ADA

La adenosina desaminasa (ADA) es una proteína producida por las células del organismo y asociada a activación de los
linfocitos; estos son un tipo de leucocitos que juegan un papel fundamental en la respuesta inmune a las infecciones. Los
agentes que estimulan al sistema inmune, como el microorganismo Mycobacterium tuberculosis -causante de
tuberculosis- pueden provocar que se produzca ADA en las áreas del organismo donde se encuentra el bacilo. Esta
prueba mide la cantidad de adenosina deaminasa en líquidos de derrame para así poder establecer el diagnóstico de
tuberculosis extrapulmonar.

San Salvador, el departamento con mayor número de casos detectados presentó alrededor de 794 casos durante el año
2015 la mayoría utilizando la baciloscopia como método de diagnóstico. Dado que la enfermedad puede presentarse de
forma pulmonar y extra pulmonar, los métodos de detección utilizados son variables según sea cada caso, siendo el uso
del método adenosina deaminasa (ADA) el indicado en pacientes donde se sospecha de tuberculosis extra pulmonar
cuando se analizan muestras de líquidos de derrame, ya que dicha prueba alcanza una alta sensibilidad cuando se trata
del análisis de dichos analitos.

Prueba Adenosina Desaminasa (ADA)

El proveedor de servicios de salud debe saber que esta prueba, es una reacción enzimática basada en la catalizacion de
las purinas que se utiliza principalmente para el diagnóstico de la TB extrapulmonar. Su sensibilidad y especificidad es
superior al 95% en países de alta endemia.
Obtención de la muestra: Las muestras para el estudio de ADA se obtienen a través de procedimientos
especiales, en forma aséptica, condición que debe mantenerse hasta su procesamiento.

TOMA DE LA MUESTRA PARA LCR: Es un líquido que circula por los espacios huecos del cerebro y la médula
espinal y entre dos de las meninges (las capas finas de tejido que cubren y protegen el cerebro y la médula
espinal).

La toma de muestra se realiza mediante una punción lumbar debe ser realizada por un médico, en estrictas
condiciones de esterilidad, en jeringa heparinizada quien realice la toma de la muestra deberá lavarse las manos
antes de realizar el procedimiento, además deberá de colocarse una sobretúnica y guantes estériles. La muestra
se colocará en un tubo cónico de plástico sin aditivo de tapa rosca azul. El médico realizará los siguientes pasos
para la toma de la muestra:

 Se localiza la zona elegida para la punción lumbar mediante

palpación de los espacios intervertebrales una vez colocado el
paciente en la posición adecuada.
 Se desinfecta con alcohol al 70% una zona de uso de 10 cm de
diámetro en el área elegida, la aplicación del desinfectante se
hace del centro a la periferia.
 Repetiremos la operación con Yodo povidona que se deja secar
durante un minuto.
 Realizar la punción entre los espacios intervertebrales L3-L4, L4-
L5 o L5-S1, siguiendo las normas de la más estricta asepsia.
 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir
libremente el líquido cefalorraquídeo que se recogerá en tubos,
sin conservantes, con tapón de rosca.
TOMA DE LA MUESTRA PARA LÍQUIDO PLEURAL: Este líquido se encuentra entre las capas de la pleura. La
pleura es una membrana de dos capas que cubre los pulmones y reviste la cavidad torácica. La parte que contiene
líquido pleural se conoce como espacio pleural. En este espacio, normalmente hay una pequeña cantidad de
líquido. Este líquido mantiene la pleura húmeda y reduce la fricción entre las membranas al respirar.
Se realiza por medio de la técnica toracocentesis:

 Sentar al paciente en una cama o en el borde de una silla o una

cama con los brazos apoyados sobre una mesa acolchada
 Se limpia una pequeña zona de piel en la espalda. Se inyecta un
medicamento insensibilizador (anestésico local) en esa zona.
 El médico introduce una aguja a través de la piel y los músculos
de la pared torácica en el espacio pleural.
 Se recoge el líquido para su análisis con las jeringas y tubos
correspondientes.
 Se retira la aguja y para finalizar se le colocará un vendaje sobre
la piel.

TOMA DE MUESTRA DE LÍQUIDO PERITONEAL: Se realiza para

examinar el líquido que se ha acumulado en la zona del abdomen
alrededor de los órganos gastrointestinales. Se realizará la técnica
llamada Paracentesis mediante una punción percutánea abdominal
esto nos permitirá evacuar líquido de la cavidad peritoneal:
 Colocar al paciente en posición supina semi inclinado.
 Realizar antisepsia de piel con alcohol, haciendo círculos desde
el centro hacia la periferia en una zona de unos 10 cm de
diámetro.
  Repetir el paso anterior con Yodo povidona al 10%, dejando secar durante un minuto. En pacientes con
hipersensibilidad al yodo, realizar la desinfección con alcohol 70%, dos veces consecutivas.
 La toma se hace por punción percutánea de forma aséptica para evitar la contaminación por la flora cutánea
o ambiental.
 Luego de obtener el líquido se retira el yodo povidona de la piel con un apósito impregnado en alcohol al
70%.
 Los recipientes idóneos son tubos estériles de tapón de rosca o de presión negativa sin conservantes.

TOMA DE LA MUESTRA DE LÍQUIDO PERICARDICO: Es un fluido que actúa como lubricante del movimiento del
corazón. Se realiza la técnica llamada Pericardiocentesis:

 Se lava la piel del tórax justo por debajo del esternón o del pezón izquierdo.
Se aplicará anestesia en la zona.
 El medico introducirá una pequeña aguja en el tórax, entre las costillas hasta
el saco delgado que rodea el corazón que es el pericardio, podemos realizar
este procedimiento bajo control ecocardiográfico.
 Una vez que la aguja haya llegado al área correcta, se retira y se reemplaza
con una sonda llamada catéter
 Se extrae una pequeña cantidad de líquido.
 Luego de haber realizado el procedimiento se aplicará el apósito.
Condiciones de la muestra:
 Las muestras hemolisadas producen falsos resultados debido a que los eritrocitos humanos tienen un alto
contenido de ADA.
 En promedio las muestras son estables 24 horas a 4°C y hasta 6 meses a -20°C. Estos datos los
utilizaremos dependiendo en el tiempo en el que se vaya a procesar la muestra.
 Cantidad de muestra a utilizar:

LCR 1ml
LIQUIDO PLEURAL 5ml
LIQUIDO PERITONEAL 5ml
LIQUIDO PERICARDICO 1ml

Transporte de la muestra: Se aconseja transportar la muestra adicionada de una cantidad refrigerante y con las
medidas de bioseguridad que corresponden al traslado de cualquier muestra potencialmente contaminada. Para
eso utilizaremos el triple embalaje:

TRIPLE EMBALAJE: En el transporte de muestras de materias biológicas de la categoría B, que pueden ser o son
infecciosas, o de categoría A, que son materias infecciosas de alto riesgo, se emplea un sistema de triple
embalaje con el fin de garantizar la integridad de las muestras y, en caso de accidente, minimizar la exposición a
estas por parte de personas y medio ambiente.
CONTIENEN RECIPIENTES PRIMARIOS Y ENVASE SECUNDARIOS:
RECIPIENTES PRIMARIOS:
Contienen las muestras y obligatoriamente deben ser estancos. En caso de contener
muestras líquidas, deberá colocarse material absorbente (polímero tecnológico), entre este y
el envase secundario, con capacidad suficiente para absorber la totalidad del contenido en
caso de rotura. Por ejemplo: tubos de muestras, placas de Petri, botes de orina, etc

ENVASES SECUNDARIOS
Estos envases pueden ser flexibles o rígidos y cuentan con cierres de seguridad. En el caso
de los flexibles son termo sellados y acompañados de una bolsa canguro exterior para
incluir la documentación. Permite la colocación de una extensa variedad de gradillas con los
recipientes primarios sin ninguna manipulación posterior, facilitando el workflow y
manteniendo la bioseguridad. Puede alojarse con un enfriador de temperatura variable que
distribuya el frío de manera uniforme.

EMBALAJE EXTERIOR
Es un embalaje rígido y robusto para proteger los envases secundarios y los recipientes
primarios ante posibles daños durante el transporte. Incluye elementos de estabilidad para
garantizar la correcta posición y seguridad de estos y todos los pictogramas requeridos para
su transporte Los materiales de fabricación deben proporcionarle una larga vida útil y que
permitan su limpieza y mantenimiento.
Llenar correctamente el formulario de solicitud de la prueba, descrito en el anexo 16, posteriormente será
explicado.

Enviar en forma adecuada la muestra al laboratorio de referencia del Hospital Nacional de Neumología y Medicina
Familiar "Dr. José Antonio Saldaña", Hospital Nacional Rosales o ISSS, lo más pronto posible en horas de la
mañana para su procesamiento, ya que estos son los únicos establecimientos que realizan la prueba en el país.
PROCEDIMIENTO:
Determinación cuantitativa de Adenosina Deaminasa (ADA) en muestras humanas, según la casa comercial
SPINREACT:
PREPARACIÓN: Los reactivos están listos para su uso. Antes de ser usados necesitan reconstituirse con 1,0 mL de
agua destilada.
PRECAUCIONES: R1 es sensible a la luz y se debe conservar en lugar oscuro. Los reactivos contienen 0,1% Azida
Sódica por lo tanto se debe evitar la ingestión o el contacto con la piel o membranas mucosas. En caso de contacto con
la piel, limpiar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, acudir inmediatamente
al médico. Todos los especímenes utilizados en esta prueba se deben considerar como potencialmente infecciosos.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en
la etiqueta, cuando se mantienen bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación durante el uso.
No se deben utilizar reactivos fuera de la fecha indicada. Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia de
partículas y turbidez.
MATERIAL ADICIONAL
 Espectrofotómetro o colorímetro para mediciones a 540/550nm.
 Baño termostático a 37ºC ( 0.1ºC) - Cubetas de paso de luz de 1,0 cm.
 Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS: El ensayo se puede realizar con suero, plasma heparinizado, líquido pleural, o líquido cefalorraquídeo
(LCR). No debemos de utilizar citrato ni oxalato como anticoagulante. El plasma y el suero, tras la rápida separación de
las células o coágulos, se deben cerrar herméticamente con un tapón, en el caso que hayamos realizado una punción
venosa. El contenido de ADA de la sangre permanece estable durante una semana cuando se almacena a 2-8ºC. El
líquido pleural se debe recoger en un tubo estéril o heparinizado y procesado dentro de las siguientes 2 h a temperatura
ambiente, o conservarlo a 2-8ºC o -20ºC durante 2 días y hasta 2,5 años conservado a -80ºC. El líquido cefalorraquídeo
(LCR) debe ser claro y recogido en un tubo estéril sin anticoagulante. El reactivo de ADA en LCR es estable durante 24 h
a 25ºC, 7 días a 2- 8ºC y 3 meses a -20ºC.
PASOS:
 Condiciones de la prueba:
 Longitud de onda de nuestro espectrofotómetro debe de ser (principal/sub): 550 nm (nanómetros)
 Mezclar 5 μL de muestra con 180 μL R1 e incubar a 37ºC durante 3 minutos.
 Añadir 90 μL R2 en la cubeta, mezclar y esperar durante 5 minutos.
 Posteriormente colocamos la cubeta correctamente en el espectrofotómetro y se leerá la absorbancia inicial luego
encenderemos el cronómetro simultáneamente, y leeremos otra vez después de 3 minutos.
 Para tener nuestro valor final calcularemos el cambio de absorbancia por minuto (A/min)
Unidades: La concentración se expresa en unidades por litro (U/L).
CONTROL DE CALIDAD: Es conveniente analizar junto con las muestras control valorados. Si los valores de control
están fuera del rango definido, se debe revisar el instrumento, los reactivos y la técnica. Cada laboratorio deberá disponer
su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso que los controles no cumplan con las tolerancias.
VALORES DE REFERENCIA
 Suero: 0 -15 U/L
 Líquido pleural: 0-30 U/L
 LCR: 0-9 U/L
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.