Universidad Autónoma de Chiapas
Facultad de Ciencias Químicas
Campus IV-Tapachula
Lic. En Químico Farmacobiólogo
Materia: Inmunología II
Tema:
“Prueba VDRL”
Alumnos:
Becerra González José Daniel
Castellanos Abarca Paola Gissel
López García Fernanda Monserrat
7° Semestre Grupo A
Docente:
Dr. Crispín Herrera Portugal
Tapachula de Córdoba, Chiapas, A 09 de febrero del 2021
FUNDAMENTO.
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una
técnica serológica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar
el diagnóstico de sífilis y analizar la respuesta al tratamiento específico. Su costo y
complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisión sexual
en grandes masas de población.
El VDRL es una técnica de floculación que utiliza el antígeno de cardiolipina para
detectar anticuerpos antitreponémicos inespecíficos producidos por el individuo
ante una infección sifilítica. Se practica normalmente en lámina de cristal, en la que
se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el
complemento), con una suspensión fresca de antígeno de cardiolipina; esta mezcla
se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la
floculación utilizando un microscopio de bajo aumento; sus resultados pueden
expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente.
Las "reaginas", presentes en individuos infectados por T. pallidum se detectan en
suero por la reacción con un antígeno cardiolipínico purificado y estabilizado. Si la
muestra contiene reagina, ésta se unirá al antígeno produciendo una floculación
visible en microscopio. Las reacciones inespecíficas se evitan con el empleo de
antígeno altamente purificado y el agregado de cloruro de colina característica de la
técnica USR (Unheated Serum Reagin) en la que no es necesario inactivar la
muestra.
PROCEDIMIENTO
Técnica VDRL en muestras de suero
1. Preparación de muestras de suero
1.1 Verificar que las muestras tengan un volumen adecuado, estén libres de
hemólisis, lipemia y/o contaminación, condiciones que constituyen causal
de rechazo.
1.2 Si la muestra es sangre total, se centrifuga a 2.500 rpm por 5 minutos para
separar el suero.
1.3 Rotular el tubo primario y secundario con el número asignado por el
laboratorio.
1.4 Del tubo primario se traspasa el suero a otro tubo secundario, ambos
previamente rotulados con el mismo número entregado por el laboratorio.
1.5 Inactivar los sueros tapados a 56ºC durante 30 minutos en el baño
termorregulado.
1.6 Dejar enfriar a temperatura ambiente durante 10 minutos hasta su
procesamiento y no más allá de 4 horas. Si excede dicho tiempo deberá
inactivar nuevamente por 10 minutos adicionales.
2. Preparación del antígeno para VDRL en suero
2.1 Temperar el laboratorio entre 23° y 29° C.
2.2 Agregar con pipeta de vidrio a un frasco con tapa esmerilada y fondo plano,
0.4 mL de solución salina amortiguada incluida en el kit.
2.3 Agregar 0.5 mL de solución de antígeno gota a gota, por 6 segundos a la
solución salina, haciendo rotar el frasco suave y continuamente durante 10
segundos.
2.4 Añadir 4.1 mL de solución salina amortiguada con pipeta de 5 mL dejándola
escurrir suavemente.
2.5 Tapar el frasco y agitar por inversión vigorosa aproximadamente 30 veces
en 10 segundos.
Técnica cualitativa de VDRL en suero
1. En el extremo superior izquierdo de cada lámina se anota el número de la
primera muestra e inferior izquierdo el número de la última.
2. Calibrar la aguja despuntada calibre 18G con una jeringa de vidrio de 2 mL
aspirando 1 mL de suspensión la cual debe rendir 60 +/-2 gotas, es decir entre
58 y 62. Una gota de aguja calibre 18G corresponde a 17 µL.
3. Ubicar las láminas de vidrio en el soporte de madera según el número de
muestras a procesar. Agitar los tubos en vortex y con micropipeta dispensar 50
µL de cada una de las muestras preparadas en el punto anterior dentro de cada
pocillo y extender el contenido por toda la superficie.
4. Homogenizar la suspensión de antígeno con suaves movimientos circulares.
Aspirar un volumen suficiente y en forma vertical, agregar una gota a cada
pocillo.
5. Agitar las láminas durante 4 minutos a 180 rpm Imagen 1. Diluciones
en rotador orbital.
Técnica cuantitativa de VDRL en suero
1. Separar las muestras R a cuantificar.
2. Dispensar las muestras según figura N° 1.
3. Depositar con micropipeta 50 µL de muestra de
suero en el pocillo número 1 (dilución 1:1) y 50
µL de suero fisiológico 0.9 % en los pocillos 5 y 9, según figura Nº1.
4. En el pocillo número 5 agregue 50 µL de muestra de suero (dilución 1:2),
mezclar por aspiración ocho veces con la pipeta automática y transferir 50 µL
de esta mezcla al pocillo número 9 (dilución 1:4) mezclar ocho veces igual
forma como se explicó anteriormente, descartar los últimos 50 µL.
5. Proceder de la misma manera con el resto de las muestras paciente.
6. Homogenizar suavemente la suspensión del antígeno y añadir 1 gota a cada
pocillo, con aguja calibre 18G.
7. Agitar la lámina por 4 minutos en rotador a 180 rpm.
8. Leer las reacciones al microscopio e interpretar los resultados.
9. Si la reactividad continúa, seguir diluyendo la muestra de la siguiente manera:
hacer una dilución 1:8 en tubo, colocando 700 µL de suero fisiológico y 100 µL
de muestra y mezclar en vórtex.
10. Transferir 50 µl de suero fisiológico al pocillo 5 y 6. Agregar 50 µL de la dilución
1:8 al pocillo 4. Tomar otros 50 µL de esta dilución y mezclar 8 veces con los
50 µL de suero fisiológico del pocillo 5, de ahí tomar 50 µL y mezclar con los
50 µL de suero fisiológico del pocillo 6, mezclar 8 veces y eliminar los últimos
50 µL.
11. Agregar una gota de antígeno (17 µL) a cada pocillo.
12. Agitar la lámina en el rotador orbital, a 180 rpm por 4 minutos.
13. Leer al microscopio.
14. Si la reactividad continúa (1:32 R o Rd), preparar diluciones adicionales.
15. Preparar dilución 1:64 en tubo, tomando 700 µL de suero fisiológico y 100 µL
de la dilución 1:8 y se procede según lo descrito anteriormente hasta la
obtención de un resultado NR.
APLICACIONES CLÍNICAS
La sífilis es una enfermedad infecciosa causada por Treponema pallidum y aunque
se conocía desde finales del siglo XV, no fue hasta 1905 que Fritz Shaudin y Erich
Hoffman descubrieron el microorganismo (m.o.) espiral en el suero de una lesión
sifilítica secundaria. (Cuba. Ministerio de Salud Pública. Sinopsis de la sífilis. La
Habana: Viceministerio de Higiene y Epidemiología, 1972).
En la actualidad, la prueba serológica no treponémica más utilizada es la VDRL. Se
trata de una prueba bien controlada, fácil de realizar y que se puede cuantificar con
exactitud. Los resultados de la VDRL se describen como positivos o reactivos, débil
reactivo y negativas o no reactivas.
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una
técnica serológica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar
el diagnóstico de sífilis y analizar la respuesta al tratamiento específico. Su costo y
complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisión sexual
en grandes masas de población.
La prueba del laboratorio de investigación de enfermedades venéreas (VDRL) está
diseñada para evaluar si tiene sífilis, una infección de transmisión sexual (ITS) . La
sífilis es causada por la bacteria Treponema pallidum. La bacteria infecta al penetrar
en el revestimiento de la boca o el área genital.
La prueba VDRL no busca las bacterias que causan la sífilis. En cambio, busca los
anticuerpos que su cuerpo produce en respuesta a los antígenos producidos por las
células dañadas por las bacterias. Los anticuerpos son un tipo de proteína producida
por su sistema inmunológico para combatir invasores como bacterias o toxinas. Las
pruebas de estos anticuerpos pueden informar a sus médicos si tiene sífilis.
No es necesario que tenga los síntomas de la sífilis para que esta prueba sea
precisa. Debido a que busca anticuerpos producidos como resultado de una
infección por sífilis, la prueba VDRL se puede usar independientemente de si
actualmente tiene algún síntoma.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
Reactivo: presencia de floculación.
No reactivo: ausencia completa de floculación.
Prueba semicuantitativa: el título estará dado por la inversa de la última dilución
que se observe reactiva.
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA. Resultados falsamente
positivos pueden ser observados en individuos con cuadros patológicos diversos
como hepatitis, influenza, brucelosis, lepra, malaria, asma, tuberculosis, cáncer,
diabetes y enfermedades autoinmunes. Estos casos no son muy comunes y
generalmente presentan reacciones con títulos bajos y una historia clínica que no
coincide con las características de sífilis. Es imprescindible por estos motivos ante
toda prueba cualitativa reactiva realizar la prueba semicuantitativa. Resultados
falsamente negativos pueden observarse cuando se presenta el fenómeno de
prozona. Por este motivo se recomienda repetir la prueba en suero diluido 1:5 con
solución fisiológica para verificar el resultado. Si en estas condiciones se observa
floculación la muestra es reactiva. A pesar de las ventajas de este método, sus
resultados al igual que los de cualquier prueba serológica, sólo constituyen un dato
auxiliar de diagnóstico que debe corroborarse con la historia clínica del paciente.
BIBLIOGRAFIA.
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Salvat Editores (1983).
Murria PR. Manual of Clinical Microbiology 6th Ed American Society for Microbiology
(1995).
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Colina Morales, R., & Manríquez Cortez, A. (2018). PROCEDIMIENTO TÉCNICO
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Ministerio de Salud DEPARTAMENTO LABORATORIO BIOMÉDICO NACIONAL
Y DE REFERENCIA.
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0PARA%20EL%20DIAGN%C3%93STICO%20SER%C3%93LOGICO%20DE%20
S%C3%8DFILIS.pdf
