GUIA DE LABORATORIO 2:

PREPARACIÓN DE EXTENDIDOS

INTRODUCCIÓN

La determinación de la morfología en la identificación de los microorganismos

juega un papel fundamental. A través de las determinaciones morfológicas, se

puede efectuar el reconocimiento de los microorganismos soportada con una

adecuada consulta bibliográfica.

MATERIALES

 Láminas porta objetos

 Láminas cubre objetos

 Asa de inoculación

 Mechero

 Goteros

 Agua destilada

METODO

Preparación del extendido

FIGURA 1. Preparación de extendidos

1. Colocar en cada una de las láminas limpias, secas y desengrasadas, una gota

de solución salina utilizando el asa de platino previamente esterilizada.

2. Tomar asépticamente con el filamento una pequeña muestra de cultivo sólido

suministrado y mezclar con una gota de solución salina o agua destilada para

obtener una suspensión. También puede utilizarse un cultivo líquido, en dicho

caso la muestra se toma con el asa de platino y no es necesario colocar la gota de

solución salina o de agua destilada.

3. Extender la suspensión con el asa de platino previamente esterilizada y

enfriada.

4. Dejar secar la lámina a temperatura ambiente

[Link] la muestra extendida a la lámina utilizando calor

Esto se logra pasando la lámina por la llama del mechero máximo 3 veces. La

lámina no debe calentarse mucho y ello se verifica tocándola suavemente con el

dorso de la mano la lámina. El operario debe soportar el calor sin quemarse.

NOTA: Cuando se realizan extendidos a partir de un medio líquido, no es

necesario colocar agua en el porta objetos.

COLORACIONES DIFERENCIALES

INTRODUCCIÓN

La morfología de las bacterias se puede confirmar de dos maneras.

Observándolas muertas teñidas con colorantes. Algunos colorantes sirven para

observar la estructura interna de las células que de otro modo serían invisibles. Es

importante que todos los colorantes se preparen en el laboratorio siguiendo las

instrucciones específicas del fabricante. Es preciso seguir paso a paso los detalles

cuando se preparan las mezclas o compuestos colorantes simples, el período y las

condiciones de almacenamiento pueden ser factores críticos para determinar la

composición y la calidad tintorial de la solución final.

Las tinciones que más se usan son principalmente:

1. Coloración de Gram

2. Coloración de cápsula

3. Coloración de esporas

Objetivo

Identificar las técnicas de coloración más comunes utilizadas para identificar

morfología y estructuras de bacterias.

1. COLORACIÓN DE GRAM

En 1884, un bacteriólogo danés Christian Gram, desarrolló una técnica de tinción

que permite separar a las bacterias en dos grandes grupos: Gram positivos y

Gram negativos, basados en que si retienen o no el colorante primario (cristal

violeta), luego del proceso de decoloración. Los organismos que retienen el cristal

violeta luego de la adición de agentes decolorantes como el alcohol, aparecen

como azul oscuro o violeta y se designan como Gram positivos: aquellos que

pierden e cristal violeta y se tiñen con el colorante secundario, la safranina,

aparecen como rojos y se designan como Gram negativos.

Un examen minucioso de un extendido bacteriano teñido diferencialmente, provee

una información muy importante sobre la caracterización morfológica e

identificación de la muestra. Por ejemplo, una reacción positiva o negativa a la

tinción de Gram es sumamente con importante como medio primario de

clasificación.

El procedimiento puede resumirse de la siguiente manera: Una vez que la

preparación ha sido fijado a la lámina porta objeto, se añade el colorante cristal

violeta, el cual se deja en contacto por 1 minuto y las células se tiñen de color

violeta: posteriormente se lava el exceso de colorante con agua destilada y luego

se añade la solución de lugol que actúa como mordiente y se deja en contacto por

un minuto. El yodo se combina con el cristal violeta y forma un compuesto que

precipita en el interior de la célula, este complejo puede extraerse fácilmente con

alcohol etílico de las Gram negativas, pero no se remueve fácilmente de las Gram

positivas. Una vez realizada la decoloración se añade el colorante de contraste, la

safranina, la cual se deja en contacto por 30 segundos; el exceso de colorante se

elimina con agua destilada. Las láminas así preparadas se secan a temperatura

ambiente o con ayuda de toallas absorbentes.

El por qué las bacterias Gram positivas retienen el complejo cristal violeta- yodo y

las Gram negativas no, ha sido un tema muy controversial. Una de las

explicaciones que se dan, está relacionada con la naturaleza química de la pared

celular de las bacterias Gram positivas que previenen la remoción del complejo

con el alcohol.
FIGURA 2. Esquema comparativo de pared celular de bacterias Gram (+) y (-)

Otra teoría asevera que la gruesa envoltura celular de las Gram positivas,

especialmente la capa gruesa de peptidoglucano, se deshidrata y al encogerse por

el efecto del alcohol, ocasiona el cierre de los poros lo cual impide la salida del

complejo cristal violeta-lugol.

En definitiva la pared celular es la barrera para la decoloración si se altera la pared

celular de las bacterias Gram positivas se transforman en Gram negativas.

MATERIALES

• Cristal violeta

• Lugol de Gram

• Alcohol-acetona (decolorante)

• Safranina

• Cultivos bacterianos (Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus

cereus, Pseudomona aeruginosa)

• Bandejas de coloración

• Láminas porta objetos

• Mechero

• Asa de siembra

METODO DE COLORACIÓN

PREPARACIÓN DE LAS LÁMINAS

Para realizar una coloración ya sea simple o diferencial, es necesario como primer

paso, preparar la extensión de la muestra sobre la lámina porta-objeto y fijarlo,

para posteriormente añadir el o los colorantes y observar la muestra teñida bajo el

microscopio de luz en lente 100X con aceite de inmersión. En la tabla 1 a

continuación muestra el uso, secuencia y tiempo de permanencia de los colorantes

a aplicar con los resultados que daría en caso de ser Gram positivas o negativas.

TABLA 1. Aplicación y resultado de coloración de Gram

REACTIVOS TIEMPO RESULTADO

Gram + Gram -

Colorante primario Cristal violeta 1 minuto Color violeta

Mordiente Sol. de lugol 1 minuto Color violeta

Agente decolorante Alcohol-acetona 10-20 segundos Incoloro

Colorante de contraste, Safranina 30 segundos Morado Rosado

Procedimiento de la tinción de Gram:

1. Colocar las láminas extendidas y fijadas en una bandeja adecuada y cubrir el

extendido con cristal violeta por un minuto. Lavar con agua destilada y escurrir.

2. Cubrir la superficie de la lámina con solución de lugol por un minuto. Lavar con

agua destilada y escurrir.

3. Colocar cada una de las láminas en posición inclinada y decolorarlas con

alcohol-acetona hasta que el color libre deje de salir (10-20 segundos

aproximadamente). Este es el paso más importante de la coloración ya que

una excesiva adición de alcohol-acetona permite la salida del colorante

primario de las células Gram positivas.

4. Cubrir las láminas con safranina por 30 segundos. Lavar con agua destilada y

escurrir.

La figura 3 esquematiza el procedimiento de la coloración de Gram

Coloración de Gram

Coloración

de Gram

Cristal

violeta 1

min.

Lugol 1min Álcohol-acetona

Hasta decolorar
safranina 30s

Observación bajo el microscopio de luz

1. Colocar una gota de aceite de inmersión sobre las láminas teñidas y secas y

examinarlas bajo un microscopio de luz con el objetivo de inmersión 100X.

2. Observar varios campos hasta encontrar aquel donde las células

están adecuadamente separadas para permitir la visualización de la morfología,

arreglo de las células, presencia de endosporas y su reacción a la coloración de

Gram.

Precauciones

Para obtener una buena lámina de Gram, es necesario tomar en cuenta ciertas

precauciones tanto en su preparación como en su observación bajo el microscopio

con el objetivo de inmersión.

1. Extendido: Este paso es importante ya que la preparación debe ser fina y no

gruesa. Si se coloca demasiada muestra del cultivo bacteriano, el extendido

quedará una gran mancha coloreada, pero vista bajo el microscopio, con el

objetivo de inmersión, se observará una masa oscura de estructuras que no

podrán ser distinguidas en forma individualizada y el proceso de identificación de

la morfología, arreglos, estructuras tipo endosporas etc. Se dificulta.

2. Fijación: Si el extendido bacteriano no se fija adecuadamente, las células

bacterianas se pierden durante el proceso de tinción que involucra varios lavados

y trae como consecuencia la ausencia de bacterias teñidas. Por el contrario, un

sobrecalentamiento puede ocasionar la aparición de artefactos y la deformación

de la morfología de las células bacterianas.

3. Enfoque: Antes de colocar la lámina en la platina determinar en cuál lado de la

lámina portaobjeto está localizado el extendido, para efectuar la observación.

4. Observación: Observe varios campos hasta encontrar aquel que permitirá una

identificación de la morfología, estructura y reacción de Gram.

RESULTADOS

Con las imágenes enviadas como resultados, realice una descripción de cada

bacteria en cuanto a forma, coloración, reacción a la coloración de Gram y asigne

el nombre a cada imagen de acuerdo con los cultivos bacterianos utilizados en la

práctica.

PREGUNTAS

1. Defina los términos aumento y resolución, para el uso de microscopios ópticos

2. ¿Cuál es el límite superior de aumento para un microscopio de campo claro?

.Por qué?

3. Por qué es necesario el uso de aceite de inmersión en el objetivo de mayor

Aumento

4. ¿Cuál es la función de la tinción en la microscopia óptica?

5. Por qué considera que la coloración de Gram se sigue empleando en las

técnicas de identificación de bacterias

BIBLIOGRAFIA

Benson, H. 1979. Microbiological Aplications. A Laboratory Manual in General Microbiology. Third Ed.
Wm. C.

Brown Company Publishers. Dubuque Lowa.

Clavel, L. Pederique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos Generals Seg. Ed. Facultad
de

Farmacia Uiversidad Central de Venezuela.

Pelczar and Chan. 1977. Laboratory Exercisas in Microbiology. Fourth ED. Mc Graw-Hill Book Company.

Seely, H.: van Demark, P. 1982. Microbios en acción. Manual de Laboratorio para Microbiología. Ed
Blume.

Madrid España.

Tortola, G.J.: Funke, [Link] Case, C.L. 2001. Microbiology Introduction. Seventh Ed. The Benjamin

Guia laboratorio biologia 2012 1 - copia

1. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERAL GUÍA DE LABORATORIO BIOLOGÍA GENERAL FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA

2. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA

GENERAL NORMAS DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIONORMAS DENTRO DEL LABORATORIOSiga las
siguientes recomendaciones que son generales a tener en cuenta en unlaboratorio 1. GENERALES
Mantenga las luces apagadas si no hay necesidad de su utilización. Los grifos de agua se deben manejar
con cuidado a fin de no romperlos y cerciorarse que no se está perdiendo agua inútilmente. Las llaves de
gas que abastecen los mecheros deben estar cerradas, en caso de fugas informar al Monitor o al
profesor directamente. Si hay fuerte olor a gas cohíbase de encender fuego hasta tanto no desaparezca
el olor a gas. Terminada la práctica cierre correctamente las llaves de paso. Estar puntual a la hora de
entrar al laboratorio, recuerde ese adagio que dice “Uno llega tarde porque se sabe que lo esperan, si
sabe que no lo esperan uno no llega tarde”. Se da un margen máximo de 5 minutos para su llegada Está
prohibido comer, beber o fumar dentro del laboratorio, esto genera indisposición general y no ayuda al
desarrollo armónico de las prácticas No se permite juegos ni indisciplina dentro del laboratorio, éste es
un sitio donde el respeto y la academia nos debe ayudar a formar integralmente. No pierda tiempo,
trabaje rápido y con cuidado, sea diligente dentro del proceso de las distintas prácticas. Evite el
deambular por el espacio físico del laboratorio sin motivo aparente, céntrese en su trabajo con el grupo
de compañeros el cual le correspondió. De esta manera el trabajo rinde y se hace más armónico.
Finalizada la práctica la mesa de trabajo debe quedar en buen estado y aseada. Entregue el material de
laboratorio asignado en perfecto estado y de manera limpia. En caso que por accidente se haya
fraccionado algunos de los materiales dados, debe hablar con el profesor de la materia o en su defecto
con el monitor. Es claro que debe reponer el material que averió.

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GENERAL 2. MATERIAL DEL LABORATORIO Dentro del laboratorio siempre utilizar bata de manga larga,
blanca, preferiblemente de algodón. Cuide los lentes del microscopio para que no se manchen con
colorantes. Una vez dentro el laboratorio lave y seque correctamente el material que previamente le han
entregado procurando no ocasionar fracturas del mismo. Todo el material, especialmente los aparatos
delicados, como lupas y microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus
mecanismos. Jamás pipetee ácidos o Bases fuertes, sustancias toxicas o volátiles Nunca arroje materiales
sólidos (papeles, fósforos, vidrios, etc) en los sumideros o vertederos, utilice los implementos adecuados
para ello. Evite instalaciones o montajes inestables de aparatos durante las distintas prácticas. No
pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o artilugio que se disponga
en el Centro. Las pipetas se cogerán de forma que sea el dedo índice el que tape su extremo superior
para regular la caída de líquido. Al enrasar un líquido con una determinada división de escala graduada
debe evitarse el error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la
visual al enrase sea horizontal. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen líquidos
debe evitarse la ebullición violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. El tubo de ensayo
se acercará a la llama inclinada y procurando que ésta actúe sobre la mitad superior del contenido y,
cuando se observe que se inicia la ebullición rápida, se retirará, acercándolo nuevamente a los pocos
segundos y retirándolo otra vez al producirse una nueva ebullición, realizando así un calentamiento
intermitente. En cualquier caso, se evitará dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona.
Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo después de haberlos calentado con el
fin de evitar roturas. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se
engrasen.
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GENERAL

5. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA

GENERAL 3. EVITAR ACCIDENTES Sofoque cualquier principio de incendio con un trapo mojado Evite
inhalar vapores de manera directa de cualquier material. Si es absolutamente necesario porque la
practica así lo requiere, opere arrastrando los vapores con la mano hacia la nariz Lea con atención las
etiquetas que están adosadas a los envases de las sustancias químicas, evite accidentes por consumo de
sustancias químicas del laboratorio. Cerciórese antes de coger cualquier material de vidrio, hierro y
porcelana, que estos se encuentran a la temperatura ambiente para evitar posibles quemaduras En caso
de quemaduras con sustancias químicas o materiales expuestos a altas temperaturas, vaya directamente
con el docente a fin de utilizar algún paliativo para la quemadura. Evite por si solo hacer combinaciones
de sustancias. Hable con el docente si es procedente hacer algo al margen de lo manifestado en la guía
de laboratorio. Evite cortarse con vidrio cumpliendo las siguientes instrucciones: a. Nunca trate de
insertar tubos de vidrio, termómetros, embudos o cualquier otro objeto de vidrio en tapones de caucho,
o cualquier otro objeto sin humedecer el tapón y el objeto de vidrio. b. Proteja sus manos con una toalla
c. Para reducir el palanqueo que se ejerce sobre el vidrio, mantenga una mano en el tapón y con la otra
tome el material de vidrio muy cerca del extremo que se va a insertar, haga presión y el objeto de vidrio
se ira introduciendo lentamente. Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) deben mantenerse
alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se hará
al baño María, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho
cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. Cuando se manejan productos corrosivos (ácidos,
álcalis, etc.) deberá hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se
verterán bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se dejarán resbalar suavemente por su pared.
Cuando se quiera diluir un ácido, nunca se debe echar agua sobre ellos; siempre al contrario: ácido sobre
agua.

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GENERAL Cuando se vierta un producto líquido, el frasco que lo contiene se inclinará de forma que la
etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre líquido se deteriore dicha etiqueta y no se
pueda identificar el contenido del frasco. RECOMENDACIONES PARA EL ÉXITO DE LAS PRÁCTICAS DE
LABORATORIO Antes de realizar una práctica, debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de
su objetivo, fundamento y técnica. Los resultados deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas
se conozcan. Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona de trabajo y de su material . Llevar
el material solicitado en las distintas prácticas Trabajar con diligencia y de manera armónica de tal forma
que no se malgaste el tiempo y pueda terminar la practica en el tiempo estipulado Conformar grupos de
trabajo de acuerdo a las indicaciones del Docente o Monitor y presento los informes de laboratorio con
el grupo de trabajo con quien realizo la practica PREGUNTAS PREGUNTAS PRELABORATORIO
COMPLEMENTARIAS (Se entregan ocho días después de hacer este laboratorio) 1. Defina: Residuo solido
Residuo peligroso Residuo combustible De acuerdo con la clasificación Residuo corrosivo de residuos
diseñe una tabla Residuo reactivo que incluya: clase de residuo Residuo explosivo (NO PELIGROSOS,
Inflamabilidad reciclables, vidrio); contenido básico (toda case de vidrio no Residuo patógeno
contaminado), color (blanco) y Residuo volátil etiqueta. Residuo cortopunzante Biodegradable
Biosanitario Metales pesados Recalcitrante

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GENERAL PRESENTACIÓN GENERAL DEL INFORME DE LABORATORIO El desarrollo práctico de la
asignatura Biología General se realiza a través de cuatro laboratorios. Todas las prácticas requieren del
manejo del microscopio para observar diferentes tipos de sistemas biológicos unicelulares,
pluricelulares, bacterianas, protista, hongo, animales y vegetales. Las guías de biología inician con un
conocimiento sobre microscopía, resaltando la importancia del microscopio como instrumento
fundamental para la observación y estudio de la diversidad celular y otros campos importantes de la
Biología microscópica; continúa con el estudio de la célula como entidad estructural y funcional de todos
los sistemas vivos, destacando la variabilidad que se presenta en cuanto a forma, tamaño y tipos
celulares. Las actividades de laboratorio están diseñadas con el objetivo de llevar a la práctica los
conceptos fundamentales que se imparten en teoría y de esta manera involucrarse experimentalmente
con la ciencia. En los instructivos de cada práctica encontrará una introducción, objetivos, procedimiento
y cuestionario, los cuales deben ser resueltos antes de ingresar al laboratorio ya que contienen aspectos
indispensables para comprender la práctica. Todas las prácticas indican qué material, equipo o reactivo
se utilizará y el procedimiento a seguir, para llevar a cabo los [Link] de presentar el
laboratorio: El estudiante deberá presentar en un cuaderno de laboratorio cada una de las prácticas
desarrolladas (no se reciben laboratorios en computador). El laboratorio se presenta en tipo artículo
científico: Título, resumen, abstract, introducción, metodología (materiales y métodos), resultados
(gráficas, figuras, gráficos), discusión de resultados, conclusiones y bibliografía. Las personas que no
asistan a las prácticas no podrán entregar informe de laboratorio.

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GENERAL MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO PRÁCTICA No 1INTRODUCCIÓNEl
microscopio óptico es el instrumento principal en el laboratorio de biología, ya que estenos ayuda a
observar cosas que no podemos ver a simple [Link] tres tipos de microscopios en el laboratorio de
biología1. - Microscopio estereoscópico: este nos sirve para observar muestras vegetales ymuestras
animales, y consta de 2 objetivo, uno de 2 “x” y otro de 4 “x”, por lo tanto suaumento será de 20 y 40
veces.2. - Microscopio de luz polarizada: este se utiliza para observar metales, tiene 5 objetivosy un solo
ocular.3. - Microscopio óptico: este es el que se utiliza de manera más común en las prácticasde
laboratorio de biología, este microscopio consta de tres sistemas.a)Sistema mecánico: son todas las
partes que sirven de soporte al microscopio: el brazo,el pie o soporte, el carro o la platinab) Sistema de
iluminación: las fuentes de luz, el condensador y el espejoCLASES DE MICROSCOPIOS:Existen dos tipos
de microscopios: simples y compuestos� Microscopios simples : Consta de un solo sistema de lente �
Microscopios compuestos:Constan de dos (2) sistemas de lentes: el objetivo y el [Link] microscopio
compuesto es un instrumento que aumenta considerablemente la imagende los objetivos que en él se
observan. Entre las variedades de éste microscopioencontramos el electrónico y el fotónico u óptico.
Este último tipo de microscopio estáformado por una parte mecánica y una parte óptica.

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GENERALParte Mecánica:a. Pie o Base: Generalmente en forma de herradura o rectangular, es el apoyo
de lasdemás piezas del microscopio. El pie debe ser sólido y pesado para asegurar suestabilidad.b.
Columna o Brazo: Este elemento relaciona el tubo del microscopio con el pie; sostienela platina y el
condensador y de ella se agarrará el microscopio cuando se trasladadurante los trabajos. En algunos c.
Tubo del Ocular: Está colocado en la parte superiordel microscopio, donde están acoplados los oculares,
que pueden tener movimientovertical, con ayuda de una cremallera sobre la columna. En algunos
microscopios el tubodel ocular es inclinado y se mantiene fijo, en este caso se mueve la platina.d.
Revólver o Disco Giratorio: Está debajo del tubo ocular donde están acoplados losobjetivos, presenta
movimiento giratorio para facilitar el cambio de un objetivo a otro.e. Platina: Es una placa que puede ser
cuadrada, circular o rectangular, con un orificiocentral que permite el paso de la luz a través de ella. Su
función es sostener las placascon los preparados biológicos que se van observarf. Carro: es un dispositivo
ubicado sobre la platina, cuya función es sujetar y mover laplaca que se va a estudiar. Posee dos tornillos
que permiten movimientos horizontales(hacia adelante, hacia atrás, hacia la derecha y hacia la
izquierda) del [Link] la platina carece del anterior dispositivo, lleva dos soportes para fijar
las placasllamadas ganchos o uñas.g. Mecanismos de Movimiento: Está integrado por el tornillo
macrométrico y elmicrométrico� Tornillo Macrométrico: Acerca o aleja rápidamente el objetivo del
preparado aobservar; su función es lograr un enfoque más o menos claro o aproximado del objeto. �
Tornillo Micrométrico: Acerca o aleja el objetivo del preparado, pero lentamente,
casiimperceptiblemente, permite desplazamientos muy finos de la platina o del tubo delocular. Durante
la observación y enfoque este tornillo debe estarse moviendopermanentemente; su función es darle
nitidez al [Link] óptica:Esta integrada por los objetivos, oculares y el aparato de iluminación
(espejo, diafragma,condensador y filtros). Estos elementos son los que permiten la iluminación,
ampliación yla visión aumentada del objetivo.a. Objetivo: Es la pieza más importante del microscopio.
Ellos se acoplan medianteroscas estándar al revólver y pueden ser cambiados de posición con sólo
[Link] el nombre de objetivos porque son los lentes que están más cerca del objeto.
Lamayoría de los microscopios tienen tres o cuatro objetivos. Las lentes de los objetivosson de aumentos
diversos, los más usados son:Objetivos de pequeños aumentos 3.5x; 4x, 5x, 6x, 8x y 10x; objetivos de
grandes

10. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALaumentos 40x, 45x, 50x y objetivos de inmersión 90x, 95x y [Link] lentes de inmersión se
emplean con aceite de inmersión para conectar la lente frontal(lente inferior del objetivo) al porta-
objeto. Entre el objetivo y el objeto se produce unapérdida de luz por reflexión que se corrige
adicionando al preparado unas gotas de aceitede cedro (aceite de inmersión) cuyo índice de refracción
1.515, es próximo al cristal. Esteaceite también reduce o suprime por completo la refracción de los rayos
de luzprovenientes de la fuente luminosa. b. Ocular: Están colocados en la parte superior deltubo ocular.
Está formado por dos sistemas de lentes dispuestos de un cilindro. Sufinalidad es aumentar la imagen
dada por el objetivo y eventualmente corregir algunosdefectos de la misma. Reciben dicho nombre
porque son las lentes que se encuentranmás cerca del ojo. Hay oculares de 3.5x; 5x; 6,3x; 10x; 12.5x;
15x; 20x y [Link] aumento de la imagen de un objeto observado a través de un microscopio, se
calculamultiplicando el número de aumento del objetivo con el cual se está trabajando por elnúmero de
aumento del ocular que se está utilizando.c. Aparato de iluminación: Está conformado por la fuente de
luz, el diafragma, elcondensador y los filtros.d. Fuente de luz: Puede ser natural o artificial, cuando es
natural (solar) o procede de unfoco luminoso situado fuera del microscopio, un espejo recoge la luz del
medio y la reflejaa través del objeto y del sistema de lentes. La luz artificial la constituye generalmente
unbombillo ubicado en el microscopio y conectado a un circuito eléctrico de bajo voltaje.e. Diafragma:
Está ubicado entre la fuente de luz y el condensador, inmediatamentedebajo de la platina, su función es
regular la intensidad de luz que atraviesa el objeto. Eldiafragma tiene una palanquita que al moverla
hacia delante o hacia atrás agranda oachica el orificio central, dejando pasar mayor o menor cantidad de
luz respectivamente.f. Condensador: Es un elemento cónico que posee un sistema de dos
lentesconvergentes que recogen o concretan los rayos luminosos para enviarlos al objetivo porel agujero
de la [Link] un tornillo manual que permite guardar la altura del condensador. Esta graduaciónes
importante cuando se trabaja con objetivos de gran aumento (40x, 100x), ya que en lamedida que se
trabaja con éstos objetivos el condensador debe subirse. Lo contrariosucede cuando se trabaja con
objetivos de menor aumento (4x, 10x).g. Filtros: Entre la fuente de luz y el condensador de algunos
microscopios existe unportafiltros en el cual se puede colocar filtros a voluntad del observador. Los filtros
sonelementos de cuarzo o de vidrio, pueden ser de color azul, amarillo o verde. Ellosinterceptan el haz
de rayos luminosos antes de entrar al condensador, esto se hace conel objeto de seleccionar un tipo de
luz determinada para una experiencia dada.

11. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALLENTES:Las lentes son el componente más importante del microscopio; se fabrican de vidrio
uotros materiales [Link] ser convexas o cóncavas en ambas superficies, planas en una
cara o tenercualquier combinación de éstas dos formas en su [Link] lentes son de dos tipos:
positivas y negativas.� Lentes Positivas: Hacen converger los rayos de luz, es decir, los concentra para
formaruna imagen real.� Lentes Negativas: Hacen divergir los rayos de luz, sin formar ninguna imagen
[Link] MICROSCÓPICAS:Debemos tener en cuenta que a través del microscopio
solamente se pueden observarobjetos que dejan pasar rayos de luz, por esta razón el preparado debe
ser lo másdelgado y transparente posible, pues un preparado grueso solo nos permite observar
unamancha negra. Los detalles solo se observan si la preparación es lo suficientementedelgada para que
sea transparente con la luz que recibe. Para realizar preparacionesmicroscópicas los porta y cubre-
objetos deben limpiarse antes de usarse. Un buenmétodo es guardarlos en alcohol y antes de utilizarlos
secarlos con un paño limpio y librede grasa. Los cubre-objetos deben limpiarse con mucho cuidado
porque son frá[Link] preparaciones microscópicas pueden ser acuosas o en [Link] preparaciones
acuosas son las más simples y fáciles usadas para examinarcualquier objeto fluido, como agua de
estanque o sangre. Se deposita una gotita dellíquido que se desea observar en el centro del porta-
objeto, se coloca el cubreobjetosobre el porta, forme con las dos láminas un ángulo de 45 grados y luego
deje caersuavemente la laminilla cubre-objeto sobre el preparado, evitando la formación [Link]
líquido no debe rebosar los bordes del cubre-objeto, en caso de que suceda sequecuidadosamente el
líquido sobrante usando papel absorbente o papel toalla. Lapreparación queda así lista para la
observación. Estas preparaciones son de cortaduración porque se secan rápidamente; para hacerlas más
duraderas debe cerrarseherméticamente los bordes del cubre objeto; la duración de ésta preparación no
esindefinida. Los bordes se pueden cerrar con vaselina o [Link] :Los colorantes son sales
compuestas por un ácido y una base. Se clasifican en ácidos,básicos y neutros, según la parte de los
mismos que imparta el color. En los colorantesácidos el grupo cromóforo, el que imparte el color, es el
componente ácido, elcomponente básico es incoloro. Lo contrario sucede con los colorantes básicos. Los

12. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALcolorantes neutros tienen coloreado el componente ácido y el bá[Link] mayoría de los
colorantes son sintéticos, aunque se emplean todavía algunosnaturales. La hematoxilina y el carmín son
los colorantes naturales más importantes parala tinción de tejidos. El carmín es producido por la
conchinilla (Coccus cacti). Lahematoxilina se extrae de la madera de un árbol de México, el palo
[Link] colorante es la orceína que se extrae de líquenes. Existen tres técnicas de tinción deuso
general: la coloración seca o de tejidos muertos, la coloración vital o de tejidos vivosy la histoquímica, en
la cual se utilizan las reacciones de los colores para hacer visible loselementos estructurales de las
células y de los tejidos. Partes de un microscopio ópticoRESUMEN PARTES DE UN MICROSCOPIO
ÓPTICOSISTEMA ÓPTICOOCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del
[Link]: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de é[Link]:
Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparació[Link]: Regula la cantidad de luz
que entra en el [Link]: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

13. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALSISTEMA MECÁNICOSOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el
[Link]: Lugar donde se deposita la preparació[Link]: Contiene los sistemas de lentes
oculares. Puede ser monocular, [Link]ÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite,
al girar, cambiar [Link] DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y
micrométrico queconsigue el enfoque correcto. I. MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO1. Colocar el
objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio
se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.2. Colocar la
preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.3. Comenzar la observación con el
objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.4.
Para realizar el enfoque: a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el
tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre
el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos. b.
Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el
macrométrico y, cuando se observe algo nítido la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un
enfoque fino.5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al

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GENERAL cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el
objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia
de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si
se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una
preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.6. Empleo del objetivo de inmersión: a. Bajar
totalmente la platina. b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos
indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite. c. Girar el revólver hacia el
objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40. d. Colocar una gota mínima de
aceite de inmersión sobre el círculo de luz. e. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición
del objetivo de inmersión. f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la
lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
g. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y
la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el
objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay
que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3. i. Una vez finalizada la observación de la
preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este
momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de
inmersión en posición de observación. j. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un
papel especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio. II.
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES 1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor
aumentoen posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina nosobresale del
borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. 2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay
que mantenerlocubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usarde
forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo

15. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALdel polvo. 3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlasmuy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica. 4. No dejar el portaobjetos puesto
sobre la platina si no se está utilizando elmicroscopio. 5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay
que limpiar el aceite quequeda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro
(menosrecomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido ycon
suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlocon una mezcla de
alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo delimpieza, porque si se aplican estos
disolventes en exceso se pueden dañar las lentes ysu sujeción. 6. No forzar nunca los tornillos giratorios
del microscopio (macrométrico,micrométrico, platina, revólver y condensador). 7. El cambio de objetivo
se hace girando el revólver y dirigiendo siempre lamirada a la preparación para prevenir el roce de la
lente con la muestra. No cambiarnunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo
mientras se estáobservando a través del ocular. 8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si
se derrama sobreella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un
pañohumedecido en xilol. 9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar
lasesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión generalde los [Link]
DIBUJO EN BIOLOGIA, debe tener las siguientes características: Objetividad y claridad. Deben
representarse los objetos tal como son y con nitidez. Exactitud. Proporcionalidad entre el objeto y su
representación gráfica en toda su estructura. Trazos nítidos y firmes. Con ausencia de sombras y colores.
Nombres. Todas las estructuras que aparecen deberán llevar su nombre por fuera del dibujo en forma
ordenadaRECORDEMOS: Usar eficientemente el microscopio y los elementos y equipos a su disposición.
Estudiar e interpretar críticamente el material biológico para el estudio microscópico. Registrar las
imágenes microscópicas para ilustrar y discutir los resultados

16. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERAL obtenidos. El examen microscópico proporciona información fundamental en investigación.
Mucha de esta información sólo puede ser obtenida a través de esta herramienta, por lo tanto, se debe
poner el máximo interés en la adquisición de una información lo más amplia y profunda posible sobre la
estructura microscópica y los métodos de trabajo utilizados para su observación y [Link]
Identificar cada una de las partes que conforman el microscopio óptico y conocer los cuidados que se
deben tener para su manejo. Manejar los mecanismos de enfoque del microscopio Comprender la
importancia del microscopio como herramienta fundamental en biología celularMateriales (descripción
de equipos, reactivos, materiales de vidrio, plástico y acero,especificar los materiales que deben llevar
los estudiantes)Microscopio¼ hoja de papel periódicoPortaobjetosCubreobjetosTijerasPapel seda
bancoGoteroXilolFibras de lana o algodón de diferentes coloresGranos de polenMetodología –
Procedimiento 1. Cortar un pedazo de papel periódico de 1 cm2 de área y colocarlo sobre un cubre
limpio y seco 2. Adicionar con el gotero un poco de agua sobre el papel hasta humedecer y poner el
cubre objeto sobre el evitando que se formen burbujas. 3. Observar la muestra en el microscopio para
ello se debe colocar la muestra e la platina asegurándola con las pinzas. 4. Realizar las observaciones con
los objetivos de 10x, 40x, 100x

17. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERAL 5. Ajustar las observaciones con los tornillos macrométrico y micromético. 6. Realizar los
esquemas de cada una de las observaciones. 7. Realizar el mismo procedimiento con fibras de lana o
algodón de diferentes colores y con Granos de polen. 8. Después de utilizar el microscopio limpiar
suavemente el microscopio y las lentes con xilol y papel seda 9. Cubrir y guardar debidamente el
microscopioCuestionario ¿Cómo se puede definir un microscopio? ¿Cuáles son las diferencias entre un
microscopio simple y uno compuesto? ¿Cuáles son las diferencias al observar la muestra con diferentes
tipos de lentes de aumento? ¿Que dificultades tendrías si al iniciar un trabajo lo hicieras con la lente de
mayor aumento? Cuando utilizas el objetivo de inmersión ¿por que es necesario utilizar un aceite con
este nombre? Por que el objetivo necesita un índice? Cuáles son los poderes del microscopia. Cuál es el
índice de refracción del agua y del aceite. Cuáles pueden ser las causas de las rupturas de los
micropreparados ¿Qué importancia tiene el microscopio en la biología celular? Investiga si es lo mismo
amplificación y resolución ¿y de que factores depende cada una de ellas?

18. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERAL CÉLULAS VEGETALES Y CÉLULAS ANIMALES PRÁCTICA No 2 INTRODUCCIÓNLas células son la
porción más pequeña de materia viva capaz de realizar todas lasfunciones de los seres vivos, es decir,
reproducirse, respirar, crecer, producir energía,etc. Existen dos tipos de células con respecto a su origen,
células animales y célulasvegetales:En ambos casos presentan un alto grado de organización con
numerosas estructurasinternas delimitadas por membranas. La membrana nuclear establece una barrera
entreel material genético y el citoplasma. Las mitocondrias, de interior sinuoso, convierten losnutrientes
en energía que utiliza la [Link] la célula vegetal como la animal poseen membrana celular, pero la
célula vegetalcuenta, además, con una pared celular de celulosa, que le da rigidez. La célula
vegetalcontiene cloroplastos: organelos capaces de sintetizar azúcares a partir de dióxido decarbono,
agua y luz solar (fotosínteis) lo cual los hace autótrofos (producen su propioalimento) y la célula animal
no los posee por lo tanto no puede realizar el proceso defotosíntesis. Pared celular: la célula vegetal
presenta esta pared que está formada porcelulosa rígida, en cambio la célula animal no la posee, sólo
tiene la membranacitoplasmática que la separa del medio. Una vacuola única llena de líquido que
ocupacasi todo el interior de la célula vegetal, en cambio, la célula animal, tiene varias vacuolasy son
más pequeñ[Link] células vegetales pueden reproducirse mediante un proceso que da por
resultadocélulas iguales a las progenitoras, este tipo de reproducción se llama reproducciónasexual. Las
células animales pueden realizar un tipo de reproducción llamadoreproducción sexual, en el cual, los
descendientes presentan características de losprogenitores pero no son idénticos a él.CÉLULAS
VEGETALESMATERIALES: Una cebolla cabezona. Viruta de madera Semillas de durazno y cereza. Un
tomate, Una arracacha, yuca, papa y banano. Una hoja de lirio, elodea Láminas porta y cubres. Cuchilla o
bisturí. Papel absorbente. Aguja de disección. Pincel.

19. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
[Link] HUMEDO DE EPIDERMIS DE CEBOLLA (Allium cepa)En un porta
objetos coloque dos muestras de epidermis de cebolla. Uno con agua y otrocon lugol. Observe la forma
de la célula y su disposición en el tejido. Identifique Paredcelular, membrana celular, citoplasma, vacuola,
núcleo, nucleolos. Cuántos núcleos ynucleolos presenta la célula. Diferencie entre las dos preparaciones.
Cuáles son lasventajas de utilizar colorantes. Qué organelos celulares se colorean con [Link]
HUMEDO DE EPIDERMIS DE LIRIO- ElodeaColoque un segmento de hoja de lirio en el porta objetos,
coloree con azul de [Link] al microscopio y diga: cuántos tipos de células observa y qué
forma tienen,identifique y esquematice en las células epidérmicas las siguientes estructuras:
paredcelular, membrana celular, citoplasma, vacuolas y núcleo. Identifique un estoma, señaleel ostiolo y
diga su función. De cada una de las estructuras anteriores diga su funció[Link] HUMEDO DE
EPIDERMIS DE TOMATE (Lycopersicum esculentumMillar)Raspe la epidermis de tomate sobre la lámina
porta objetos, lavando con agua hasta quela epidermis esté translucida. Agregue tionina y observe: La
forma de las células, sucoloración, pared celular, la lámina media y los plasmodesmos que fraccionan
oseccionan la pared celular. Diga qué son y cuál es su funció[Link]ÓN DE [Link]
una hoja de elodea (Egeria densa) y ubique el ápice foliar. Pase a 40X y diga cómose llaman los organelos
de color verde que se observan, dónde se localizan y cuál es sufunción. Describa el tipo de movimiento
de los organelos y cómo se llama este tipo demovimiento?. Dibuje lo [Link]ÓN DE
[Link] un trozo de papa (Solanum tuberosum L) y con el bisturí o cuchilla haga unraspado
y deposítelo sobre el portaobjetos; agregue una gota de lugol, cubra y lleve almicroscopio. Observe la
forma de los amiloplastos. Repita la misma operación conbanano (Musa sapientum L.).OBSERVACIÓN DE
[Link] una muestra de pulpa roja (mesocarpo) de tomate, extienda sobre la lámina
portaobjetos, agregue una gota de agua y lleve al microscopio. Observe las células grandes
ytransparentes con una pared delgada, dentro se encuentran unas granulaciones de colorrojo que
pueden agruparse alrededor del núcleo o estar dispersos en el citoplasma.

20. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALCÉLULAS ANIMALES METODOLOGÍA Muestra de sangre: Con la lanceta estéril realizar una
punción en un pulgar. Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos. Colocar un
portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la superficie del porta de manera que se
pueda obtener una fina película de sangre. El porta absorbe la gota y la arrastra, pero sin pasar nunca
por encima de ella para no dañar los gota de sangre hematíes. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta
de tinción y añadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la
preparación. Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la
desecación del colorante agregando más líquido. Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina
dejándola actuar 1 minuto. Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante. Dejar secar aireando
el porta. Observar al microscopio. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA Al microscopio se verán con un
dominio predominante los glóbulos rojos, hematíes o eritrocitos teñidos de color rojo por la eosina. No
tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes.

21. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERAL Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo, teñido
de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de leucocitos: Linfocitos: de tamaño aproximado al de
los glóbulos rojos, tienen un solo núcleo que ocupa casi todo el glóbulo. Monolitos: son los leucocitos
mayores, poco frecuentes normalmente, núcleo grande, redondo, son los más móviles y su función
principal es la fagocitosis. Polimorfonucleares: núcleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser
eosinófilos, con abundantes granulaciones teñidas de rojo por la eosina, neutrófilos y basófilos. Las
plaquetas no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción. Muestra de protozoarios:
-Agregar una gota de muestra de agua estancada (con gotero) en el portaobjeto, poner el cubreobjeto
con la precaución de que no se formen burbujas, observar en los objetivos de 10x y [Link]
ComplementariaEn el siguiente cuadro marca las estructuras que pudiste observarMuestras/ Células
Vegetales Células Animalesorganelos Cebolla Tomate Elodea Sangre Protozoarios 10 X 40X 10 X 40X 10 X
40X 10 X 40X 10 X 40XNúcleoMembranacelularParedcelularCitoplasmaVacuolasOtrosPOST
LABORATORIO 1. Indique las principales diferencias entre células vegetales y células animales (realice un
cuadro comparativo). 2. Porque los organelos celulares son de diferente formas y color 3. Describa los
organelos celulares que diferencias los dos tipos de células de estudio. 4. Revise diferentes tipos de
técnicas que se utilizan para estudia células vegetales y animales.

22. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERAL OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE HONGOS PRÁCTICA 3INTRODUCCIÓNLos hongos
constituyen un grupo muy numeroso de organismos (se han descritoaproximadamente 500.000, pero se
estima que pueden existir entre 1 y 1,5 millones deespecies) que presentan una amplia distribución en la
naturaleza, contribuyendo a ladescomposición de la materia orgánica (Figura 1) y participando en los
ciclos bioló[Link] pequeño número son patógenos de animales y [Link] 1. Estructura de
Hongos estructuras para la degradación de materia orgá[Link], los hongos fueron clasificados
dentro del Reino Plantae ya que fueronconsiderados organismos inmóviles presentando estructuras que
se asientan firmementeen el sustrato sobre el que crecían. Sin embargo, cuando se ha aplicado la
biologíamolecular en los estudios taxonómicos se ha observado que los hongos están máspróximos al
Reino Animalia que al Plantae. En el sistema de clasificación de los seresvivos en cinco reinos, los hongos
se encuentran clasificados en el Reino Fungi, que sedivide en cuatro Phyla denominados Ascomycota (el
más extenso que comprende el 50%de los hongos conocidos y aproximadamente el 80% de los hongos
patógenos,Basidiomycota, Zygomycota, y Chytridiomycota, encontrándose en los tres primeros
loshongos patógenos humanos. Los hongos en los que no se conoce su reproducciónsexual, constituyen
un grupo heterogéneo denominado Deuteromicetos, hongosimperfectos o mitospóricos, que representa
el segundo grupo más numeroso y quetambién incluye patógenos [Link] hongos son organismos
eucariotas típicos (Figura 2) y poseen un núcleo quecontiene varios cromosomas (siete en Candida
albicans, ocho en Aspergillus nidulans ydieciséis en Saccharomyces cerevisiae) delimitado por una
membrana nuclear, connucléolo rico en ARN y orgánulos citoplásmicos, como mitocondrias, vacuolas,
retículoendoplásmico, aparato de Golgi y ribosomas 80 S. El citoplasma se encuentra limitadopor la
membrana citoplásmica, que es una doble capa de lípidos que contiene proteínas yesteroles y que
controla la permeabilidad celular y participa en la síntesis de la paredcelular. La estructura de las células
de los hongos es muy diferente de la de las bacteriasque son organismos procariotas. Aunque comparten
muchas estructuras, las células delos hongos se diferencian de las de las plantas en la composición de la
pared celular y enque carecen de cloroplastos y clorofila, y de las humanas en que tienen pared celular
yen la presencia de ergosterol en la membrana citoplásmica. Por el exterior de lamembrana
citoplásmica, presentan una pared celular que está compuestafundamentalmente por polisacáridos y
por diversas proteínas. Los polisacáridos másimportantes son la quitina (polímero de n-acetil
glucosamina), el manano (polímero demanosa) y el glucano (polímero de glucosa).Los hongos presentan
básicamente dos tipos de morfologías: una multicelulardenominada filamentosa y otra unicelular
denominada levaduriforme. Los hongosfilamentosos (miceliares o mohos), representan el crecimiento
más típico de los hongos

23. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALmicroscópicos. En medios de cultivo sólidos y también sobre cualquier superficie en laque se
desarrollen, por ejemplo frutas u otros alimentos, producen colonias algodonosaso pulverulentas que
son muy características. Al microscopio óptico, los hongosfilamentosos presentan unas estructuras
tubulares, formadas por múltiples células, quese denominan [Link] hongos obtienen los nutrientes
por absorción y tienen un metabolismoquimioheterótrofo, ya que obtienen la energía y el carbono de
compuestos orgánicossintetizados por otros organismos. Este hecho condiciona su modo de vida, ya que
en lanaturaleza se encuentran asociados a la materia orgánica en descomposición,participando en los
ciclos naturales de reciclado del carbono y otros elementos naturaleso Bial - Arístegui 3 4 Rev Iberoam
Micol 2002 como patógenos oportunistas de losanimales y plantas. Los hongos pueden degradar una
gran cantidad de componentes,para lo que disponen de potentes exoenzimas que en algunos casos
pueden servirlescomo factores de virulencia en el [Link] el laboratorio, los hongos crecen
fácilmente en la mayoría de los medios de cultivo,necesitando una fuente de carbono orgánica e iones
amonio o nitrato como fuentes denitrógeno. Esta facilidad para crecer en cualquier medio de cultivo y la
presencia deconidios en el aire hace que sean contaminantes habituales en el laboratorio. Los
hongosfilamentosos son aerobios y los levaduriformes anaerobios facultativos. Susrequerimientos de
temperatura y de pH son poco exigentes y la mayoría crecen en unrango de pH de 2 a 9 y a temperaturas
entre 10 y 40 °[Link] mayoría de los hongos presentan reproducción sexual y asexual. El estado sexual
sedenomina teleomorfo o meiospórico y el asexual anamorfo o mitospórico. Esrelativamente común que
un mismo hongo tenga dos nombres, el del estado anamorfo yel del estado teleomorfo, ya que suelen
haberse descubierto y nombrado de formaindependiente. En un grupo importante de hongos solamente
se conoce la reproducciónasexual, bien porque no se conocen las condiciones adecuadas para que se
desarrolle laforma sexual o porque ésta se ha perdido a lo largo de la evolución. Aunque lareproducción
asexual puede lograrse por fragmentación de las hifas, ya que cadafragmento puede producir una nueva
colonia, normalmente los hongos se reproducen,tanto sexual como asexualmente, por medio de
esporas. Los hongos producen millonesde esporas, cada una con la capacidad para desarrollar una nueva
colonia. Las esporassexuales se producen tras la fusión de los núcleos de dos hifas sexualmente
compatibleso de dos levaduras y posterior meiosis. La morfología de las esporas sexuales es muyvariada
y tiene gran interés para la identificación fúngica, ya que presentan diferenciascaracterísticas. OBJETIVOS
1. Conocer procesos de preparación en fresco y en cinta adhesiva de distintas especies de hongos 2.
Observar la morfología de los hongos y distinguir las diferentes estructuras que presenta. 3. Diferenciar
los diferentes tipos de hongos según su origen y materia

24. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERAL orgánica que pueden degradar Una semana antes de realizar el laboratorio se deberán cultivar
hongos, los cuales serán observados en el laboratorio. En diferentes frascos de vidrio de plástico o vidrio
de boca ancha, colocar los siguientes materiales: a) un trozo de pan de marca o de panadería, b), un
trozo de tomate, papaya u otros alimentos en descomposición. Dejar la caja a la intemperie un día en un
lugar sombreado y después taparla. Colocar los frascos de preferencia en un lugar fresco por cinco días y
llevarla posteriormente al laboratorio. Materiales Microscopio Agujas de disección Solución salina al 1%
Gotero Pinza de punta roma Lugol Cajas de Petri Azul de metileno Portaobjetos Cubreobjetos Cuchilla-
bisturí Muestras de hongos Cinta transparente Champiñón Procedimiento en el laboratorio -Abrir los
frascos y separa los diferentes productos colocándolos en una caja de Petri. -Empleando el
estereoscópico, observa cada uno de los productos y describe la apariencia que tienen los mohos o
pelusas que se observan sobre ellos, así como las manchas que aprecies sobre los mismos. -En el cuadro
que se presenta en la sección de resultados deberás indicar que olor despiden los diferentes productos:
si es azucarado, picante como vinagre, rancio, fétido, etc. Estas observaciones son subjetivas. Igualmente
deberás indicar el color de los mohos, manchas o pelusas, si se ve como polvo o como gelatina.

25. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERAL -Una vez descritos los productos observados con el estereoscópico, realizar una serie de
preparaciones temporales y observar con el microscopio compuesto la estructura microscópica que
presentan, añadir una gota de colorante y describir la estructura que logra identificar. Elaborar los
esquemas representativos de las observaciones y anéxala a este reporte. En caso de no observar hifas,
conidióforos o esporangióforos señala las características de forma y color que presentan conidiósporas y
esporangiósporas. -Respecto al champiñón, realizar con un bisturí un corte lo más fino posible tanto en
la cabeza del hongo como de su talo o estípite, colocarlo en el porta objeto, añadir una gota de azul de
metileno, describir a través de un esquema las estructuras que observa. -Técnica cinta adhesiva: colocar
sobre un portaobjetos una gota de solución de lactofenol no demasiado grande para evitar que el
cubreobjetos flote y la preparación quede demasiado gruesa. Cortar un trozo de cinta adhesiva
transparente de aproximadamente 2cm. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o
el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia
puede haber una excesiva concentración de esporas. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del
portaobjetos. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro. Una vez concluidas las observaciones
trata de agrupar a los hongos observados de acuerdo a las características comunes. Completar en el
siguiente cuadro y guía. Sustrato o Olor que Apariencia de Estructuras alimento despide las colonias
observadas Cuestionario 1. ¿En qué consisten las diferencias que presentan los hongos encontrados o
desarrollados en los distintos materiales? 2. ¿Qué origen tienen olores que despiden los diferentes
alimentos? Señalar si éstos pueden indicar cuál sustancia o compuesto degradan los hongos 3. Tras
realizar las observaciones con el microscopio compuesto, qué
26. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERAL estructuras se pueden identificar en los organismos observados. 4. Con base en las
características observadas en los diferentes organismos, ¿Cómo se clasifican los organismos observados?
5. Realizar un esquema con las divisiones del reino hongo o fungi. PREPARACIÓN DE UN FROTIS
BACTERIANO PRÁCTICA No 4 INTRODUCCIÓNPara realizar el estudio microbiológico, ya sea humana o
animal, vegetal, industrial o delmedio ambiente, se debe someter a una serie de procesos
estandarizados de laboratorio,que permitan reconocer los microorganismos. Las coloraciones permiten
diferenciarformas, agrupaciones, características tintoriales y estructuras de los
diferentesmicroorganismos en las [Link] colorantes biológicos tienen varias
aplicaciones en microbiología, se usan paraclasificar las bacterias en Gram positivas y Gram negativas,
también para observar lasdiferentes estructuras microbianas como pared, capsula, espora, flagelo,
núcleo ygránulos, tienen utilidad para la observación de levaduras y estructuras, en medios decultivo se
emplean como indicadores o inhibidores [Link] morfología bacteriana se puede observar
claramente por medio de coloración de lascélulas. En las técnicas de coloración, las bacterias están
muertas por el hecho de fijarcon calor la muestra a la lámina y por el mismo proceso de coloració[Link]
aplicar un colorante a la preparación microbiana, las bacterias se tiñen haciéndolasresaltar con claridad,
debido a la composición química tan diferente con respecto almedio que las rodea, además permite
estudiar las características morfológicas y emplearmayores amplificaciones microscó[Link] poner en
contacto una célula bacteriana con un colorante, ocurre un intercambio deiones entre el colorante y los
sitios activos de la superficie o del interior de la célula. Losiones tenidos del colorante reemplazan a los
iones de los componentes celulares, porejemplo, el catión azul de metileno, reemplaza el catión de
sodio, dándoles el [Link]ún la estructura que el colorante tiñe en la bacteria, las coloraciones se
hanclasificado en:

27. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERAL-Coloraciones simples: En las que se emplea un solo colorante para el proceso, porejemplo:
azul de metileno, cristal violeta, fucsina básica y safranina.-Coloraciones compuestas y diferenciales: En
estas se usa más de un colorante, ycon la misma coloración las células se tiñen de manera
[Link]: Tinción de Gram, Ziehl Neelsen.-Coloraciones especiales: permiten la observación de
estructuras especiales de labacteria como esporas, glicocálix, cápsulas, flagelos, etc. Ejemplo: Wayson
(esporo),Leifson (flagelo), rojo congo (coloración ácida) (glicocalix, cápsula), Van Stoltemberg(gránulos
metacromáticos).-Coloración de Gram:La coloración de Gram fue descrita en 1884, por el citólogo
Christian Gram, para teñirbacterias presentes en los tejidos. Actualmente continúa siendo la más
empleada enmicrobiología, esta clasificada como una coloración compuesta y diferencial, debido aque
en el proceso se utilizan dos colorantes: el cristal violeta y la fuscina básica, ydependiendo del colorante
que toma la pared bacteriana y dos grandes categoríasdenominadas: Gram positivas (se tiñen de cristal
violeta) y las Gram negativas (toman elcolor de la fuscina básica).Esta diferenciación es fundamental para
establecer específicamente el tratamiento conantibióticos. La reacción tintorial que presentan las
bacterias al ser coloreadas con Gramdemuestra una composición química y estructural de la paredes,
pues se evidenciatambién el comportamiento bacteriano específico frente a agentes físicos y
quí[Link]ón de las células frente a los componentes de la coloración de Gram. COMPONENTES
GRAM POSITIVAS (más GRAM NEGATIVAS concentración de (menos concentración de peptidoglicano)
peptidoglicano, doble capa lipídica) Cristal violeta (colorante Bacteria de color violeta. Bacterias de color
violeta básico) Lugol (fijador) Se forma complejo CV-I Se forma complejo CV-I. Bacteria de color violeta
Bacterias de color violeta Alcohol acetona Deshidratación de paredes Extracción de lípidos de la
(decolorante) celulares, retracción de pared, mayor porosidad, poros, disminución de la liberación del
complejo permeabilidad. colorante-fijador (CV-I). Presencia del complejo Bacteria incolora CV-I. Bacteria
de color violeta. Fucsina básica Bacteria de color violeta Bacteria de color rosadoLa pared celular es
responsable de lo que le sucede al colorante utilizado en la tinción deGram (1884). Las propiedad de
teñirse o no de violeta oscuro (Gram positivas o Gram

28. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALnegativas) por esta coloración es un criterio de clasificación importante correlacionablecon
otras propiedades bacterianas. Unos pocos organismos son Gram [Link] las Gram positivas
como las Gram negativas captan la misma cantidad de cristalvioleta e yodo. El complejo CV-I sin embargo
es atrapado dentro de la célula Grampositiva por la deshidratación y la reducción del tamaño de los
poros de la paredresultante del proceso de lavado con solvente. En contraste en las Gram negativas la
fina(y probablemente discontinua) capa de peptidoglicano no impide la extracción por elsolvente del
[Link] lo antedicho el hecho que, si después de su tinción se tratan con lisosomabacterias Gram
positivas, se ve que los protoplastos siguen teñidos, pero pierden elcolorante si se los trata con alcohol.
Esto indica que el colorante es fijado a nivel delprotoplasto, y que la pared celular de las bacterias Gram
positivas es la que impide laextracción del colorante. Corroborando esta suposición se observa que
cuando [Link] emerge de su espora su pared celular está inmadura y se comporta como
Gramnegativas. Cuando la pared celular adquiere su estructura final pasa a ser Gram [Link] pared
bacteriana está compuesta por elementos comunes para la mayoría deespecies como son
peptidoglucano, ácido diaminopimélico, y componentes especialesque están presentes solo en algunas
especies como ácido teicoico – teicurónico en Grampositivas, lipopolisacaridos en Gram negativas, ácido
micólico – arabinogalactano enmycobacterias, formas meso – levo de ácido diaminopimélico o carencia
de ellas comosucede en Actinomices, Streptomyces y Nocardias, ausencia de peptidoglucano
enMicoplasma y [Link] componentes son aprovechados por la coloración de Gram que
clasifica lasbacterias en 4 grandes grupos: Cocos Gram positivos, Cocos Gram negativos, BacilosGram
positivos, Bacilos Gram negativos. Sin embargo algunos géneros bacterianos nopueden ser incluidos
dentro de la clasificación por la coloración de Gram porque notoman el colorante por su baja afinidad
(Ricketsias), ausencia de pared (micoplasmas),diferente composición química de la pared (mycobacteias,
Nocardias, Actinomices),carcterísticas especiales o no visibles al microscopio óptico común por su
reducidotamaño (Espiroquetas, Mycobacterias entre otras), formas diferentes a las
clásicas(Haemophilus, fusoespirilos). Como coloraciones alternas para estos microorganismosesta Ziehl
Neelsen, Giemsa, Wright, fluorocromos e incluso microsocopía electrónica.-Coloración de Wayson:
especial para endosporas, está clasificada como una coloraciónespecial, por demostrar la presencia de
una estructura especial, que caracteriza a labacteria. Que se pueda observar dicha estructura es de gran
importancia, paradeterminar el proceso de estudio que se va a seguir, realizar el diagnóstico exacto y
darun tratamiento adecuado al agente [Link] endosporas son cuerpos ovales de pared gruesa,
que se forman dentro de la célulavegetativa, donde se recoge el material celular y la célula se deshidrata
(se sintetizadipicolinato de calcio y el endosporo se recubre de una serie de capas protectoras comoel
oxosporium), dentro de la cual se encuentra la cubierta de la espora, que estácompuesta de una capa
parecida a la de la pared celular, por debajo de la cubierta de la

29. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALespora se encuentra la corteza, y dentro de ella, el núcleo o corazón, que contiene a lapared
celular usual. Así, la espora difiere de la estructura de la célula [Link] endosporas dan a la
bacteria alta resistencia a factores físicos y químicosdesfavorables, son características del género Bacillus
y Clostridium.-Coloración de rojo congo y tinta china (cápsula y glicocálix), los glicocálix son
sustanciasdensas o pegajosas, constituidas por glucanos solubles e insolubles que secretan lamayoría de
procariotas, sobre su pared: algunos forman una capa de poco espesollamada microcápsula, otros
forman capas de mayor diámetro que constituyen unaverdadera cá[Link] glicocálix cumple la función
de fijar los microorganismos patógenos a sus huéspedes,los cuales son difíciles de reconocer y destruir
por [Link] sustancia tiene especial importancia en la patogenicidad bacteriana y les daespecial
resistencia a la desecació[Link] coloraciones utilizadas para la observación de estas estructuras son
denominadasnegativas (rojo congo, nigrosina y tinta china). También se pueden utilizar
colorantesbásicos, como en la coloración de Hiss, en la que la cápsula se colorea de azul pálido,
labacteria de color púrpura y el fondo de color [Link] coloraciones, por tener el ión colorante
cargado negativamente, son rechazadaspor la cápsula y el glicocálix, por eso la estructura queda
incolora, pero si se colorea elmedio que a envuelve, el resultado es un fondo coloreado sobre el cual se
observanpequeños agujeros incoloros que corresponden a la cápsula cuando es de escasodiámetro y al
glicocálix cuando el diámetro es más amplio. Si en el proceso de coloraciónse incluye un colorante
básico, este tiñe la pared de la bacteria, que se observacoloreada dentro de la cápsula o del glicocá[Link]
se desea incrementar el contraste de las células para la microscopía son suficientesprocedimientos
simples de tinción. El azul de metileno es un buen colorante simple queactúa sobre todas las células
bacterianas rápidamente y que no produce un color tanintenso que oscurezca los detalles celulares. Es
especialmente útil para detectar lapresencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor
parte del material nocelular no se tiñ[Link] DEL FROTIS: Si el frotis se va a realizar a partir de
una muestra sólida,se debe poner sobre una lámina limpia y desengrasada una pequeña gota de agua
con elasa recta esterilizada, y con la punta del asa recta se toma ya sea una colonia bacterianaempleadas
en este laboratorio, se emulsiona con la gota de agua y luego se extiendesobre la lámina en un área no
mayor de 0.5 cm de diámetro, de manera que sobre unamisma lámina se pueden realizar hasta 3 frotis
diferentes. El frotis se deja secar atemperatura ambiente y nunca con calor, debido a que se facilita la
formación deabundantes aerosoles, precipitados de colorantes y alteraciones de la forma de
losmicroorganismos. Si la muestra es líquida se emplea el asa con argolla y no se requiereemulsionar la
muestra con agua, sino que directamente se extiende en un área de 0.5

30. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALcm, se deja secar a temperatura [Link]: en el proceso de fijación del frotis consiste
en pasar la lámina por el ladocontrario de donde se hizo el frotis sobre la llama del mechero tres veces
consecutivas,evitando que se caliente la lámina para que no se dañen las estructuras celulares, estose
hace debido a que tiene como fundamento matar y fijar a la lámina losmicroorganismos presentes en el
[Link] USO DE BATA DE MANGA LARGA-Por grupos llevar una toalla y jabón en
polvo para lavar el material Microscopio Frasco lavador Portaobjetos Mechero de alcohol Cubreobjetos
Papel de filtro Asa de siembra Cristal violeta Cubeta de tinción Lugol Pinzas Alcohol-acetona Yogur
Safranina Vinagre PalillosBacterias del Yogur.1. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un
portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de
siembra.2. Tomar una muestra (gota) de yogur y expandirla en el porta, mezclarla bien col el agua.3.
Dejar secar y fijar con metanol.4. Teñir 2 o 3 minutos, lavar el exceso de colorante y dejar secar.5. Esperar
hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En
este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden
deformarse o romperse.6. Observar en microscopio con los objetivos de 10x, 40x y 100 x. Para el
objetivo de 100x aplicar aceite de inmersión, colocar cubre objetos y observar.

31. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALBacterias del Vinagre7. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos
limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra.8. Tomar
una muestra (gota) de vinagre y expandirla en el porta.9. Dejar secar y fijar al calor10. Teñir 2 o 3
minutos, lavar el exceso de colorante y dejar secar.11. Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar
su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución
de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.12. Observar en
microscopio con los objetivos de 10x, 40x y 100 x. Para el objetivo de 100x aplicar aceite de inmersión,
colocar cubre objetos y [Link] del Sarro Dental13. Colocar una pequeña gota de agua en el
centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el
asa de siembra.14. Tomar con una aguja enmanglada una porción del sarro dental y expandirla en el
porta.15. Dejar secar y fijar al calor16. Teñir 2 o 3 minutos, lavar el exceso de colorante y dejar secar.17.
Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del
mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las
células pueden deformarse o romperse.18. Observar en microscopio con los objetivos de 10x, 40x y 100
x. Para el objetivo de 100x aplicar aceite de inmersión, colocar cubre objetos y [Link]ÓN DE LAS
BACTERIAS AL PORTAOBJETOS Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos
segundos. Dejar enfriar el porta entre los pases. Con metanol (para bacterias procedentes de medio
líquido). Añadir unas gotas de metanol sobre la extensión completamente seca. Golpear el portaobjetos
por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol.
Esperar a que el metanol se evapore completamente.

32. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALUna vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden serobservadas al
microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con elproceso de tinció[Link] 1.
Preparar los frotis bacterianos. 2. Teñir con cristal violeta 1min. 3. Lavar con abundante agua el exceso de
colorante. 4. Cubrir con Lugol 1min. 5. Lavar con agua el exceso de Lugol. 6. Decolorar con alcohol-
acetona o simplemente con alcohol hasta que la preparación deje de perder color (30seg) 7. Lavar con
abundante agua para eliminar el resto de disolvente. 8. Teñir con safranina 1min. 9. Lavar con agua para
eliminar el colorante de contraste. 10. Secar la preparación. 11. Examinar al microscopio fijándose sobre
todo en el color de cada preparació[Link] tiempos de exposición a los colorantes son orientativos. Cada
vez que se prepara labatería de colorantes para realizar la tinción Gram presentan algunas
diferenciasrespecto a los preparados en otro momento, por lo que puede ser necesario ajustar
[Link] LABORATORIO Describa las características más importantes de las bacterias, realizar
esquemas de las formas que presentan y los tipos de agrupaciones que presentan. Realizar una revisión
de las aplicaciones de células bacterianas más importantes a nivel ambiental e industrial. Busque en
esquemas (dibujos) las formas y agrupaciones bacterianas y dibujelas De 3 razones por las que a una
muestra se le debe realizar la coloración de Gram De acuerdo a la localización y tamaño de las esporas
como se clasifican. Mencione 5 bacterias Gram positivas y 5 Gram negativas. PREPARACION Y
ESTERILIZACION DE MEDIOS DE CULTIVO. PRÁCTICA No 5INTRODUCCIONLos medios de cultivo son un
sistema artificial que permite las condiciones óptimas ynecesarias (de cantidad de nutrientes,
temperatura) para el desarrollo de determinados

33. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALmicroorganismos. De acuerdo con esto encontramos diferentes requerimientosnutricionales,
distintos tipos de medios en cuanto a consistencia: líquidos, sólidos)alrededor de 1.6% de agar),
semisólidos (0.8% de agar), que como se observa, laconsistencia depende de cantidad de agar o de su
ausencia, el agar es componenteesencial que proviene de las algas rojas, además que es resistente a la
acción dedegradación que realizan las bacterias. El conocimiento de la nutrición microbianapermite el
cultivo de los microorganismos en el laboratorio. Todos los microorganismostienen parecidos
requerimientos de macro y micronutrientes, aunque ha quedado caroque la forma en que cada
nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacteriasy otras, así como la cantidad relativa de
cada [Link] DE MEDIOS DE CULTIVO:Un medio de cultivo es una solución acuosa (bien como
tal, o bien incorporada a uncoloide en estado de gel) en la que están presentes todas las sustancias
necesarias parael crecimiento de un(os) determinados microorganismos. Los medios de cultivo
sepueden clasificar en primera instancia en tres grandes tipos:1. Medios complejos o indefinidos: su
composición química exacta se desconoce, yaque son el producto de realizar infusiones y extractos de
materiales naturales complejos:Ejemplos: Digeridos crudos de extracto de carne, extracto de levadura,
peptona de carne,extracto de levadura y caseína (de la leche).Con ellos se logra un tipo de medio rico
nutricionalmente, aunque indefinidoquímicamente. Si lo que pretendemos simplemente es obtener un
buen crecimientobacteriano, este tipo de medios es ideal, ya que su confección es fácil y rápida
(bastapesar cierta cantidad del extracto desecado, suministrado por casas comerciales,disolverlo en agua
y esterilizar en autoclave, antes de inocular e incubar la bacteria con laque queramos trabajar). Estos
medios contienen fuentes variadas de C y N orgánicos,sales minerales y micronutrientes. Sin embargo
con ellos no podemos tener un controlnutricional preciso, ya que desconocemos la composición química
y proporción exacta delos distintos nutrientes.2. Medios sintéticos o definidos: se obtienen disolviendo
en agua destiladacantidades concretas de distintas sustancias químicas puras, orgánicas y/o orgánicas.
Lacomposición concreta de un medio sintético dependerá de la bacteria que queramoscultivar:
lógicamente un medio definido para una bacteria con grandes capacidadesbiosintéticas será más sencillo
que el medio definido de otra bacteria con menoresposibilidades biosintéticas.3. En tercer lugar,
podemos fabricar un tipo de medio “mezcla” de los anteriores,denominado medio semisintético: llevan
algunas sustancias químicas cuya naturaleza ycantidad conocemos, junto con sustancias de naturaleza y
composición [Link] que sea el tipo de medio, de los 3 que acabamos de citar, podemos
elaborardos tipos de versiones, según su estado aparente:-Medios líquidos.

34. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERAL-Medios sólidos: derivan de los líquidos simplemente añadiendo a la solución nutritivaun
coloide en estado gel, que solidifica (da consistencia) a esta solució[Link] los primeros tiempos de la
microbiología solo se conocía como sustancia gelificante,la gelatina. Sin embargo, presenta muchos
inconvenientes, ya que funde a 25C (porencima de esta temperatura el medio se licúa), y además,
muchas bacterias presentangelatinasas que hidrolizan la [Link] gelificante más usado es el agar-agar,
extraído de algas rojas ([Link]. Gelidium), del cualexisten versiones más o menos purificadas (las más puras
están más enriquecidas en elpolisacárido agarosa, son las que se emplean para los medios definidos, con
el objeto deevitar la introducción de sustancias contaminantes, inadvertidas que falseen
lasinterpretaciones sobre el comportamiento nutricional de la bacteria).El agar presenta la ventaja de
que una vez gelificado, no funde hasta cerca de los 100C,lo que permite su uso para la inmensa mayoría
de las bacterias, que son mesó[Link] cultivar ciertas bacterias (sobre todo los quimioautótrofos) se
suele recurrir a ungelificante inorgánico, el silicagel o gel de sí[Link] selectivos son aquellos que
permiten seleccionar un tipo (unos pocos tipos) demicroorganismos. En el laboratorio se emplean
mucho medios selectivos sólidos queincorporan ciertas sustancias que inhiben el crecimiento de ciertas
bacterias, peropermite el crecimiento de otras (p. ej. Medios que llevan violeta cristal inhiben
elcrecimiento de bacterias gran positivas).Medios diferenciales son aquellos que permite distinguir a
simple vista dos o más tiposde bacterias en función de su distinto comportamiento respecto de algún
nutriente delmedio. Este comportamiento diferencial se traduce normalmente en viraje de color deuna
sustancia indicadora presente en el [Link]:En el medio EMB (eosina azul de metileno) ciertos
tipos de metabólicos de bacteriasproducen ácidos por fermentación de ciertas fuentes de [Link]
medio agar-sangre lleva un 5% de sangre de caballo o carnero, lo cual revela lacapacidad (y el tipo) de
hemólisis de ciertas [Link] DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVOSAntes de utilizar un
medio de cultivo se debe realizar el control de calidad paracomprobar si las características del medio
están dentro de las especificaciones dadas porla casa comercial y si la metodología de preparación es
satisfactoria. Cada lote de mediopreparado debe someterse a un programa mínimo de ensayo que
asegure su aceptacióny demuestre su actividad bacteriana tí[Link] de pH: compruebe el pH del
medio, cuando este, tenga la temperatura ambiente, el

35. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALcual debe coincidir con el señalado en la [Link]: Tome al azar una muestra del 3 al
5% del lote preparado e incúbelo a 37Cdurante 2 a 5 días, para observar si hay crecimiento microbiano.
Si hay presencia esindicativa de mala esterilización y debe repetirse toda la preparació[Link] esterilización
es el proceso mediante el cual se destruyen los microorganismos seacual sean sus características (células
viables, esporas etc.) patógenos o no, sobre elmaterial o dentro de é[Link]: Que en el medio
preparado efectivamente hay un desarrollo demicroorganismos, se pone el medio de cultivo al ambiente
o sirviendo una [Link]: con cierta periodicidad compruebe los datos mencionados en el
mediopreparado y conservado, para determinar si las condiciones de conservación
sonsatisfactoriasMATERIALESAutoclaveBalanzaEspátulaErlenmeyerCajas de petriGradillasAgua
destiladaPapel kraftProbetasErlenmeyerTaponesMedios de cultivo (agar y caldo)METODOLOGIAEn la
práctica, se realizará la preparación de medios de cultivo tales como: agar nutritivoy caldo
[Link] los cálculos correspondientes para la preparación de los medios, teniendo encuenta el
recipiente en el que se va a ensayar el medio, ya que los tubos de ensayo13X100 tapón algodón se
ponen 3 ml y en las cajas de petri se envasan 20 [Link] en un erlenmeyer el medio (gramos) y
agregue la cantidad de agua calculada(ml). Agite el medio y póngalo a calentar con un tapón algodón
ligeramente puesto, dejehervir. En el caso de los caldos no se [Link] esterilice en
autoclave (calor húmedo). Es importante saber que haycondiciones que garantizan una verdadera
esterilización: tiempo: 15-30 minutos, presiónde vapor 15 libras/pulgadas cuadradas o 1.2 atmósfera y
temperatura de [Link] enfriar a temperatura cachete y sirva en cajas de petri, en el caso de los tubos
sirva5 o 6 mililitros con la pipeta.

36. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALPara conservar los medios de cultivo, se colocarán en el refrigerador para evitar que sedañen y
se contaminen. Se recomienda guardar los medios dentro de bolsas de plá[Link] la
prueba de esterilidad para 2 cajas, una como control sin esterilizar y unaprueba de efectividad
exponiendo la caja al [Link] PRELABORATORIO Qué efecto tiene el calor sobre los
microorganismos?. Qué efecto tiene el método de calor seco en la célula (microorganismos)?. Qué
efecto tiene la luz ultravioleta sobre la célula (microorganismos)?. Defina desinfectante, antiséptico,
[Link] COMPLEMENTARIAS Haga un esquema del autoclave con sus partes y su función
Esquematice etapas de esterilización en autoclave (en clase). Mencione los dos tipos principales de
esterilización y explique cada uno de ellos. PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA CELULAR. FENÓMENOS
DE DIFUSIÓN, OSMOSIS Y PRESION OSMÓTICA LABORATORIO No. 6Toda célula posee un sistema
complejo de membranas, cuya función general es elintercambio de materiales entre la célula y el medio
acuoso externo o fluido extracelular yentre los organelos y el citoplasma de las células. Las membranas
sirven igualmentepara compartimentar enzimas y metabolitos celulares. Estas poseen la
propiedadfuncional de PERMEABILIDAD SELECTIVA, por ser permeables a las moléculas deagua, pero
más o menos impermeables a los solutos. Sin embargo, esta permeabilidadpuede verse afectada por
cambios de temperatura, tóxicos, solventes orgánicas y lacomposición química del medio que rodea la
cé[Link]: Observar el efecto de la concentración del medio sobre las células ycomprobar el
proceso de ósmosis en un osmó[Link] PARTEMATERIALES:Azul de metilenoSolución rojo
neutroSolución salina (NaCl) al 2%, 0.6%

37. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERALAgua destiladaHieloTermómetroTubos de ensayoGradillasPipetasVasos de precipitadoPinzas,
porta y [Link]:DIFUSIÓN ESPONTÁNEA:Ponga 2 ml de agua destilada en 5 tubos
de ensayo marcados respectivamente del 1 al5. Tome la temperatura. Agregue azúl de metileno a cada
uno de los tubos así: Tubo 1:Una gota, Tubo 2: Dos gotas, Tubo 3: Tres gotas, Tubo 4: Cuatro gotas, Tubo
5: Cincogotas. Mida el tiempo de difusión en cada uno de los tubos, para ello registre el tiempo enel que
colocó las gotas de azúl de metileno y el momento en que la distribución de éstees uniforme. Registre el
tiempo de difusión en una gráfica (papel milimetrado) y diga quéefecto tiene la concentración sobre la
velocidad de difusió[Link] cuatro tubos de ensayo marcados del 1 al 4. En el tubo 1 adicione 2 ml de
agua a0°C, al tubo 2 adicione 2 ml de agua a temperatura ambiente, al tubo 3 adicione 2 ml deagua a
45°C y en cuarto tubo 2 ml de agua a 75°C. Inmediatamente después deadicionar el agua en los tubos
coloque dos gotas de azul de metileno en cada uno deellos y mida el tiempo de difusión. Registre
gráficamente los resultados y diga el efectoque tiene la temperatura sobre la velocidad de difusión
(realice una tabla y una gráfica).OSMOSIS A TRAVES DE LA MEMBRANA CELULARUtilizando los eritrocitos
como osmómetros, marque 3 tubos del 1 al 3 tresrespectivamente y deposite en cada uno de ellos 2 ml
de solución así: tubo 1: soluciónsalina al 2%, tubo 2: agua destilada, tubo 3: solución salina al 0.6%.
Luego adicione 1gota de sangre en los tres tubos de ensayo. Transcurridos 2 minutos transfiera con
unapipeta limpia a un portaobjetos previamente marcado (1 a 3) una gota de cada tubo ycúbrala con
una laminilla. Observe la muestra al microscopio y describa la forma quepresentan los eritrocitos o
glóbulos rojos. Con el ocular micrométrico indique el tamañode los eritrocitos en cada caso y compare.
El tamaño promedio de un eritrocito humanoes de 7.5 um. Haga sus [Link]: Qué
procesos se desarrollaron durante la práctica, hubo hemólisis o normalidad en cada caso? La solución
era isotónica, hipotónica o hipertónica en cada caso. Qué le sucedería a una persona si se le inyectara
agua destilada en el torrente

38. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA
GENERAL sanguí[Link] PARTEDETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN OSMÓTICA CELULAR Y
CÁLCULO DELA PRESIÓN OSMÓTICA MEDIANTE EL MÉTODO PLASMOLÍ[Link] al lado izquierdo de
una lámina dos gota de solución de sacarosa al 0.1M ysobre ésta una hoja de elodea. Luego cubra el
montaje con una laminilla. Al lado derechode la misma lámina coloque en una gota de agua de acuario
otra hoja de tamañosemejante. No permita que se seque el líquido en los montajes. Observe al
microscopio20 células de la hoja y determine si se presenta plasmólisis en algunas de ellas. Paraefectos
prácticos se considera que una solución de determinada concentración produceplasmólisis cuando el
50% están plasmolizadas. Compare su observación con el montajede control. Repita el procedimiento
con las soluciones restantes de sacarosa (0.2, 0.3,0.4 y 0.5M) y registre sus resultados en una gráfica.
Indique la (s) concentración (es)hipo-osmótica, iso-osmótica e hiper-osmótica. Determine la
concentración osmótica de lacélula y calcule la Presión Osmótica (PO).Preguntas:  Qué factores
determinan el paso de sustancias a través de las membranas celulares.  Explique por qué las heladas
afectan a los cultivos.  Indique algunos procesos biológicos en plantas y animales relacionados con la
ósmosis.  Qué es transporte activo. De un ejemplo de este proceso.  Qué es diálisis y de un ejemplo. 
En que consiste la electrodiálisis.  Dé un ejemplo de una aplicación práctica de la diálisis en el campo de
la salud.

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