PRACTICA N° 11 DETERMINACION DE ACIDO URICO EN SUERO, PLASMA U ORINA
SIGNIFICACION CLINICA
El ácido úrico es un metabolito de las purinas, ácidos nucleicos y nucleoproteínas.
Habitualmente la concentración de ácido úrico en suero varía de un individuo a otro de
acuerdo con diversos factores tales como: sexo, dieta, origen étnico, constitución genética,
embarazo. Niveles anormales de ácido úrico en suero son índice de desorden en el
metabolismo de las sustancias que lo originan o de inadecuada eliminación.
FUNDAMENTOS DEL METODO
El esquema de reacción es el siguiente:
La cantidad de ácido úrico se determina midiendo la absorbancia de este pigmento.
UOD: uricasa
POD: peroxidasa
4-AF: 4-aminofenazona
3,5-DHS: sal sódica de 3,5-diclorohidroxibenceno sulfónico
REACTIVOS PROVISTOS S.
Standard*: solución de ácido úrico 10 mg/dl.
A. Reactivo A: solución conteniendo buffer Good pH 7,8 y la sal sódica de 3,5
diclorohidroxibenceno sulfónico (DHS).
B. Reactivo B: solución conteniendo buffer Good pH 7,8, 4-aminofenazona (4-AF), uricasa
(UOD), peroxidasa (POD), y ferrocianuro de potasio.
Concentraciones finales Buffer Good .........................................................50 mmol/l
UOD..................................................................... ≥ 200 U/l
POD................................................................... ≥ 1000 U/l 4-
AF..................................................................0,10 mmol/l
Ferrocianuro de potasio..........................................6 umol/l
DHS....................................................................2,0 mmol/l
REACTIVOS NO PROVISTOS
Calibrador A Plus de Wiener lab.
INSTRUCCIONES PARA SU USO Standard:
listo para usar. Reactivos A y B: listos para usar. Estos pueden usarse separados o como
Reactivo único mezclando 4 partes de Reactivo A + 1 parte de Reactivo B (ej. 4 ml Reactivo A +
1 ml Reactivo B).
PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro"
No ingerir. Evitar el contacto con la piel y los ojos. En caso de derrame o salpicaduras, lavar con
abundante agua la zona afectada. Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos. Todos los reactivos y las muestras deben
descartarse de acuerdo a la normativa local vigente.
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO
Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10o C) hasta la fecha de vencimiento
indicada en la caja. Una vez abiertos, no deben permanecer destapados y fuera del
refrigerador durante lapsos prolongados. Evitar contaminaciones. Reactivo único
(premezclado): en refrigerador (2-10o C) es estable 1 mes a partir de la fecha de su
preparación.
INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS
La dificultad en obtener los valores de los controles dentro del rango asignado (ej. Standatrol
S-E 2 niveles) es indicio de deterioro de los Reactivos. En tal caso, desechar. La turbidez es
indicio de deterioro de los Reactivos. Desechar cuando las lecturas del Blanco sean > 0,200
D.O. o las lecturas del Standard sean anormalmente bajas. MUESTRA Suero, plasma u orina
a) Recolección: se debe obtener suero o plasma de la manera usual. Separar el coágulo lo
antes posible, dentro de las dos horas posteriores a la recolección. Si la muestra es orina,
utilizar preferentemente fresca.
b) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plasma, se recomienda únicamente el
uso de heparina como anticoagulante para su obtención.
c) Sustancias interferentes conocidas: - Medicamentos: las sustancias fuertemente
reductoras, tales como el ácido ascórbico (vitamina C), la Buscapina (butil bromuro de
hioscina), etc. en dosis elevadas interfieren. Por tal razón debe suspenderse la medicación,
siempre que sea posible, 24 horas antes de la toma de muestra. - No se observan
interferencias por bilirrubina hasta 10 mg/dl (100 mg/l), triglicéridos hasta 490 mg/dl (4,9 g/l),
hemoglobina hasta 180 mg/dl y heparina hasta 100 U/ml. Referirse a la bibliografía de Young
para los efectos de las drogas en el presente método.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: las muestras deben ser preferentemente
frescas. En caso de no procesarlas en el momento, las muestras de suero o plasma, pueden
conservarse 3 días a 20-25o C, 7 días a 2-10o C o 6 meses a -20o C.
sin agregado de conservantes. Las muestras de orina pueden conservarse 4 días a 20-25o C a
pH > 8. No refrigerar ni congelar. MATERIAL REQUERIDO (no provisto) - Espectrofotómetro o
fotocolorímetro. - Material volumétrico adecuado. - Tubos o cubetas espectrofotométricas de
caras paralelas. - Baño de agua a 37o C. - Reloj o timer.
CONDICIONES DE REACCION - Longitud de onda: 505 nm en espectrofotómetro o en
fotocolorímetro con filtro verde (490-530 nm). - Temperatura de reacción: 37o C o 18-25o C -
Tiempo de reacción: 5 minutos a 37o C o 20 minutos a 18-25o C - Volumen de muestra: 20 ul -
Volumen final de la reacción: 1,02 ml Los volúmenes de Muestra y de Reactivo pueden
disminuirse o aumentarse proporcionalmente (Ej: 50 ul de Muestra + 2,5 ml de Reactivo único
ó 10 ul +500ul).
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL
El color de reacción final es estable 30 minutos, por lo que la absorbancia debe ser leída dentro
de ese lapso. CALCULO DE LOS RESULTADOS
ácido úrico (mg/l) = D x f
(1) En caso de usar Calibrador A plus, ver la concentración de ácido úrico en el manual de
instrucciones correspondiente. D: lectura de absorbancia del Desconocido S: lectura de
absorbancia del Standard o Calibrador Ejemplo: D = 0,134 S = 0,284
(2) Ácido úrico en el Standard = 10 mg/dl
Ácido úrico en la muestra = 0,134 x 35,21 mg/dl = 4,72 mg/dl
METODO DE CONTROL DE CALIDAD
Procesar 2 niveles de un material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con
concentraciones conocidas de ácido úrico, con cada determinación.
VALORES DE REFERENCIA
Se analizaron con Uricostat enzimático AA líquida, 120 muestras de individuos de
ambos sexos, con edades comprendidas entre 20 y 45 años, provenientes de la ciudad
de Rosario (Argentina), sin síntomas de gota, nefropatía gotosa, nefrolitiasis por uratos
o cualquier otra enfermedad aparente. Se encontró que el 95% de los resultados
cubrieron los siguientes rangos: Hombres: 2,5-6,0 mg/dl Mujeres: 2,0-5,0 mg/dl En la
literatura (Tietz, N.W.) se menciona el siguiente rango de referencia: Suero o plasma
Hombres: 3,5-7,2 mg/dl Mujeres: 2,6-6,0 mg/dl Orina Orina: 250 a 750 mg/24 horas Se
recomienda que cada laboratorio establezca sus propios intervalos o valores de
referencia, teniendo en cuenta la edad, sexo, hábitos alimenticios y demás factores.
CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI
Ácido úrico (mg/dl) x 0,059 = Ácido úrico (mmol/l) Ácido úrico (mg/24 hs) x 0,0059 =
Ácido úrico (mmol/24 hs).
