WORK PAPER No.

PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD

No DE HOJAS : 8

No DE PROCEDIMIENTO (incluye carátula)

ELABORÓ: Dr. E. Fernando Magne Mendieta CÓDIGO

TÍTULO DEL WORK PAPER: MICROSCOPÍA

DPTO. Facultad de Ciencias de la Salud

DESTINADO A:

DOCENTES ESTUDIANTES X ADMINIST OTROS

OBSERVACIONES: Fac. Ciencias de la Salud - primer semestre

FECHA DE DIFUSION: I – 2020

FECHA DE ENTREGA: I – 2020

 FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

MICROSCOPÍA

La invención de las lentes como instrumentos de corrección de los efectos de la visión suele atribuirse a
SalvinoDegliArmati y fue Alejandro Spina quien divulgó su uso construcción a mediados del siglo XIII.

Johannes Kepler (1571-1630). Estudió los fenómenos ópticos y descubrió que la imagen de los objetos se
enfocan sobre la retina, gracias a la refringencia del cristalino. También conocía el papel de las lentes
convergentes y divergentes y las combinaciones de las lentes cóncavas y convexas para la construcción de
telescopios.

Descartes (1596-1650). Escribe su libro DIOPTRIQUE, en el cual describe diversas aplicaciones de las lentes
asociadas a espejos.

Francisco y ZacariasJanssen, fabricantes de anteojos combinaron lentes convexas en un tubo,

determinando la construcción del primer microscopio compuesto; y Campani fue quien construyó un
microscopio que hizo posible la observación de preparaciones por transparencia.

Jaime Faber, es el primero en utilizar la palabra MICROSCOPIUM, para designar al instrumento óptico que
nos ocupa y Anastasio Kircker designó una clasificación de los mismos en su tiempo.

Robert Hooke (1665), en su libro MICROGRAPHIA, describe la circulación de la sangre en los peces, y
examina láminas muy delgadas de corcho comprobando la existencia de múltiples cavidades pequeñas a las
que designó con el nombre de celdillas, donde incorpora al microscopio por él construido el ajuste fino y
una lámpara equivalente al sistema condensador. Define también el principio fundamental de los actuales
objetivos de Inmersión.

Borelius afirmaba que se podía ver moscas del tamaño de elefantes, mientras Antonio Van Leeuwenhoek
(1632-1723) considerado fundador de la bacteriología, observó glóbulos de sangre, bacterias y
protozoarios, describiendo un mundo microscópico jamás visto por el hombre.

Durante el siglo XVIII continuó el progreso de las técnicas de los microscopios y se hicieron grandes
esfuerzos para corregir aberraciones de las lentes.

Ya en el siglo actual el desarrollo de múltiples campos de la investigación y la tecnología incorpora diversas

modificaciones al diseño de los microscopios, determinando un gran avance en la ciencia.

DEFINICIÓN
Se llama microscopio a todo instrumento óptico capaz de producir imágenes ampliadas de objetos muy
pequeños.

La palabra microscopio significa:

Micros = Pequeño Scopein = Ver
Existen dos tipos de microscopios: Simple y Compuesto

MICROSCOPIO SIMPLE

Es el que se halla constituido por un solo lente denominado también Lupa o lente de mano, que produce de
5 hasta 30 aumentos.
Corrientemente son lentes biconvexas o plano convexas, las cuales se pueden montar sobre una armadura
sencilla o sobre un soporte.
Como ejemplos de microscopios simples tenemos: las lupas comunes, las lentes de bolsillos, las lupas de
relojero, él cuenta hilos y el microscopio de disección de fabricación casera.

MICROSCOPIO COMPUESTO

Es el que utiliza dos conjuntos o sistemas de lentes convergentes. Un juego forma el objetivo y produce una
imagen amplificada del objeto, el otro juego forma el ocular que tiene como misión ampliar la imagen
formada por el primero. El aumento del microscopio es el resultado del producto de los aumentos de los
dos sistemas.
Los tejidos observados en el microscopio deben tener un espesor ínfimo, para observar las preparaciones
por transparencia.
Para describir un microscopio compuesto es necesario dividirlo en dos partes:
- Parte mecánica
- Parte óptica

PARTE MECÁNICA
Llamado también estativo o montura. Forma el sostén o armazón del microscopio y contiene accesorios y
aditamentos necesarios para el desplazamiento del tubo y otros elementos. Sus elementos son los
siguientes:
 Base o pie
 Columna o pilar
 Asa o limbo
 Platina
 Sub platina
 Tubo
 Revolver porta objetivos
 Sistema de enfoque

BASE O PIE
Ubicado en la parte inferior del microscopio y está destinado a sostener el instrumento. Presenta diversas
formas, U, Y, V rectangular o circular. Debe ser sólida y pesada ya que le proporciona estabilidad con tres
puntos de apoyo.

COLUMNA O PILAR
Es un vástago metálico que se proyecta desde el tercio posterior del pie. Este puede ser simple, cuando la
inclinación del tubo es fija, o doble al articularse con el asa, mediante una charnela, punto por donde se
inclina, según sea el requerimiento.
ASA O LIMBO
También llamado brazo, es una estructura en forma de C, se une en su extremo superior con el tubo y en su
parte inferior con la platina y la columna. Es el lugar por donde se debe sujetar el microscopio al trasladarlo

PLATINA
Dispositivo plano, de color negro mate para evitar la reflexión de la luz de formas muy variadas, cuadradas,
rectangular o circular. Puede ser fija o móvil, según el modelo.
En ella se colocan las preparaciones para ser observadas. Tiene un orificio en su parte central para permitir
el paso de los rayos luminosos provenientes del sistema de iluminación.
En la parte superior presenta el “carro de movimientos o Charriot”, un sistema de vástagos metálicos
accionados por una manivela lateral, que permiten fijar y sostener la laminilla histológica. Mediante
tornillos, ubicados generalmente a la derecha, se obtiene movimientos antero-posteriores y laterales lentos
y regulares y además presenta una escala que sirve para precisar un área específica de estudio (nonius o
vernier).

SUB PLATINA
Es el conjunto de piezas ubicadas debajo de la platina y representa un sistema de sostén para:
 Condensador
 Diafragma
 Aros porta filtros
Mediante un mecanismo de piñón y cremallera proporciona movimientos de ascenso y descenso para
cambiar el foco de iluminación a voluntad, siendo en otros casos fijo.

TUBO O CUERPO
Es un cilindro hueco, ennegrecido por dentro, para evitar reflejos. En su parte superior se insertan los
oculares y en su parte inferior el revolver porta objetivos. Su longitud es de 160 mm.

REVOLVER PORTA OBJETIVOS

Son dos casquetes superpuestos donde el superior está fijo al tubo y la pieza inferior gira sobre el primero.
Es en este que se enroscan los objetivos, los cuales se presentan en número variable.
Este sistema presenta, en su parte posterior, una lámina metálica fija al casquete superior que encaja en
muescas del inferior, indicando que ambos están en eje óptico.

SISTEMA DE ENFOQUE
Este sistema está representado por dos tornillos o botones, separados o juntos, uno sobre el otro, según el
modelo. Estos son:
a) Tornillo Macrométrico o de Aproximación.- Es el de mayor tamaño y acerca o aleja rápidamente el
tubo de la platina. Estos movimientos amplios representan entre 0,2 a 0,5 cm. por cada vuelta.
Muestra un piñón, (rueda dentada), que engrana a una cremallera (superficie dentada). Ambas
superficies se relacionan al girar el tornillo y presentan dientes de dirección oblicua, para evitar el
descenso espontáneo ya sea del tubo o de la platina.

b) Tornillo Micrométrico o de Precisión.- Acerca o aleja, lentamente el tubo de la platina y es

empleado para lograr un enfoque fino y nítido. Sus movimientos se logran en micras.
PARTE ÓPTICA
Compuesto de un sistema de lentes que captan y amplían la imagen del objeto a observar, consta de:
 Objetivos
 Ocular
 Aparato de iluminación
OBJETIVOS
Son un sistema de lentes positivas dispuestas en cilindros huecos. Su extremo inferior se relaciona con la
preparación y su extremo superior se atornillan al revolver porta objetivos mediante roscas universales.
Presentan grabado, en su exterior, el aumento (x) y la abertura numérica (NA).
La lente principal, es la inferior, plano convexa, llamada “lente frontal” del objetivo y es la única
responsable del aumento. Las demás lentes sirven solo para corregir las aberraciones.
Los objetivos pueden ser:
a) A seco.- Cuando entre la lente frontal del objetivo y el preparado, se interpone el aire. El menor
aumento se denomina de aumento débil y el de mayor fuerte a seco.
b) De inmersión.- son aquellos en los cuales se interpone un líquido transparente, cuyo índice de
refracción sea superior al del aire, ej. Aceite de cedro, es el objetivo más largo, el de mayor
aumento, presenta la palabra OIL, tiene la menor distancia frontal y la mayor abertura numérica.

OCULARES

Son sistemas más sencillos que los objetivos. Van contenidos en tubos cortos que se adaptan en la parte
alta del tubo del microscopio, lugar donde se aplica el ojo del observador.
Su propósito es amplificar la imagen formada por el objetivo, dando una imagen virtual y de mayor tamaño.
En todo ocular se distinguen dos partes:
- Una lente propiamente dicha que actúa como una lupa sobre la imagen que brinda la lente inferior.
- Una lente de campo o colectora situada muy próxima a la imagen producida por el objetivo, esta
corrige las aberraciones de esfericidad producida por los objetivos y hace la imagen un poco más
pequeña y más luminosa proyectándola para que la lente superior la capte.

El tipo de ocular más utilizado es el denominado de Huygens o negativo y está constituido por dos lentes
planos- convexas, entre las que se interpone un diafragma dispuestas como indica la figura.
Los microscopios que presentan un solo ocular se denominan monoculares y los que presentan dos a la vez
se llaman binoculares, pudiendo observar la imagen con ambos ojos a la vez. Estos presentan internamente
láminas o prismas de reflexión que se encargan de desviar las imágenes recibidas por los objetivos y
dirigirlas hacia los oculares.

APARATO DE ILUMINACIÓN
Está situado en la sub platina y presenta:
- Condensador
- Diafragma
- Filtros
- Espejo o fuente de luz
Condensador
Tiene el objeto de reunir (condensar) los rayos luminosos provenientes del espejo o la fuente de luz, en un
cono luminoso que atraviese la preparación (iluminada por transparencia).
El condensador está constituido por dos lentes, una superior plano convexa, denominada lente frontal del
condensador y una inferior biconvexa llamada lente colectriz.

El condensador en algunos casos está fijo en la platina y en otros posee movimientos de ascenso y
descenso para variar el foco a gusto del observador. Si bien el condensador no tiene acción sobre la
amplificación de la imagen, es de vital importancia ya que da la iluminación con la cual el objetivo captará la
imagen.
En algunos casos el condensador está localizado sobre el objetivo mediante un sistema de prismas la luz es
proyectada sobre la preparación, a través del objetivo, el haz luminoso incide sobre la muestra y es captado
nuevamente por el objetivo.

DIAFRAGMA IRIS
Permite al observador controlar la cantidad de rayos luminosos que han de ser empleados en la
observación y habitualmente se localiza por debajo del condensador.
Presenta varias laminillas imbricadas unas sobre otras, de tal forma que conforman un orificio central, que
pueden ser agrandado o disminuido a voluntad, según la cantidad de luz que se requiere mediante una
manecilla lateral.

FILTROS
Son láminas de vidrio de diferentes colores que se emplean para dar un color a la luz de acuerdo a las
necesidades, se colocan en los aros porta filtros descritos en la parte mecánica. Son muy importantes para
obtener el máximo de detalles, especialmente cuando se emplea luz artificial, que generalmente es
amarilla.

ESPEJO O FUENTE DE LUZ

Cuando se emplea luz natural en la observación, se usa el espejo para desviar los rayos luminosos hacia el
condensador.
El espejo del microscopio presenta dos caras, una plana que se emplea cuando la luz es suficiente y otra
cóncava que se emplea cuando la luz es deficiente.
El espejo está sujeto al microscopio por un sistema de cardan que le brinda amplios movimientos de
rotación tanto antero posteriores como laterales.
Según el modelo, el microscopio puede tener una fuente de luz incorporada (lámpara) brindando ésta,
iluminación adecuada y directa sin requerir el espejo.

ASPECTOS ADICIONALES
Se describe a continuación los conceptos de capacidades o poderes, son los siguientes:
- Poder de Resolución
- Poder de Penetración
- Poder de Definición
PODER DE RESOLUCIÓN
Se refiere a la capacidad del microscopio de separar distintamente las imágenes de dos puntos muy
próximos, y no verlos fusionados, determinando así los más finos detalles.
El ojo humano tiene un poder de resolución de 0,2 mm. Es decir que estructuras que están separadas por
espacios menores a 0,2 mm se observan como juntas.
El poder de resolución del microscopio óptico es de 0,25 micrómetros y está en relación a la longitud de
onda de la luz visible.

PODER DE PENETRACIÓN
También llamado poder de profundidad de foco, es la capacidad de presentar perfectamente detallados los
diversos planos del espesor de una preparación, sin variar el enfoque. Es así que a mayor aumento, menor
poder de penetración, y a menor aumento, mayor poder de penetración.

PODER DE DEFINICIÓN
Es la capacidad del microscopio de formar imágenes claras, nítidas de contornos definidos. El primer
objetivo posee esta propiedad.

DISTANCIA FRONTAL
Es la distancia existente entre la lente frontal del objetivo y la preparación, una vez que está enfocado. La
distancia frontal está en relación inversa al aumento del objetivo.

AUMENTO TOTAL
El aumento total del microscopio se obtiene multiplicando el aumento que brinda el objetivo, por el que
logra el ocular, así por ejemplo:

Objetivo 10 x ocular 5 x = 50 x

MARCHA DE LOS RAYOS LUMINOSOS

Los rayos luminosos provenientes de la fuente, son concentrados por el condensador en un punto brillante,
atravesando la preparación, luego los rayos pasan por la lente frontal del objetivo, ampliándose éste de
acuerdo al cuarto al cuarto caso de formación de imágenes, proyectándola hacia el interior del tubo,
Donde es recogida por la lente colectriz del ocular, ésta la proyecta para que la lente superior del ocular la
capte y forme la imagen de acuerdo al sexto caso de formación de imágenes.