PRACTICA 1
CROMATOGRAFÍA
a) OBJETIVOS
• Conocer cómo se efectúa una cromatografía en columna
• Conocer cómo se efectúa la cromatografía en capa delgada
b) MARCO TEORICO
CROMATOGRAFÍA
Se trata de una técnica de separación de mezclas en la que sus componentes se separan
en dos fases: una fase estacionaria de gran área superficial, y una fase móvil. La fase
estacionaria retrasa el paso de los componentes de la mezcla. Cuando los componentes
pasan a través del sistema cromatográfico a diferentes velocidades, por ende, emplean
tiempos diferentes para atravesar el sistema, llamado tiempo de retención. La
cromatografía permite la separación y cuantificación de sustancias muy similares en
estructura y propiedades químicas.
CROMATOGRAMA
Es un gráfico u otra representación de la respuesta del detector, de la concentración del
analito en el efluente o de otra magnitud utilizada para medir una propiedad del efluente
frente al volumen de efluente o tiempo. E
CROMATÓGRAFO
Sistema instrumental para llevar a cabo la separación cromatográfica.
FASE ESTACIONARIA
La fase estacionaria es una de las dos fases que forman un sistema cromatográfico. Puede
ser un sólido, un gel, o un líquido. Si es un líquido, puede estar adherido sobre un sólido.
Este sólido puede o no contribuir al proceso de separación. El líquido también se puede
unir químicamente al sólido (fase unida químicamente) o inmovilizarse sobre él (fase
inmovilizada). La expresión lecho cromatográfico o sorbente, se puede emplear como
término general para denominar cualquiera de las diferentes formas en las que se presenta
la fase estacionaria.
FASE MÓVIL
Es un fluido que penetra a través o a lo largo del lecho estacionario, en una dirección
determinada. Puede ser un líquido (cromatografía de líquidos) o un gas (cromatografía de
gases) o un fluido supercrítico (cromatografía de fluidos supercríticos). En cromatografía
de gases se puede utilizar la expresión gas portador para designar la fase móvil, y en
cromatografía de elución se puede utilizar la palabra eluyente para designar esta misma
fase.
ELUIR
Cromato grafiar por cromatografía de elución. El proceso de elución se puede detener
mientras todos los componentes están aún en el lecho cromatográfico, o continuar hasta
que todos los componentes lo hayan abandonado.
EFLUENTE
Es la fase móvil que sale de la columna.
MUESTRA
La muestra consiste en un determinado número de componentes cuya separación se
alcanza en el lecho cromatográfico cuando son arrastrados o eludidos por la fase móvil.
TIPOS DE CROMATOGRAFIA
CROMATOGRAFÍA PREPARATIVA
Este método consiste en recoger la muestra con una jeringa o tubo capilar para distribuirla
sobre la placa del cromatógrafo.
Seguido de eso, el absorbente fragmenta los componentes y el analista los extrae con una
espátula sobre un papel filtro. Cada componente debe ser sumergido de forma individual
en el disolvente y repetir el proceso todas las veces que sea necesario para lograr la
separación final.
Actualmente, es considerado uno de los mejores tipos de cromatografía que existen,
debido a que logra separar los componentes de una mezcla de forma precisa y obteniendo
un mejor resultado de pureza.
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA EN ALTA RESOLUCIÓN
En él se procede a separar los componentes mediante las interacciones químicas entre la
sustancia y la columna del cromatógrafo.
Durante el proceso de separación, el tubo se llena de partículas minúsculas bombeadas
mediante un líquido de alta presión. Y si bien se considera uno de los métodos más
completos, es también el más complicado de realizar, ya que se necesita un detector para
lograr los mejores resultados.
CROMATOGRAFÍA DE GASES
Esta consiste en la vaporización de una muestra, la cual es transportada con ayuda de un
flujo de gas a través de la columna de un cromatógrafo.
Debido a sus particularidades, la cromatografía de gases es una de las técnicas más
utilizadas para detectar la pureza del gas natural. Sin embargo, a diferencia de otros tipos
de cromatografías, este método tiende a presentar limitaciones ante los cambios de
temperatura o sustancias poco volátiles.
CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA
Se utiliza para obtener compuestos químicos puros a nivel de microgramos y kilogramos,
los cuales se distribuyen en columnas de vidrio de entre 50 cm a 1 metro de altura y cuyo
diámetro varía entre los 5 y los 50 mm.
Para llevar a cabo dicho proceso, se prepara una solución en polvo para esparcirla con
cuidado dentro de la columna. Para eso, se debe crear un depósito de elución redondo o
un embudo de separación con forma de tapón.
El fluido empleado para la distribución de los componentes en las columnas puede variar
entre líquido y gaseoso. Y la fase estacionaria del producto se debe situar dentro de cada
columna hasta lograr los mejores resultados.
CROMATOGRAFÍA DE FLUIDOS SUPERCRÍTICOS
Por último, tenemos la técnica del fluido supercrítico. Se trata de un tipo de cromatografía
que combina la técnica del gas y el líquido de alta resolución para proceder a la separación
de todo tipo de mezclas químicas.
Entre las características de este tipo de cromatografía se encuentra el uso de equipos
similares a la cromatografía de líquidos de alta resolución, los cuales difieren debido a
que usan un horno termostático para controlar la temperatura de la fase móvil con
precisión.
Asimismo, también se diferencia de la cromatografía de gases por el uso del aumento de
la presión y la densidad de la mezcla. Por este motivo, es considerado uno de los mejores
métodos de separación de partículas que existen y que toma lo mejor de ambas técnicas
mencionadas anteriormente.
c) PARTE EXPERIMENTAL
Visualizar el siguiente video:
Técnicas cromatográficas en el enlace:
https://www.youtube.com/watch?v=Vo_-Zov2NEE
MATERIALES Y EQUIPOS
• Soporte universal
• Pinzas para bureta
• Bureta
• Probeta graduada
• Pipeta
• Espátula
• Vaso precipitado
• Matraz Erlenmeyer
• Embudo
• Tapón o goma
• Micropipeta
• Pipeta Pasteur
• Rotavapor
• Lámpara ultravioleta
• Placa cromatográfica
• Balanza
REACTIVOS
• Gel de Sílice
• Hexano
• Bola de algodón
• Arena de mar
• Fluoreno
• Dicloro metano
• Hexano / Dicloro metano 70/30
PROCEDIMIENTO
1. En un soporte universal sujetamos verticalmente dos pinzas y colocamos la bureta.
2. En un vaso precipitado colocamos 6 g de gel de sílice y en una probeta 20 ml de
hexano.
3. Introducimos una pequeña bola de algodón en el fondo de la columna, esta no
debe ser muy grande y densa, ya que dificultaría el paso del disolvente durante la
separación cromatográfica.
4. Vertimos una pequeña cantidad de arena, hasta 1cm de espesor, sobre la base del
algodón, la arena no participa en la separación y sirve como soporte mecánico del
absorbente.
5. Colocamos un vaso precipitado debajo de la bureta.
6. Añadimos 20ml de Hexano que se utiliza como diluyente
7. Añadimos gel de sílice en pequeñas porciones, para que se disuelva
uniformemente para evitar grumos.
8. Agitamos el tubo de cromatografía, golpes suaves con un tapón o una goma, para
que el gel de sílice se disuelva uniformemente, el borde superior debe quedar
horizontal al mismo tiempo se deja gotear lentamente el disolvente.
9. Se añade de nuevo 1cm de altura de arena, esta segunda capa protege la solvente
de las salpicaduras que se producen al añadir nuevas cantidades de diluyente.
10. Se deja eluir el disolvente hasta que su nivel quede aproximadamente 1 o 2 ml por
encima del nivel de la arena, es importante que la columna nuca quede seca el
disolvente por debajo el nivel de absorbente ni durante el proceso de relleno ni
durante la adición de la muestra o la separación.
11. Se toma 1 ml de una mezcla de fluoreno disuelto en ciclohexano y se añadimos
gota gota con una micropipeta a la columna,
12. Abrimos la llave se deja salir el disolvente hasta que el nivel superior de mismo
quede ligera por encima de la capa de la arena de esta forma las sustancias que se
van separar comienzan hacer absorbidas por el absorbente.
13. Añadimos 2 ml de eluyente con una pipeta pasteur.
14. Abrimos la llave y se deja alcanzar al disolvente al nivel de la arena, este proceso
se repite 2 a 3 veces.
15. Rellenamos la columna con eluyente y comiena la elución con hexano,
recogiéndose de 75 ml de eluato (fracción 1)
16. Se recoge 60 ml de eluato (fracción 2) donde se encuentra la mayor parte del
fluoreno
17. Se añade después 60 ml de diclorometano
18. Se continua la cromatografía
19. previamente es marcar con un lápiz y señalar ligeramente donde se va aplicar la
muestra la disolución de la muestra se aplica una pequeña cantidad.
20. Se revela las machas de cada producto , las manchas deben aparecer en la lampaa
ultravioleta
d) CUESTIONARIO
A. ¿Qué es el Rf, y cuál es su importancia?
se puede determinar para cada una de las manchas el valor de Rf (factor de retención), o la
distancia que cada compuesto se desplaza en la placa. Cada compuesto tiene
un Rf característico que depende del disolvente empleado y del tipo de placa de CCF utilizada,
pero es independiente del recorrido del disolvente. De esta manera se puede ayudar a
identificar un compuesto en una mezcla al comparar su Rf con el de un compuesto conocido
(preferiblemente cuando se hacen eluir en la misma placa de CCF).
B. Es la cromatografía un proceso de adsorción o de absorción? Fundamente su respuesta
Absorción: es la retención de una especie química por parte de una masa y depende de la
tendencia que tiene ésta a formar mezcla o a reaccionar químicamente con la misma.
Adsorción: es la retención de una especie química en los sitios activos de la superficie de un
sólido, quedando limitado el fenómeno a la superficie que separa las fases o superficie
interfacial, esta retención superficial puede ser física o química.
BIBLIOGRAFIA
“(1) Técnicas Cromatográficas - YouTube.” n.d. Accessed May 2021.
https://www.youtube.com/watch?v=Vo_-Zov2NEE&t=60s.
“Operaciones Básicas En El Laboratorio de Química. Cromatografía. Cromatografía En
Capa Fina y En Columna.” n.d. Accessed May 29, 2021.
http://www.ub.edu/oblq/oblq castellano/cromatografia_tipus.html.
