UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
INFORME DE PRÁCTICA VIRTUAL N° 5 y 6
“Extracción y Calidad de ARN”
CATEDRA:
Biología Molecular
ALUMNO:
Javier Alejandro Flores Alayo
DOCENTE:
Blgo. Psq. Ronald Fernando Zelada Mázmela, McS, PhD(c)
Abril del 2021
1. Título.
“Extracción y Calidad de ARN”
2. Objetivos principales:
Conocer el uso de equipos anexos y el desarrollo del protocolo específico para la
extracción de ARN.
Conocer las metodologías de evaluación de la calidad del ARN extraído.
3. Material y métodos:
Observar los videos [Link] y
[Link] y leer artículo: Extracción
de ARN total en plantas y hongos filamentosos.
4. Desarrollo:
1. ¿Qué es el RNA later y cuál es su función?
La solución “RNAlater” de estabilización de ARN es un reactivo de
almacenamiento de tejido acuoso que penetra rápidamente en la mayoría de los
tejidos para estabilizar y proteger el ARN en muestras frescas. Elimina la
necesidad de procesar o congelar muestras inmediatamente; la muestra puede
simplemente sumergirse en la solución “RNAlater” y almacenarse para su
análisis en una fecha posterior.
Según Life Technologies: Las muestras en la solución RNAlater se pueden
almacenar durante períodos prolongados en condiciones donde la degradación
del ARN normalmente tomaría colocar rápidamente. Los tejidos se pueden
almacenar indefinidamente en: Solución RNAlater a –20 ° C o menos.
2. ¿Qué significa EDTA y cuál es su función en la extracción de ácidos nucleicos?
Las siglas “EDTA” representan a agentes quelantes que son utilizados en la
primera etapa de purificación del ARN. Funcionan protegiendo los ácidos
nucleicos de la acción enzimática de nucleasas. Los agentes quelantes como lo
indican Rojas, Portal y Jiménez (2011) “capturan los iones y no permiten que
actúen como cofactores de estas enzimas. Las altas concentraciones de NaCl se
utilizan para prevenir la contaminación de las muestras con polisacáridos que
afectan la pureza de los ácidos nucleicos”.
3. ¿Cuál es la función del fenol y del fenol: cloroformo en la extracción de ARN?
Fenol y Fenol: cloroformo son solventes encargado de eliminar los restos de
proteínas que contaminen las muestras de extracción. Realizan esta tarea
desnaturalizando proteínas que migran a la fase orgánica o interfase, mientras
que los ácidos nucleicos se mantienen en la fase acuosa. De esta manera se
asegura una mejor extracción.
4. ¿Qué es la melanina y cómo afecta la extracción de ARN en hongos?
La melanina es un compuesto fenólico, que también se considera pigmento
asociado a la patogenicidad de los hongos. Al tratarse de un compuesto fenólico,
la melanina se asocia a ácidos nucleicos en el momento de homogenización y
precipita simultáneamente con el ADN y ARN total. Además, su presencia
influye en las reacciones de RT-PCR pues se asocian a las polimerasas e inhiben
su actividad enzimática.
5. ¿A qué se debe qué la extracción de ácidos nucleicos sea más compleja en hongos
filamentosos que en plantas?
El aislamiento y purificación de ADN de hongos aislados del suelo incluyen la
degradación del ADN, debido a endonucleasas, alta producción de polisacáridos
y la presencia de compuestos inhibidores como metabolitos secundarios que
pueden reducir el rendimiento y la pureza al unirse covalentemente con el
material extraído. La rigidez de la pared celular, presencia de ribonucleasas
intercelulares y la alta concentración de polisacáridos. En cambio, en plantas se
rompen las membranas del núcleo, mitocondrias y cloroplastos, donde se
encuentra el material genético (ADN).
5. Conclusiones:
Se logró el reconocimiento de usos de equipos anexos y el desarrollo del
protocolo específico para la extracción de ARN mediante información
bibliográfica y videográfica brindada por el docente.
Pudimos conocer las metodologías de evaluación de la calidad del ARN extraído
utilizando recursos bibliográficos.
6. Referencias Bibliográficas:
Abnova. (2011, 6 enero). RNA Extraction by TRIzol®. YouTube.
[Link]
Lugo, D. (2020, 20 agosto). Extracción de ARN. YouTube.
[Link]
Rojas, L. (2011, 3 octubre). Extracción de ARN total en plantas y hongos filamentosos |
Rojas | Biotecnología Vegetal. Biotecnología Vegetal.
[Link]
RNAlater® Tissue Collection: RNA Stabilization Solution. (2014).
[Link]
