UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA Y METALÚRGICA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENERÍA QUÍMICA
TRABAJO MONOGRAFICO
“INFORME DE PURIFICACION DE LAS PROTEINAS 2 Y 59”
ALUMNA
ALARCON NUÑEZ DANNITZA ARELY
DOCENTE
ING. OCROSPOMA DUEÑAS ROBERT WILLIAM
HUACHO – 2020
INDICE
I. OBJETIVOS ........................................................................................................................... 4
II. MARCO TEORICO................................................................................................................. 5
III. PROCEDIMIENTOS ............................................................................................................ 11
.
I. OBJETIVOS
OBEJTIVOS GENERALES
o -Mostrar una simulación de la purificación de las proteínas 2 y 59
OBJETIVOS ESPECIFICO
o -Obtener el menor costo posible al final de purificar nuestras proteínas
o -Explicación de la purificación de las proteínas.
II. MARCO TEORICO
FILTRACION POR GEL
La purificación de una sustancia de interés se hace siguiendo los criterios de separación basados en alguna
propiedad física o química que diferencia al compuesto en cuestión de otros que en principio estarían
ligados a él.
CROMATOGRAFIA DE INTERACCION HIDROFOBICA
La técnica de Interacción Hidrofóbica (HIC) separa las proteínas en base a su hidrofobicidad superficial, y
se caracteriza por la adsorción de las biomoléculas a la superficie débilmente hidrofóbica de la resina en
una solución fuertemente salina y su posterior elución mediante una gradiente salina negativa.
FRACCIONAMIENTO POR SULFATO DE AMONIO
La precipitación con sulfato de amonio es uno de los métodos más comúnmente utilizados para la
purificación y fraccionamiento de proteínas, ya sea a gran escala o a escala de laboratorio, que se puede
utilizar para separar proteínas al alterar su solubilidad en presencia de una alta concentración de sal.
CROMATOGRAFIA POR INTERCAMBIO IONICO
El principio básico de la cromatografía de intercambio iónico es que las moléculas cargadas se adhieren a
los intercambiadores de forma reversible de modo que dichas moléculas pueden ser asociadas o
disociadas cambiando el ambiente iónico.
TRATAMIENTO DE CALOR
Normalmente la purificación de proteínas se llevan a cabo a bajas temperaturas ya que la mayoría de las
proteínas son estables a bajas temperaturas, a medida que la temperatura aumenta de 0° a 37°C- 40°C su
estabilidad disminuye significativamente.
III. PROCEDIMIENTOS
El primer paso es ingresar al programa que se encuentra en internet con el siguiente enlace:
http://www.agbooth.com/pp_ajax/index.html?locale=es
Este programa es un simulador de purificación de proteínas, el cual tiene una capacidad de hasta
60 proteínas.
Los métodos de separación que usan en este programa son los siguientes:
Fraccionamiento por sulfato de amonio
Tratamiento con calor
Filtración por gel
Cromatografía de intercambio iónico
Cromatografía de interacción hidrofóbica
Cromatografía de afinidad
PURIFICACION DE LA PROTEINA 2
PASO #1
Inicia el programa y colocar a la proteína 2 para su posterior purificación, nos dan estos datos
importantes sobre dicha proteína:
“La actividad enzimática de la proteína 2 es estable por varias horas a una temperatura de hasta
40°C y a valores de pH entre 2.5 y 11.5.”
Vamos a la opción PAGINA y veremos a nuestra proteína junto al resto
PASO #2
El primer método a usar sera el método de filtración de gel, y tomaremos el medio de filtración
en gel “Sephadex G-100” ya que en ese medio se encuentra el peso de nuestra proteína que seria
entre 15k-20k.
Luego obtendríamos el grafico de la derecha, donde sabemos que la proteína 2 se encuentra
dentro de la línea roja, procederemos a combinar sus fracciones para obtener lo siguiente:
PASO #3
Para finalizar tomaremos al
método de intercambio ionico y optaremos por usar los siguientes medios:
Y obtendríamos los siguientes resultados:
La proteína 2 y la tabla de costos.
PURIFICACION DE LA PROTEINA 59
PROCEIMIENTOS UTILIZADOS PARA LA PROTEINA 46
PASO #1
Al inicia el programa y colocar a la proteína 59 para su posterior purificación, nos dan estos datos:
“La actividad enzimática de la proteína 59 es estable por varias horas a una temperatura de hasta 59°C y a
valores de pH entre 3.5 y 11”
Vamos a la opción PÁGINA y veremos a nuestra proteína junto al resto y separada:
PASO #2
Primero Aplicare el método de purificación por tratamiento de calor.
PASO #3
Seguido usare el método de purificación de filtración por gel, teniendo en cuenta el peso
molecular de la aproximado de la proteína 59 usare “Sephacryl S-200 HR”
PASO #4
Luego usaremos el método de cromatografía por intercambio iónico y debido a los datos
conocidos de la proteína optaremos por el siguiente:
Combinaremos las fracciones:
Y obtendremos los siguientes resultados:
Finalmente obtendríamos nuestra proteína número 59 y la tabla de los costos:
La purificacion de esta proteína nos da un costo total de: 2.387
