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PRACTICA N° 7
ENZIMAS
1. OBJETIVO:
¾ Demostrar el efecto que tiene la variación de pH sobre la actividad enzimática y
determinar el pH óptimo.
¾ Demostrar el efecto de la temperatura sobre la velocidad de la reacción
enzimática y determinar la temperatura óptima.
¾ Demostrar el efecto en la duración del tiempo de incubación sobre la actividad
enzimática.
2. MATERIALES Y REACTIVOS:
MATERIALES
9 3 tubos de ensayo vacío
9 3 Tubos de ensayo, cada uno con 2 mil de gelatina solidificada.
9 Vaso de 100 ml
9 Probeta de 10 ml
9 Gradilla
9 2 agitadores
9 Termómetro
9 Hornilla
9 Lápiz de marcar vidrio
9 Toalla de papel
REACTIVOS:
9 6ml de solución de almidón
9 Solución de yodo lugol
9 Ablandador de carne
9 Saliva
9 10 ml de agua destilada
9 Baño de agua de 37° C
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3. INTRODUCCIÓN:
Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que actuan como catalizadores en
todas las reacciones del metabolismo. Para que ocurran estas reacciones es
generalmente necesaria la presencia de un catalizador (substancia que facilita la
reacción y de este modo aumenta la velocidad a la que esta se desarrolla), catalizador
que, además, ha de ser específico para determinada reacción (pues de lo contrario
podrían ocurrir reacciones no deseables).
Las enzimas, por tanto, además de ser catalizadores, han de ser capaces de
reconocer sobre qué substancia o substancias han de actuar (substrato o substratos de
la enzima) y también han de ser capaces de provocar una transformación
Todas estas condiciones las enzimas las pueden cumplir por ser moléculas de
proteína con estructura terciaria globular. Eso hace que tengan en su superficie
entrantes con una forma y una distribución de cargas determinadas. En alguno de
estos entrantes (el llamado centro activo) solo encaja una molécula: el substrato.
Mientras esté encajado el subtrato en el centro activo (formando el llamado
complejo enzima-substrato) tiene lugar la transformación del substrato dando lugar a
los productos de reacción Estos se separan de la enzima, quedando el centro
activo de esta fibra y la enzima lista para volverse a unir a otra molécula de
substrato, es decir, lista para volver a actuar.
Al tratarse de proteínas con estructura terciaria globular están muy influidos por
las condiciones del medio en el que tiene lugar la reacción
Así el pH, por ejemplo, puede alterar la forma de la molécula de enzima,
dificultando, o incluso impidiendo, su unión con el substrato sobre el que actua.
Cuanto afecta a la enzima es típico de cada una de ellas.
En general, hay un valor de pH en el cual la actividad es máxima (pH optimo). Para
valores muy alejados de este optimo la enzima no funciona. Incluso puede ocurrir
que la molécula de enzima se altere tanto que ya no pueda volver a la forma en la que
es activa (desnaturalizacion de la enzima).
En el caso de la temperatura la situación es algo diferente. La velocidad de todas las
reacciones químicas aumenta al aumentar la temperatura y cuando esta es muy baja
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no hay reacción apreciable. Por ello, en las reacciones catalizadas por enzimas un
aumento de temperatura también supondrá un aumento de velocidad. Pero un
aumento de temperatura provoca una alteración de la estructura de la enzima (un
cambio en la molécula de proteína que es la enzima), y cuando se alcanza un cierto
valor la enzima empieza a dejar de funcionar; incluso puede desnaturalizarse, es
decir, alterarse de modo irreversible y no volver a funcionar ya.
¾ En esta práctica de laboratorio observaremos la forma en la cual las enzimas
actúan sobre diferentes sustancias, que al igual en el exterior, sucede dentro
de nuestro organismo. Tal es el caso de cuando comemos carne o gelatina. Se
utilizó la saliva, en donde la enzima presente es la amilasa (que actúa sobre el
almidón) y la papaína (enzima extraída de la fruta papaya que se encarga de
romper los enlaces peptídicos en proteínas animales) que se utilizó en la
gelatina. Se podrá observar la forma en la cual las enzimas necesitan algunos
factores específicos (temperatura, pH etc.) para poder realizar su reacción de
catálisis y así poder completar su función.
¾ Los enzima, como ya se menciono anteriormente, son catalizadores
biológicos, por la cual son importantes para todo ser vivo.
Sin las enzimas la vida humana sería imposible ya que el organismo no
podría llevar a cabo funciones básicas para la misma. Todos los procesos
fisiológicos se desarrollan de un modo ordenado, de manera que la
homeostasis se mantiene intacta. En cambio, cuando algo no va bien, la
homeostasis puede verse seriamente perjudicada
4. PROCEDIMIENTO:
Ensayo 1:
1. Preparar una tabla para anotar datos:
a. tubos de ensayo del 1 al 6,
b. el sustrato –gelatina o almidón,
c. la sustancia que se añade,
d. los cambios.
x Anota tus observaciones en el lugar correspondiente, a medida que
realices los pasos de la actividad.
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2. En el vaso, recoge saliva de varios estudiantes hasta completar 5 ml. Añade 5 ml
de agua destilada a la saliva.
3. En 3 tubos de ensayo colocar en cada uno 2 ml de gelatina solidificada, y rotular.
Anadir 2 ml de solución de saliva al tubo 2. Al tubo 3, añadir suficiente
ablandador para cubrir la superficie de la gelatina.
4. Tres minutos después de añadir la solución de saliva y el ablandador a los tubos
con gelatina, pica suavemente la superficie con un agitador. Limpia el agitador
con una toalla de papel cada vez que piques el tubo. Repetir la actividad a
intervalos de 1 minuto hasta que veas un cambio en la superficie de la gelatina
en cualquier tubo.
5. Anotar en la tabla cualquier cambio que observes en la gelatina.
6. Limpiar los 3 tubos y con un marcado rotular de 4 a 6. Usar la probeta para poner
2 ml de almidón en solución en cada tubo.
7. Agregar en el 4 2 gotas de yodo, en el 5 2 ml de saliva y en el 6 ablandador de
carne, usar una toalla de papel para limpiar el agitador una vez que se haya
mezclado el almidón en cada tubo. Calentar los tubos en baño de agua a 37C.
Esperar 10 minutos y añadir 2 gotas de yodo al tubo 5 y 6.
*Anota tus observaciones en el lugar correspondiente, a medida que realices
los pasos de la actividad.
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5. CUESTIONARIO:
1. ¿Qué es una Enzima?
2. ¿Que es un inhibidor enzimático?
.
3. ¿Explique brevemente el mecanismo de acción de las Enzimas?
4. ¿Cuál es la estructura de las enzimas?
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6. OBSERVACIONES:
Ensayo 1:
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7. RESULTADO:
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8. CONCLUSIONES:
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9. BIBLIOTECA:
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10. EVALUACION:
1. Identifica los sustratos usados en esta actividad.
2. El color observado en el tubo 4. Indica la presencia de…………
3. ¿En la práctica realizada Cuál de los tubos no muestra presencia de almidón?
4. De acuerdo con tus observaciones en esta actividad, ¿Cuál es la fuente de la
enzima que reacciona con el almidón? ¿Con la proteína?
5. ¿Cómo muestra esta actividad los efectos de las enzimas sobre los sustratos?
