TINCIONES SIMPLES Y COMPUESTAS

RESUMEN

Las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el

laboratorio para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas. Desde hace más
de un siglo han ayudado a resolver problemas de etiología microbiana. Hay una
gran variedad de tinciones, que se han ido desarrollando para la detección de los
diferentes agentes infecciosos –en los que se incluyen bacterias, parásitos y
hongos–. La tinción de Gram se considera básica en la valoración inicial de
muestras para análisis bacteriológico, mientras que la tinción de Wright se ocupa
para el diagnóstico de enfermedades muy particulares en el rubro de la
parasitología. Hay técnicas tintoriales específicas de gran utilidad, como la tinción
de Ziehl-Neelsen, que se utiliza para el diagnóstico de enfermedades crónicas como
la tuberculosis o la actinomicosis, o la tinción de azul de lactofenol, que preserva e
identifica a los componentes estructurales de los hongos. Las diferentes tinciones
en el laboratorio microbiológico tienen una utilidad fundamental para el diagnóstico
y tratamiento oportuno de múltiples patologías de etiología infecciosa.

Palabras claves: baterías, tinciones, técnicas.

INTRODUCCION característica en la región ultravioleta o

visible; dicho de otra forma, es la
Un colorante se define como una capacidad que tiene la molécula para que
sustancia capaz de dar color a células, sus electrones absorban energía o luz
tejidos, fibras, etcétera. De acuerdo con visible, se exciten y emitan diversos
su origen, se pueden dividir en: colorantes colores de acuerdo con la longitud de
naturales, los cuales son extraídos de emitida como resultado del cambio en el
plantas o animales, y colorantes nivel energético. Cabe mencionar que
artificiales, que son aquellos de minerales esta longitud de onda corresponde al
procesados y manipulados en el rango de espectro visible. Los cromóforos
laboratorio. Químicamente, el colorante se pueden presentar en dos formas
está constituido de un componente fundamentales: en sistemas conjugados
cromóforo y un auxocromo. El cromóforo pi o complejos metálicos. Los cromóforos
es todo grupo aislado, covalente e son principalmente grupos funcionales
insaturado, que tiene una absorción con dobles y triples enlaces carbono-

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carbono, anillos aromáticos, grupos colorante (azul de lactofenol o tinta china);
carbonilos, imino, diazo, nitro y enlaces tinción diferencial, cuando se visualiza
entre carbono-y (y es un átomo con pares más de un color porque se utiliza más de
libres).Los auxocromos son grupos un colorante (Gram o Ziehl-Neelsen);
funcionales o radicales que constituyen tinción específica, cuando se utilizan
una molécula y poseen carga parcial anticuerpos marcados con una molécula
positiva; tienen la función de intensificar la fluorescente para identificar una
formación de color mediante la acción de estructura celular en particular
grupos de átomos no saturados; su (inmunohistoquímico). El control de
función es desplazar a los cromóforos calidad de los métodos tintoriales es
hacia longitudes de ondas largas para importante, ya que así se asegura que la
aumentar la intensidad. Los siguientes preparación de la muestra haya sido
grupos funcionales son considerados adecuada, por lo que se recomienda
auxocromos: grupo metilo, halógenos, realizar al mismo tiempo de la evaluación
hidroxi, alcoxi y amino.4,5 Aunque los de la muestra clínica, la tinción de un
microorganismos vivos se pueden agente infeccioso ya identificado
observar directamente en fresco al mediante esa tinción, el cual funcionará
microscopio óptico, la mayoría de las como un control positivo. Algunas
veces es necesario teñirlos para que por técnicas tintoriales como Gram o
medio del uso de colorantes, sea mucho ZiehlNeelsen requieren antes de su
más fácil su identificación;6 además, la proceso la fijación de las muestras, con la
presencia de ciertas estructuras, así como finalidad de preservar la arquitectura
su reacción a determinadas técnicas, nos estructural y química de las células.3
permite clasificar a las bacterias. Así Existen dos tipos de fijadores: físicos y
pues, los colorantes tienen las siguientes químicos. Entre los procesos de fijación
funciones: físicos se tienen los siguientes:
1. Permiten hacer visibles a los objetos desecación, calor seco, calor húmedo,
microscópicos y transparentes. ultrasonido y microondas, mientras que
2. Revelan su forma y tamaño. los procesos de fijación químicos se
3. Muestran la presencia de estructuras pueden clasificar como oxidantes y
internas y externas. reductores, de acuerdo con sus
4. Producen reacciones químicas propiedades químicas. Entre los agentes
específicas. químicos oxidantes se encuentran: óxido
crómico, ácido acético, ácido pícrico,
Las tinciones se pueden clasifi car como acetona, dicromato de potasio. Los
simples cuando toda la muestra se tiñe agentes químicos reductores son:
del mismo color y se utiliza un sólo formaldehído, glutaraldehído, etanol,
metanol, paraldehído, etcétera.8 Quizá el

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método físico con mayor utilización en • Láminas o portaobjetos
microbiología es el calor seco, que
consiste en exponer directamente la • Cultivos en medio líquido:
laminilla a la flama del mechero, con esto Escherichia coli. Bacillus sp.,
se logra detener los procesos vitales de Staphylococcus sp.
las células y los microorganismos. Sin
embargo, la sobreexposición, o la • Cultivos en medio sólido:
exposición en una zona incorrecta de la fl Escherichia coli. Bacillus sp.,
ama (zona fría, zona caliente y zona de Staphylococcus sp
fusión) repercutirá en el efecto deseado;
es muy común provocar alteraciones • Cultivos en medio sólido
morfológicas y destrucción celular. Este Clostridium spp
método preserva el extendido por poco
tiempo, por lo que se recomienda utilizar • Cultivos en medio sólido Klebsiella
un método químico, que precipite pneumoniae
proteínas, antes de teñir. Los métodos
• Cultivos en medio sólido
químicos ofrecen mejores resultados para
Streptococcus peumonia
la fijación, ya que son líquidos con
potencial alto de difusión intracelular y
• Cristal violeta
detienen procesos enzimáticos que
provocan autolisis. Los reactivos poseen • Lugol: Alcohol cetona: Fucshina o
la capacidad de interactuar con safranina
biomoléculas como proteínas,
glicoproteínas, peptidoglicanos, lípidos, • Reactivo de azul de metileno
glicolípidos, lipoproteínas, pigmentos,
ácidos pécticos y nucleicos. • Verde de Malaquita al 5%

MATERIALES Y REACTIVOS • Tinta China

• Asas bacteriológicas
METODOLOGÍA
• Mechero de Bunsen
Procedimiento para Tinción de
Gram
• Microscopio
• Realice el frotis con la técnica
adecuada y fíjelos al calor.
• Papel para limpiar lentes
• Vierta sobre el frotis Cristal Violeta
y déjelo actuar por 1 minuto.

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• Lave con agua de la llave a baja • Caliente hasta la expulsión de los
presión y escurra. primeros vapores empleando unas
• Cubra ahora el frotis con lugol y pinzas, retírelo del fuego.
deje actuar por 1 minuto. • Repita la operación
• Lave con agua de la llave a baja aproximadamente durante 5
presión y escurra. minutos; no deje secar el
• Cubra ahora con solución colorante.
decolorante por 30 segundos. • Lavar con agua a baja presión.
• Lave con agua de la llave a baja • Agregue safranina y déjela durante
presión y escurra. 1 minuto.
• cubra ahora con colorante de • Lave con agua, saque la
contraste y deje actuar por 45 preparación y obsérvela con el
segundos. lente de inmersión.
• Lave con agua de la llave a baja
presión y escurra. Interpretación: Esporas: Verde
• Permita que se seque al aire
dejando la lámina en posición Forma vegetativa: Rojo
inclinada. Cepas usadas: Bacillus spp
Clostridium spp que son esporuladas.
• Observe al microscopio con los
siguientes objetivos: 10X – 40X –
100X utilizando este último con CUESTIONARIO
aceite de inmersión.
1. ¿Cuál es el objetivo de realizar
Interpretación: Microorganismos fijación de un frotis bacteriano?
Gram positivos: violeta
La fijación de una
Microorganismos Gram negativos: extensión bacteriana hace que las
rojo o rosado bacterias queden inactivadas y
adheridas al vidrio alterando lo
Procedimiento para coloración de menos posible la morfología
Scheaffer Fulton y bacteriana y las posibles
agrupaciones de
células que pudiera haber.
• Haga un extendido del cultivo y
fíjelo.
2. ¿Cómo se clasifican las bacterias
• Coloque sobre el portaobjeto papel
según su morfología? Ilustre y de 4
filtro.
ejemplos de bacterias para cada
• Cúbralo con verde de malaquita. uno.

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Cocos.
Esferas diminutas o bayas redondas.
Pueden estar aislados, pares, cubos o
cadenas largas, Se reproducen por
partición
• Se dividen en dos y se adhieren.
(Diplococos)
• Se divide continuamente.
(Estreptococos)
• Se dividen en tres planos en
ángulos rectos para obtener
formas cubicas. (Sarcinas)
• Se dividen en dos planos para
formar tétradas de células.
(Pediococos)
• Se dividen en dos planos para 3. Nombre todos los tipos de
formar grupos irregulares. agrupación bacteriana
(Estafilococos)
Las agrupaciones bacterianas
aparecen cuando las células se
Bacilos mantienen juntas después de la
Son Bacterias que tienen forma de división celular. Son características
bastones o cilindros. Se dividen en un de diferentes microorganismos.
solo plano y se pueden observar como
células únicas, en pares o en cadenas. A partir de los cocos:

Vibriones • Diplococos, Estreptococos

Son bastones curvos que parecen (un plano de división),
“comas”. En ocasiones crecen en Tétradas, Sarcinas y
forma de “S” Estafilococos (dos o más
planos).
Espirales.
Bacterias cilíndricas, están enrolladas • Diplococos: dos células
en diferentes grados.
• Estreptococos: cadenetas
de varias células

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 • Tétradas: dos planos gran parte de esa responsabilidad
perpendiculares patogénica del microorganismo. La
• Sarcinas: tres planos membrana exterior está compuesta
ortogonales (paquetes por un complejo lipopolisacárido que
cúbicos)
actúan como endotoxinas, y si éstas
• Estafilococos: muchos
planos aleatorios entran en el sistema circulatorio
provocan una reacción tóxica en el
A partir de bacilos aparecen: animal infectado. Las endotoxinas son
componentes estructurales
• Diplobacilos exclusivamente de las bacterias
Gram-. La membrana externa de las
• Estreptobacilos bacterias Gram- ejerce una notable
influencia en la resistencia frente a
Otras agrupaciones son:
varios antibióticos, sobre todo a los
En Empalizada, en V o L, letras que actúan sobre la pared de
chinas o rosetas. peptidoglicanos, que es el punto débil
de las bacterias Gram+. Hay que
4. ¿En qué radican las diferencias pensar que el antibiótico no induce
estructurales entre bacterias Gram resistencia, solamente actúa en una
positivas y Gram negativas?
interferencia clara de la humanidad en
Los fundamentos de la diferenciación el proceso de selección natural. La
entre ambos grupos se basan pared de las bacterias Gram+ ejerce
exclusivamente en las características un efecto protector o de resistencia
diferentes de las paredes celulares contra numerosos antibióticos que
entre ambos grupos de bacterias. La tienen que atravesar esta estructura
clave es el peptidoglucano -más para llegar a su interior y ejercer su
conocido como mureina-, uno de los efecto antibacteriano.
principales constituyentes de la pared
celular, formando una gruesa capa en 5. ¿Por qué la edad de un cultivo
los Gram+, mientras que tienen una afecta las tinciones?
delgada capa en los Gram-. Son
muchas las especies de bacterias La edad de las células, las
Gram- que causan enfermedades, condiciones de cultivo y la
actividad de sus autolisinas
teniendo la membrana externa una
pueden afectar el resultado de la

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 tinción. Las células envejecidas, o
crecidas en condiciones que
impiden la síntesis de mucopéptido
pueden verse de color rojo. La
intensidad de la decoloración con
alcohol suele ser el problema más
común.

BIBLIOGRAFÍA

Guía de laboratorio de Microbiología,

universidad de Pamplona.

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