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Espectrofotometría
Francis Dayana urieles Galvis
Universidad Simón Bolívar. Programa de Microbiología. Bioquímica
Resumen
La espectrofotometría permite determinar concentraciones de compuestos de soluciones.
Absorben dichas radiación magnética y cantidad de luz absorbida, también de forma tienen
concentración para hacer tipos de medidas. Que se emplea en un espectro fotómetro que
pueden seleccionar las longitudes de onda.
Espectrometría se basa en concentraciones de cantidad de especies. A lo que llamamos luz
hace parte espetromanetico que puede ser percibido por los ojos humanos y diversas formas de
radiaciones. La transmitancia es la relación en cantidad de luz transmitida de compuestos
químicos que absorbe la luz, dicho comportamiento de la luz depende de la luz es luminosa
indique índice en la superficie de unos materiales. Pueden emplearse varios efectos de
transmisión, difusión, reflexión, difomision, absorción sus resúmenes introductorios se basa en
lo que que es transmisiones directas, difusa, filtrada. En la característica de onda encontramos
amplitud, periodo(p), frecuencia(f). En el espectro electromagnético se hacen en términos de
las longitudes de onda y frecuencias de radiaciones de onda rayos gamma y hasta de mayor
longitud de onda, la cual se compone de diversos subrangos o porciones cuyo limite no son del
todo definidas. La absorbancia se relaciona más a lo que es la muestra ya que indica la
cantidad de luz cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales(l0=(t) la transmitancia
de1/t. en los espectrofotómetros encontramos la medición de la absorbancia de la luz.
Los espectrofotómetros pueden variarlos diseños en especial con la incorporación de
ordenadores para lo que es análisis de datos todo el espectrofotómetro consta según se indican
absoluta.
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La fotometría ciencia que se encarga de la luz como el brillo percibido por el ojo humano
estudia es sistema visual que estudia la capacidad que tiene la radiación electromagnética
La característica de la luz como base de la luz como base de la fotografía. Tiene una serie de
características muy importantes para el fotógrafo y que este debe tener presente la primera de
ellas se refieren a la forma de propagarse
Ley de Lambert beer la ley fundamental que rige la absorción electromagnética aplicable a la
disolución y también a gases y solidos absorbancia de radiación electromagnética producida
por especie absorbente es directamente proporcional a la trayectoria de la radiación a través de
la radiación atraves de la disolución y la concentración de las sustancias que produce la
absorción A=constante de proporcionalidad absortividad es una propiedad intensiva de la
material y por tanto relaciona únicamente con la naturaleza de la misma.
En la absorbancia cuantifica el fenómeno que ocurre con radiaciones sustancias y lumínicas es
decir al incidir la luz sobre la muestra influye la radiación absorbida por sustancias.
La colorimétricas dicho análisis químico que se basa en lo que es intensidad de color y
disolución la saturación de un color es su grado de pureza.
Palabras clave: espetrofometria, característica de la luz, longitudes de onda, absorbancia, ley
de Lambert Baer, prueba econometría, espectrofotómetro funciones del equipo
Abstract
Spectrophotometry allows the determination of concentrations of compounds in solutions.
They absorb said magnetic radiation and amount of absorbed light, they also have
concentration to make types of measurements. Which is used in a spectrum photometer that
can select wavelengths.
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Spectrometry is based on concentrations of quantity of species. What we call light is a
spetromanetic part that can be precaved by human eyes and various forms of radiation.
Transmittance is the ratio of the amount of transmitted light of chemical compounds that
absorbs light, such light behavior depends on the light is luminous indicate index on the
surface of some materials. Various effects of transmission, diffusion, reflection, diffusion,
absorption can be used. Their introductory summaries are based on what is direct, diffuse,
filtered transmissions. In the wave characteristic we find amplitude, period (p), frequency (f).
In the electromagnetic spectrum, gamma rays and even longer wavelengths are made in terms
of wavelengths and frequencies of radiation waves, which is made up of various subranges or
portions whose limits are not entirely defined. The absorbance is more related to what the
sample is since it indicates the amount of light when the incident and transmitted intensity are
equal (l0 = (t) the transmittance of 1 / t. In spectrophotometers we find the measurement of the
absorbance of light .
The spectrophotometers can vary their designs, especially with the incorporation of computers
for what is data analysis, the entire spectrophotometer consists as indicated absolute.
The science photometry that deals with light as the brightness perceived by the human eye
studies the visual system that studies the capacity of electromagnetic radiation
The characteristic of light as the basis of light as the basis of photography. It has a series of
very important characteristics for the photographer and that he must bear in mind, the first of
which refers to the way of propagating
Lambert beer's law the fundamental law governing electromagnetic absorption applicable to
dissolution and also to gases and solids absorbance of electromagnetic radiation produced by
absorbing species is directly proportional to the path of radiation through the radiation through
the solution and the concentration of the substances that produces the absorption A = constant
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of proportionality absorptivity is an intensive property of the material and therefore only
related to its nature.
Keywords: spectrophometry, light characteristic, wavelengths, absorbance, Lambert Baer law
In absorbance, it quantifies the phenomenon that occurs with substance and light radiation, that
is, when the light falls on the sample, the radiation absorbed by substances influences it.
The colorimetric said chemical analysis that is based on what is color intensity and dissolution
the saturation of a color is its degree of purity.
Objetivos
General:
Reforzar el aprendizaje del uso del espectrofotómetro
Especifico:
Conocer los fundamentos de espetrofometria y la ley de Lambert Baer
Conocer la onda apropiada para la determinación de absorbancia
Introducción
La espectrofotometría es una técnica que permite determinar concentraciones de compuestos
de soluciones. Absorben dichas radiación magnética y cantidad de luz absorbida, también de
forma tienen concentración para hacer tipos de medidas. Que se emplea en un espectro
fotómetro que pueden seleccionar las longitudes de onda.
La espectrometría
A menudo se usa para la identificación de dichas sustancias mediante es espectro o absorbido
por las mismas. La espectrometría también se usa en astronomía y detención remota. La
mayoría de los telescopios tiene espectrómetros que son usados para medir la composición
química y propiedades físicas de los objectos astronómicos o para medir o para medir sus
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velocidades atreves de efectos Doppler. Un espectrómetro se usa en espectroscopia para
producir líneas espectrales y medir sus longitudes de ondas. estos instrumentos amplia una alta
variedad de longitudes de onda, desde rayos gamma y rayos X hasta el infrarrojo lejano.
La luz
La que llamamos luz hace parte de espectros magnéticos que pueden ser percibido por el ojo
humano. a parte de la luz existen diversas diversas formas de radiaciones electromagnéticas en
el universo que se propaga por el espacio y se propaga por el espacio y transporta energía de
un lugar a otro como la radiación ultravioleta y por otro lado también los rayos X pero ninguna
de ellas podemos ver a simple vista. La luz visible está compuesta por fotones y tipo de
partículas elementales. Los fotones se comportan de manera dual como ondas y como
partículas.
Comportamiento, cuando la energía luminosa índice en la superficie de una materia puede
darse varios efectos como la transmisión de absorción reflexión, refracción difusión, absorción
interferencia, pluralización, dispersión y estos fenómenos son los que manejan los lentes
fotográficos para hacer imágenes más nítidas y generalmente no se dan en estado si no
combinados entre si
Resumen introductorio
Transmisión: paso de la luz atreves desustancias no pocas pueden ser
Directas: a través de un material transparente, agua, aire, vidrio
Difusa: a través de un material plástico o acrilico
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Y las filtradas pueden ser directas o difusa se produce al atravesar materiales transparentes
translucidos de color como un filtro, donde pasen ciertas o algunas longitudes de ondas y otras
no porque son absorbidas
Característica de la luz
1. Ondulatoria y corpuscular: grandes modelos que han empleado históricamente para la
explicación de la naturaleza de la luz.
En distintas investigaciones se ha determinado que la luz a su vez, ondulatoria (debido a que se
propaga a través de ondas) y corpuscular ya que esta formada por diminutas partículas que son
llamadas fotones. Los modelos corpusculares son complementario no excluyentes
2. Se propaga en línea recta luz: lleva una recta en su propagación
La teoría de Albert Einstein en el año 1905 introdujo un nuevo al afirmar que el espacio-
tiempo, la luz se desplazan en curvas al ser desviada por aquellos elementos que se interponen
en el camino
3. Velocidad finita: es extremadamente rápida en el vacío, esta puede llegar a desplazarse a
cerca de 300.000km/s
4. Frecuencia: se desplazan en ciclos, es decir se mueven desde una polaridad a la siguiente y
luego retornan. Es la frecuencia de la luz la que determina el nivel de energía de un cuerpo a
mayor frecuencia, mayor energía, a menor frecuencia, menor energía
5. Longitud de onda: tiene que ver con la distancia que existen entre puntos de ondas
consecutivas las cuales ocurren en un tiempo determinado
El valor de longitud de onda genera división entre velocidad de onda. entre mas corta sea la
longitud de onda, la frecuencia será más alta y mientras mas larga sea la longitud de onda la
frecuencia será más baja
6. Absorción: las longitudes de onda y frecuencia permite que las ondas tengan un tono
especifico. El espectro electromagnético contiene dentro de si todos los colores posibles
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Los objectos que no absorben son las que están percibidas por color. El electromagnético tiene
área visible al ojo humano y otra que no lo es.
7. Reflexión: tiene que ver con el hecho de que la luz es capaz de cambiar de dirección cuando
se refleja en un área
Esta propiedad indica que, cuando la luz incide sobre un objeto de superficie lisa, el ángulo en
el que se reflejará corresponderá al mismo que tenia el rayo de luz que incidió en primer lugar
en la superficie
8. Refracción: está relacionada con lo siguiente en su recorrido, las ondas de luz pueden
atravesar superficies transparentes perfectamente.
9. Difracción: se basa en el cambio de la dirección de ondas cuando estas pasan a través de
aberturas, o cuando rodean un obstáculo en su camino
10. Dispersión: capacidad que tiene la luz de separase al atravesar una superficie transparente, y
mostrar como consecuencia todos los colores que hacen parte de ella.
Características de la onda
Existen diferentes características de las ondas las cuales son
Amplitud: (A) Es una máxima altura que alcanza la onda se miden en metros
Longitud de onda: distancia que separa dos puntos máximos de una onda
Ciclo oscilación: recorrido de una partícula desde que inicia una vibración hasta que vuelve a
la posición inicial
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Periodo(T): Es el tiempo en que una partícula realiza una vibración (oscilación) completa se
mide en segundo (s)
Frecuencia (F): Numero de oscilación de la partícula vibrante por segundo.
Periodos y frecuencias están relacionados f= 1/T
Espectrofotómetro
La medición de la absorbancia de la luz por las moléculas se realiza de la luz por las moléculas
se realizan en unos aparatos llamados espectrofotómetros, aunque puede variar un diseño, en
especial con la corporación de ordenadores para el análisis de datos todos los
espectrofotómetros
Funciones del equipo
1. Una fuente de energía radiante lampara de deuterio y tungsteno
2. Un monocromador para la selección de radiaciones de una determinada longitud de
una onda: filtro, prisma, redes de difracción
3. Un comportamiento donde se aloja un recipiente transparente (cubeta o tubos) que se
contengan la muestra puede ser de vidrio, cuarzo o plástico transparente para medir en UV se
deben medir las de cuarzo o sílice fundido porque el vidrio no transmite la radiación UV
4. Un detector de luz y un amplificador convertidor de las señales luminosa en señales eléctricas
5. Un registrador o sistema de lectura de datos
Transmitancia
Sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector
una vez que ha atravesado la muestra, (lt) y la cantidad de luz que incidió sobre ella, Io, y se
representa normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x 100
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La transmitancia nos da una medida física de la relacion de la intensidad incidente y
transmitida al pasar por la muestra. Relaciones entre %T y la concentración no es lineal, pero
asume una relacion logarítmica inversa.
Absorbancia
Esta relacionado con la muestra puesto nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma y
se define como el logaritmo de 1/t en consecuencia
A=log 1/t=-loglt/lo
Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (lo=lt) la transmitancia es de 100% e
indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda y entonces A vale log
1=0
La cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que atraviesa la luz a través de la
solución de cromóforo y de la concentración de este
Espectro ultravioleta
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La absorción molecular en la región ultravioleta y visible del espectro depende de las
estructuras electrónica de una molécula. La absorción de dicha energía se cuantifica y da por
resultado ya la elevación de los electrones desde orbitales en el estado básico a orbitales de
mayor energía en un estado excitado. Para muchas estructuras electrónicas, la absorción no
ocurre en una porción fácilmente accesible de la región ultravioleta. En la práctica, la
espectrometría ultravioleta está limitada en gran parte a los sistemas conjugados. Sin embargo,
se tiene gran ventaja en cuanto a la selectividad de la absorción ultravioleta: los grupos
característicos pueden reconocerse en moléculas de complejidad ampliamente variable. Una
gran parte de la molécula relativamente compleja puede resultar transparente en el ultravioleta
de modo que existe la posibilidad de obtener un espectro similar al de una molécula bastante
más simple. El espectro ultravioleta está formado por una gráfica de la longitud de onda en
función de la intensidad de absorción. Los datos frecuentemente se muestran en forma de
gráfica o presentación tabular de la longitud de onda en función de la absortividad molar o el
logaritmo de la absortividad molar max o log máx
Fotometría
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La fotometría es una ciencia la cual se encarga de la medida de la luz como el brillo percibido
por el ojo humano y estudia el sistema visual que estudia capacidad que tiene la radiación
electromagnética
La característica de la luz como base de la fotografía tiene una serie de características muy
importantes para el fotógrafo y que este debe tener presente la primera de ellas se refiere ala
forma que tiene de propagarse
LEY DE BEER-LAMBERT
La espectrometría UV-Vis se utiliza con mayor frecuencia en forma cuantitativa para
determinar las concentraciones de especies absorbentes en solución, usando la Ley de Beer-
Lambert:
-Fórmula Ley de Lambert-Beer
donde A es la absorbancia medida, I0 es la intensidad de la luz incidente a una determinada
longitud de onda, I es la intensidad de transmisión, L la longitud de ruta a través de la muestra,
y c la concentración de las especies absorbentes. Para cada especie y longitud de onda, ε es
una constante conocida como absortividad molar o coeficiente de extinción. Esta constante es
una propiedad fundamental molecular en un solvente dado, a una temperatura y presión
particular, y tiene como unidades 1/M * cm o, a menudo, U/M * cm.
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La absorbancia y extinción ε a veces son definidas en términos de logaritmo natural en lugar
de logaritmo de base 10.
La ley de Beer-Lambert es útil para la caracterización de muchos compuestos, pero no sirve
como relación universal para la concentración y absorción de todas las sustancias
Espectro magnético
Clasifica y ordena ondas electromagnéticas a sus diferentes longitudes y clasificación la
llamamos espectro electromagnético
El aspecto visible, es la luz la cual podemos ver con nuestros ojos esta es una pequeña fracción
de diferentes clases de energía que son de menores frecuencias y por lo tanto son mayores son
mayores la longitud de onda de colores emitidos por el cuerpo térmico. los microondas y las
ondas de radio estos tipos de radiaciones rodeando constantemente rayos ultra violeta (OV) los
rayos X y los rayos gamma esta clase de radiaciones son dañinas para el organismo vivo ya
que tiene frecuencias extremadamente altas y por lo tanto mucha energía
Es por este motivo que se usa loción bloqueadora en las playas, para bloquear los rayos UV
que son provenientes del sol y también para prevenir que los rayos X penetren otras áreas del
cuerpo distintas a las que requiere visualizarse.
Técnicos de rayos X colocan placas de plomo sobre nosotros ya que son altos en frecuencias y
energía
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Por otra parte, nuestra atmosfera absorbe la gamma que provienen del espacio y así nos ayuda
a protegernos del daño
Prueba de colorimetría
Técnicas que suministran información cualitativa y cuantitativa, es una técnica encargada con
mayor asiduidad en laboratorio
Un colorímetro es un diseño para dirigir un haz de luz paralela cronométrica a través de una
muestra liquida y medir intensidad emergente haz luminoso.
Se calibran al ojo humano primeros colorimétricos comparando el color de una solución con
los de una serie de disco coloreado los resultados obtenidos eran subjetivos y no muy exacto
las colorimétricas visuales tienen interés histórico cabe resaltar que el ojo humano tiene una
gran ventaja de poder determinar grado de absorción de un color y ser mucho más objetivo
Se dice que un color tiene mucho vidrio ya sea claro o poco brillo oscuro se puede simbolizar
con L y sus unidades de medidas es (d/m2)
En la longitud de onda es la radiación monocromática correspondiente. Posteriormente se
habla de tono matraz
La fracción de luz incidente absorbida por una solución a una longitud de onda esta
relacionada con el paso óptico y con la concentración de la especie absorbente estas dos
relaciones están combinadas en la ley de Lambert-beer esta ley expresa la radiación que hay
entre absorbancia de la luz monocromática de longitud de onda fijas y la concentración de un
cromóforo en solución.
A = log I/Io = ε·c·l
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Conclusión
Este trabajo ha sido de gran importancia ya que me permite conocer un poco más de
espretofotrometria es un método muy importante ya que se basa en la absorbancia o
transmitancias de las radiaciones.
Todo este tema que contiene este trabajo es de gran utilidad en la actualidad para la
identificación en una muestra problema.
Por otra parte, en la absorbancia se puede observar que dependiendo de la concentración y la
longitud a la cual se le aplique un rayo, puede alcanzar un punto máximo de absorción.
el tema de la ley de Lambert-Beer es un tema interesante ya que permite la determinación de
concentraciones disoluciones problema a partir de rectas de calibrados obtenidas midiendo
absorbancia de patrones de concentraciones conocidas.
para concluir el tema de los rayos ultravioleta, los rayos x y los rayos gamma me llamo mucho
la atención ya que me percato y refuerzo mi conocimiento del gran daño que causan.
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