UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE
SAN LUIS POTOSÍ
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA
REPORTE PRÁCTICA:
“FORENSE 1”
CANELA COSTILLA AARON JARED
SÁNCHEZ PARRA DANIELA
PROFESORES:
SERGIO ZARAZÚA GUZMÁN
PATRICIA AGUIRRE BAÑUELOS
ROSA ELVIA MEDINA NOYOLA
DÍA: JUEVES HORA: 09:00-12:00
FECHA DE ENTREGA: 27 ABRIL DEL 2021
SAN LUIS POTOSÍ, S.L.P.
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REPORTE PRÁCTICA FORENSE 1
1. Realice un diagrama para la identificación de las siguientes drogas:
marihuana, cocaína y anfetaminas/metanfetaminas.
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2. Investigue el fundamento de las pruebas utilizadas en la pregunta anterior.
Test Bouchardat
Orientan sobre la presencia de alcaloides en distintas muestras biológicas, basadas en la
capacidad que tienen los alcaloides en estado de sal (extractos ácidos), de combinarse
con el yodo y metales pesados como bismuto, mercurio, vanadio formando precipitados
en la presencia de un alcaloide.
Test Scott
El fundamento del test es la formación de distintos complejos coloreados entre la cocaína
(forma catiónica) y el complejo de cobalto (forma aniónica), en función del pH del medio.
Así, en condiciones ácidas, se forma el complejo [Co(NR3)i](SCN)2 de color rosa que es
soluble en agua, mientras que a pH básico se formaría el complejo [NHR3] 2[Co(SCN) 4],
de color azul, que es soluble en cloroformo
Se trata de una prueba química muy utilizada para detectar la presencia de cocaína un
alcaloide de carácter básico débil (pKa = 8,6). Este test permite, además diferenciar entre
las dos formas de cocaína: la cocaína básica o "crack", insoluble en agua, y el clorhidrato
de cocaína, una sal y por tanto soluble en agua.
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Test de Nitrato de Plata
Muy útil para el revelado en papel. Se utiliza en forma de aerosol y por tanto en lugares
ventilados. Cuando entra en contacto con la huella, se forma cloruro de plata, sensible a
la luz, dando lugar a marcas de color marrón o gris oscuro y haciéndola visible.
Una vez que las marcas han aparecido, deben retirarse de la luz y fotografiarse ya que,
en caso contrario, a las pocas semanas las huellas se vuelven borrosas y se pierde el
contraste. El nitrato de plata elimina los restos de aceite y de aminoácidos presentes en la
huella, por lo que nunca debe usarse antes que la ninhidrina.
Tiene un coste elevado y además no funciona cuando la muestra ha estado en contacto
con el agua. En caso de humedad se utiliza el PD, que se trata principalmente de nitrato
de plata mezclado con un sistema redox, [Fe(NH4)i(S04) 2]/[Fe(N03) 3], un detergente y
un tampón.
Test de Duquenois- Levine modificada
. El reactivo está formado por tres componentes (A, B y C). A es una mezcla de
acetaldehído y de vainillina en etanol, B es una disolución de ácido clorhídrico
concentrado, y C es cloroformo. Al añadir las tres disoluciones a la muestra que se va a
analizar se forman diferentes capas. Si en la capa más densa, que es la de cloroformo, se
observa un color púrpura, puede ser indicativo de la presencia de THC
(Tetrahidrocannabinol). Este test, como ocurre en otros casos, no es excluyente para esta
sustancia, ya que puede dar positivo para una variedad de extractos vegetales, como son
los derivados del resorcinol (m-dihidroxibenceno).
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Test de la O-dianisidina
Proporciona una cooración verde-azulada cuando se desarrolla en medio ácido
caliente. Se tiene que tener en cuenta que no es un método del todo específico,
pues diversas sustancias reductoras pueden interferir con el indicador.
Test de Marquis
Este test principalmente se utiliza para detectar la presencia de MDMA y anfetamina.
Permite un sistema de detección rápida de las sustancias adulteradas y en particular de
las pastillas fraudulentas vendidas como éxtasis.
Consta de una solución de formaldehído al 40%, con ácido sulfúrico concentrado,
generando un color violeta (púrpura) intenso que es indicativo de la presencia de
derivados de opio. Si el color marrón del extracto acuoso oscurece el color que se espera
obtener en la prueba, debe repetirse la misma, utilizando una pequeña cantidad de la
sustancia sospechosa.
Test de Simon
Mezcla de tres reactivos, acetaldehído, una disolución de nitroprusiato de sodio,
Na2[(CN)5FeNO], y otra disolución de carbonato de sodio. En el caso de la
metanfetamina se observa la formación de un complejo de color azul.
Mecanismo propuesto para la reacción de Metanfetamina con el reactivo de Simon.
3. Describa el fundamento de la prueba de bencidina y fenolftaleína y
qué otras pruebas complementarían la investigación de una mancha de
sangre hasta la identificación de un individuo.
PRUEBAS DE ORIENTACIÓN
TÉCNICA DE BENCIDINA O ADLER
Las peroxidasas sanguíneas son catalasas que, poseen actividad catalítica en las
reacciones de oxidación, ya que tienen la propiedad de descomponer el peróxido de
hidrógeno u otros peróxidos orgánicos, produciendo la liberación de radicales oxhidrilo
El grupo hemo de la hemoglobina, posee esa actividad enzimática, por lo que cataliza
reacciones de oxidación al descomponer el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno, que
al reaccionar con la bencidina la oxidará formando un compuesto azul.
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Se pueden obtener falsos positivos con sustancias con actividad semejante a las
peroxidasas o materiales oxidantes como manzanas, espárragos, frijol, zarzamora, etc.
TÉCNICA DE LA FENOLFTALEÍNA O DE KASTLE-MAYER
Se rige con el mismo principio de la reacción de Adler. La fenolftaleína debe estar
reducida (incolora), se trabaja en medio alcalino y con un calentamiento previo a 100°C
durante 1 minuto, esto es para diferenciar las peroxidasas vegetales de las de origen
animal, ya que las peroxidasas animales pueden trabajar en estas condiciones mientras
que las peroxidasas vegetales no.
TÉCNICA DE LEUCO MALAQUITA VERDE
La forma leuco o reducida del verde de malaquita es oxidada por acción de las
peroxidasas para dar la forma oxidada de color verde.
TÉCNICAS ESPECTROSCÓPICAS:
Permiten identificar la presencia de hemoglobina y/o de alguno de sus derivados, en
manchas de sangre. La hemoglobina, diluida en agua (oxihemoglobina) tiene dos bandas
de absorción en la zona del espectro visible cuyos máximos se encuentran a 575 y 540
nm respectivamente; así como la banda de Soret, típica de los derivados porfirínicos,
próxima a la región del ultravioleta, que para la hemoglobina se encuentra a 412 nm
siendo esta banda mucho más ancha que las dos primeras.
TÉCNICA DE LUMINOL
La prueba se basa en la propiedad peroxidasa de la sangre en la que esta sirve de
catalítico para que el luminol sea oxidado por el perborato de sodio en un medio alcalino,
y como consecuencia genera quimioluminiscencia en la obscuridad.
TÉCNICAS DE CONFIRMACIÓN
CRISTALES DE HEMINA O DE TEICHMAN
La hemoglobina cuando es tratada con ácido acético, se separa de las proteínas y del
grupo prostético. Durante la hidrólisis la globulina se desnaturaliza. La oxidación del fierro
del grupo hemo se efectúa más rápidamente en medio ácido que en medio alcalino. Si
está presente un halógeno inorgánico como el cloro, se formarán cristales insolubles de
cloruro de ferriprotoporfirina o hemina.
PRUEBA DE TAKAYAMA (HEMOCROMÓGENO)
Tanto la ferroprotoporfirina como la ferriprotoporfirina tienen la propiedad de combinarse
con otros compuestos nitrogenados por medio de la globulina. Tales compuestos incluyen
otras proteínas, hidróxido de amonio, cianuro, nicotina y piridina y los productos
resultados se llaman hemocromógenos. Los cristales pueden formarse tanto en medio
ácido como alcalino, sin embargo, el reactivo de Takayama es de naturaleza alcalina.
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4. ¿Qué pruebas se encuentran disponibles para la identificación de líquido
seminal? Y describa además su fundamento.
En las agresiones sexuales frecuentemente aparecen indicios de este fluido biológico,
bien como manchas en sábanas o en prendas de ropa, por ejemplo, bien como tal fluido
en la vagina u otras partes del cuerpo de la víctima e, incluso, en preservativos. Como
siempre, se estudiará primero la composición del semen como clave para encontrar los
métodos de detectarlo y analizarlo.
En criminología el estudio del semen requiere llevar a cabo dos etapas: en la primera,
localizarlo, y en la segunda, identificarlo de forma inequívoca. A éstas se añadiría una
tercera, como siempre ocurre en los indicios biológicos: identificar el sujeto de donde
proviene este semen, es decir, individualizarlo.
Localización del semen
El primer paso es localizar el semen o sus manchas en la escena del crimen o en objetos
que, fuera de ella, pudieran estar relacionados con el caso investigado. En general, las
manchas de semen tienen un aspecto característico, que hacen más fácil su detección
por simple observación visual, con ayuda de luces forenses. Además, ciertos
componentes de este fluido corporal, como son las flavinas, tienen propiedades
luminiscentes, con lo que se puede detectar el semen con luz ultravioleta.
No obstante, esta tarea se puede complicar debido a que haya muchos objetos a
investigar (generalmente prendas de vestir) o a su gran superficie (como sábanas o
alfombras). Además, se hace aún más difícil si las manchas contienen muy poco semen o
si se han lavado, tratando de eliminarlas.
Identificación del semen
Los métodos más usuales para su identificación son los siguientes:
Métodos ópticos: microscopía
Dada la alta concentración de espermatozoides en el semen y su aspecto característico,
se pueden detectar fácilmente en el microscopio. Previamente ha de prepararse la
muestra, para lo cual hay varios procedimientos. Así, se corta un trozo del material donde
esté la mancha y se introduce en un pequeño volumen de agua destilada o de suero
fisiológico y, rápidamente, se agita. De esta forma se extraen parte de los
espermatozoides, que pasan a la fase líquida, de la que se toma una gota para ser
observada al microscopio. No obstante, es conveniente teñir los espermatozoides
extraídos con un colorante adecuado (como azul de metileno-fucsina). Es importante
tener presente que esta prueba puede dar lugar a falsos negativos, existiendo varias
razones para ello. Así, está el hecho de que el semen puede no contener
espermatozoides (caso de las vasectomías, de ciertas anomalías congénitas o de
determinadas enfermedades) o existir en una concentración sumamente baja y, por tanto,
casi imposibles de detectar. Por otra parte, hay que considerar que los espermatozoides
están fuertemente unidos a la ropa y que además son muy frágiles una vez que la
mancha se ha secado, con lo que simplemente por el roce se desintegran. Por todo ello,
puede afirmarse que si hay espermatozoides es que hay semen, pero no puede decirse lo
contrario. En consecuencia, se han diseñado otros métodos de detección.
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o Prueba de la fosfatasa ácida
Ésta es una enzima producida por la próstata y se halla presente en el
semen en muy alta concentración. Por ello es muy útil su determinación
cuando no se han observado espermatozoides en una mancha sospechosa
y también en los casos en que es necesario localizar el semen en grandes
superficies de tejidos o en muchas prendas de ropa. En estos casos el
procedimiento a seguir es humedecer un papel de filtro con agua destilada
y frotarlo suavemente sobre la superficie a estudiar. Si existe semen, la
fosfatasa ácida que contiene se trasferirá al papel de filtro.
Para detectar la presencia de esta enzima se recurre a una prueba de
color, ya que en una disolución ácida de alfa-naftilfosfato de sodio y el tinte
designado como «Fast Blue B» produce una fuerte coloración púrpura
(debida al complejo formado). Además la intensidad del color producido es
proporcional a la cantidad de fosfata ácida presente, es decir, es
cuantitativa.
Lo cual es importante en este caso, ya que también los fluidos vaginales
contienen esta enzima, si bien en mucha menor concentración que el
semen.
En los laboratorios suelen existir kits con este reactivo ya preparado,
generalmente en unas tiras, lo que facilita este análisis. De esta manera,
un hisopo humedecido se pone en contacto con la mancha y después se
coloca sobre la tira reactiva, con lo que si hay semen aparecerá el color
púrpura. No obstante, hay que resaltar el carácter sólo orientativo de esta
prueba.
Ensayos cristalográficos
La colina es otra sustancia presente en el semen (producida en los vehículos seminales),
que con determinados reactivos origina derivados sólidos cristalinos característicos, que
se pueden observar y estudiar en un microscopio. Tal es su reacción con yodo, que da
lugar a unos cristales de yoduro de colina, en forma de agujas de color ámbar (test de
Florence). Existen bastantes pruebas similares, pero ninguna resulta demasiado
específica.
Pruebas inmunológicas con la proteína P30
La P30, descubierta hacia 1970, en una proteína que se encuentra en el líquido seminal.
Con esta abreviatura es como comúnmente se conoce al antígeno prostático específico
(PSA), que como su nombre indica se produce en la próstata y que es exclusivo del
semen.
Por tanto, las pruebas que detecten esta proteína tienen un alto grado de especificidad.
Se trata de pruebas inmunológicas, en las que esta proteína se toma como marcador, por
lo que los pasos a llevar a cabo son muy similares a los que se expusieron en el caso de
la precipitina. De esta manera, se inyecta la proteína P30 en un conejo para provocar la
formación de anticuerpos, y después se extrae la sangre del animal inmunizado para
obtener el suero con los anticuerpos de la proteína (antisuero-P30). Así, ya podrá
emplearse frente a muestras de las que se sospecha puedan ser de semen.
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Para llevar a cabo esta prueba se utilizan varios métodos. El más tradicional es mediante
electroforesis (como en la precipitina), empleando también una placa cubierta de gel con
dos pocillos enfrentados, uno con el antisuero-P30 y el otro con la muestra a analizar. Si
en ésta hay semen, aparece una línea claramente visible entre los dos pocillos. Esta es
una de los mejores procedimientos para asegurar, si no se observan espermatozoides,
que la muestra sospechosa es de semen. Individualización del semen Con restos de
semen se puede determinar también el grupo sanguíneo, ya que los antígenos necesarios
para su estudio se encuentran en este fluido orporal de la mayoría de los hombres. No
obstante, para la individualización inequívoca, hay que acudir a técnicas de ADN.
Bibliografía:
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