METABOLISMO DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS
Tema 17:
REPLICACIÓN DEL ADN
PUNTOS A TRATAR
➔ Duplicación del DNA
➔ Etapas
➔ Proteínas involucradas
➔ Importancia biológica
COMPOSICIÓN DEL ADN
El ácido desoxirribonucleico es un compuesto que está formado por la unión de dos
polinucleótidos (cadenas), cuya pentosa es la desoxirribosa y las bases nitrogenadas son: Adenina
(A), Guanina (G), Timina (T) y Citosina (C). Esta molécula no tiene uracilo en su estructura.
ÁCIDOS NUCLEICOS
Son polinucleótidos.
➔ Las bases nitrogenadas corresponden a dos categorías que permiten su apareamiento exacto
(Purinas y Pirimidinas)
➔ Timina para ADN y Uracilo para ARN
➔ ADN resiste a pH alcalino (2-desoxirribosa)
➔ Unión grupo fosfatos por enlaces α (diéster), β y γ (fosfoanhidro)
➔ Altamente energéticos (liberan energía al hidrolizarse).
NOMENCLATURA DE NUCLEOTIDOS Y NUCLEOSIDOS
Normalmente en las purinas la terminación en nina mientras que en las pirimidinas es dina. En el
caso del uracilo no se encuentra nomenclatura para el nucleósido y el ribonucleótido pero no para el
desoxirribonucleótido ya que este tipo de base nitrogenada no se encuentra en el ADN sino solo en
el ARN
ESTRUCTURA DEL DNA
➔ El descubrimiento de que el DNA es una doble hélice ha sido uno de los mayores avances de
la biología molecular.
➔ Las dos cadenas del ADN, unidas mediante los puentes de hidrógeno, forman una
estructura tridimensional conocida con el nombre de doble hélice, en la que las moléculas de
desoxirribosa y fosfato forman la parte externa y las bases se encuentran orientadas hacia el
centro.
➔ Las moléculas de ADN son muy grandes y se encuentran en el núcleo de las células. Tienen
la función primordial de almacenar la información genética, que será transmitida a los
descendientes de un individuo. Además, en esas estructuras se encuentra el código para
ordenar a los aminoácidos en una secuencia definida, con el propósito de fabricar proteínas
específicas necesarias para el funcionamiento de una célula.
➔ Estudios de difracción de rayos X: helicoidal → Doble hélice con distancia entre hélice de 34A
con 10 nucleótidos por vueltas.
MODELO PROPUESTO POR WATSON Y CRICK
➔ Las 2 bandas del DNA están unidas por puentes de hidrógeno, con apareamientos estrictos:
G-C y A-T.
➔ Las 2 bandas tienen orientaciones anti paralelas, de modo que una banda va dirección 5’-3’ y
su complementaria en dirección 3’-5’
➔ Existen 3 puentes de hidrógeno entre G-C y 2 puentes de hidrógeno entre A-T
➔ Entre nucleótidos existe un enlace fosfodiéster: ataque nucleófilo del grupo hidroxilo 3’ sobre
el fosfato α.
➔ El enrollamiento es dextrógiro (hacia la derecha)
➔ Plectonémico: Las dos cadenas no pueden separarse sin desenrollarse.
REPLICACIÓN DEL ADN
Consiste en la formación de dos cadenas de ADN a partir de una, siguiendo como modelo de copia
las dos hebras de la molécula progenitora; cada filamento sirve como molde para la replicación y
reparación de cualquier otro fragmento.
Tiene como objetivo la transmisión de la información genética de célula a célula, y de generación en
generación. Es por ello, que se considera el proceso previo a la división celular en el que se duplica
el ADN de una célula para formar nuevas moléculas, que se van a repartir de manera equitativa
entre cada una de las dos células hijas que se forman durante el proceso de división celular.
La replicación debe ser un proceso extremadamente preciso, que garantice la transmisión de la
información a las células hijas sea idéntica a la de la célula parental; y a su vez lo suficientemente
flexible como para permitir una pequeña tasa de mutaciones que propicien el proceso evolutivo, y
determine las diferencias individuales de los organismos.
CARACTERÍSTICAS
➔ Semiconservativa: cada nueva cadena tiene una hebra del ADN padre y otra hebra de nueva
síntesis.
➔ Es ordenada, secuencial, uni y bidireccional: empieza en puntos concretos y puede transcurrir
en una sola dirección hasta completarse la copia al llegar de nuevo al sitio de origen, o en
ambas direcciones de forma simultánea hasta llegar al punto diametralmente opuesto al
origen.
➔ Son antiparalelas: la dirección en que actúan las enzimas es fijas única de 5´- 3´, esto
determina que la cadena molde tenga dirección 3´ - 5´ para que la nueva cadena en formación
tenga dirección 5´ - 3´. Coincidente con el sistema de trabajo de las enzimas.
➔ Requiere un cebador o iniciador: es un fragmento de ARN que sirve como punto de arranque.
Para la síntesis del cebador se requieren, por tanto, los cuatro ribonucleótidos en su forma
trifosfato.
➔ Utiliza sustratos activados dNTPs (desoxinucleótidos trifosfato): donde N puede ser la
adenina, guanina, citosina o timina.
➔ Utiliza al Mg2+, que actúa como cofactor metálico estabilizando la estructura de los dNTPs y
ATP.
➔ Es el proceso enzimático más exacto que se conoce: requiere de una maquinaria enzimática
compleja.
MODELOS DE REPLICACIÓN
➔ Semiconservativa: cada banda de ADN parental al servir de molde para la banda hija, se
aparea con esta de modo que cada doble hélice resultante va tener una hebra padre y otra
hija.
➔ Conservativa: las bandas de ADN no tienen que desenvolverse para sintetizar las hijas; se
deja leer la secuencia por la enzima polimerizante y el resultado serian dos bandas hijas
juntas y don bandas parentales que nunca se separan.
➔ Dispersivo: ambas células hijas poseen fragmentos de la célula progenitora y fragmentos de
la nueva síntesis.
ESTUDIOS DE ISÓTOPOS QUE DEMUESTRAN LA REPLICACIÓN
➔ Experimento de Meselson y Stahl:
En 1957 Meselson y Stahl desarrollaron un experimento para tratar de averiguar la forma en la que
se realiza la replicación del ADN en E.coli ; para ello realizaron un cultivo durante varias
generaciones, en un medio que contenía un isótopo pesado de Nitrógeno N15. Al cabo de un tiempo
se tomó una muestra (tubo 1), y las bacterias restantes se cambiaron a un medio con el isótopo
ligero de Nitrógeno N14 y se recogieron muestras después de una, dos y tres generaciones (tubo 2,3
y 4).
El ADN aislado de cada tubo se centrifugó hasta el equilibrio en una solución que forma un gradiente
de densidad y luego se determinó en qué posición bandea el ADN de cada tubo.
La posición de densidad intermedia que ocupa el ADN aislado (N14-15) después de una generación
indica que la replicación es semiconservativa y que cada molécula recién sintetizada está formada
por una hebra antigua y una nueva.
ETAPAS DE REPLICACIÓN DEL ADN:
Origen de replicación:
La replicación empieza en sitios específicos denominados origen de replicación (ori). Los orígenes
de replicación conocidos contienen múltiples secuencias cortas repetidas a las que se unen
proteínas específicas y regiones ricas en adenina timina en la cual tiene lugar la separación inicial de
las hebras parentales.
El cromosoma escherichia coli tiene un único origen de replicación, OriC (origen de replicación del
cromosoma). En las células eucariotas hay millones de orígenes de replicación.
Proceso de iniciación:
En escherichia coli, una proteína de iniciación denominada DnaA se une al origen de replicación del
cromosoma, la DnaC que se une a continuación, tiene como función facilitar la unión de la DnaB y la
helicasa que separa las hebras parental es para crear la horquilla de replicación. En el ori se forma
una burbuja de replicación que se aleja del origen en direcciones opuestas, la replicación es pues
bidireccional.
Los eucariotas contienen secuencias especiales sobre las cuales se ensambla un gran complejo de
de proteínas denominado complejo de reconocimiento del origen (ORC), que inicia la formación de
las horquillas de replicación, el ensamblaje del ORC en un origen no es suficiente, un segundo
complejo denominado MCM (proteínas de mantenimiento del minicromosoma), que posea una ligera
actividad helicasa, debe unirse y activarse. Los paso de activación están regulados por ciclinas y
proteínas quinasas dependientes de ciclinas.
Una vez que ha sido activado en un ori el complejo ORC/MSM cataliza la reparación de las hebras
parental es para formar una pequeña burbuja de replicación. Las SSB (proteína de unión específica
a ADN de cadena sencilla) se une para mantener la hebra separada. La helicasa se incorporan a la
burbuja de replicación para desenrollar las hebras en la horquilla de replicación.
Una primasa inicia la síntesis de un cebador de ARN, que es extendido por un ADN polimerasa de la
misma forma que en la hebra retrógrada de una horquilla de replicación.
La polimerasa que extiende es la primera hebra que puede continuar continuar la síntesis y formar la
hebra conductora de la horquilla en uno de los lados de la burbuja de replicación.
En esta mitad de la burbuja se inicia la síntesis del primer fragmento de Okazaki de la hebra
retrógrada, pues que este primer fragmento no colisiona con el fragmento anterior continúa creciendo
y se convierte en la hebra conductora de la horquilla de opuesta.
El resultado son un par de horquillas de replicación que divergen del origen.
El ciclo celular:
En los eucariotas la característica morfológica más destacada del ciclo celular es la mitosis o fase M,
consiste en la condensación, alineación y separación de los cromosomas que preceden a la división
de la célula en dos.
La replicación del ADN tiene lugar en durante la fase S síntesis. la fase G1 se encuentra entre la
mitosis y la fase S y la fase G2 entre la fase S y la mitosis.
Para la variabilidad celular es importante que el ADN se haya replicado por completo antes de la
mitosis. Algo importante para destacar es que durante la síntesis las hebras de ADN crecen
mediante ciclos repetidos de adición de nucleótidos a los extremo 3´ hidroxilo de la cadena, esta
catalizada por una de ADN polimerasa, este proceso tiene relación con lo que sería la elongación de
la cadena.
Terminación de la replicación en genomas circulares:
La terminación de la replicación de un genoma circular generalmente ocurre a 180° de origen. Se
encuentra dos horquillas de replicación convergente y se sintetiza la última porción del genoma.
Es necesario desenlazar topológicamente los dos nuevos cromosoma. Esta es una de las funciones
básicas de la topoisomerasas de tipo II.
El genoma de escherichia coli contiene secuencias especiales de terminación que restringen la
replicación dentro de una región, impidiendo que las horquillas de replicación prosigan.
Terminación de la replicación en genomas lineales:
En los extremos de los cromosomas lineales de los eucariotas se encuentran unas estructuras
denominadas telómeros que contienen muchas repeticiones de una secuencia de seis nucleótidos
rico en guanina.
El extremo 3’ del cromosoma se extiende unos 18 nucleótidos más alto del extremo 5’ dejando tres
repeticiones en este fragmento. El extremo 3’ se repliega sobre sí mismo, formando puentes
hidrógeno y uniendo proteínas que determinan su longitud y lo protegen de una recombinación
excesiva.
ENZIMAS QUE PARTICIPAN EN EL PROCESO:
1. TOPOISOMERASA TIPO I y II:
Las topoisimerasas son, pues, indispensable para la replicación del ADN. La topoisomerasa I
eschericha coli se denomina proteína omega. Omega actúa unidireccionalmente, eliminando sólo en
las vueltas superhelicoidales negativas. La ADN girasa es una topoisomerasa de tipo II, es
indispensable para la replicación del ADN. la ADN girasa elimina vueltas superhelicoidales positivas
e introduce vueltas superhelicoidales negativa, la dirección es la misma.
En humanos se encuentran topoisomerasa tipo I y de tipo II. La topoisimerasa de tipo I llamada
enzima de corte y empalme es capaz de eliminar vueltas superhelicoidales tanto positivas como
negativas y actúan durante la replicación y transcripción. La topoisomerasa de tipo II humana no es
una girasa, pero es esencial en la terminación y en la segregación de los cromosomas.
2. HELICASAS
Las helicasas son enzimas que catalizan el desenrollamiento dependiente de ATP del ADN de doble
cadena. generalmente es necesaria una zona de ADN de cadena sencilla para que se una la
helicasa, la cual luego se desplaza a lo largo de la cadena, rompiendo esos enlaces de puentes de
hidrogeno. actúa en una dirección fija (5→3 ó 3→5) desplazando la cadena del ADN no unida según
se va moviendo, acoplando el movimiento a la hidrólisis del ATP.
3. PROTEÍNAS DE UNION AL DNA DE CADENA ÚNICA o PUBS
Tienen especificidad por hebras de ADN sencillas, es decir , en el momento en que se desenrollan
las hebras, es allí cuando ellas se unen, esta unión es fuertemente cooperativa y va a permitir
mantener el molde en una conformación de una sola hebra extendida. Estas proteínas van a brindar
estabilidad a esas dos hebras para que se mantengan separadas y permitan la participación de
todas las demás enzimas del proceso de replicación.
4. DNA POLIMERASA
La enzima requería la adición de DNA y de Mg2+. Son necesarias dos
moléculas de DNA para la reacción: el molde y el cebador. Este último se
extiende de manera covalente a partir de su grupo hidroxilo 3’. Además, la
polaridad de la cadena de DNA producida (es decir, el cebador extendido) es
contraria a la de la cadena molde.
La reacción de la DNA polimerasa comporta un ataque nucleófilo por el grupo
hidroxilo 3’ del extremo del cebador, sobre el fosfato α del
desoxirribonucleótido sustrato, que da lugar a la formación de un enlace
covalente. Así pues, se gastan dos fosfatos de energía elevada por nucleótido
incorporado.
La enzima puede copiar alrededor de un molde de una sola cadena circular, como el DNA extraído
de pequeños bacteriófagos, siempre que exista un cebador, pero no es capaz de unir los extremos.
Cuando el molde es lineal, la polimerasa copia tan sólo hacia el extremo 5’ del molde y luego se
disocia
De manera similar, la enzima puede llenar un hueco, disociándose cuando el hueco se reduce a una
mella. En ciertas condiciones, la enzima puede también extender desde un grupo hidroxilo 3’ en una
mella. Es característico, cuando ocurre esto, que el extremo 5’ del DNA preexistente se desplace por
delante de la mella. Esto se denomina síntesis con desplazamiento de cadena.
La polimerasa va a llegar con el mononucleotido Trifosfato el cual al unirse a la cadena en formación
se da un ataque electrófilo por parte del grupo hidroxilo libre del segmento cebador al fosfato alfa y
se obtiene ya entonces la cadena con un nucleótido mas, este proceso se va a repetir para asi poder
sintetizar todo el ADN que necesite sintetizarse.
FUNCIONES DE LA DNA POLIMERASA
Además de su actividad polimerasa, la enzima purificada posee dos actividades nucleasa: la 3’
exonucleasa degrada el DNA de cadena única a partir del extremo 3’ y la 5’ exonucleasa degrada el
DNA con apareamiento de bases a partir del extremo 5’.
3’ Exonucleasa: La 3’ exonucleasa realiza una función de “corrección de pruebas” para mejorar la
exactitud con la que se copia el molde de DNA. La actividad eliminará los nucleótidos con un
apareamiento de bases inadecuados desde el extremo 3’ en crecimiento de una cadena
polidesoxinucleotídica, proporcionando a la actividad polimerasa una segunda posibilidad de insertar
el nucleótido correcto especificado por el molde.
5’ Exonucleasa: La actividad 5’ exonucleasa desempeña dos funciones conocidas. La primera de
ellas es la de la escisión (división) de los RNA cebadores en la replicación de la cadena retardada.
En este proceso la enzima cataliza una traslación de mella, de manera que la 5’ exonucleasa elimina
los ribonucleótidos en la misma medida en que la polimerasa los va sustituyendo por
desoxirribonucleótidos. En segundo lugar, la actividad 5 exonucleasa da a la DNA polimerasa I un
papel importante en la reparación del DNA. La exonucleasa puede separar desoxirribonucleótidos, al
igual que ribonucleótidos, del DNA. Cuando el DNA ha sido dañado por la radiación o los productos
químicos, la actividad de traslación de mella de la DNA polimerasa I puede eliminar simultáneamente
los desoxirribonucleótidos dañados y sustituirlos con desoxirribonucleótidos indemnes.
COMPLEJO DE ADN POLIMERASA modelo de hans klenon para explicar la acción polimerasa
y nucleasa de la ADN polimerasa, ella va a tener un lugar activo exonucleasa que es el lugar
correcto o correctivo y va a contar con un lugar activo para la polimerización, es decir, que al mismo
tiempo que la enzima va a adicionando nucleótidos rápidamente para sintetizar la nueva cadena si
llega a haber un error, en esa hebra sencilla el error retarda la actividad polimerasa dejando el
nucleótido mal apareado en el extremo 3´, este retardo permite la fusión espontánea y libera el
extremo 3’ para que contacte con el lugar de la exonucleasa y se elimine el mal apareamiento
apareado que no permite el apareamiento de la nueva cadena sintetizada con el ADN parenteral.
DEFINICIONES CON RELACIÓN A LA FUNCIÓN DE LA ADN POLIMERASA
Proofreading: Corrección de los errores en la síntesis de un biopolímero que contiene información,
por remoción de las subunidades monoméricas incorrectas, después que estas han sido añadidas al
polímero en crecimiento
Procesividad: Se define como el número de nucleótidos que se incorporan por cada fenómeno de
unión entre una molécula de polimerasa y una terminación del cebador.
TIPOS DE ADN POLIMERASA
Tipo I: Constituye un 90 % de la actividad polimerasa observada en E.Coli. En el mutante polA
original descrito por Cairns, la replicación del DNA se producía normalmente. Sin embargo, las
bacterias mostraron una sensibilidad anormal a la radiación ultravioleta y a los agentes alquilantes
que reaccionan con el DNA, lo cual sugiere un papel de la polimerasa I en la reparación del DNA.
Tipo II: Se dice que tiene acción en la síntesis reparadora o procesos de corrección en la síntesis de
ADN. Sintetizada por un gen estructural PolB.
Tipo III: Mayor protagonista del proceso a la cual se le atribuye la capacidad de incorporar
nucleótidos en el proceso de replicación con una velocidad máxima.
SUBUNIDADES DE LA HOLOENZIMA DNA POLIMERASA III
- Descubierta en 1969 Jhon Cairns
- Codificada por un gen estructural llamado PoliC
- Presenta una elevada velocidad máxima
- Actuan en parte como un agregado multiproteico denominado holoenzima DNA polimerasa III
- Compuesta por 10 cadenas polipeptidicas
La holoenzima de la ADN polimerasa III es la enzima principal involucrada en la replicación del ADN
en los procariotas y pertenece a la familia de las polimerasas C. Consta de tres conjuntos: el núcleo
pol III, el factor de procesividad de la abrazadera deslizante beta y el complejo de carga de la
abrazadera.
El núcleo consta de tres subunidades: α, el centro de actividad de la polimerasa, ɛ, corrector de
pruebas exonucleolítico y θ, que puede actuar como estabilizador para ɛ. El factor de procesividad de
la abrazadera deslizante beta también está presente por duplicado, uno para cada núcleo, para crear
una abrazadera que encierra el ADN, lo que permite una alta procesividad. El tercer conjunto es un
complejo cargador de pinzas de siete subunidades (τ2γδδ′χψ).
El gen polC codifica una única cadena polipeptídica, con un Mr de aproximadamente 130 000. Esta
proteína tiene una actividad polimerasa intrínseca, pero es bastante baja.
MODELO DE REPLICACIÓN DISCONTINUA
La enzima ADN polimerasa añade los nuevos nucleótidos en dirección 5'-> 3'. Como las dos cadenas
son antiparalelas (tienen sentidos opuestos), en una de las cadenas la enzima actúa a medida que
se abre la horquilla (cadena continua), sin embargo en la otra cadena (cadena discontinua) la adición
de los nuevos nucleótidos no puede llevarse a cabo de forma continua ya que tiene el sentido 3'-> 5'
y la enzima ADN pol III sólo añade nucleótidos en sentido 5'-> 3'. Para solucionar este problema, a
medida que la helicasa abre la doble hélice original la enzima primasa debe agregar un ARN cebador
en el extremo 3' de la cadena discontinua. A continuación se sintetizará ADN a partir de ese cebador
hasta el ARN cebador anterior. Los cebadores de ARN son luego reemplazados por secuencias de
ADN mediante la acción de la ADN polimerasa I: Los cebadores son retirados o degradados por la
ADN polimerasa I, siendo sustituidos por los desoxirribonucleótidos trifosfato (dNTP)
correspondientes, en lo que se conoce como desplazamiento de la mella. Una vez los cebadores de
ARN han sido reemplazados por ADN, la ADN ligasa une los extremos de los fragmentos de Okazaki
y da lugar a una cadena continua de ADN.
PRIMASA o ARN polimerasas
La síntesis de cada fragmento de Okazaki de la cadena retardada se inicia con la síntesis de un
corto RNA cebador, que se extiende luego por la DNA polimerasa para iniciar la síntesis de un
fragmento de Okazaki debe intervenir otra enzima, la primasa. Como la DNA polimerasa, la primasa
copia una cadena molde de DNA para formar un producto polinucleótido. Sin embargo, ese producto
es RNA, no DNA. A diferencia de la DNA polimerasa, la primasa puede iniciar la síntesis de una
cadena de polinucleótido, posicionando primero un ribonucleósido 5 - trifosfato (rNTP) opuesto a su
base de DNA complementaria, y luego extenderlo a partir del grupo hidroxilo 3 de este rNTP.
Una vez polimerizados varios ribonucleótidos para formar un RNA cebador, la primasa se aparta de
alguna manera del camino y la DNA polimerasa añade un 5 desoxirribonucleótido al extremo 3 del
cebador de RNA y continúa añadiendo luego dNTP en su dirección habitual 5 →3. Las pruebas más
recientes han identificado una subunidad específica de la DNA polimerasa responsable del
desplazamiento de la primasa.
En la imagen se observa:
1) la topoisomerasa, que alivia el estrés de torsión creado por el desenrollamiento del DNA
dúplex;
(2) las helicasa y primasa como componentes diferenciados del primosoma, que desenrollan el
DNA original y sintetizan los cebadores de RNA;
(3) la DNA polimerasa replicativa en forma de dímero, con la elongación simultánea en las
cadenas conductora y retardada;
(4) una abrazadera deslizante que sujeta cada unidad polimerasa a su molde, rodeando
físicamente la cadena de DNA molde;
(5) la proteína de unión al DNA de cadena única, que estabiliza el DNA molde para facilitar un
apareamiento de bases con los desoxirribonucleótidos que llegan.
(6) la DNA polimerasa I y la DNA ligasa, posicionadas para cortar los cebadores de RNA unidos a
la cadena retardada del DNA, sustituir el RNA con DNA y pegar los fragmentos de Okazaki al
DNA de peso molecular elevado. La RNasa H, una enzima que degrada RNA en los híbridos
DNA-RNA, también puede participar en el corte de los RNA cebadores
La enzima que sintetiza los RNA cebadores se denomina primasa. En E. coli, esta enzima es el
producto del gen dnaG, mientras que la reacción equivalente en el fago T4 la realiza el producto
del gen 61. En ambos casos, la enzima es activa únicamente en presencia de otras proteínas
(incluyendo una helicasa),que crean un complejo denominado primosoma, el primosoma participa
también en el desenrollamiento de las cadenas del DNA original por encima de la horquilla de
replicación. El cebado comporta la inserción de un ribonucleósido 5 -trifosfato opuesto a un
residuo desoxirribonucleótido en el DNA molde, seguido por las adiciones secuenciales de
ribonucleótidos al extremo hidroxilo 3 , de la misma forma que ocurre con las DNA polimerasas.
En algún punto, la síntesis de RNA se detiene, el primosoma se disocia y la DNA polimerasa
continúa extendiéndose a partir del extremo hidroxilo 3 del RNA cebador, pero ahora con la
incorporación de desoxirribonucleótidos.
En T4 y en E. coli, la replicación del DNA se produce con cebadores de una longitud de 5 y 11
nucleótidos, respectivamente, y la mayor parte de los cebadores tienen ATP como nucleótido 5
terminal. Sin embargo, todavía no conocemos todos los factores que controlan el paso de la
síntesis de RNA cebador a la síntesis de la cadena retardada del DNA. En conclusión, podemos
resumir a la primasa o ARN polimerasas como:
-Es la encargada de sintetizar los cebadores.
-Es Codificada a partir del gen dnaG.
-Presenta una máxima actividad en presencia de las enzimas que conforman el primosoma.
-El cebado comporta la inserción de un ribonucleósido 5’-trifosfato opuesto a un residuo
desoxirribonucleótidico en el DNA molde.
-No se conocen los factores que permiten la disociación de la primasa y la adición de la DNA
polimerasa.
5. DNA LIGASA
Reiji Okazaki propuso que la ligasa proporcionaba una vía por la cual el DNA se sintetizaba
retrógradamente desde la horquilla en pequeños fragmentos que podían unirse de manera covalente
al DNA de alto peso molecular
La DNA ligasa cierra de manera covalente las mellas del DNA de doble cadena. La mella debe
contener extremos 3’ hidroxilo y 5’ fosforilo, y los nucleótidos que se unen deben estar situados
juntos en una estructura de doble cadena con las bases apareadas de forma adecuada. La DNA
ligasa es la enzima encargada de unir los dos nucleótidos contiguos mediante la formación del
enlace fosfodiéster, sin necesidad de añadir un nuevo nucleótido
La DNA ligasa se activa por la adenililación de un residuo de lisina en el lugar activo (Figura 24.24).
La enzima adenilila a su vez el fosfato 5’ terminal del DNA sustrato, con lo que lo activa para el
ataque nucleófilo por el grupo 3’ hidroxilo, con formación de un enlace fosfodiéster y desplazamiento
del AMP. La enzima del fago T4 utiliza el ATP para adenililar la enzima, igual que hacen las DNA
ligasas de los eucariotas. Sin embargo, la enzima de E. coli y de otras bacterias utiliza en su lugar
NAD+. En vez de actuar como un cofactor redox, el dinucleótido en esta enzima se fragmenta, para
dar la enzima adenililada y el mononucleótido de Nicotinamida (NMN).
Podemos resumir la DNA ligasa como:
-Cierra de manera covalente las mellas del DNA de doble cadena.
-Debe presentar extremos 3’hidroxilos y 5’fosforilos
Importancia biológica de la replicación del ADN
Si el proceso de replicación no ocurre el ADN no pudiera replicarse, es decir no podría formar copias
de sí mismo. La replicación se lleva a cabo en la fase de síntesis (S) del ciclo celular. Esta etapa es
un paso obligado para realizar la división celular. Por ello, al no existir replicación no ocurriría la
división celular, por lo tanto, no se da el paso hacia la formación de la vida, ya que la información
genética se transfiere de una célula a otra mediante el proceso de replicación del ADN.
La representación estructural del ADN en doble hélice permite comprender cómo dicha molécula
puede dar lugar a otras idénticas, sin perder su conformación.
El objetivo de la replicación es el de conservar la información genética, para así perpetuar la vida.
