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Producción de Insulina Recombinante

El documento describe el proceso de producción de insulina humana mediante ingeniería genética. El mRNA de la insulina se aísla de células pancreáticas y se convierte en cDNA, el cual se inserta en un plásmido. Este plásmido recombinante se transforma en bacterias E. coli, las cuales producen insulina humana. Alternativamente, los genes de las cadenas A y B de la insulina se insertan por separado en el plásmido y luego se unen in vitro para reconstituir la insulina.

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Alicia Navarro Leyva
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Producción de Insulina Recombinante

El documento describe el proceso de producción de insulina humana mediante ingeniería genética. El mRNA de la insulina se aísla de células pancreáticas y se convierte en cDNA, el cual se inserta en un plásmido. Este plásmido recombinante se transforma en bacterias E. coli, las cuales producen insulina humana. Alternativamente, los genes de las cadenas A y B de la insulina se insertan por separado en el plásmido y luego se unen in vitro para reconstituir la insulina.

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Producción de insulina humana por ingeniería genética

La insulina es una hormona peptídica producida por el páncreas y es un regulador


central del metabolismo de los carbohidratos y las grasas en el cuerpo.
Es una proteína pequeña y simple compuesta por secuencias de 51 aminoácidos y
tiene un peso molecular de 5808 Da. Es un dímero de una cadena A y una cadena
B.
Consta de dos cadenas polipeptídicas,
o Cadena A-21 aminoácidos de largo
o Cadena B-30 aminoácidos de largo
o Ambas cadenas están unidas por enlace disulfuro entre dos residuos de cisteína
PROCESO
El mRNA de la insulina humana se aísla de las células pancreáticas.
Posteriormente este mRNA se convierte a cDNA con ayuda de una transcriptasa
inversa. Luego el mRNA es degradado por ribonucleasas quedando únicamente el
cDNA.
Seguido a esto la polimerasa cataliza la formación de cDNA de doble hebra.
A este cDNA complementario se le agregan adaptadores para crear sitios de
restricción en los extremos del DNA
Después el plásmido y el cDNA son cortados con la misma enzima se restricción,
produciendo extremos pegajosos o cohesivos. En este ejemplo se usa EcoR1
como enzima de restricción.
El paso siguiente es la inserción del cDNA en el plásmido, y con ayuda de una
ADN ligasa se unirá el plásmido ahora recombinante.
Posteriormente se realiza la transformación y amplificación del plásmido
recombinante. Para ello se transfiere el plásmido a la célula huésped bacteriana
(E. coli), para que comience a producir la insulina.
El último paso es la detección del plásmido recombinante a partir de las colonias
formadas (azules o blancas). Las colonias blancas serán las que tienen el DNA
recombinante. Entonces estas colonias se cultivan y finalmente se extraerá
insulina humana.
PARA EXTRA DEL VIDEO
En este método se produce la insulina completa, sin embargo, también se
producen las dos cadenas por separado y posteriormente se unen.
Para ello, los genes que codifican para la cadena A y B se insertan cada uno por
separado al lado del gen de la β-galactosidasa del plásmido.
A continuación, el plásmido recombinante se transforma por separado en un
huésped E. coli.
El huésped recombinante producirá cadenas de proinsulina, es decir, fusionaron la
cadena β-galactosidasa-A y la β-galactosidasa-cadena B por separado.
Estas cadenas de proinsulina A y B se separan de la β-galactosidasa mediante
tratamiento con bromuro de cianógeno. El desprendimiento de las cadenas de
proinsulina de la β-galactosidasa es posible porque se añade un codón extra en
forma de metionina en el extremo N-terminal de cada gen para las cadenas A y B.
Después del desprendimiento, las cadenas A y B se unen in vitro para reconstituir
la insulina sin tratamiento previo sulfonando las cadenas peptídicas con
disulfonato de sodio y sulfito de sodio.

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