Laboratorio de Química Ambiental
Informe 5
Análisis de parámetros biológicos
Alejandra Balseca (204948)
I. Objetivos
Determinar la existencia de coliformes totales y E. Coli en agua de consumo.
Analizar porque se genera la presencia de estos tipos de coliformes.
Comprobar si el agua es apta para el consumo.
II. Procedimiento
Tomas 2 diferentes muestras de agua (botellón, lavandería)
Tomar una placa Petri film y levantan el film superior colocar una gota de
muestra de agua
Bajar con cuidado el film cubriendo la muestra evitando que se introduzcan
burbujas.
Rotular la placa Petri film con el tipo de muestra
Incubadora
Tomar dos recipientes de plástico del mismo diámetro, pero diferentes alturas.
Realizar un corte rectangular en ambos recipientes
En el recipiente de menor altura realizar unos agujeros en la base
Colocar ambos recipientes juntos uno dentro del otro
Incubación
Colocar las dos placas Petri film dentro de la incubadora
Colocar la lampara cerca de la incubadora
Colocar el termómetro
Revisar que el termómetro mantenga una temperatura de 37 °C
Tras 24 horas realizar el conteo de coliformes
Tras 48 horas realizar el conteo de coliformes.
III. Cálculos y resultados
Cálculo de Coliformes Totales en UFC/ml
𝑼𝑭𝑪
=𝟎
𝒎𝒍
Tabla1. Resultados de recuento después de 24 y 48 horas
Muestras 24 horas 48 horas
Coliformes E. Coli Coliformes E. Coli
totales totales
1 Lavandería 0 0 0 0
2 Botellón 0 0 0 0
Fig 1. Incubadora DIY
Dilucion 𝟏𝟎𝟐
Fig 2. Placas petrifilm día 1
Dilucion 𝟏𝟎𝟐
Fig 3. Placas petrifilm día 2
Método del numero más probables (NMP)
La determinación del número más probable de microorganismos coliformes fecales se
realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se fundamenta en la
capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y producir gas cuando son incubados
a una temperatura de 44.5 0.1C por un periodo de 24 a 48 h [1].
Procedimiento
Preparar la solución de agua de dilución y de los diferentes medios de cultivo
Realizar las diluciones tomando en cuenta lo establecido en el procedimiento CAMB6-
03, agitando bien la muestra.
Hacer la siembra en los tubos conteniendo el medio de cultivo Caldo Lactosado con
Purpurea de Bromocresol (CLPB) de concentración simple o doble
Incubar durante 48 horas a 35 ± 0.5°C y anotar en la bitácora de la incubadora.
Cuantificar los tubos positivos (color amarillo y/o producción de gas en la campana
Durham).
Resembrar los tubos positivos
En tubos de Caldo Lactosado Verde Bilis Brillante al 2% (CLVBB) para análisis de los
coliformes totales, e incubar 48h a 35 ± 0.5°C (incubadora).
En tubos de medio EC para análisis de los coliformes fecales, e incubar 24h a 44.5 ±
0.2°C (termobaño).
Cuantificar los tubos positivos y anotar en los formatos de la prueba confirmativa. [2]
IV. Discusión
Las muestras de agua de potable obtenidas de las fuentes botellón y lavandería no
presentaron [Link] y ni coliformes totales, lo que indica que ambas muestras si son aptas
para el consumo. En cuanto al agua del botellón si se cumplió con la norma INEN 1180
del 2014 porque no presento de ninguno de estos microorganismos.
Se considera agua potable o apta para consumo, al agua cuyas características físicas,
químicas y microbiológicas han sido tratadas a fin de garantizar su aptitud para consumo
humano. Debe cumplir ciertos requisitos, dentro de estos requisitos están los
microbiológicos, los cuales establecen que por cada 100mL de agua evaluada debe haber
menos de 1 UFC de Coliformes fecales y la total ausencia de Cryptosporidium y Giardia
[3].
Por otra parte el agua contaminada depende de la ubicación donde se toma la muestra, si
de donde se obtuvo la muestra de agua se encuentra cerca de una instalación agrícola,
será una causa presumible de la contaminación del agua [4].
Coliformes fecales
Las bacterias Coliformes fecales son definidas como bacilos gram-negativos, no
esporulados que fermentan la lactosa con producción de ácido y gas a 44.5 °C +/- 0.2 °C
dentro de las 24 +/- 2 horas. La mayor especie en el grupo de coliforme fecal es el
Escherichia coli [5].
Coliformes Totales
Los Coliformes totales se definen como bacilos Gram negativos, aerobios o anaerobios
facultativos, no esporulados que pueden desarrollarse en presencia de sales biliares y otros
agentes tensoactivos con propiedades similares de inhibición del crecimiento, no tienen
citocromo oxidasa y son capaces de fermentar la lactosa con producción de ácido, gas y
aldehído, en un período de 24 a 48 horas [4]
Cambios de color.
Las 3M Placas Petrifilm para el recuento de E. coli/coliformes totales contienen nutrientes
de Bilis Rojo Violeta (VRB), un agente gelificante soluble en agua fría, un indicador de
actividad de la glucuronidasa y un indicador que facilita la enumeración de las colonias.
La mayoría de las E. coli (cerca del 97%) produce beta-glucuronidasa, la que a su vez
produce una precipitación azul asociada con la colonia. La película superior atrapa el gas
producido por E. coli y coliformes fermentadores de lactosa. Cerca del 95% de las E. coli
producen gas, representado por colonias 16 entre azules y rojo-azules asociadas con el
gas atrapado en la 3M Placas PetrifilmTM EC (dentro del diámetro aproximado de una
colonia)
Adicional a esto, el medio puede tornarse amarillo, cuando un alto número de
microorganismos no-coliformes, tales como Pseudomonas, están presentes en las placas
Petrifilm CC, por tanto, el gel puede virar a amarillo [6].
V. Referencias
[1] [Link], «Método para la determinación de bacterias coliformes, coliformes fecales,» 2006.
Available: [Link]
[2] S. Salas, «Prácticas de análisis de laboratorio microbiológicos,» 2004. [En línea]. Available:
[Link]
CapituloIII/[Link].
[3] INEN, «Instituto Ecuatoriano de Normalizacion,» 2014. [En línea].
[4] ECOFLUIDOS, «FODM,» 2012. [En línea].
[5] Lopez, «Laboratorio de Tecnologia Educativa. Departamento de Microbiologia y Genetica.,»
16 marzo 2015. [En línea]. Available: [Link]
coliformes/.
[6] 3m, «Placas Petrifilm Guia,» [En línea]. Available:
[Link]
[Link].
