UNIVERSIDAD POLITECNICA SALESIANA
INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA
INTRODUCCION A LA BIOTECNOLOGIA
INTEGRANTES: FECHA: 09-07-2019.
DENISSE CHASI GRUPO: 3.
NICOLAY NEIRA
CRISTIAN RECALDE
SEBASTIAN CHAMORRRO
PRACTICA N°7
TEMA: ELECTROFORESIS EN GELES DE
AGAROSA
OBJETIVO GENERAL:
- Ejecutar la técnica de electroforesis horizontal en geles de agarosa.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
- Conocer acerca del uso, manejo y utilización de materiales y reactivos
adecuados para la preparación de geles de agarosa.
- Dominar el proceso de una Electroforesis Horizontal.
- Realizar un corrido electroforético en geles de agarosa.
MARCO TEÓRICO:
La electroforesis es una técnica que permite separar moléculas cargadas eléctricamente,
entre las cuales se encuentran los ácidos nucleicos (DNA y RNA) o las proteínas. Las
proteínas pueden tener carga neta positiva o negativa, los ácidos nucleicos tienen carga neta
negativa debido a sus grupos fosfato, de forma que la carga del ácido nucleico está
condicionada por el número de grupos fosfato. Durante la electroforesis, el movimiento de
las moléculas cargadas se hace a través de una matriz porosa (o gel), que está inmersa en un
medio acuoso. Bajo el campo eléctrico aplicado, las diferentes moléculas de la muestra se
mueven a través de la matriz a diferentes velocidades, de forma que al final de la
electroforesis las distintas moléculas se pueden diferenciar como bandas separadas a
distintas posiciones en la matriz. Dichas bandas se detectan mediante tinción o
autorradiografía, o pueden transferirse a una superficie membranosa.
Tipos de electroforesis
Dentro de las electroforesis que usan algún soporte (gel) se pueden distinguir entre
electroforesis vertical y electroforesis horizontal. Aparte de diferenciarse por la posición
que adopta cada cubeta, existen una serie de ventajas e inconvenientes para cada uno:
Electroforesis horizontal: En papel, para
aminoácidos u otras moléculas pequeñas; en soportes
similares (especialmente, acetato de celulosa), para
proteínas. En gel de almidón o de agarosa, para
proteínas y especialmente para ácidos nucleicos. Casi
siempre el tampón cubre el gel (para evitar que se
seque debido al calentamiento sufrido al pasar la
corriente), denominándose por ello “electroforesis
submarina”.
El soporte se impregna por capilaridad de disolución tampón, que disuelve la muestra y
mantiene el contacto eléctrico. Se aplica la muestra depositándola (con pipeta o un
aplicador específico) como una gota sobre el soporte (papel, acetato de celulosa) o dentro
de un “pocillo” creado en el gel.
Ventajas: Sencillez del aparato. Posibilidad de aplicar la muestra en cualquier zona del gel.
Desventaja: Carece de refrigeración.
Electroforesis vertical: Se usa casi
exclusivamente con gel de poliacrilamida (más
resistente físicamente, no se desliza), para proteínas
o para ácidos nucleicos de pequeño tamaño. El gel
puede rellenar tubos de vidrio (este formato ya
apenas se usa) o estar contenido entre 2 placas
rectangulares. Contacto eléctrico y disolvente gracias
al tampón que embebe el gel y llena las cubetas o
compartimentos del ánodo y cátodo. La muestra se
deposita con micropipeta llenando un “pocillo”
creado al
polimerizar el gel. En cuanto a la composición del gel hay dos variantes: electroforesis
continua (un solo tipo de gel) y electroforesis discontinua (2 tramos de gel de
composición ligeramente diferente).
Ventaja: Posible refrigeración.
Inconveniente: La muestra sólo se aplica en la parte superior del gel.
(Herráez, 2018)
Para la electroforesis horizontal se suelen usar geles de almidón o geles de agarosa,
mientras que para la electroforesis vertical se usan habitualmente geles de poliacrilamida.
En los geles de almidón se cargan muestras de proteínas, en los de agarosa se cargan ácidos
nucleicos (DNA y RNA), y en los geles de poliacrilamida tanto proteínas como ácidos
nucleicos. El gran inconveniente de los geles de almidón es la imposibilidad de definir el
tamaño del poro, mientras que, tanto en los geles de agarosa como en los de poliacrilamida
el tamaño del poro viene definido por la concentración a la que se hace el gel, a mayor
concentración menor tamaño de poro y viceversa; de forma que a mayor concentración,
aumenta la resistencia al paso de las moléculas a través del gel, y mayor será su
selectividad. La agarosa es un polisacárido originalmente obtenido de algas
(Rodofíceas), derivado del agar-agar, pero de composición más homogénea. El rango de
concentraciones normales de trabajo varía entre 0.4% y 4% (w/v), concentraciones por
fuera de este rango crearían propiedades mecánicas que haría inútil al gel, ya que por
encima del 4% los poros son demasiado pequeños como para que pase alguna molécula, y
por debajo del 0.4% son demasiado grandes como para poder discernir diferentes
moléculas. Las principales ventajas del uso de la electroforesis en gel de agarosa son su
simplicidad, versatilidad y el amplio rango de separación posible.
Condiciones de electroforesis y concentración de agarosa.
Existen cámaras electroforéticas de diferentes tamaños. Es importante recordar que los
ácidos nucleicos tienen carga negativa y se mueven hacia el electrodo positivo. Los
electrodos se distinguen por el color: el negro es el negativo y el rojo es el positivo, hacia el
que migran los ácidos nucleicos. La resolución de los geles de agarosa depende de su
concentración. Para cada concentración de agarosa existe un límite inferior y otro superior
de tamaño de DNA, fuera de los cuales no hay resolución y moléculas de distinto tamaño
migran igual, en los frentes del principio y del final.
Ello se debe a que por debajo de un determinado tamaño los poros del gel de agarosa no
frenan y no discriminan fragmentos diferentes de DNA, por otra parte, por encima de un
determinado tamaño los poros del gel de agarosa no frenan y no discriminan fragmentos
diferentes de DNA.
La resolución de los geles con las concentraciones más útiles de agarosa son las
siguientes: Los geles de 0.35% deben correrse en cámara fría y a bajo voltaje por ser muy
frágiles. Para tamaños menores de 0.15 kb debe usarse geles verticales de poliacrilamida o
geles horizontales de agarosas especiales modificadas. Los geles verticales de
poliacrilamida pueden resolver moléculas de DNA de 5 a 500 pb y distinguir diferencias de
tamaño de un solo nucleótido. Son los geles utilizados para secuenciación del DNA. Para
tamaños mayores de 50 kb debe usarse electroforesis de campo pulsante, en donde al
alternar la dirección del campo eléctrico las moléculas de DNA deben reorientarse
periódicamente y entonces la resolución aumenta hasta 2-10 Mb.
Moléculas intercalantes y Enzimas de Restricción
En la actualidad hay nuevas moléculas intercalantes fluorescentes que no tienen estos
potenciales efectos tóxicos para el ser humano, entre ellos: SYBR Safe, SYBR Gold, Red
Gel, Green Gel. En nuestro práctico utilizaremos Red Gel el cual además de no ser
mutagénico ni citotóxico es amigable con el medioambiente.
Las enzimas (o endonucleasas) de restricción son unas proteínas con acción catalítica que
tienen la propiedad de reconocer secuencias cortas, de unos cuatro o seis pares de bases en
el ADN de doble hebra, y cortar en todos los puntos donde se encuentre dicha secuencia.
Este lugar de corte se denomina diana de restricción. Cada enzima de restricción tiene una
diana particular en el ADN.
Tampones de Electroforesis
Para geles analíticos, donde no haya que recuperar el DNA para usos posteriores
(minipreparaciones y Southern) se emplea tampón “TBE”, con Tris base, ácido bórico y
EDTA, que es el de mejor poder tampón ya que tanto la base como el ácido tamponan en las
condiciones de electroforesis. El EDTA se añade para complejar metales divalentes que
podrían activar DNAsas contaminantes. La agarosa fundida en este tampón puede guardarse
en una estufa a 50ºC durante varias semanas y esto resulta muy cómodo para utilizarla
rápidamente por simple vertido. Sin embargo, el almacenamiento prolongado genera
productos tóxicos de descomposición del agar y no es recomendado cuando hay que extraer
DNA del gel para usos posteriores (geles preparativos). Tampoco se recomienda el uso de
TBE en este caso pues el borato puede contaminar el DNA extraído del gel y resultar tóxico
para manipulaciones enzimáticas. Para geles preparativos (posteriormente Southern) se
emplea tampón “TAE” (Tris Base, Ácido Acético y EDTA), menos efectivo para tamponar,
pero no contiene ácido bórico que podría contaminar al DNA extraído del gel. Por tanto, los
geles analíticos se preparan con TBE y se pueden almacenar a 50ºC mientras que los geles
preparativos se preparan frescos con tampón TAE.
EQUIPOS, REACTIVOS Y MATERIALES:
Cámara electroforética, peines, fuente de poder, transiluminador, guantes, TBE 1x: tampón
de corrida, agarosa, muestras de ADN extraídas previamente, colorante azul naranja,
marcador de ácidos nucleicos: Sybr, marcador de peso molecular: 50pb, agua destilada
PROCEDIMIENTO:
Preparación del tampón de corrida TBE
Se preparan 2 lt de TBE 1x a partir del tampón TBE 10x. Se debe guardar protegido de la
luz.
- Geles normales al 0.7%: Se prepara 70 ml de TBE 1x, pesando la cantidad de
agarosa necesario, se mezcla y se diluye en hot plate o microondas, con
mucho cuidado que no se riegue.
- Geles para tamaños pequeños al 1.5%: La relación es: mayor cantidad de agarosa,
moléculas de tamaños más pequeños que se desplazan en la electroforesis.
Preparación del gel de agarosa 1%
- Lo primero que se debe hacer a la hora de preparar la electroforesis es preparar el
molde donde va a solidificar el gel, dicho molde puede montarse dentro de la misma
cubeta de electroforesis o fuera de ella. El molde lleva uno o varios peines para que,
al retirarlos, se formen los pocillos donde vamos a introducir la muestra.
- Una vez montado el molde, se hace el gel. Por ejemplo, para elaborar un gel de
agarosa de 70 mL al 1% primero, se disuelve 0,5 g de agarosa en 70 mL de
tampón TBE 1X calentándolo en el microondas y evitando su ebullición, y así
sucesivamente hasta que quede perfectamente disuelto.
- Después se deja enfriar unos minutos, y se adicionan 7 L (de Sybr Safe al gel (aun
líquido).Posteriormente, se vierte la agarosa en el molde dejando que polimerice al
aire.
- Momentos antes de cargar las muestras se quitan los peines y los límites superiores
que les hayamos puesto al molde (ya sean cuñas o cinta adhesiva), se rellena la
cubeta de electroforesis con TBE 1X hasta cubrir completamente el gel.
Preparación de muestras de ADN
- Una vez que se haya solificado el gel. En un trozo de parafilm (parte estéril) se
coloca 7 L del marcador molecular LADE de 1kb para dar un patrón molecular
a la muestra y 3 L de colorante naranja.
- Se procede a mezclar el marcador molecular con el colorante y se coloca en
el primer posillo del gel de agarosa.
- Para la preparación de la muestra de ADN, se añade 15 L del ADN y 3 L de
colorante. Una vez mezclados estos solutos se procede a colocar a partir del
segundo posillo en adelante las muestras de ADN. Se procede a llenar el gel
con cada muestra a analizar.
Fuente de Poder (Cámara de Electroforesis)
- Se tapa la cámara con cuidado y se conecta los cables (rojo con rojo y negro con
negro). El electrodo negro debe ir al lado donde se cargan las muestras.
- Se conecta los cables se conectaron a la fuente de poder cuando está apagada.
- Se ajusta la fuente de poder a 80 volts y se procede a encender la fuente de poder.
- Se deja que corra el gel en la cámara durante un periodo de 40 minutos.
Visualización del Gel de Agarosa
- Se coloca el gel en el fotodocumentador y se observa las bandas que se ven por la
excitación de la sonda intercalante.
- Finalmente se coloca el gel en el transiluminador y se compara las bandas de
ADN con el marcador molecular, se procede a fotografiar el gel para la
comparación de resultados.
CUESTIONARIO
1. Consultar: Tabla de concentraciones en % de agarosa para fragmentos de
DNA separado de varios tamaños en pb.
(Fierro, 2017)
2. ¿Qué es la Agarosa y para qué sirve?
La agarosa es una fracción extraída de polisacáridos derivados de galactosa que se
extrae de algas productoras de agar (Rodofíceas) y es la responsable fundamental
del poder gelificante de éste. Presenta una histéresis (diferencia entre temperaturas
de fusión y melificación) importante, que la hace idónea para técnicas de separación
tales como electroforesis, cromatografía y otras, empleadas en el campo de la
Bioquímica y Biología Molecular.
(CONDA, 2015)
3. ¿Qué es el Bromuro de Etidio, para qué sirve y que efectos causa?
El bromuro de etidio (BrEt) es un agente intercalante fluorescente y aromático
usado comúnmente como aclarador de ácidos nucleicos en laboratorios de biología
molecular para procesos como la electroforesis en gel de agarosa. Cuando se expone
esta sustancia a luz ultravioleta, emite una luz roja-anaranjada, que se intensifica
unas 20 veces después de haberse unido a una cadena de ADN.
El bromuro de etidio es una sustancia fuertemente mutagénica y es irritante a los
ojos, piel, mucosas y el tracto respiratorio. Los efectos sanitarios de la exposición a
este compuesto no han sido todavía investigados profundamente. Se sospecha que
puede ser cancerígeno y teratogénico por su cualidad de mutagenicidad, aunque no
hay ninguna prueba concluyente de ninguno de estos efectos. Si se ingiere, se inhala
o se absorbe por la piel, esta sustancia puede tener efectos nocivos.
(Universitat Politécnica de Valencia, 2010)
4. ¿Cuáles son las condiciones necesarias para un buen
corrimiento electroforético?
Los factores necesarios para un buen corrimiento electroforético son: el campo
eléctrico, la muestra, el tampón y el soporte.
CAMPO ELÉCTRICO
Es el entorno electrodinámico que permite la electroforesis, y depende a su vez de
diferentes parámetros:
- Diferencia de potencial entre electrodos (V): Se mide en voltios (V) y es lo
que define el campo eléctrico. Cuanto mayor sea, mayor será la velocidad
de migración de las moléculas.
- Intensidad (I): Se mide en amperios (A), y cuantifica el flujo de la carga
eléctrica. Está relacionada con el factor anterior y la resistencia por la ley
de OHM (V=IR).
- Resistencia (R): Se mide en ohmios (Ω). Cuanto mayor sea la resistencia del
soporte, menor será la movilidad electroforética. La resistencia depende de
la naturaleza del soporte y de la concentración del tampón que se utilice.
- Temperatura (T): Se mide en grados Celsius (°C) El paso de una corriente
eléctrica produce calor (Efecto Joule). Este efecto será tanto mayor cuanto
sea la diferencia de potencial y la resistencia del sistema. Debe controlarse
de forma estricta, puesto que puede afectar al proceso. Esto justifica la
necesidad de un sistema de refrigeración en las cubetas.
MUESTRA
Influye tanto en la carga de la molécula (cuanto mayor sea su carga más móvil
será), como su tamaño (a mayor tamaño mayor será la fricción de la molécula con el
medio y menor será su carga por unidad de superficie; por lo que avanzará menos),
y su forma (las moléculas globulares avanzan más que las lineales).
TAMPÓN
Durante la electroforesis se produce la electrolisis del agua, generándose protones
en el ánodo e iones hidroxilo en el cátodo. Esto afectaría mucho a la acidez o
basicidad del entorno, lo que podría afectar a la muestra. Un tampón es, por tanto,
esencial en la electroforesis. Su composición no debe afectar a las partículas en
disolución, aunque en algunos casos la unión de alguno de los iones se aproveche
para conducir mejor la disolución. La fuerza iónica condiciona la U de las
sustancias a separar, pues influye en su esfera de solvatación y en la conductividad
del sistema.
Se utilizan tampones con fuerzas iónicas moderadas (0,05 – 0,1 M); aunque lo
verdaderamente importante de controlar de los tampones es el pH, puesto que
determina la carga de la muestra. Hay dos sistemas de electroforesis dependiendo de
la distribución del tampón: los de sistema de tampón continuo (se emplea un único
tampón), y sistema de tampón discontinuo (se emplea por lo menos dos tampones
diferentes).
SOPORTE
La presencia del soporte en la electroforesis de zona hace que este pueda dar lugar a
una serie de fenómenos, ajenos a la electroforesis en sí, pero de marcada
trascendencia en para el resultado. Tales fenómenos son los siguientes:
- Absorción: Es una retención inespecífica de las moléculas de la muestra
sobre el soporte, y por tanto tiene un efecto negativo sobre la resolución.
- Electroendosmosis: Es un fenómeno que se da en algunos soportes en los
que aparecen cargas negativas al estar en contacto con una disolución
iónica. Surge así un potencial de Heimholtz sobre la superficie del soporte.
Al aplicar el campo eléctrico, los iones se desplazan según la carga. Pero su
migración se encuentra con un flujo de cationes, desplazándose sobre la
superficie del soporte, y otro de aniones, haciéndolo por el centro de los
poros. Tal flujo orientado se denomina flujo electroendosmótico (EEO).
El EEO va en contra de la resolución de una electroforesis. Sin embargo, el
EEO contribuirá a una mejor resolución en las inmunoelectroforesis y en
la electroforesis capilar.
- Tamizado Molecular: Es un efecto debido al mayor o menor reticulado de
los soportes. Cuanto más tupida es la red de fibras, menores son los poros,
por lo que no todas las moléculas pueden pasar (las más grandes no
podrán, por lo que avanzarán menos, y las más pequeñas sí que podrán y
avanzarán más).
Los soportes no restrictivos son aquellos en los que el tamaño del poro no
influye en la movilidad de las moléculas, ya que el tamaño de la molécula
(proteínas en la mayor parte de los casos) es muy pequeño en comparación
con el tamaño del poro. En este caso la separación depende de la densidad
de carga.
Los soportes restrictivos son aquellos en los que el tamaño del poro si afecta
a la migración de la partícula.
(Universidad Francisco de Vitoria, 2016)
5. ¿Qué es Sybr gold y para qué se utiliza?
El marcador Sybr Gold para ácidos nucleicos es la tintura fluorescente más sensible
disponible en el mercado para la detección de ácidos nucleicos. Trabaja con
transiluminadores UV, el Dark Reader, escáneres láser o transiluminadores de luz
azul.
Es un colorante muy sensible con una elevada afinidad por el ADN, que puede
detectar cantidades de tan sólo 20 pg de ADN. Se utiliza en una dilución 1/10 000
en agua para el teñido del gel tras la electroforesis. Su elevado precio hace que sólo
sea recomendable su uso para la detección de cantidades muy pequeñas de ADN
que no sean detectables mediante tinción con BrEt.
(Fierro, 2017)
RESULTADOS
Los resultados obtenidos al inicio y al final del laboratorio, se pudo visualizar y fotografiar
el protocolo de la práctica con el fin de observar cualitativamente el gel de agarosa en la
cámara del fotodocumentador y transiluminador respectivamente:
Preparar correctamente los geles de
agarosa y colocarlos en la cámara
electroforética con posillos (peines) para
formar rendijas donde se introducirá las
muestras. Después se inyecto con
micropipetas de 0 – 20 μl las muestras de
ADN de cebolla (Allium cepa) dentro de
las rendijas del gel.
Insertar de manera cuidadosa en el 1°
posillo el marcador molecular (LADE)
de 1kb y en los posillos siguientes se
procederá a inyectar una muestra del
material que se va a analizar, compuesta
por 3μl de colorante con 15μl de ADN
de la cebolla.
Encender la fuente de poder de la
cámara de electroforesis, programar la
corrida del gel de agarosa durante un
periodo de 40 minutos, cubrir con papel
aluminio y esperar resultados.
Transcurrido el tiempo, se lo lleva al
fotodocumentador donde el gel de
agarosa expuesto a la luz, presenta un
espectro de las bandas del ADN.
Correcto
Finalmente, para esclarecer resultados,
el gel es colocado en el transiluminador
y se observan bandas fluorescentes de
ADN lo que indicara la presencia o
ausencia del material genético a evaluar. Correcto
ACTITUDES Y DESTREZAS:
El estudiante será capaz de aprender la técnica de análisis molecular denominada
Electroforesis Horizontal para la vis preservación y conservación de material genético
(ADN) mediante técnicas sencillas en el laboratorio.
El estudiante fomentará el trabajo en equipo durante el desarrollo de las prácticas de
laboratorio con una actitud proactiva frente al aprendizaje.
DISCUSIÓN
- Lo que se pretendió realizar en esta práctica fue la identificación de las bandas de ADN de
la especie Allium cepa (cebolla) utilizando la técnica de electroforesis horizontal. Para
ejecutar este procedimiento necesitamos primeramente preparar el gel de agarosa con Sybr
Safe, estos se utilizan para la separación de las moléculas de ADN en la electroforesis,
esperamos que el gel se solidifique y empezamos a rellenar la parte interna del envase con
TBE (Tris Acético EDTA), este proporcionara las condiciones óptimas de pH y su EDTA
evitara la degradación del ADN por nucleasas,
- Después introducimos los geles de agarosa en el envase los bañamos con más tampón
TBE. Para poder interpretar los resultados en el primer espacio del gel introducimos el
marcador de peso molecular, en los siguientes espacios incorporamos 15 μl del ADN de
nuestra muestra con 3 μl del colorante azul naranja, este permitirá observar la muestra con
luz UV. Al terminar la siembra de las muestras separadas se conecta la fuente de poder y se
aplica el campo electrónico, está técnica dura alrededor de 40 minutos.
- Al finalizar el proceso de la electroforesis se procede a observar los resultados en el
fotodocumentador. Los resultados fueron negativos, ya que no hubo presencia de bandas de
ADN, solo del marcador molecular.
- Esto pudo suceder por una degradación de la muestra de ADN por el prolongado tiempo
que se mantuvo al gel de agarosa con el TBE, por el largo tiempo que se tubo a la muestra
de ADN en refrigeración o por la obtención del ADN de cebolla por un método casero.
CONCLUSIONES
● Los reactivos deben estar correctamente realizados para posteriormente tener unos
buenos resultados en electroforesis.
● La preparación inadecuada en el gel de agarosa provoca que la resolución de las
bandas que se forman resulten difusas.
● La composición y la fuerza eléctrica del tampón pueden afectar la movilidad de
ADN, ya que en ausencia de iones se desplaza lentamente o no se mueve, y con
demasiados iones se sobrecalienta o se funde.
● En el caso de utilizar reactivos peligrosos como el caso de bromuro de etidio para la
tinción de ADN, esto genera una desventaja para llevar acabo la práctica.
● Los daños ambientales y el peligro del uso de bromuro de etidio hacen más factible
el uso del marcador Sybr para ácidos nucleicos.
● El marcador Sybr interrumpe la alineación y emparejamiento de las bases de las
cadenas complementarias, así la emisión de fluorescencia se da cuando se une al
ADN de cadena doble y depende directamente de la cantidad de éste.
● La electroforesis puede ser utilizada mediante la técnica de separación basada en la
migración diferencial de moléculas ADN, proteínas, iones inorgánicos,
carbohidratos, esteroides, fármacos, etc.
RECOMENDACIONES
Para tener conocimiento de lo que se va a desarrollar en la práctica, es necesario
realizar una lectura previa de la guía de laboratorio. Además de recordar
conocimientos previamente aprendidos en cátedras anteriores.
Recibir todas las indicaciones necesarias por parte del docente para evitar
accidentes de cualquier tipo en el laboratorio.
Realizar las actividades siempre en orden y en silencio, utilizando adecuadamente el
equipo solicitado en la práctica de laboratorio.
Preparar el gel de agarosa lo más pronto posible, ya que, si prolongamos el tiempo
durante el proceso, los resultados observados pueden verse comprometidos.
Realizar una óptima extracción de ADN de la muestra con la que vamos a trabajar
ya que el índice de fluorescencia usando el marcador Sybr depende de la cantidad y
calidad del ADN presente utilizado durante la práctica.
Es recomendable preparar el gel de agarosa en un ambiente lo más aséptico posible
para evitar la contaminación de la muestra, por lo que el uso de barreras primarias y
secundaria de bioseguridad (guantes, mandil, cofia y mascarilla).
ANEXOS
Resultado de electroforesis en tiempo real Preparación de TBE
Ensamble de la cámara de electro foresis
Resultado de electroforesis en tiempo real
Colocación de los peines para el posterior
vertido del gel
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
- CONDA. (2015). Life is a great Discovery - Agarosas. Madrid, España; Laboratorios
Conda. Obtenido de: [Link]
- Fierro, F. (2017). Electroforesis de ADN. Ciudad de México, México; Instituto Nacional
de Ecología y Cambio Climático. Obtenido de:
[Link]
- Herráez, A. (2018). Electroforesis de proteínas y de ácidos nucleicos. Alcalá,
España; Departamento de Biología de Sistemas de la Universidad de Alcalá.
Obtenido de: [Link]
- Universidad Francisco de Vitoria. (2016). Tema 2 - Electroforesis. Madrid, España;
Obtenido de: [Link]
vitoria/tib/apuntes/tema-2-electroforesis/2395787/view
- Universitat Politecnica de Valencia. (2010). Procedimiento standard para trabajo con
bromuro de etidio. Valencia, España; Servicio Integrado de Prevención y Salud Laboral de
la Universidad Politecnica de Valencia. Obtenido de:
[Link]