores biológicos haciendo que aumente la velocidad a la que se
producen las reacciones químicas del metabolismo).
Otras funciones más específicas son, por ejemplo, el colágeno, cuya función
de resistencia lo hace imprescindible en los tejidos de sostén o la miosina y
la actina, dos proteínas musculares que hacen posible el movimiento, entre
muchas otras.
Las dos propiedades principales de las proteínas, que permiten su existencia
y el correcto desempeño de sus funciones son la estabilidad y la solubilidad.
La primera hace referencia a que las proteínas deben ser estables en el
medio en el que estén almacenadas o en el que desarrollan su función, de
manera que su vida media sea lo más larga posible y no genere
contratiempos en el organismo. En cuanto a la solubilidad, se refiere a que
cada proteína tiene una temperatura y un pH que se deben mantener para
que los enlaces sean estables.
Las proteínas tienen también algunas otras propiedades secundarias, que
dependen de las características químicas que poseen. Es el caso de la
especificidad (su estructura hace que cada proteína desempeñe una función
específica y concreta diferente de las demás y de la función que pueden
tener otras moléculas), la amortiguación de pH (pueden comportarse como
ácidos o como básicos, en función de si pierden o ganan electrones, y hacen
que el pH de un tejido o compuesto del organismo se mantenga a los niveles
adecuados) o la capacidad electrolítica que les permite trasladarse de los
polos positivos a los negativos y viceversa.
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3. DETALLES EXPERIMENTALES
3.1. IDENTIFICACION DE PROTEÍNAS (Reacción de Biuret)
En un tubo de ensayo se colocó 2 ml de Albúmina al 10 %, luego
se agregó 2 gotas de NaOH AL 20 %, se mezcló bien y
finalmente se añadió 2 gotas de CuSO4 al 0.5 %, se volvió a
agitar y se observó la aparición de una coloración violeta lo cual
se debe a la formación de una sustancia compleja llamada
biuret.
Fig. 1 Albúmina
Fig. 2 Albúmina + NaOH
3.2. REACCIÓN XANTOPROTEICA
En un tubo de ensayo se colocó 2 ml de la solución de Albúmina
al 10%, luego se añadió 3 gotas de Ácido Nítrico concentrado,
luego se calentó la muestra y se observó una coloración amarilla
esto debido a la formación de un compuesto aromático nitrado.
Fig. 3 Ácido nítrico (HNO3) Fig. 4 Albúmina + HNO3
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3.3. REACCIÓN CON LA NINHIDRINA
En un tubo de ensayo se colocó 2 ml de la solución de Albúmina
al 10 %, luego se agregó 3 gotas de Ninhidrina al 0.1 %, se
procedió a calentar en baño maría y se observó la coloración
azul que evidencia la formación de un complejo.
Fig. 5 Ninhidrina Fig. 6 Albúmina + Ninhidrina
3.4. REACCIONES DE DESNATURALIZACION DE PROTEINAS
En un tubo de ensayo se colocó 2 ml de la solución de
Albúmina al 10 %, luego se agitó la muestra y se observó lo
siguiente:
Fig. 7 Agitación de la albúmina
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En un tubo de ensayo se colocó 2 ml de la solución de
Albúmina al 10 %, luego se le calentó en baño maría y se
observó lo que sucedió.
Fig. 8 Calentamiento
de la albúmina
En un tubo de ensayo se colocó 2 ml de la solución de
Albúmina al 10 %, luego se le añadió 10 gotas de Éter y
se observó lo que sucedió.
Fig. 9 Albúmina + Éter
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En un tubo de ensayo se colocó 2 ml de la solución de
Albúmina al 10 %, luego se le añadió 10 gotas de CuSO4 y
se observó que sucedió.
Fig. 10 Albúmina + CuSO4
En un tubo de ensayo se colocó 2 ml de la solución de
Albúmina al 10 %, luego se le añadió 10 gotas de HCl y se
observó lo que sucedió.
Fig. 11 Albúmina + HCl
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4. REACCIONES QUIMICAS
Reacción de Buiret
Reacción Xantoproteica
Reacción Ninhidrina
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5. DISCUSION DE RESULTADOS
¿Cómo se da el mecanismo de la reacción xantoproteica para la
identificación de las proteínas?
La reacción es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado
de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico
concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con
aminoácidos portadores de grupos bencénicos, especialmente en
presencia de tirosina. La fenilalanina, la tirosina y en cierto grado el
Triptófano, así como todas las proteínas que los contienen, dan positiva
la prueba.
¿Cuál es agente que realiza la reacción de Biuret?
Los agentes que la producen los péptidos y las proteínas, pero no los
aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (- CO-
NH -) que se destruye al liberarse los aminoácidos.
Se forma una sustancia compleja denominada Biuret, que en contacto
con una solución de sulfato cúprico diluida, da una coloración violeta1
característica.
Hidróxido de Sodio no participa en la reacción, pero proporciona el
medio alcalino necesario para que tenga lugar.
¿Qué sucede si no da positivo para la prueba Biuret y positivo en la
ninhidrina?
La prueba de ninhidrina se produce una reacciona con todos los
aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una
coloración que varía de azul a violeta intenso. Este producto colorido se
estabiliza por resonancia, la coloración producida por la ninhidrina es
independiente de la coloración original del aminoácido.
En aquellos casos donde no da positiva la prueba de Biuret y da positiva
la de ninhidrina, indica que no hay proteínas, pero si hay aminoácidos
libres.
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Vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta.
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Para el caso de la desnaturalización ¿Cuáles son las condiciones que
damos a la reacción y qué es lo que buscamos con este proceso?
Las condiciones que tomamos en cuenta para analizar la
desnaturalización2 son dos: el calor y pH extremos.
Se forma un conjunto de cadenas polipeptídicas con distinto grado de
plegamiento. La desnaturalización no significa que siempre se obtenga
la cadena polipeptidica totalmente desplegada. Los productos de
desnaturalización en solución se agregan físicamente y según las
condiciones de pH y fuerza iónica, precipitan.
El objetivo de elegir un paso de purificación desnaturalizante es crear las
condiciones donde la proteína de interés no se desnaturalice mientras
que los otros componentes se desnaturalicen y precipiten.
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Una pérdida de la estructura tridimensional suficiente para causar pérdida de la función se llama
desnaturalización.
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6. CONCLUSIONES
En la reacción de Biuret se pudo verificar la presencia de proteína
debido a la formación de un complejo de coordinación con enlace
peptídicos, este complejo se identifica por el color violeta final de la
solución.
En la reacción xantoproteica se lleva a cabo por la formación de un
compuesto aromático nitrado de color amarillo. Por lo tanto la prueba da
resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de
grupos bencénicos
El calor y el pH extremos, varían la reacción de desnaturalización y la
proteína de interés no se desnaturalizo mientras que los otros
compuestos sí.
Por ultimoen la reacción de la ninhidrina se va a llevar acabo cuando
haya aminoácidos.
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7. RECOMENDACIONES
Evitar el contacto directo con los ácidos o bases concentradas, de
preferencia realizar dichas experiencias campana.
Evitar la exposición al calor de la albumina, para que no ocurra errores
en los resultados.
Evitar el sobre calentamiento de las reacciones que requieran calor,
dado que una sobre exposición adulteraría los resultados.
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8. APENDICE
Apéndice 1 Estructura de la Ninhidrina (C9H6O4) Apéndice 2 Estructura del Biuret (C2H5N3O2)
CUESTIONARIO
1. ¿Qué otras pruebas de coloración se utilizan para reconocer
proteínas? Fundamento de ellas
Reacción de Hopkins Cole: es una prueba estándar para el triptófano
y para las proteínas que contienen triptófano. Al realizar la reacción
de la muestra de proteínas en medio ácido sulfúrico concentrado,
frente al ácido glioxilico (Reactivo de Hopkins-Cole) aparece color
violeta en la interface solución H2SO4, debido a la formación de un
colorante similar al índigo. La reacción es positiva cuando los prótidos
poseen aminoácidos con núcleo indólico (Triptófano).
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Reconocimiento de aminoácidos que poseen azufre: Los aminoácidos
sulfurados se descomponen al tratarlos con solución de NaOH en
caliente, formando sulfuro de sodio como producto. Éste se pone en
evidencia acidificando con un ácido concentrado y colocando en la
boca del tubo un papel mojado con acetato de Pb, Se observa la
formación de un sólido negro-amarronado de sulfuro de plomo.
Reacciones para cistinas y cisteínas: Cuando las proteínas que
contienen grupos tiólicos se calientan en medio fuertemente alcalino,
el azufre presente reacciona para formar sulfuros. Este sulfuro puede
detectarse por la formación de un precipitado negro de sulfuro de
plomo por adición de acetato de plomo. Los grupos tioles también
reaccionan con el nitroprusiato de sodio en presencia de un exceso
de amoníaco para dar un complejo de color rojo.
Prueba de Ehrlich: La presencia de anillos aromáticos fenólicos o
nitrogenados en la cadena lateral de los aminoácidos se puede
identificar mediante la reacción con ácido sulfanílico y nitrito de Sodio
por formación de sales de Diazonio fuertemente coloreadas
permitiendo así detectar la presencia de Histidina libres o formando
péptidos y proteínas. El resultado positivo de esta prueba se puede
evidenciar con un color rojo o vino tinto
2. ¿Cómo se desnaturalizan las proteínas por acción de metales pesados?
Cuando se adiciona Sulfato de cobre en la muestra de clara de huevo
se forma una precipitación de coloración azul, esto a causa de la
presencia de Cobre (metal pesado) en el reactivo, por tanto al haber
presencia de iones metálicos se neutralizaron las cargas aniónicas de
los grupos esenciales de la proteína causando una precipitación
debido a la desestabilización de esta.
3. ¿Por qué se coagulan las proteínas con el calor?
Cuando la temperatura es elevada aumenta la energía cinética de las
moléculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las
proteínas, y se desnaturalizan. Asimismo, un aumento de la
temperatura destruye las interacciones débiles y desorganiza la
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estructura de la proteína, de forma que el interior hidrofóbico
interacciona con el medio acuoso y se produce la agregación y
precipitación de la proteína desnaturalizada.
4. ¿Qué es una emulsión y cuál es su importancia para la vida?
Una emulsión es un líquido lácteo que contiene en suspensión
pequeñas partículas o gotas de otras sustancias insolubles en ella
también se le denomina como mezcla de dos líquidos inmiscibles de
manera poco homogénea
EN LA MEDICINA: Las emulsiones microscópicas son usadas para
distribuir vacunas y matar microbios
EN LA CONSTRUCCIÓN DE CARRETERA: se usan emulsiones
catiónicas y anionicas que disminuyen las huellas a altas
temperaturas y aumentan la elasticidad a bajas (impermeabilidad de
la superficie)
FABRICACIÓN DE PINTURA: emulsión acrílica permite dar un
aspecto especial
EN LA INDUSTRIA DEL CALZADO: da propiedades de adhesión y
resistencia al lavado.
5. ¿Si calentamos una solución de ovoalbúmina, y posteriormente le
añadimos NaOH y sulfato de cobre? ¿Qué resultados se obtiene? ¿A
qué se debe?
Se obtiene una muestra de color violeta esto se debe a que la
proteína se hidrolizado y el sulfato rompe el enlace peptídico
formando un complejo
6. ¿Se puede renaturalizar una proteína?
Esto depende del grado de modificación de las estructuras ,aunque
esto se puede realizar modificaciones algunos casos este proceso
demora horas , hasta días ya que la reconstrucción es un proceso
donde la proteína no retoma su forma original inmediatamente y en
algunos casos se puede obtener estructuras distintas a la original o
con características diferentes.
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9. BIBLIOGRAFIA
CAREY F. A. “Química orgánica” Edit. Mc. Graw Hill. 6ta Edición. (2006) Pág.
1123
BROWN, LEMAY, BURSTEN “Química, la ciencia central” Edit. Pearson
Education. 9na Edición. (2004) Pág. 1012
CHANG R. “Química” Edit. Mc. Graw Hill. 11 Edición. (2013) Pág. 1067
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