Actividad enzimática

¿Cianuro y Plomo inhiben la actividad de la enzima catalasa?

Benemérita Universidad Autónoma de Puebla. CONCLUSIÓN:

INTRODUCCIÓN Facultad de Ciencias Químicas . El plomo y el cianuro sí actúan como inhibidores de la catalasa, reducen su actividad enzimática relacionandose con el grupo HEM en el caso del cianuro y con los SH en el caso del
Las enzimas son proteínas globulares que presentan residuos estructurales y tienen un lugar donde interaccionan con el sustrato (reactivo) denominado sitio activo en donde se encuentran los residuos catalíticos, son los Laboratorio de Bioquímica I. plomo.
catalizadores más eficientes que se conocen. La catalasa es una enzima con gran importancia biológica, pues una enzima “protectora”, encargada de disminuir el estrés oxidativo en los organismos, descompone al peró-
xido de hidrógeno que resulta de algunas vías metabólicas. Es importante también conocer los mecanismos inhibitorios de esta enzima, ya que estos agentes producirán una serie de efectos nocivos en los organismos.
Profesora Leticia García Albarrán
Licenciatura en QFB.
DISCUSIÓN:
CONCEPTOS En los tejidos hervidos notamos que la temperatura influyo en la función de la enzima catalasa, puesto que al ponerla en el baño María por los 5 min, y después al adicionarle el H2O2 la intensidad
de la reacción fue casi nula ya que no hubo ninguna reacción, podemos decir entonces que la enzima catalasa ya no se encontraba activa; en comparación al tubo que contenía solo el tejido crudo y al
Los enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas en los seres vivos. Los enzimas son catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse en una reacción, aumentan notablemente su velocidad. No hacen
factibles las reacciones imposibles, sino que sólamente aceleran las que espontáneamente podrían producirse. Ello hace posible que en condiciones fisiológicas tengan lugar reacciones que sin catalizador requerirían introducirle H2O2 este presento una un intenso burbujeo por lo que podemos decir que la enzima catalasa se encontraba activa, reaccionando con el peróxido de hidrógeno y liberando oxígno
condiciones extremas de presión, temperatura o pH. (burbujeo)
La sustancia sobre la que actúa el enzima se llama sustrato. El sustrato se une a una región concreta del enzima, llamada centro activo. El centro activo comprende (1) un sitio de unión formado por los aminoácidos que
están en contacto directo con el sustrato y (2) un sitio catalítico, formado por los aminoácidos directamente implicados en el mecanismo de la reacción. Una vez formados los productos el enzima puede comenzar un En los tubos con NaCN se presenta una poca cantidad de burbujeo ya que como dicho anteriormente el CN es un inhibidor irreversible y este hace que la enzima se destruya y no realice su proceso,
nuevo ciclo de reacción.
CLASISFICACIÓN TRADICIONAL DE LAS ENZIMAS este efecto solo lo observamos en el tubo con el tejido de manzana ya que no presentó burbujeo i y por lo que pensamos que en los demás tubos tuvimos un pequeño error al pipetear la solución de
 DESHIDROGENASAS. Catalizan la pérdida de hidrogeno (H+ y e-) de un sustrato teniendo como aceptor una molécula diferente al oxígeno. H2O2 ya que observamos un burbujeo bajo pero en parte si impidió que la catalasa disminuyera su función.
 OXIDASAS.– Catalizan la pérdida de hidrógeno de un sustrato teniendo como aceptor al oxígeno. Finalmente en los tubos con Pb(No3)2 notamos una cantidad moderada de burbujeo ya que este inhibidor actúa diferente, no se sitúa totalmente en el sitio activo si no que hace que la enzima catalasa
 QUINASAS (CINASAS) Catalizan la transferencia de grupos fosfato del ATP a otra molécula.
INHIBICIÓN
retarde y se le dificulte el proceso o la función que tiene que realizar, por ello se nota que un poco de burbujeo al añadirle el H2O2.
 TRANSAMINASAS.– Transfieren grupos amino a grupos carboxilo.
 FOSFATASAS.– Rompen enlaces fosfoéster en presencia de agua. OBJETIVO: También podemos determinar que la cantidad de inhibidores aplicados ara este modelo experimental, fue suficiente para limitar o reducir la actividad enzimática de la catalasa presente en el tejido y
 TIOQUINASAS.– Forman enlaces tioester dependientes de ATP a partir de la coenzima A y ácidos carboxílicos.
 MUTASAS.-Catalizan rearreglos intramoleculares de grupos funcionales.
Reversible Irreversible ¿Cianuro y Plomo inhiben la actividad de la enzi- las muestras, sin embargo no fue la suficiente para inhibir totalmente la reacción de la catalasa con el peróxido de hidrógeno.
 TRANSALODASAS Y TRANSCETOLASAS. Transfieren grupos de tres y dos carbonos respectivamente. ma catalasa?
 EPIMERASAS.-Catalizan la formación de compuestos con orientaciones espaciales diferentes. Los inhibidores se unen Los inhibidores se
 DESCARBOXILASAS.– Eliminan grupos carboxilo. unen
Material:
REGISTRO:
en forma no covalentes en forma covalente
 SINTETASAS.– Forman nuevos compuestos por condensación de dos sustratos.
 HIDROLASAS.– Rompen enlaces introduciendo una molécula de agua. El alumno deberá traer:
 FOSFORILASAS.-Introducen fosfato inorgánico.  H2O2
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
 Papa* Las X representan el nivel de burbujeo observado Papa xxxx x x xxx
 Hígado de pollo*
INHIBICION ENZIMATICA: La inhibición es la dismi- xxxxx xxx x xxx
nución de la actividad enzimática que se puede lograr por Dependiendo de la cantidad de enzima o inhibidor la inhibición puede Clasificación de los tipos de  Manzana* Higado
desnaturalización, ya que se trata de una ser: inhibición reversible  2 goteros
proteína y por lo tanto le afectan pH, temperatura, agitación Total Parcial Las sustancias que se comportan como inhibidores  Pinzas pequeñas Manzana xxx x xx x
La concentración de inhibidor La concentración de inhibidor competitivos, suelen tener una estructura semejante
vigorosa, por citar algunos agentes. es igual o menor que la enzima es menor que la enzima a la del sustrato. El efecto de un inhibidor competiti-  Papel absorbente
LAS CATALASA
Competitiva vo sobre la actividad puede invertirse aumentando la  Cuchillo
concentración de sustrato.
Se han identificado tres grupos de catalasas:  * todo crudo Manzana
i) las catalasas monofuncionales, que contienen hemo y están presentes tanto en los organismos procariotos como en los eucariotos, El inhibidor solo se une al complejo enzima – sus- papa Hígado de pollo
Acompetitiva trato, y no a la enzima libre. La adición de más sus-
En el laboratorio.
ii) las Mn-catalasas, que son enzimas hexaméricas que no tienen hemo, tienen Mn en el sitio activo y sólo están presentes en algunos
organismos procariotos anaerobios trato a la reacción da lugar a un aumento del grado  12 tubos de ensaye
iii) las catalasas-peroxidasas, que tienen actividad de catalasa y de peroxidasa, contienen hemo y sólo están presentes en las bacte- de inhibición.  1 Baño María a 100 °C
rias y los hongos (3). El inhibidor se une a un sitio diferente al funcional  Pipetas
La mayoría de los organismos aerobios tienen catalasas monofuncionales. Las catalasas catalizan la dismutación del peróxido de hi- de la enzima .
drógeno en agua y dioxígeno evitando así que se forme el radical hidroxilo y el oxí- geno singulete, especies de oxígeno que son muy Hay dos formas, ya que se une a la enzima indepen-  1 Gradilla
reactivas. En el hombre, la catalasa protege la hemoglobina del peróxido de hidrógeno que se genera en los No competitiva dientemente del sustrato. Se une a la enzima al Reactivos:
eritrocitos. También tiene un papel de protección en la inflamación, en la prevención de mutaciones, evita el en- sustrato ES y luego el inhibidor —ESI, y la otra  Agua destilada
forma es que se una antes que el sustrato EI —-
vejecimiento y cierto tipo de cáncer
ESI.  Cianuro de sodio al 5 %
 Nitrato de plomo al 5 %

FUNDAMENTO
ENZIMA CATALASA
El peróxido de hidrógeno se forma por la dismutación del radical superóxido y también en la reacción de algunas oxidasas, es tóxico para la mayoría de los organismos vivos. Muchos organismos
son capaces de destruir el H2O2 mediante la acción de enzimas antes de que pueda realizar mucho daño. El H2O2 se convierte en oxígeno y agua según la siguiente reacción: 2 H2O2 → 2 H2O +
O2
Aunque esta reacción ocurre espontáneamente, las enzimas incrementan la velocidad de reacción de forma considerable. Se conoce que al menos dos enzimas diferentes catalizan esta reacción:
a) catalasa, que se encuentra en animales y protistas
PROCEDIMIENTO:
b) peroxidasa, que se encuentra en las plantas.
La catalasa es una enzima que pertenece a la oxidorreductasas, se encuentra presente en los peroxisomas de las células de todos los tejidos animales, unida a â-Nicotinamida adenina dinu-
cleótido 2´fosfato reducido (NADPH), que la protege de la inactivación y aumenta su eficiencia, y en vegetales (peroxidasa).

Actúa sobre el peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) descomponiéndolo en agua y oxígeno, y liberando energía en forma de calor. El agua oxigenada es un producto resultante de las reaccio-
Cortar en trozos delgados cada tejido y De cada tejido separa una por-
nes metabólicas y si no se destruye puede ser tóxica para la célula. Si se pone un tejido en contacto con el agua oxigenada se observa la aparición de efervescencia (producción de oxígeno).
La enzima catalasa descompone a la molécula de peróxido de hidrógeno en un proceso de dos pasos. La primera etapa implica que la enzima choque con la molécula de peróxido de hidrógeno. ponerlo sobre el papel absorbente ción y ponerla en un tubo y cu-
Un átomo de oxígeno del peróxido de hidrógeno se une a un átomo de hierro en la catalasa. Un segundo peróxido de hidrógeno es entonces capaz de unirse a la enzima catalasa, que luego rompe brir con agua destilada, introdu-
la molécula y la convierte en agua y gas oxígeno. (procurar que todas las muestras sean del
Enz (Por-FeIII) + H2O2 → Compuesto I (Por+•-FeIV-O) + H2O cir en agua hirviente durante 5 Prepare una serie de tubos para cada
Compuesto I (Por+•-FeIV-O) + H2O2 → Enz (Por-FeIII) + H2O + O2
mismo tamaño). No debe tocarse con los
minutos, colocar estas porciones tejido como lo indica la tabla.
Compuesto I (Por+•-FeIV-O) + CH3CH2OH → Enz (Por-FeIII) + CH3CHO + H2O dedos si no manipularse con las pinzas.
Cumple también la función de detoxificar otros sustratos como fenoles y alcoholes mediante una vía de reducción acoplada a H2O2 y se le ha atribuido un rol antioxidante de gran importancia, pues
al disminuir el nivel de H2O2 disminuye también el riesgo de formación de •OH mediante la reacción de Fenton.
sobre papel absorbente.
Además, cumple con una función protectora contra determinados microorganismos patógenos, sobre todo anaerobios. Las bacterias anaerobias, mueren al estar en contacto con oxígeno, es por
esta razón que el oxígeno producido por esta enzima tiene efecto bactericida sobre estos microorganismos.

INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
La actividad enzimática se puede inhibir, es decir, reducir o eliminar la actividad enzimática o catalítica de enzimas específicas.
La inhibición puede ser: Agua Destilada
Irreversible - el inhibidor se une covalentemente a la enzima, casi siempre a un grupo de la cadena lateral de los amino ácidos en el foco activo. La enzima queda inactiva permanentemente.
Reversible: el inhibidor puede disociarse de la enzima porque no se une por enlaces covalentes. Esta inhibición puede ser competitiva o no-competitiva. Contenido Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
(a)Inhibición Competitiva - el inhibidor competitivo es muy similar al sustrato normal de la enzima. Dada esa similitud estructural, este tipo de inhibidor se une reversiblemente al foco activo de la Tejido Sin hervir Hervido Sin hervir Sin hervir
enzima. Mezclar bien, marcar con cruces de
Inhibición No-Competitiva: el inhibidor se combina con la enzima en un lugar distinto al foco activo. La unión del inhibidor afecta la configuración tridimensional de la enzima y bloquea la reacción. NaCN 5% ———-— ——–—- 5 gotas ———–
Este tipo de inhibidor no compite directamente con el sustrato para unirse a la enzima (no afecta la unión ES). 1 a 5 según aprecie la intensidad del Pb(NO3)2 5% ——-—— ——–— ———–-- 5 gotas
burbujeo en cada serie de tubos. H2O2 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml
Cianuro
Es una sustancia química de uso industrial, minero como agente acomplejante de iones metálicos, en la galvanoplastía de electrodeposición de zinc, oro, cobre y especialmente plata, y de uso en
la producción de plásticos de base acrílica.
La acción dela catalasa es por vía de la reacción directa del ión Fe(III) con el oxígeno, para liberar el peróxido y formar agua.
La elevada constante de formación de complejos de hierro trivalente y divalente con aniones cianuro es debida al fuerte enlace sinérgico originado por la suma de dos efectos:
- Donación de e- por parte del ligando en enlace s.
- Retrodonación de e- por parte del metal en enlace p.
Ya que el cianuro se une por en laces covalentes al grupo funcional de la enzima, su inhibición es irreversible. CUESTIONARIO:
Plomo 1.– ¿Cuál es el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática?
El plomo ejerce sus efectos a través de su unión con grupos sulfhidrilos de proteínas y en las enzimas produce una inhibición de enzimas asociadas a membranas, por medio de la competición y
desplazamiento del calcio, y alteración en el metabolismo de la vitamina D; la calmodulina es una proteína importante para la regulación intracelular del calcio, y su funcionamiento es alterado por Todas las enzimas son proteínas. Por lo tanto, todas las enzimas sufren desnaturalizarción frente al calor. Esto quiere decir que cuando la temperatura es muy elevada, la enzima pierde su estructura terciaria,
el plomo. por lo tanto su sitio activo también se desnaturaliza, y ya no puede cumplir su función. Este hecho se puede demostrar repitiendo el experimento anterior, pero habiendo hervido previamente los trocitos de híga-
La unión del plomo a la catalasa se da en los grupos sulfhidrilo libres de las cisteínas que contiene la enzima, de forma covalente, por lo que su inhibición sobre la enzima es irreversible. do. Cuando añadimos el agua oxigenada, no se observa el burbujeo.
En general, la velocidad de la reacción se incrementa con la temperatura hasta que un punto máximo es alcanzado. Este incremento se debe a que aumenta el número de moléculas ricas en energía que pue-
den pasar la barrera energética de estado de transición, para formar a los productos; la temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama temperatura óptima.
TEMPERATURA La temperatura afecta a las reacciones químicas. Las reacciones enzimáticas no son la excepción. Pero debido a que las enzimas son proteínas se presenta una des- Sin embargo, si la temperatura aumenta por encima de la temperatura óptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimática debido a que la enzima se desnaturaliza.
naturalización térmica. En general, la velocidad de la reacción se incrementa con la temperatura hasta que un punto máximo es alcanzado. Este incremento se debe a que aumenta el número de Cada enzima posee una temperatura óptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de 37°C.
moléculas ricas en energía que pueden pasar la barrera energética de estado de transición, para formar a los productos; la temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama tempera- 2.– ¿Qué es el factor Q-10?
tura óptima. Sin embargo, si la temperatura aumenta por encima de la temperatura óptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimática debido a que la enzima se desnaturaliza.. Cada enzima
posee una temperatura óptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de 37°C. Otro parámetro que se utiliza para cuantificar el efecto de la temperatura es el coeficiente de temperatura (Q10), que se define, para una temperatura dada, como el factor de incremento de la velocidad de
reacción cuando la temperatura se incrementa 10 o C.
*La enzima catalasa, al igual que otras proteínas, se puede desnaturalizar al exponerla a altas temperaturas. Al perder su estructura se perderá también la fun-
ción, por lo que no podrá descomponer el agua oxigenada. BIBLIOGRAFÍA. Se calcula:
LEHNINGER, A. L. Bioquímica 2a Edición España (Barcelona) Ediciones 3.– Escribir el complejo que se forma con el Fe y el CN.
Omega, 2003.
Ayudas Didácticas para QFB, Departamento de Bioquímica– Alimentos El ion ferroso forma un complejo con seis iones cianuro (CN) y es un complejo octaédrico que se llama ferrocianuro. El ion férrico también forma un complejo
Facultad de Ciencias Quimicas, 2010. con seis iones cianuro, el complejo octaédrico formado se llama ferrocianuro y la única diferencia es que el complejo de hierro II tiene un electrón más que el com-
plejo de hierro III.