UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE INGENIERIA QUÍMICA E INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

PRÁCTICA N°03 Y 04

MÉTODOS DE CALIBRADO
ALUMNOS:

De La Cruz De La Cruz Elver Wildor

Hernández Flores Leonela Marleny

Hernández Soto Lilian Estefani

GRUPO:

G1- S1

MATERIA:

Métodos Instrumentales

DOCENTE:

Ing. Ysabel Nevado Rojas

SEMESTRE ACADÉMICO:

2020-I

CICLO:

VI

Lambayeque, 08 de septiembre del 2020

0
I. OBJETIVOS

- Aplicar los métodos de calibración según tipos de muestras y matriz

- Adiestramiento en los cálculos químicos.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

Calibración metodológica. La calibración metodológica o analítica, es una operación

necesaria para algunos métodos de análisis en los cuales no basta con una calibración

instrumental. Los métodos utilizados en un laboratorio analítico se pueden clasificar en

dos grandes grupos: Métodos clásicos: son los métodos más antiguos utilizados para

medir la cantidad de sustancia en una muestra. La gravimetría y volumetría son ejemplos

de ellos. Se caracterizan por ser métodos de alta precisión, mayor que la de los análisis

instrumentales. Son considerados métodos absolutos porque es posible encontrar una

relación directa entre la medida analítica y la concentración analítica sin necesitar de

estándares o patrones que contengan el analito en cuestión, tan solo utilizan reacciones

químicas y coeficientes estequiométricos para calcular la concentración final de analito

(Valcárcel y Ríos, 1992).

Métodos instrumentales: son métodos que utilizan técnicas más modernas, como son las

técnicas ópticas, térmicas, radioquímicas, másicas, etc. Suelen tener gran sensibilidad y

gran capacidad de analizar, de forma rápida, muchas muestras. Además, al usar

instrumentos y técnicas más avanzadas, los resultados de los análisis están

computarizados y automatizados. Aun así, los métodos instrumentales presentan una

desventaja frente a los clásicos, son menos precisos y esto es debido al error de

calibración. Las técnicas instrumentales son técnicas relativas, la señal obtenida de la

medición de la muestra a analizar se compara con otras medidas para determinar la

concentración analítica.

1
Los patrones utilizados ya contienen un error de medida, y este error se arrastra y se añade

al resto de errores, tanto aleatorios como sistemáticos, que aparecen en el proceso de

calibración, incrementando el posible error de la determinación de la concentración

(Valcárcel, 1999). A diferencia de lo que ocurre con los métodos clásicos, los métodos

instrumentales requieren el uso de estándares químico-analíticos adecuados que

contengan el analito a estudiar. Y la forma más común de determinar la concentración de

una muestra usando estándares pasa por la elaboración de gráficas de calibrado con la

correspondiente recta de calibración. El procedimiento para elaborar las gráficas de

calibrado es el siguiente: se toman una serie de patrones de calibración de los que se

conoce la concentración del analito. Estos patrones se miden en el instrumento analítico,

y se representa gráficamente la concentración de cada uno de los patrones frente a las

respuestas de medición. Una vez elaborada la gráfica de calibrado, se puede obtener

mediante interpolación (menos en algún caso que se hace por extrapolación) la

concentración de la muestra a determinar midiendo ésta con el instrumental analítico en

las mismas condiciones en las que se hizo la medida de los patrones (Miller y Miller,

2002). Para ello, es necesario encontrar la forma de obtener una curva de calibración lo

más recta posible, ajustándose a una serie de puntos experimentales, donde cada punto se

encuentra definido por una variable X (variable independiente, concentración del analito)

y una variable Y (variable dependiente, respuesta instrumental) (Riu y Boqué, 2003)

Método simple, directo o del estándar externo Un estándar o patrón externo, es aquel

que se prepara fuera de la muestra problema. Se aplica este método cuando se desea

determinar la concentración de un analito en la que, ni los componentes de la matriz de

la muestra ni los reactivos usados en el procedimiento interfieren en el análisis. También

se puede usar en el caso en que las interferencias se conozcan y se mantengan siempre

constantes en las medidas, con lo cual se podrán corregir estas posteriormente (Sánchez,

2
2016). Procedimiento: se preparan una serie de estándares externos de concentración

conocida. La cantidad óptima de estándares debe ser como mínimo de tres a cinco, aunque

en análisis rutinarios se podrá confiar en calibraciones con dos patrones. Se mide las

señales y se representan frente a la concentración de los patrones obteniendo una línea

recta. Previa a las medidas de los estándares, se utiliza un blanco, que es una muestra

idéntica al problema, pero sin el analito. El blanco corrige la respuesta analítica original.

Ventajas: método simple y rápido. Usando un número necesario de patrones se puede

analizar múltiples muestras.

Inconvenientes: este método se basa en la suposición de que la respuesta instrumental del

analito en la muestra será la misma que la respuesta del analito en la muestra patrón.

Aunque se corrige con blanco, hay muchos factores que pueden hacer que esta suposición

no se cumpla. Los más comunes son: los efectos Método del patrón interno:

Método utilizado para compensar errores debidos a fluctuaciones debidas a la técnica

analítica. Los patrones internos, además, se consideran muy útiles, cuando la

concentración de la muestra o la respuesta instrumental varia cada vez que se utiliza, por

razones desconocidas y difíciles de controlar. También es un método de utilidad cuando

se producen perdidas del analito durante el proceso. Se utiliza como estándar interno, una

sustancia diferente al analito pero que tengan propiedades físico-químicas similares,

provocando que se vean afectadas de forma similar durante el análisis. Añadiendo un

patrón de propiedades parecidas al analito, la relación de concentración perdida de ambas

se mantiene constante (Sánchez, 2016). Procedimiento: se empieza por la adición de la

sustancia pura a la muestra y a los patrones en concentración fija. Primero se determina

la respuesta del equipo a las disoluciones Ejm en la determinación de isoprenoides por

calibración simple. 26 estándares (A) por separado y después con el patrón interno (PI).

Se calcula el cociente de la respuesta de ambas, y este valor es el que se representa frente

3
a la concentración del analito. Por tanto, se representa gráficamente el cociente entre la

señal del analito y la del patrón interno en función de la concentración del analito de las

disoluciones de los estándares. Si se varía algún parámetro que afecte a las respuestas

medidas, dichas respuestas deberán afectar igual al analito y al patrón interno.

Ventajas: al compensar el efecto de los errores no controlados, se obtienen resultados

muy exactos y precisos.

Inconvenientes: se trata de un procedimiento más laborioso que cualquier otro método

de calibración convencional. Además de la dificultad de encontrar una sustancia adecuada

para que sea utilizada como patrón interno. Aplicación: para mostrar la utilización de una

calibración por la técnica del patrón interno se ha tomado el ejemplo del estudio de Díaz

(2014) sobre los compuestos responsables de los defectos sensoriales de aceites de oliva

vírgenes, principalmente el hexanal. Se utiliza para el análisis cuantitativo la

cromatografía de gases. Cualquier cromatografía presenta muchos parámetros difíciles de

controlar a la hora de realizar un análisis, entre ellos variaciones en el gas transportador,

cambios en el volumen de inyección, etc., por lo que el método adecuado para solventar

esos problemas es la calibración con un patrón interno, en el caso del estudio fue el acetato

de isobutilo.

Tomando la ecuación de la recta de calibrado se van a calcular las concentraciones de las

muestras problemas por interpolación de la misma.

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III. REACTIVOS MATERIALES Y EQUIPOS

 FeCl3 (sólido) * Probetas

 H2O destilada * Pipetas

 FeSO4.(NH4)2SO4.6H2O

 Fiola

 Espátula

 Balanza analítica

 Matraz aforado

MUESTRAS PROPORCIONADAS POR EL ESTUDIANTE:

 03 Muestras de agua potable

 01 botella de vino (barato)

IV. EXPERIENCIAS A REALIZAR

Experiencia # 1: PREPARACIÓN DE SOLUCIÓN MADRE

a. Calcular los gramos de FeSO4. (NH4)2SO4.6H2O (sulfato ferroso amoniacal)

necesarios para preparar 1000 ml de una solución con una concentración de Fe+2 que

permita prepara las soluciones patrón deseadas de 10 ppm.

b. Pesar y disolver la sal en agua destilada, hasta completar el volumen deseado en una

fiola.

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1.-CÁLCULOS QUÍMICOS:

10 mg Fe+2/L.*1L*1g/1000mg. (391.8 g sal/55.8g Fe) = 0.0702g

FeSO4(NH4)2SO4.6H2O

W=0,0702 g

W= 0,7020 PESO PARA LA NUEVA SOLUCION MADRE- 100 mg/l =100 ppm

0,7020 g sal/1L (55,8 g Fe+2/391,8 g sal) (1000 mg/1g) =99,999= 100 ppm

(CONCENTRACION DE LA MADRE 1, SE REQUIERE PREPARAR LA

SOLUCION DESEADA: 10 PPM)

PF: 55,8+64 + 224 + 20 + 28

PF: 391.8 gFeSO4(NH4)2SO4.6H20

V1. C1 = V2.C2

C2=10ppm

V2=1000ml

V1’=?

C1=100ppm

1000 𝑥 10
V1 = = 100ml
100

2.-DESICIONES Y FUNDAMENTACIÓN:

El primer resultado (madre 1) arrojó un dato bastante bajo con el cual no se podía trabajar,

por ello se decidió aumentar la concentración de 10ppm a 100ppm. Para que el resultado

sea manejable y podamos obtener lo requerido.

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3.-VISUALIZAR MATERIAL AUDIOVISUAL

Técnica analítica para la determinación de Hierro:

Se usa la técnica o método de espectrometría que viene a ser la medida cuantitativa del

color o imagen sobre un rango amplio, las cubren varias formas: visible, ultravioleta y

ultrarrojo, estas vienen a ser las longitudes de onda.

En el caso del Hierro se recomienda medir a 520 nanómetros, para esto se tiene que

estandarizar la técnica ya que se asocia a las BPM.

Se prepara el testigo cero o “blanco” que corresponde a todo menos la muestra que

contiene Hierro. Por otro lado, el testigo positivo vendría a ser el estándar stock y los

estándares de trabajo van a tener un volumen de 1 hasta 75ml.

Es importante mencionar también que para los volúmenes pequeños se usan pipetas, las

cuales deben portar su respectivo pipeteador, mientras que para volúmenes mayores se

usan probetas.

El primer paso es homogenizar la muestra, luego se vierte una cierta cantidad de muestra

y se agrega cantidades al sistema de filtración. El segundo paso es el pesaje del estándar

primario (sulfato ferroso amoniacal) en la balanza analítica, el valor es de 0.08g luego se

coloca esto a un vaso de precipitación, seguidamente se adiciona agua (20 a 40ml) y se

agita hasta disolver la muestra completamente la muestra, luego se agrega acido sulfúrico

concentrado (2,5ml), posteriormente se vierte esta solución al balón aforado mas grande

o sea al estándar stock. Como tercer paso se va a preparar el blanco (50ml de agua

desionizada) y el cuarto paso es la preparación de las demás muestras.

Se menciona la muestra sintética, que viene a ser una concentración que solo el docente

conoce y que proporcionará a sus alumnos cuando sea necesario. También se explica la

curva bidimensional, la cual representa la absorbancia con respecto a la longitud de onda.

Por otro lado, la curva espectral, sirve para medir la absorbancia de cada uno de los

7
estándares de trabajo. Mientras que la precisión es el grado de concordancia o

coincidencia entre las mediciones de una misma magnitud hechas en idénticas

condiciones.

Se evalúa la absorbancia del blanco y del estándar en el espectrómetro y luego se hace lo

mismo con las muestras para finalmente aplicar los cálculos correspondientes.

4.-GRÁFICOS DEL PROCEDIMIENTO

Gráfico 1: Pesado de la muestra.

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 Experiencia # 2: PREPARACIÓN DE PATRONES EXTERNOS PARA

DETERMINACIÓN DE FE+2 EN AGUA POTABLES

a.- Calcular el volumen de alícuota necesaria, para preparar 100 ml de solución con las

sgts. Concentraciones:

Tabla 1. Datos de la experiencia 2

0 0,1 0.5 1.0 2,5 5.0 7.5 0,2 0,4 1,0 2,0 4,0
Concentración de
Fe+2(ppm)

Volumen de 0 1 5 10 25 50 75 2 4 10 20 40
solución madre
(ml)

Volumen de H2O 100 99 95 90 75 50 25 98 96 90 80 60

VOLUMEN 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
TOTAL

Señal del equipo 0,00 0,011 0,102 0,217 0,555 1,131 1,704

ABSORBANCIA

CÁLCULOS QUÍMICOS:

C1 x V1 = C2 x V2 C1 x V1 = C2 x V2

10ppm x 1ml = C2 x100ml 10ppm x 5ml = C2 x 100ml

C2 = 0.1ppm C2= 0.5ppm

C1 x V1 = C2 x V2 C1 x V1 = C2 x V2

10ppm x 10ml = C2 x 100 10ppm x 25ml = C2 x 100ml

C2= 1ppm C2= 2.5ppm

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 C1 x V1 = C2 x V2 C1 x V1 = C2 x V2

10 x 50 = C2 x 100ml 10ppm x 75ml = C2 x 100ml

C2= 5ppm C2 = 7.5ppm

Identificar las concentraciones de los patrones recomendables: fundamentación.

0,1 0.5 1.0 2,5 5.0 7.5

Estas serían las concentraciones patrón recomendables, porque se aproximas según la

curva de calibración a una recta lineal

GRÁFICOS

F2 +2 100ml

……..
Gráfico 2: Concentraciones de los patrones.

DECISIÓN (Fundamentación):

se calculó las concentraciones patrones para ajustar a la gráfica de la curva de calibración

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CURVA DE CALIBRACIÓN

Experiencia # 3: MÉTODO DE PATRÓN INTERNO: Calibración por adición de

Patrón para la determinación de Fe+3 en vinos, para esto utilizaremos la sal de

FeCl3 con 98% de pureza en:

Solución patrón de Fe+3: 10 ppm

a.- Prepare una solución madre

PM = 162,8 g/ml

10mg Fe +3/L x 1g/1000mg x (162.8g/sal)/55.8gFe

= 0.0291gFeCl3 para la solución madre.

MADRE 1(más concentrada que la solución deseada)

100mgFe+ 3/L x 1L x 1g/1000mg (162.8g/sal)55.8gFe

= 0.2917g FeCl3

b.- preparar la solución deseada = MADRE 2

C1 x V1 = C2 x V2

100ppm x V1 = 10ppm x 100ml

11
 V1 =10ml

c.-Colocar en fiolas de 50 ml los sgts. Soluciones:

Tabla 2. Valores de las soluciones

Volumen de solución de Fe +3 (patrón) (ml) 0 5 10 15 20

Concentración Fe +3 en la solución patrón (ppm) 0 1 2 3 4

Volumen de vino (ml) 10 10 10 10 10

volumen H2O 90 90 90 90 90

Volumen total a enrazar 50 50 50 50 50

Señal del equipo 0,040 0,062 0,081 0,102 0,135

. CÁLCULOS QUÍMICOS: C1 = 10ppm (madre)

C1 x Va = C2 x V2 C1 x Va = C2 x V2

10ppm x 0ml = C2 x 50ml 10ppm x 5ml = C2 x 50ml

C2 =0ppm C2 = 1ppm

C1 x Va = C2 x V2 C1 x V1 = C2 x V2

10ppm x 10ml = C2 x 50ml 10ppm x 15ml = C2 x 50ml

C2 = 2ppm C2 = 3ppm

C1 x V1 = C2 x V2

10ppm x 20ml = C2 x 50ml

C2 = 4ppm

12
 DECISIÓN (Fundamentación):

Primero preparamos una solución con 10 mg de Fe +3, pero obtuvimos un valor de 0,0291

en cual no es un valor confiable, por eso tomamos la decisión de preparar una madre 1

más concentrada que la solución deseada aumentando la concentración a 100mg Fe +3,

con esta concentración obtuvimos ya un valor de 0,2917 para preparar la solución deseada

para preparar la madre2.

GRÁFICOS de procedimiento

vino

F2 +3 50ml

Gráfico 3: Concentraciones de los patrones.

CURVA DE CALIBRACIÓN:

curva de calibracion Mètodo de patron interno

0.16
0.14 4; 0.135
0.12
ABSORBANCIA

0.1
0.08
y = 0.023x + 0.038
0.06 R² = 0.988
0.04
0.02
0
0 1 2 3 4
CONCENTRACION(ppm)

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V.- TABULACION DE DATOS Y RESULTADOS

Siguiendo la metodología descrita para la realización de la curva de calibración para Fe

+2 en agua potable se prepararon los patrones y se realizaron 7 lecturas de absorbancia

de cada uno para tratamiento estadístico posterior, con las lecturas obtenidas se calculó la

media de la absorbancia para cada uno de los patrones y se tabularon con los datos de las

concentraciones, después se graficaron para obtener así la curva de calibración.

Experiencia #2

Tabla 3. Datos del experimento

X: Y:
concentracion Absorbancia
0 0

0.1 0.011

0.5 0.102

1 0.217

2.5 0.555

5 1.131

7.5 1.174

Curva de Calibración, experiencia 2

CURVA DE CALIBRACION DE PATRONES

EXTERNOS
1.6
1.4 y = 0.1731x + 0.0451
1.2 R² = 0.9434
ABSORBANCIA

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
-0.5 0.5 1.5 2.5 3.5 4.5 5.5 6.5 7.5
CONCENTRACION(mg/ml)

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Experiencia #3

Tabla 3. Datos del experimento

X:
concentracion Y: Absorbancia

0 0.04

1 0.062

2 0.081

3 0.102

4 0.135

Curva de Calibración, experiencia 3

curva de calibracion Mètodo de patron interno

0.16
0.14
4; 0.135
0.12
ABSORBANCIA

0.1
0.08
y = 0.023x + 0.038
0.06 R² = 0.988
0.04
0.02
0
0 1 2 3 4
CONCENTRACION(ppm)

Analizando los resultados de las gráficas de la experiencia 2 y 3, el coeficiente de

correlación fue próximo a uno esto quiere decir que nuestra gráfica en las dos ecuaciones

de las experiencias realizadas se está ajustando a una línea recta

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VI.- EXPLICACIÓN FUNDAMENTADA DE CADA EXPERIENCIA

 Experiencia # 1

El Fe es un metal maleable, de color gris plateado y presenta propiedades magnéticas; es

ferromagnético a temperatura ambiente y presión atmosférica. Es extremadamente duro

y denso. Por otro lado, el sulfato ferroso amoniacal o Sal de Mohr, se sintetiza a partir del

sulfato de hierro (II) heptahidratado (FeSO4.7H2O) y sulfato de amonio en partes

equivalentes. El rendimiento de esta reacción suele ser de un 90%. Es muy estable frente

a la acción del oxígeno atmosférico sobre el ion ferroso, por lo que es muy utilizada en

análisis volumétricos.

 Experiencia # 2

La palabra alícuota es un término con el cual podremos encontrarnos en dos ámbitos

mayormente, por un lado, a instancias del trabajo científico en laboratorios, en el cual se

emplea para denominar a aquella parte inicial que se toma de un volumen determinado,

en ese caso se trata de una alícuota líquida, o en su defecto de una masa, alícuota sólida.

Generalmente las alícuotas resultan de repartir un volumen inicial en varias partes iguales.

Se lo puede medir en mililitros (ml) o en gramos (g).

En cuanto a la señal de absorbancia, podemos decir que es proporcional al camino óptico

de la muestra y a la concentración de la sustancia en ésta, en contraste con la

transmitancia, que varía exponencialmente con el grosor y con la concentración.

16
  Experiencia # 3

Los metales que se encuentran en el vino pueden provenir de la uva, así como también de

la maquinaria que se utilice, ya que el mosto y el vino atacan los metales. El ferrocianuro

desarrolla en el vino una acción química compleja dando como resultado la

insolubilización y precipitación de los metales (Zn, Cu, Fe y Mn) en distintas

proporciones. Como el Fe se encuentra en el vino bajo forma ferrosa y férrica, se combina

de distinta manera según su estado de oxidación.

Por otro lado, el método de patrón interno es una sustancia en una cantidad conocida a

estándares, muestras y espacios en blanco durante un análisis.

VII.- RESPONDA LO SIGUIENTE

5.1. ¿Por qué son necesarias las curvas de calibración?

Porque así podremos determinar la concentración de una sustancia (analito) en una

muestra desconocida, sobre todo en disoluciones.

5.2. ¿Cuándo se utiliza los patrones externos?

Un estándar o patrón externo, es aquel que se prepara fuera de la muestra problema. Se

aplica este método cuando se desea determinar la concentración de un analito en la que,

ni los componentes de la matriz de la muestra ni los reactivos usados en el procedimiento

interfieren en el análisis. También se puede usar en el caso en que las interferencias se

conozcan y se mantengan siempre constantes en las medidas, con lo cual se podrán

corregir estas posteriormente (Sánchez, 2016).

5.3. ¿Cuándo se utiliza calibración por adición de patrón?

El método de adición patrón se usa especialmente cuando la composición de la muestra

es desconocida o compleja y afecta a la señal del analito.

17
5.4. ¿Cuándo se utiliza el método estandart interno?

Se utiliza cuando el analista está interesado en la concentración de uno o algunos de los

componentes y el método de análisis está sujeto tanto errores sistemáticos como

aleatorios. El método se basa en que cuando las señales del analito y el patrón interno

responde proporcionalmente a las fluctuaciones del método y del instrumento empleado,

entonces la razón de estas señales es independiente de tales fluctuaciones. La principal

ventaja es que con él se eliminan los problemas de fluctuación instrumental,

minimizándose los errores instrumentales, ya que tanto el analito como el patrón interno

experimentan las mismas variaciones.

5.5. ¿Qué parámetros se debe considerar para decidir el método de calibración?

La calibración incluye la selección de un modelo para estimar los parámetros que

permitan determinar la linealidad de esa curva. y, en consecuencia, la capacidad de un

método analítico para obtener resultados que sean directamente proporcionales a la

concentración de un compuesto en una muestra, dentro de un determinado intervalo de

trabajo. En el procedimiento se compara una propiedad del analito con la de estándares

de concentración conocida del mismo analito (o de algún otro con propiedades muy

similares a éste). Para realizar la comparación se requiere utilizar métodos y equipos

apropiados para la resolución del problema de acuerdo al analito que se desee determinar

5.6. ¿Qué datos debe considerar, además de la información obtenida para elaborar

curvas de calibración?

La señal de absorbancia del analito.

18
ERRORES DETERMINADOS: Los errores que pueden ser atribuidos a causas

definidas, se llaman errores determinados o sistemáticos. De acuerdo con su origen, tienen

lugar debido a: a) el método de análisis que refleja las propiedades de los sistemas

químicos involucrados, b) la ineptitud del operador c) la avería de los aparatos de

medición que no le permiten funcionar de acuerdo a los estándares requeridos.

ERRORES INDETERMINADOS: Los errores que se clasifican como indeterminados

son aquellos que ocurren a pesar de ser muy cuidadoso y meticuloso. Son errores

fortuitos que no pueden reducirse más.

ERRORES SISTEMÁTICOS:

Son aquellos que ocurren de un solo lado por defecto o exceso cuya pista puede

seguirse hasta una fuente específica. Tienden a hacer que los valores calculados u

observados sean constantemente altos o bajos. Esto significa pueden hacer los resultados

sean inexactos sin afectar la precisión.

ERRORES ALEATORIOS: Son debidas a fluctuaciones típicas de la

experimentación. Se originan cuando se realizan varias determinaciones del mismo

analito en alícuotas de la misma muestra o cuando simplemente se realizan varias veces

una misma medida. La referencia para establecer estos errores es la media aritmética

X ,´ de un conjunto de determinaciones.

Pueden tener diferente magnitud, aunque en general no muy elevada. Pueden ser

aleatoriamente por exceso (+) o por defecto (-), es decir, mayores o menores que la media.

Así pues, este tipo de errores no tiene significación para un dato sino existe un conjunto

de los mismos. Pueden atribuirse a un resultado individual o a un método (medias).

Constituyen la base para la propiedad analítica básica precisión y por lo tanto de la

incertidumbre específica.

19
ERROR DE CALIBRACIÓN: En un instrumento ideal (sin error), la relación entre los

valores reales de la variable comprendidos dentro del campo de medida y los valores de

lectura del aparato es lineal. Se considera que un instrumento está bien calibrado cuando,

en todos los puntos de su campo de medida, la diferencia entre el valor real de la variable

y el valor indicado, o registrado, está comprendido entre los límites determinados por la

exactitud del instrumento

VIII.- CONCLUSIONES

6.1. De los objetivos de la práctica

 Se logró saber e identificar qué método usar.

 Se logró aprender a desarrollar mejor los cálculos químicos.

6.2. De los procedimientos de la práctica

 Se obtuvo mayor conocimiento sobre las soluciones madre.

 Se logró identificar los valores que se necesitaban en cuanto a volumen y

concentración gracias a un previo debate entre los integrantes del grupo con la

asesoría de la docente.

 Se lograron los resultados debidos gracias a las diferentes variaciones que se

hicieron durante el desarrollo de la práctica.

 Se logró realizar las curvas de calibración de manera eficaz, gracias a los

resultados y a la señal.

 se concluye que los valores de r = 0,9434 en la curva de calibración de Fe +2 en

agua potable, r = 0,988 en la curva de calibración de Fe +3 en vino, nos muestra

una buena correlación entre las variables en cada una de las curvas, es decir que

la calidad de las rectas obtenidas es buena.

20
6.3. De los contenidos científicos de la práctica

 Se logró identificar los diferentes tipos de métodos de calibración.

 Se identificó el método más apropiado para cada situación.

 Conocimos la importancia de la curva de calibración y sus aplicaciones.

 En cuanto al método de estándar interno, la principal ventaja es que con él se

eliminan los problemas de fluctuación instrumental.

IX.- RECOMENDACIONES

 Cuando el indicador es bajo, se deben hacer cambios, ya sea de volumen o

concentración, acercando el dato siempre a 1.

 Para poder realizar las curvas de calibración se deben tener los datos de la señal,

de lo contrario estaría incompleto.

 El valor de la curva de calibración debe tener una proximidad a 1.

 Trabajar con esmero y tener a la mano una calculadora para no demorar tanto en

hacer los respectivos cálculos.

 La curva debe prepararse a partir de una solución madre de alta concentración

para realizar las distintas mediciones

21
XBIBLIOGRAFÍA

 Sánchez Palacios MA. Métodos de Calibrado. Venezuela: Facultad de Ciencias,

departamento de Química [en línea]. [Consultado en Mayo 2016]. Disponible en:

http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/angelisa/Downloads/tecnicascalibracio_vr1

.pdf

 Manual de Prácticas de Laboratorio Análisis Instrumental I, Federmán Castro

Eusse, Universidad Tecnológica de Pereira, Colombia. 2003

22
PRACTICA N° 04: MÉTODOS DE CALIBRADO- PARTE 2 (Continuación

Práctica 3)

I. OBJETIVOS

-Aplicar los métodos de calibración según tipos de muestras y matriz

- Adiestramiento en el manejo de cálculos químicos.

- Conocer y aplicar el método de calibración con la adición de estándar y de estándar

interno

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

Calibración con adición de estándares

La preparación de estándares que reproduzcan la composición de la muestra es muy

complicada cuando se trata del análisis de muestras complejas (suelos, minerales, sangre

completa, orina, etc.) ya que, en este tipo de muestras, usualmente, los componentes de

la matriz afectan las medidas de la señal analítica ya sea por exceso o por defecto. Por

ello, es imposible compensar un blanco distinto de cero. Con el objetivo de minimizar los

efectos de la matriz, se utiliza el:

Método de adición de estándar el cual consiste en la adición de un volumen fijo de la

muestra, a las soluciones estándares diluyendo a un volumen final constante.

Posteriormente, se procede a determinar la señal de los estándares, así como de una

muestra preparada de la misma forma, en ausencia de estándar añadido. En cada solución,

las señales son afectadas de manera similar por los interferentes de la matriz.

En general, con este método se obtienen intervalos lineales de concentración de trabajo

muy estrechos (menos de un orden de magnitud) originados por los complicados efectos

químicos de los componentes de la matriz. Este método no elimina las interferencias, solo

23
las compensa ya que se obtienen todas las señales analíticas bajo las mismas condiciones.

El procedimiento que se lleva a cabo para la aplicación de este método, consiste en la

selección de alícuotas de un volumen fijo de muestra (VM) a las cuales se les añaden

volúmenes variables de un estándar (VS) de concentración conocida (CS) diluyendo a un

volumen final fijo (VT).

Existen varios procedimientos matemáticos, que pueden aplicarse para el tratamiento de

los resultados obtenidos cuando se aplica el método de adición de estándar y que se

describirán a continuación.

Si se cumple una relación lineal entre la señal analítica y el volumen del estándar añadido

(VS), se tiene para la muestra (SM) sin adición de estándar que:

Señal(M)= K.CMi.VM/VT ………(Ec,1)

CMi = Concentración del analito de la muestra

VM = volumen de muestra

VT = volumen total

K= constante de calibración del equipo

Por otra parte, para una alícuota de muestra con adición de estándar la señal total (SM+S)

viene dada por la siguiente expresión:

Señal(M)= K. CMi VM / VT + K.CSi.Vs/VT………. (Ec 2)

A partir de la Ec.2 una gráfica de la Señal M+S en función de VS es una línea recta con

pendiente e intercepto igual a:

Pendiente(m)= K.CSi/VT ; Intercepto(b) = K.CMi.VM/VT

24
Al dividir la expresión del intercepto entre la expresión de la pendiente, se obtiene la

ecuación 4, a partir de la cual se determina la concentración del analito en la muestra.

Para la deducción de esta expresión ya se consideró el factor de dilución. Así que CM

corresponde en este caso a la concentración de la muestra directamente.

CMi= b.CSi/(m.VM)

Calibración del blanco

Se ha propuesto en la literatura que cuando se utiliza la curva de calibrado con adición de

estándar, es conveniente la realización de una curva de calibrado para el blanco, en la cual

están incluidos todos los reactivos y la solución patrón a diferentes concentraciones,

excepto la muestra. La finalidad de este tipo de calibrado es comprobar la contribución

real de los reactivos a la señal del analito. En este caso el intercepto en el eje x,

corresponde al contenido de analito en los reactivos. Posteriormente, se deben comparar

los parámetros estadísticos de la curva de regresión de calibrado del blanco, con los

obtenidos de la curva de regresión de adición de estándar y corregir la concentración del

analito en la muestra, usando el blanco medido.

La calibración con estándar ó patrón interno se utiliza para compensar errores

aleatorios y sistemáticos como interferencias no espectrales de componentes de la matriz,

fluctuaciones debidas del método y errores instrumentales. Entre estas se tiene; variación

de la velocidad de nebulización, del tamaño de gota, fluctuaciones de las presiones

gaseosas, de la viscosidad y tensión superficial. Se aplica este método en técnicas

instrumentales que permitan la determinación multielemental. Se selecciona como

estándar interno, una sustancia diferente del analito que presente propiedades similares a

las del analito, tal que ambos sean afectados similarmente durante el análisis. También

puede seleccionarse un componente mayoritario que esté presente en la muestra, y el cual

25
se adiciona a los patrones a elevada concentración para considerarse constante. La matriz

debe estar libre de estándar interno. El paso más importante en este método, es la

selección adecuada del estándar interno.

Considerando que se determina la intensidad de emisión de una analito (IA) y un patrón

interno (IP) a concentraciones determinadas (CA y CP) y conocidos los valores de energía

necesaria para que transcurra la transición electrónica respectiva (EA y EP) al medir la

relación de intensidades IA/IP; sí se cumple que ΔEP≈ΔEA el segundo término de la Ec.

18 tiende a uno y la relación de intensidades es independiente de la temperatura.

La aplicación de este método consiste en realizar medidas simultáneas de la respuesta del

instrumento al analito y al estándar interno. El estándar interno, se añade en una cantidad

conocida y constante a la muestra, y a los estándares del analito. En la gráfica de calibrado

se representa la relación Señal analito/Señal de estándar interno en función de la

concentración del analito en los estándares. De esta manera la respuesta del instrumento

o la señal analítica es independiente, de la fluctuación debida al método de análisis.

26
III.- MATERIALES Y REACTIVOS REACTIVOS

 Cafeína (sólido)

 Paracetamol

 H2O destilada

3.1.-MATERIALES

 Fiolas (50, 100, 250, 500 y 1000ml)

 Luna de reloj

 Pipeta

 Probetas de 10, 25 y 50 ml

 mortero

3.2.- EQUIPOS:

 Balanza

 Cocina eléctrica

MUESTRAS PROPORCIONADAS POR EL ESTUDIANTE:

Sobre de café instantáneo

 01 blister de pastillas de paracetamol

27
Experiencia #1: PREPARACIÓN DE SOLUCIÓN MADRE (patrón 1) DE

CAFEÍNA

a. Calcular los gramos de cafeína para preparar Una solución con 1000 ppm de cafeína

b. Preparar la solución.

CÁLCULOS QUÍMICOS:

%PZA=100%

%H2O= 2%

Dato: pm cafeína = 194.19 g/mol

1000 mgL *1g1000mg =1gl*0.250l=0.2500 g cafeína pura

V = 250ml

0.2500g x 100%/100% x 102%/100/

0.2550g cafeína (+-0,0001) ----- 0,2551

%Er= (w1-w2/w1) *100(0.2550+0.001)

%E = (0,0001/0,2550)100 = 0.0392%

Experiencia # 2: Preparación solución madre (patrón 2) de paracetamol

a.- Calcular los gramos de paracetamol que deberá pesar para preparar una solución con

150 ppm de paracetamol

CÁLCULOS QUÍMICOS:

%PZA=97%

%H2O= 5%

b.- Preparar la solución

150mgl*1l*1g1000mg=0.1500g Paracetamol

28
V = 1L

0.1500 g ------ 97% PUREZA

X g ---------- 100%

X = 0.1554g

0.1554g ……….95% PARACETAMOL SECO

x…………..100%pureza

x= 0.1635g paracetamol

%Er=0.00010.1635*100=0.0611%

3.-Experiencia #3: Preparar las soluciones patrón:

Colocar en fiolas de 50 ml los sgtes. Soluciones patrón y enrasar con agua destilada:

Patrón 1 1 2 3 4 5 6

Volumen de solución de cafeína (patrón

1) (ml)
2 4 6 8 10 12

Volumen de solución de paracetamol 5 5 5 5 5 5

(patrón 5) (ml)

Volumen de H2O

Volumen total a enrazar 50 50 50 50 50 50

29
 Patrón 1 2 3 4 5 6

Volumen de Concentración 40 80 120 160 200 240

de cafeína (patrón 1) (ppm)

Señal (cafeína)- PP 450,7 804,9 1150.2 1405.6 1680.2 1802,1

Concentración de (patrón 2) 150 150 150 150 150 150

(ppm)

Señal (PARECETAMOL Pi) 905,7 901,3 890,1 897.1 903,6 900,1

Calcular las concentraciones de los patrones

C1V1 = C2V2

MADRE = SOLUCIONE PATRÓN

Para la cafeína

C1 x Va = C2 x V2 C1 x Va = C2 x V2

1000ppm x 2ml = C2 x 50ml 1000ppm x 4ml = C2 x 50ml

C2 =40ppm C2 = 80ppm

C1 x Va = C2 x V2 C1 x Va = C2 x V2

1000ppm x 6ml = C2 x 50ml 1000ppm x 8ml = C2 x 50ml

C2 =120ppm C2 = 160ppm

30
C1 x Va = C2 x V2 C1 x Va = C2 x V2

1000ppm x 10ml = C2 x 50ml 1000ppm x 12ml = C2 x 50ml

C2 =200ppm C2 = 240ppm

Para el paracetamol

C1 x Va = C2 x V2 C1 x Va = C2 x V2

150ppm x 5ml = C2 x 50ml 150ppm x 5ml = C2 x 50ml

C2 =15ppm C2 = 15ppm

C1 x Va = C2 x V2 C1 x Va = C2 x V2

150ppm x 5ml = C2 x 50ml 150ppm x 5ml = C2 x 50ml

C2 =15ppm C2 = 15ppm

C1 x Va = C2 x V2 C1 x Va = C2 x V2

150ppm x 5ml = C2 x 50ml 150ppm x 5ml = C2 x 50ml

C2 =15ppm C2 = 15ppm

31
GRÁFICOS

Patrón 1 patrón 2

Cafeína (0.2550g) Paracetamol (0.1500g)

4.- Experiencia #4: Preparación de muestras problema:

Volumen de solución de cafeína (patrón 1) (ml) 0

Volumen de solución de ibuprofeno (patrón 2)(ml) 5

Peso de muestra de café (instantáneo)(gramos) 0,25

Volumen total a enrazar 50

Señal 1

Señal 2

32
V.- TABULACION DE DATOS Y RESULTADOS

Tabla 1. Datos de la experiencia

Concentration Señal
0.26 0.47
0.53 0.89
0.8 1.29
1.06 1.56
1.33 1.85
1.6 2

Curva de Calibración, experiencia #3 (Cafeína y paracetamol)

CURVA DE CALIBRACION
2.5
y = 1.1539x + 0.2702
2 R² = 0.9768

1.5
SEÑAL

0.5

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8
CONCENTRACION

33
VI.- EXPLICACIÓN FUNDAMENTADA DE CADA EXPERIENCIA

Experiencia #1

Para preparar la solución de cafeína de 1000 ppm, se calculó los gramos de cafeína

adecuados para poder pesar en nuestra balanza, siempre teniendo en cuenta que como esta

es solución estándar tiene que estar concentrado, para reducir errores, este es una etapa

clave, para que el experimento sea satisfactorio.

Experiencia#2

El paracetamol está estructuralmente emparentado con la anilina y con el fenol,

compartiendo características químicas de ambos. Desde el punto de vista ácido-base es

un ácido muy débil con un pKa de 9,4. Forma cristales principalmente como prismas

monoclínicos. Es escasamente soluble en agua fría pero mayormente soluble en agua

caliente, soluble en metanol, etanol, dimetilformamida, diclorometano, acetona y acetato

de etilo, pero es prácticamente insoluble en éter de petróleo, pentano y benceno. Se

preparó 150mg de la solución patrón 2 de paracetamol con un 97% de pureza y 5% de

humedad, el cual para saber saber si la cantidad de concentración era aceptable

calculamos el porcentaje de error el dio de 0.611% es cual es un valor confiable y se

decidió prepara la solución.

Experiencia #3

Se introduce en cada estándar y en la muestra una cantidad exactamente medida de otra

sustancia que llamamos patrón interno, cuyo pico cromatográfico esté bien diferenciado.

De esta manera, en lugar de utilizar las áreas/alturas de los picos, tomaremos como

parámetro analítico la relación existente entre las áreas/alturas de los picos del analito y

del patrón interno. Así, aunque haya imprecisión en el volumen inyectado, la relación

entre analito y patrón interno no se verá afectada.

34
Primero se ha preparado una disolución de cafeína con una concentración 1 de 1000 ppm

y un volumen 2 de 50 ml, lo que varía es el volumen de la alícuota, siendo 2, 4, 6, 8, 10

y 12 ml respectivamente. Cada uno de estos volúmenes se traspasan con ayuda de pipetas

aforadas a matraces aforados de 100 ml y luego se enrasa (50 ml).

Las concentraciones 2 con respecto al patrón 1 son las siguientes:

 Para 2 ml de solución de cafeína  40 ppm

 Para 4 ml de solución de cafeína  80 ppm

 Para 6 ml de solución de cafeína  120 ppm

 Para 8 ml de solución de cafeína  160 ppm

 Para 10 ml de solución de cafeína  200 ppm

 Para 12 ml de solución de cafeína  240 ppm

Para el paracetamol el procedimiento es el mismo que lo anterior, solo cambian los

valores, siendo la concentración 150 ppm y el volumen 5 ml para todas las muestras, se

procede a llevar esto a un matraz aforado con ayuda de pipetas para posteriormente ser

enrasado (50ml).

Las concentraciones con respecto al paracetamol son las mismas ya que el volumen y

concentración 1 se repiten, siendo la concentración 2 la siguiente:

 Para 5 ml de solución de paracetamol  15 ppm

35
VII.- RESPONDA LO SIGUIENTE

1. ¿Por qué son necesarias las curvas de calibración con patrones internos?

La curva de calibración es un método muy utilizado en química analítica para

determinar la concentración de una sustancia (analito) en una muestra desconocida,

sobre todo en disoluciones. El método se basa en la relación proporcional entre la

concentración y una determinada señal analítica (propiedad). Conociendo esta

relación, será posible conocer la concentración en una muestra dada mediante la

medida de esa señal. La relación concentración – señal se suele representar en una

gráfica a la que se le conoce como curva de calibración o curva de calibrado

2. ¿Cómo se clasifican y cuáles son los criterios para la clasificación del método de

patrones internos?

Se introduce en cada estándar y en la muestra una cantidad exactamente medida de

otra sustancia que llamamos patrón interno, cuyo pico cromatográfico esté bien

diferenciado. De esta manera, en lugar de utilizar las áreas/alturas de los picos,

tomaremos como parámetro analítico la relación existente entre las áreas/alturas de

los picos del analito y del patrón interno. Así, aunque haya imprecisión en el volumen

inyectado, la relación entre analito y patrón interno no se verá afectada.

Patrones internos

Cuando han de efectuarse numerosos análisis similares durante un cierto período de

tiempo, es útil comprobar la coherencia entre los datos mediante el uso de patrones

internos. Para ello se homogeneiza una cantidad relativamente grande de la matriz

que contiene el analito en un nivel apropiado, la cual se homogeneiza y se conserva

en unas condiciones en que el analito se mantiene estable. A intervalos especificados,

se incluye en una serie normal de análisis una porción de ensayo extraída de este

patrón interno. Es posible así comprobar si el método produce datos coherentes

36
 durante un período de tiempo y estimar la precisión a largo plazo que se está

consiguiendo.

3. ¿Cuándo se utiliza calibración con adición de patrón interno?

(Miller y Miller, 2002). El método consiste en añadir cantidades de concentración

conocida de analito a la muestra a determinar. Y con el aumento de la señal de respuesta,

se puede determinar la concentración de analito que había antes de la adición. Método

utilizado para compensar errores debidos a fluctuaciones debidas a la técnica analítica.

Los patrones internos, además, se consideran muy útiles, cuando la concentración de la

muestra o la respuesta instrumental varia cada vez que se utiliza, por razones

desconocidas y difíciles de controlar.

3. ¿Cuáles son las características que debe tener un patrón interno?

Medir la señal de un analito de concentración conocida a lo largo de un análisis Elección

del patrón interno: Comportamiento lo más parecido al analito problema

5. ¿Qué parámetros se debe considerar para decidir el método de calibración?

La calibración incluye la selección de un modelo para estimar los parámetros que

permitan determinar la linealidad de esa curva. y, en consecuencia, la capacidad de un

método analítico para obtener resultados que sean directamente proporcionales a la

concentración de un compuesto en una muestra, dentro de un determinado intervalo de

trabajo.

6. ¿Qué datos debe considerar, además de la información obtenida para elaborar

curvas de calibración?

La señal de medición del equipo ya que, si no obtenemos este dato, no podremos elaborar

la curva de calibración.

37
VIII.- CONCLUSIONES

1.-De los objetivos de la práctica

 Se aplicaron los métodos de calibración según los tipos de muestras y matrices.

 Se logró el adiestramiento en el manejo de cálculos químicos con práctica y guía

de la docente.

 Pudimos conocer y aplicar correctamente el método de calibración con la adición

de estándar y de estándar interno mediante Excel.

2.-De los procedimientos de la práctica

 Se obtuvo mayor conocimiento sobre las soluciones patrones.

 Se logró identificar las cantidades necesarias de cafeína y paracetamol que se

necesitaban para preparar la soluciones.

 Se logró realizar las curvas de calibración de manera eficaz, gracias a los

resultados y a la señal.

 se concluye que los valores correlación es de r = 0,9768 en la curva de calibración

de cafeína y paracetamol el cual el coeficiente es aceptable, es decir que la calidad

de la recta obtenida es buena.

3.-De los contenidos científicos de la práctica

 Aprendimos el uso de calibración con estándar o patrón interno

 Aprendimos el método de adición de estándar en la adición de volumen fijo de la

muestra.

 El estándar interno es un compuesto que es muy similar, pero no idéntico a las

especies químicas de interés en las muestras, ya que los efectos de la preparación

de la muestra deben ser, en relación con la cantidad de cada especie, los mismos

38
 para la señal del estándar interno. en cuanto a las señales de las especies de interés

en el caso ideal, que se realiza para corregir los efectos de la matriz.

IX.- RECOMENDACIONES

 Para realizar una curva de calibración o linealidad, el número de mediciones debe

ser en lo posible igual o mayor a cinco ya que si realizamos solamente dos siempre

será una línea recta. Éstas deben estar uniformemente distribuidas a lo largo del

intervalo de concentraciones de nuestro interés.

 En el caso de que no den valores establecidos para trabajar, se debe optar por unos

que se aproximen a los adecuados, basándose en conocimientos teóricos, además

estos se deben consultar con el docente encargado para que no haya

inconvenientes en los cálculos y en el desperdicio de material.

 Realizar el pesado teniendo en cuenta los errores que se podrían generar, ya que

es un punto crítico la pesada.

39
X. BIBLIOGRAFÍA

- Downloads/validacion-de-la-metodologiaanalitica-de-paracetamol-y-aplicacion-

a-un-estudio-de-bioexencion.pdf

- Eugene D. Olsen. (1990). Métodos ópticos de análisis. Barcelona, Editorial

Reverté, S.A.

- Fernández, I. (2012). “Cuantificación de compuestos por cromatografía: método

del patrón interno”, visitado en 14/09/2020, disponible en URL:

https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/16356/M%C3%A9todo%20Patr%C

3%B3n%20Interno.pdf?sequence=2

- Gallego Picó, A. (2013). Experimentación en química analítica. UNED -

Universidad Nacional de Educación a Distancia.

https://elibro.net/es/ereader/unprg/48602?

- https://cienciaonthecrest.com/tag/patroninterno/#:~:text=M%C3%A9todo%20de

l%20patr%C3%B3n%20interno%3A%20se,pico%20cromatogr%C3%A1fico%2

0est%C3%A9%20bien%20diferenciado.

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