aplicaciones campo oscuro : En microscopía de campo oscuro, el contraste se
crea por un espécimen brillante sobre fondo oscuro. Esta es ideal para revelar
contornos, bordes, fronteras y gradientes de índice de refracción, pero no brinda
mucha información sobre la estructura interna. Los objetos ideales incluyen células
vivas sin tinción (donde el campo oscuro brinda información no visible con otras
técnicas), aunque también se pueden observar exitosamente células fijas teñidas.
Las imágenes de campo oscuro son particularmente útiles en hematología para
examinar sangre fresca. Los especímenes no biológicos incluyen minerales,
cristales químicos, partículas coloidales, inclusiones y porosidad en vidrio,
cerámicas, y secciones delgadas de polímeros.
PRINCIPIOS Y FUNCIONAMIENTOS CONFOCAL: El funcionamiento del
microscopio láser confocal es muy similar al del microscopio de epifluorescencia.
Su principal ventaja es que permite obtener imágenes de mayor calidad mediante
técnicas de filtrado espacial que eliminan la luz que proviene de planos fuera de
foco. Esto permite controlar la profundidad de campo y, además, obtener series de
imágenes del espécimen cambiando el plano de foco. Se pueden obtener
secciones ópticas de 0.5 a 1.5 micras de especímenes fluorescentes de un
espesor de aproximadamente 50 micras o más.
Microscopía de fluorescencia: una sustancia natural en las células o un
colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo
parte de la energía absorbida como rayas luminosas: esto se conoce como
fluorescencia. La luz fluorescente de mayor longitud de onda se observa como si
viniera directamente del colorante. Microscopio de fluorescencia: Microscopio que
incorpora una lámpara especial, que actúa emitiendo una luz excitadora de los
fluorocromos, con los que se tiñen las muestras a observar, y que posee además
un filtro especial, que permite el paso de la luz emitida por el fluorocromo.
Aplicaciones del microscopio de fluorescencia
Son numerosas las aplicaciones de la microscopía de fluorescencia, notablemente
en biología y medicina (112, 113, 114):
• Marcaje de moléculas en células y tejidos para su caracterización e
identificación.
• Estudio de células normales y patológicas.
• Estudios inmunológicos.
• Mineralogía.
Microscopía en contraste de fase:
se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras
de las células sin colorear. Es ideal para especímenes delgados, o células
aisladas. El microscopio de fase ilumina el espécimen con un cono hueco de luz,
como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo, en el microscopio de fase
el cono de luz es más estrecho y entra en el campo de visión del objetivo, que
contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y
provoca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de
iluminación provoca variaciones minúsculas en el índice de refracción de un
espécimen transparente, haciéndolo visible. Este tipo de microscopio es muy útil a
la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biología y
medicina
APLICACIONES:
La imagen de contraste de fases es aplicable a varios objetos transparentes, como
células vivas en cultivos, micro-organismo, rebanadas delgadas de tejido, patrones
litográficos, vibras, dispersiones de látex, fragmentos de vidrio, y partículas
subcelulares (incluyendo núcleos y otros organelos) donde la técnica revela
estructuras que no son visibles en campo claro. Una ventaja de la microscopia de
contraste de fases es que las células vivas pueden ser observadas en detalle sin
la necesidad de teñirlas o usar fluoróforos.
