FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
IDENTIFICACION DE METABOLITOS SECUNDARIOS EN EUCALIPTUS
GLOBULUS LABILL MEDIANTE UN ESTUDIO FITOQUIMICO
CURSO: Farmacognosia
DOCENTE: Mgtr. ELISA ROXANA DIONICIO ESCALANTE
LIMA – PERÚ
RESUMEN
Se realizó un estudio experimental relacionado con la determinación cualitativa
de flavonoides presentes en el eucalipto (Eucaliptus globulus labill), obtenido
en el mercado “Las Flores de Villa María del Triunfo en la provincia de Lima el
mes de marzo del año 2011, quedando conformado para su estudio. De este
planta medicinal se tomo una muestra al azar, realizándoles todos los ensayos
previstos para el estudio: extracción de metabolitos secundarios en medio
alcohólico al 70%, separación e identificación a través de reacciones
colorimétrica, identificación a través de la técnica cromatográfica y finalmente
reafirmamos los resultados obtenidos anteriormente, a través de un análisis
espectrofotométrico de luz U.V., por lo cual se ratifico, que nuestra muestra de
eucalipto medicinal posee flavonoides. Todos estos resultados se muestran en
los cuadros y gráficos correspondientes.
Palabras Claves: eucalipto, flavonoides, estudio fitoquímico
ABSTRACT
There realized an experimental study related to the qualitative determination of
flavonoides presents in the eucalyptus (Eucaliptus globulus labill), obtained in
the market " The Flowers of Villa Maria del Triunfo in the province of Lima on
March, 2011, remaining shaped for his study. Of this one medicinal plant I take
a sample at random, realizing all the tests foreseen for the study: extraction of
metabolitos secondary in alcoholic way to 70 %, separation and identification
across reactions colorimetric, Identification across the chromatographic
technology and finally we reaffirm the results obtained previously, across an
analysis espectrofotométric of light U.V., for which I ratify, that our sample of
medicinal eucalyptus possesses flavonoides. All these results appear in the
pictures and corresponding graphs.
Key words: eucalyptus, flavonoides, I study fitoquímico
I. INTRODUCCIÓN
1.1 SITUACIÓN PROBLEMATICA
1.2 ANTECEDENTES
1.3 JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN
II. MARCO TEORICO
II.1. Estudio botánico
II.1.1. Ubicación sistematica de la especie
Eucalipto (Eucaliptus globulus Labill).
Origen
Originaria de Australia y de Tasmania
Distribución geográfica
Es natural de Australia y de Tasmania, donde se pueden encontrar más de 300
especies del genero Eucalyptus. Especie ampliamente distribuida en el
continente australiano, en el que ocupa grandes superficies a lo largo de los
ríos, formando masas puras.
Por la rapidez de crecimiento, se puede encontrar cultivado en muchas
regiones del mundo para la producción de madera, fabricación de pulpa de
papel y obtención de aceite esencial. Ha sido introducido con éxito en toda la
costa Peruana. En Argentina se ha adaptado muy bien a las condiciones más
diversas de suelos y climas, soportando bien los fríos de invierno y calores
fuertes de verano, como así mismo las sequías y los terrenos inundados.
Su uso ha supuesto una gran ayuda para el control de paludismo en muchas
zonas de Asia, América del sur y sur de Europa.
En la actualidad existen alrededor de 700 especies, la mayoría oriundas de
Australia.
Clasificación científica
Nombre vulgar : Eucalipto
Reino : Plantae
División : Magnoliophyta
Clase : Magnoliopsida
Subclase : Rosidae
Orden : Myrtales
Familia : Myrtaceae
Subfamilia : Myrtoideae
Tribu : Eucalypteae
Género : Eucalyptus
Subgénero : Dicotiledoena
País de Origen : Australia
II.1.2. Familia
El eucalipto o eucaliptus es un género de árboles (y algunos arbustos) de la
familia de las Myrtaceae, las Mirtáceas son una familia de árboles o arbustos
perennifolios, ricos en aceites esenciales, perteneciente al orden Myrtales.
Alrededor de 130 géneros y unas 2.900 especies de regiones tropicales y
subtropicales, algunas en Europa.
Myrtus communis
II.1.3. Descripción Botánica
Árbol
Árbol que alcanza de 20 m o más de altura y hasta 2 m de diámetro. Cuando
está aislado puede desarrollar una copa globosa y el follaje, las ramas
colgantes son permeables a la luz. La corteza es caduca a la mitad del tronco,
desprendiéndose anualmente en placas combadas más o menos largas y
extensas. La madera adulta presenta un color rojo caoba, con albura de color
blanco amarillento, es medianamente pesada y dura, muy pulida y con anillos
anuales no muy diferenciados.
Hojas
Las hojas son opuestas inicialmente y transformándose después en alternas;
pecioladas, lanceoladas, glabras, verde mate, ligeramente glaucas, pasando a
menudo al rojo; las hojas adultas son alternas de color verde mate en ambas
caras y con peciolos de 1 a 3 cm, miden por lo regular de 12 a 22 cm de largo
por 0,8 a 1,5 cm de ancho, pinatinervias e irregularmente anastomosadas.
Inflorescencia
La inflorescencia se dispone en umbelas axilares, de 5 a 10 flores, con
pedúnculo cilíndrico, de 10 a 15 cm de longitud.
Fruto
El fruto es una cápsula hemisférica, con pedicelo fino, o anchamente turbinado
y coronado por un disco bien prominente, el conjunto puede medir de 5 a 6 mm
de diámetro y de 7 a 8 mm de altura, con 3 a 5 valvas triangulares exsertas.
Semillas
Las semillas son pequeñas de color claro, amarillo dorado, poliédricas, con
ángulos muy marcados y menos de 1 mm de diámetro medio, las semillas
estériles son más oscuras y angostas.
II.1.4. Observaciones para el reconocimiento de la especie
• El árbol puede llegar a medir más de 60 m de altura, si bien se habla de
ejemplares ya desaparecidos que han alcanzado los 150 metros.
• La corteza exterior (ritidoma) del tallo es marrón clara con aspecto de piel y se
desprende a tiras dejando manchas grises o parduscas sobre la corteza
interior, más lisa.
• Sus hojas contienen un aceite esencial, de característico olor balsámico, que
es un poderoso desinfectante natural.
• Presenta flores blancas y solitarias con el cáliz y la corona unidos por una
especie de tapadera que cubre los estambres y el pistilo la cual, al abrirse,
libera multitud de estambres de color amarillo.
• Los frutos son grandes cápsulas de color casi negro con una tapa gris
azulada que contiene gran cantidad de semillas.
II.2. Estudio Químico
II.2.1. Compuestos Químicos
Como para la a mayoría de las especies del genero, las principales
investigaciones han sido dirigidas al estudio del aceite esencial de sus hojas.
Además se observa la presencia de compuestos polifenólicos, una β – dicetona
antioxidantes de cadena larga y terpenoides aromáticos como los euglobales.
- Polifenoles: Junto a ácidos fenoles sin importancia (ácidos gálico, gentísico,
caféico, ferúlico, se han descritos varios flavonoides: heterósidos de
flavonoles (rutósido, quercitrósido, hiperósido) y ésteres de flavonas metiladas
en la cera epicuticular.
- Euglobales: Sobre todo se encuentran en los botones florales, estos
compuestos benzotetrahidropiránicos o dihidroxanténicos resultan de un
cicloadición entre acetogenina dealdéhidica de tipo floroglucinol y mono – o
sesquiterpeno (felandrenos, sabineno, biciclogermacreno).
- Aceite esencial: Su contenido oscila entre el 0,5 y el 3,5%. El 1,8- cineol
(=eucaliptol) es el que se encuentra en mayor proporción (70% como mínimo
va acompañado de aproximadamente una centena de otros componentes
terpénicos como hidrocarburos y alcoholes entre ellos los monoterpénicos,
sesquiterpenos, cetona, ésteres, hidrocarburos. En el aceite esencial no
rectificado se encuentran aldehídos alifáticos
II.2.2. Ruta Biosintética de los flavonoides
La vía del ácido shikímico se inicia en los plastos por condensación de dos
productos fotosintéticos, la eritrosa 4-P con el fosfoenolpiruvato (PEP), y por
diversas modificaciones se obtiene el ácido shikímico, del cual derivan
directamente algunos fenoles en los vegetales. Pero la vía del ácido shikímico
normalmente prosigue, y la incorporación de una segunda molécula de PEP
conduce a la formación de fenilalanina.
La vía biosintética de los flavonoides comienza cuando la fenilalanina, por
acción de la enzima fenilalanina amonioliasa (PAL) se transforma en ácido
cinámico, que luego es transformado en ácido p-cumarínico por incorporación
de un grupo hidroxilo a nivel de anillo aromático, y la acción de una CoA ligasa
lo transforma en cumaril-SCoA, el precursor de la mayoría de los fenoles de
origen vegetal, entre los que se encuentran los flavonoides
Regulación de la biosíntesis
La vía del ácido shikímico es dependiente de la luz.
La acción de la fenilalanina amonioliasa, que inicia la vía biosintética de
los flavonoides, es fundamental para la vida de las plantas y por ello está
estrictamente regulada. Entre otros factores, la fenilalanina amonioliasa es
activada por la luz, y depende además de la concentración de diferentes
hormonas vegetales. La actividad de la fenilalanina amonioliasa suele
aumentar cuando a los vegetales se les somete a situaciones de estrés, como
puede ser la falta de agua ("estrés hídrico"), infecciones fúngicas o bacterianas,
radiaciones UV, y el frío (por esto último las plantas sometidas a bajas
temperaturas suelen presentar coloraciones rojizas en tallos y hojas, y cuando
los inviernos son muy fríos, las flores desarrollan colores muy intensos en la
primavera siguiente).
Hay isozimas dedicadas a la producción de flavonoides diferentes en
respuesta a señales ambientales diferentes.
II.2.3. Estructura Química de los Flavonoides
El primer flavonoide sintetizado por la "vía biosintética de los flavonoides" es
una chalcona, cuyo esqueleto es un anillo bencénico unido a una cadena
propánica que está unida a su vez a otro anillo bencénico. En la mayoría de los
flavonoides, la cadena de reacciones continúa, por lo que la cadena carbonada
que une los anillos aromáticos se cicla por acción de una enzima isomerasa,
creando una flavanona.
Muchas veces la biosíntesis continúa y los productos finales, también
flavonoides, quedan unidos a muy diversos grupos químicos, por ejemplo los
flavonoides glucosidados portan moléculas de azúcares o sus derivados.
También pueden encontrarse flavonoides parcialmente polimerizados dando
lugar a dímeros, trímeros, o complejos multienlazados, como los taninos
condensados.
Todos los flavonoides poseen las características de ser polifenólicos y solubles
en agua. Poseen un máximo de absorción de luz a los 280 nm.
Los flavonoides encontrados en el Eucaliptust globulus labill
Rutina: también llamada rutósido, quercetin-3-rutinósido y soforina, es un
glucósido flavonoide encontrado en algunas plantas. La rutina es el glucósido
entre el flavonol quercetina y el disacárido rutinosa. La rutina se forma creando
enlace entre el disacárido y el grupo hidroxilo de la quercetina.
Quercetina: es un flavonol que se encuentra presente en altas
concentraciones tanto en frutas como en verduras. Es el flavonoide más
abundante y el más habitual en la dieta humana, destacando por su elevada
actividad antioxidante. A partir de él se obtienen otros flavonoides, como la
naringenina o la rutina.
II.2.4. Actividad Farmacológica de los flavonoides
Los flavonoides consumidos por el hombre lo protegen del daño de los
oxidantes, como los rayos UV (cuya cantidad aumenta en verano); la polución
ambiental (minerales tóxicos como el plomo y el mercurio); algunas sustancias
químicas presentes en los alimentos (colorantes, conservantes, etc). Como el
organismo humano no tiene la capacidad de sintetizar estas sustancias
químicas, las obtiene enteramente de los alimentos que ingiere.
Sus efectos en los humanos pueden clasificarse en:
Propiedades de la rutina
• La rutina inhibe la agregación plaquetaria, así como disminuyendo la
permeabilidad vascular, haciendo la sangre menos espesa y mejorando la
circulación.
• La rutina tiene actividad antiinflamatoria.5
• La rutina inhibe la actividad de la aldosa reductasa, una enzima
normalmente presente en el ojo y otras partes del cuerpo. Ayuda a
transformar la glucosa en sorbitol.
• La rutina también fortalece los capilares, y puede reducir los síntomas de
hemofilia. Además puede ayudar a prevenir el desagradable edema de las
piernas. La rutina, como ácido ferúlico, puede reducir la citotoxicidad del
colesterol LDL oxidado y reduce el riesgo de enfermedades cardíacas.
• También hay alguna evidencia de que la rutina puede ser usada en el
tratamiento de hemorroides, várices, y microangiopatías.
Propiedades de la quercetina
• Se ha descubierto que la quercetina actúa contra el virus del herpes simple.
• La quercetina puede actuar sobre los mastocitos para prevenir que liberen
histamina, lo que ayudaría a evitar o aliviar una reacción alérgica. Basados
en esta investigación muy preliminar, las quercetina con frecuencia es
recomendada como un tratamiento para las alergias y el asma.
• En un ensayo doble ciego se descubrió que un complemento de quercetina
redujo los síntomas que presenta esta enfermedad de Cistitis Intersticial.
• Ha habido algunos indicios de que la quercetina pueda ayudar a prevenir el
cáncer. Según datos aportados por el equipo dirigido por Sonia Ramos, del
Instituto del Frío del CSIC, la quercetina podría ser capaz de curar el cáncer
de hígado, además de prevenir el desarrollo de otros tumores. Se hace
necesario desarrollar nuevas investigaciones para asegurar el potencial
efecto anticancerígeno de flavonoides como la quercetina.
• En un pequeño estudio se descubrió que la quercetina puede tener un efecto
satisfactorio eliminando los síntomas como el dolor que causa la Prostatitis
III. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. MATERIALES
Instrumentos
- Hojas de eucalipto
- Envase de vidrio de 10 L
- Licuadora
- Cuchillo
- Etanol de 70% (5 L)
- Cinta de embalaje
- Bolsa de plástico negra
- Embudo de plástico grande
- Beacker de 2 L
- Gasa de 20cm x 20cm
- Algodón de ½ kilo
- Fuente de pirex
- Envase de vidrio de 50 mL.
- Bagueta
- Lampara U.V.
Reactivos
- Metanol
- Cloroformo
- Hexano
- Bencina
- EterET
- Etanol
- Rvo. Mayer
- Rvo. Dragendorff
- Rvo. Bertrand
- Rvo. Popoff
- Rvo. Sonnenschein
- Rvo. Bouchardt
- AlCl3
- FeCl3
- Gelatina
- Shinoda
3.2. MÉTODOS
3.2.1. ESTUDIO FITOQUÍMICO
3.2.2.1. Clasificación botánica
Recolección del material a estudiar: Las muestras de Eucalipto fue colectado
en el mercado “Las Flores” del distrito de Villa María del Triunfo de la provincia
de Lima del departamento de Lima en Perú. Para la puesta a punto de los
métodos de extracción y análisis, se utilizaron muestras las hojas de
Eucalyptus globulus.
3.2.2.2. Preparación del extracto hidroalcohólico
Preparación de la muestra:
La muestra de eucalipto fue deshojada. Las hojas fueron cortadas y reducidas
al menor tamaño posible para luego proceder a licuar con etanol al 70%.
Maceración:
Luego las hojas ya licuadas anteriormente fueron sometidas a una extracción
hidroalcohólica con 5 L de la solución de etanol al 70% colocadas en un envase
de vidrio de 10 L durante siete días, mediante el método de maceración en frio,
para la obtención de los principios activos hidro o alcoholes solubles.
Filtración:
El extracto etanolico del eucalipto fue filtrado para la separacion del extracto
hidroalcohólico de los residuos de las hojas. Los residuos de la planta fueron
desechados. La solucion filtrada fue colocada en un pirex para ser secado en la
estufa.
Secado:
El extracto etanólico del eucalipto luego de ser filtrado y colocado en un pirex
se sometió a un secado para eliminar otras sustancias extraídas como
pigmentos y grasas. Para ello se llevo a la estufa por un tiempo de 7 dias a una
temperatura de 40ºC, el resultado de dicho proceso fu puesto en un envase de
vidrio.
3.2.2.3. Prueba de solubilidad
Las pruebas de solubilidad ayudan a determinar el grupo funcional que puede tener el
desconocido. Para realizar este ensayo, se extrajeron 1 – 2 mg del extracto
hidroalcohólico seco obtenido, realizando las reacciones específicas con los
siguientes solventes:
Solubilidad en Agua destilada. Se tomó de 1 - 2 mg del extracto
hidroalcohólico seco en un tubo de ensayo; se le añadió 1 mL de agua
destilada y se agitó.
Solubilidad en Metanol. Se tomó de 1 - 2 mg del extracto hidroalcohólico seco
en un tubo de ensayo; se le añadió 1 mL de metanol y se agito
Solubilidad en Cloroformo Se tomó de 1 - 2 mg del extracto hidroalcohólico
seco en un tubo de ensayo; se le añadió 1 mL de CHCl 3 y se agito.
Solubilidad en Bencina. Se tomó de 1 - 2 mg del extracto hidroalcohólico seco
en un tubo de ensayo; se le añadió 1 mL de Bencina y se agito.
Solubilidad en Hexano. Se tomó de 1 - 2 mg del extracto hidroalcohólico seco
en un tubo de ensayo; se le añadió 1 mL de Hexano y se agito.
Solubilidad en Éter Etílico. Se tomó de 1 - 2 mg del extracto hidroalcohólico
seco en un tubo de ensayo; se le añadió 1 mL de Éter Etílico y se agito.
Solubilidad en Etanol. Se tomó de 1 - 2 mg del extracto hidroalcohólico seco
en un tubo de ensayo; se le añadió 1 mL de Etanol al 96% y se agito.
3.2.2.4. Marcha Fitoquímica
Para realizar este ensayo, se extrajeron 1 mL del extracto hidroalcohólico
obtenido disuelto en Etanol al 96%, realizando las reacciones específicas para
este tipo de metabolito, a través de las reacciones colorimétricas
correspondientes.
Extracto hidro - alcohólico en Etanol: Se tomó de 1 g del extracto
hidroalcohólico seco en un tubo de ensayo, se le añadió Etanol al 96% y se
agito hasta que el extracto seco se haya disuelto totalmente.
Las reacciones químicas que se llevaron a cabo fueron las siguientes:
Marcha fitoquímica para la obtención de alcaloide
Ensayo de Mayer. Se tomo en un tubo de ensayo 0.5mL del extracto
hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 2 gotas del Rvo. De
Mayer. Si se observa precipitado blanco amarillento la muestra contiene
alcaloides.
Mecanismo de Reacción:
Ensayo de Bertrand. Se tomo en un tubo de ensayo 0.5mL del extracto
hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 2 gotas del Rvo. de
Bertrand. Si se observa precipitado blanco la muestra contiene alcaloides.
Mecanismo de Reacción:
Ensayo de Dragendorff. Se tomo en un tubo de ensayo 0.5mL del extracto
hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 2 gotas del Rvo. de
dragendorff. Si se observa precipitado anaranjado la muestra contiene
alcaloides.
Mecanismo de Reacción:
Ensayo de Popoff. Se tomo en un tubo de ensayo 0.5mL del extracto
hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 2 gotas del Rvo. de
Popoff. Si se observa precipitado amarillo la muestra contiene alcaloides.
Mecanismo de Reacción:
Ensayo de Sonnenschein. Se tomo en un tubo de ensayo 0.5mL del extracto
hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 2 gotas del Rvo. de
Sonnenschein. Si se observa precipitado amarillo la muestra contiene
alcaloides.
Mecanismo de Reacción:
Ensayo de Bouchart. Se tomo en un tubo de ensayo 0.5mL del extracto
hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 2 gotas del Rvo. de
Bouchardt. Si se observa precipitado pardo oscuro la muestra contiene
alcaloides.
Mecanismo de Reacción:
Marcha Fitoquímica para la obtención de flavonoides
Ensayo de Shinoda. Se tomó en un tubo de ensayo 1 mL del extracto
hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 1 mL de HCl(c) y unas
virutas de Mg(s) y se agitó. Si se observa un precipitado rojo magenta la
muestra contiene flavonoides.
Ensayo de Tricloruro de aluminio. Se tomó en un tubo de ensayo 1 mL del
extracto hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 1 mL AlCl3.
Ensayo de Tricloruro férrico. Se tomó en un tubo de ensayo 1 mL del
extracto hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 1 mL FeCl3.
Mecanismo de Reacción:
Ensayo de Gelatina. Se tomó en un tubo de ensayo 1 mL del extracto
hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 1 mL Gelatina
Marcha fitoquímica para la obtención de aminoácidos
Ensayo de Ninhidrina. Se tomó en un tubo de ensayo 1 mL del extracto
hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 1 mL Rvo. De
Ninhidrina.
Mecanismo de Reacción:
Marcha fitoquímica para la obtención de proteínas
Ensayo de Biuret. Se tomó en un tubo de ensayo 1 mL del extracto
hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 1 mL. de una solución
de NaOH 10% y luego añadir 1 gota de sulfato de cobre 1%.
Mecanismo de Reacción:
Marcha Fitoquímica para la obtención de lactonas
Ensayo con Hidroximato Férrico. Se tomó en un tubo de ensayo 0.5 mL de
extracto hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 0.5 mL de
solución de clorhidrato de hidroxilamina y 0.5 mL de KOH, se mezcla y se
calienta por 10 minutos o hasta que aparezca una espuma de color rojizo. Se
enfría y se le agrega 0.5 mL de HCl. Luego se le añade 0.5 mL de Cloruro
Férrico. Si se observa un precipitado de coloración violeta la muestra contiene
lactonas sesquiterpénicas.
Ensayo de Baljet. Se tomó en un tubo de ensayo 0.5 mL del extracto
hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 0.5 mL de ácido pícrico
y 0.5 mL de NaOH. Si se observa un precipitado de color anaranjado o rojo
oscuro la muestra contiene lactonas sesquiterpenicas.
Ensayo de Tollens. Se tomó en un tubo de ensayo 0.5 mL de extracto
hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 1 mL de AgNO 3, 0.5 mL
de NaOH y 3 gotas de Amoniaco. Luego se calentó por 10 minutos. Si se
observa la formación de un espejo de plata la muestra contiene lactonas
sesquiterpénicas.
Ensayo de Legal. Se tomó en un tubo de ensayo 1 – 2 g del extracto
hidroalcohólico seco, se le añadió 1 mL de piridina hasta que este se disuelva
completamente. En otro tubo posteriormente se tomó 1 – 2 g de nitroprusiato
de sodio en solido y se disolvió con agua destilada. Luego a la muestra disuelta
en piridina se le agrega 1 mL de nitroprusiato de sodio disuelto en agua
destilada. Si se observa un precipitado de coloración rosa la muestra contiene
lactonas insaturadas.
Ensayo de Kedde. Se tomo en un tubo de ensayo 0.5 mL de extracto
hidroalcohólico disuelto en Etanol al 96%, se le añadió 0.5 mL de ácido 3,5
dinitrobenzoico y 0.5 mL de KOH. Si se observa un precipitado con coloración
violetas o azules la muestra contiene lactonas insaturadas.
3.2.2.5. Análisis Cromatográficos para el aislamiento, purificación e
identificación
Cromatografía en capa fina para la identificación de flavonoides
Para la identificación de los flavonoides, se procedió de acuerdo con el método
de cromatografía en capa fina. Teniendo en cuenta que los flavonoides pueden
presentar diferentes unidades de monosacáridos se selecciono un sistema de
solvente cromatográfico, utilizándose cromatoplacas de silicagel y como fase
móvil se utilizo cloroformo – metanol – acido acético glacial (08:15:25) y se le
añadió a la cámara cromatográfica.
Se coloca el cromatofolio en la cámara y se dejo hasta que la fase móvil se
mueva aproximadamente 0.5 cm antes de terminar la placa.
La placa desarrollada se seca a temperatura ambiente y se asperja con FeCl3 .
Luego se visualiza las fluorescencias coloreadas en la lámpara UV.
Cromatografía en capa fina para la identificación de aminoácidos
Para la identificación de los aminoácidos, procedimos a comparar la muestra
con estándares de aminoácidos para observar si se obtiene la misma mancha y
poder afirmar que la planta contiene aminoácidos.
Para realizar la cromatografía se rotulan los cromatofolios que son de silicagel
y se coloca los nombres de aminoácidos que se desean comparar. Luego en la
cámara cromatográfica se utiliza como fase móvil n-butanol – ácido – acético –
agua (25:6:25). Luego de sembrar la muestra y los aminoácidos a comparar, se
coloca los cormatofolios en la cámara y se deja desarrollar el cromatograma
hasta que este a 1 cm aproximadamente de terminar la placa.
La placa desarrollada se seca en la estufa por 5 minutos y se asperja con
ninhidrina 0.25% en butanol y luego se visualizan las manchas obtenidas.
Cromatografía en capa fina para identificación de lactonas
Para la identificación de lactonas, procedimos a tomar 1 ml de la muestra de
disuelta en etanol al 96%. Luego se sembró la muestra en 2 cromatoplacas de
silicagel y se preparo la fase móvil con los siguientes solventes cloroformo –
acetona (90:10). Luego se coloca los cromatofolios a la cámara cromatográfica
y se deja desarrollar el cromatograma hasta que este aproximadamente 1 cm
de terminar la placa.
La placa ya desarrollada se deja secar con ayuda del mechero de Bunsen y
luego se revela el primer cromatofolio con vainillina sulfúrica y el segundo
cromatofolio con permanganato de potasio, se deja secar y se observan las
manchas obtenidas.
IV. RESULTADOS
4.1. Prueba de solubilidad
SOLVENTE RESULTADOS
Agua destilada -
Metanol ++
Etanol +++
Cloroformo -
Bencina -
Hexano -
Éter Etílico -
4.2. Marcha Fitoquímica
Marcha fitoquímica para la obtención de alcaloides
ENSAYO METABOLITOS RESULTADOS
Mayer Alcaloide -
Bertrand Alcaloide -
Dragendorff Alcaloide -
Popoff Alcaloide -
Sonnenschein Alcaloide -
Bouchart Alcaloide -
Marcha Fitoquímica para la obtención de flavonoides
ENSAYO METABOLITOS RESULTADOS
Shinoda Flavonoide +
Tricloruro de Aluminio Flavonoide +
Tricloruro Férrico Flavonoide +
Gelatina Flavonoide +
Marcha fitoquímica para la obtención de aminoácidos
ENSAYO METABOLITOS RESULTADOS
Ninhidrina Aminoácidos -
Marcha fitoquimica para la obtención de proteínas
ENSAYO METABOLITOS RESULTADOS
Biuret Proteínas -
Marcha fitoquímica para la obtención de lactonas
ENSAYO METABOLITOS RESULTADOS
Hidroxamato Ferrico Lactonas Sesquiterpénicas -
Baljet Lactonas Sesquiterpénicas -
Tollens Lactonas Sesquiterpénicas +-
Legal Lactonas Insaturadas -
Kedde Lactonas Insaturadas -
4.1.3. Análisis Cromatográficos
Cromatografía en capa fina para la identificación de flavonoides
Cromatografía en capa fina para la identificación de aminoácidos
Cromatografia en capa fina para la identificación de lactonas
Revelado con vainillina sulfúrica
Revelado con permanganato de potasio
V. DISCUSIÓN
En este estudio se utilizó un método de extracción sencillo y rápido a una
temperatura ambiente, empleando como solvente etanol al 70%, obteniéndose
un extracto hidroalcohólico para la identificación de metabolitos secundarios. La
valoración de la planta es de importancia, ya que esta operación comprende la
identificación del material y la determinación de su calidad y pureza. Existe
numerosos factores que afectan la calidad de la planta como la época de
recolección y la conservación deben tenerse en cuenta ().
Se realizo la determinación cualitativa de metabolitos secundarios en extracto
hidroalcohólico, a través de un estudio fitoquímico, lo cual se obtuvo un
evidencia positiva de flavonoides.
En la cromatografía en capa fina del extracto hidroalcohólico con la fase móvil
realizada, resulta satisfactoria para la separación y detección de los
flavonoides, cuya respuesta positiva fue obtenida a través del estudio
fitoquímico efectuado previamente, lo cual está relacionado con los efectos de
polaridad de las fases estudiadas, además del medio alcohólico de la muestra.
Se le realizo la cromatografía en capa fina, y por lo tanto los solventes
extrajeron los flavonoides presentes, visualizándose una mancha amarrilla en
la corrida del cromatograma.
VI. CONCLUSIONES
Una de las fuentes con una amplia variedad de moléculas bioactivas es la
naturaleza, por ello es utilizada como base para el diseño y formulación de
nuevos medicamentos para solucionar diversos problemas de salud. El objetivo
del estudio fitoquímico está en la búsqueda del descubrimiento de fármacos
con menos efectos secundarios y menor costo que los medicamentos actuales.
Con base en los resultados obtenidos, el extracto de Eucaliptus globulus L.
(hoja) puede ser una alternativa para la obtención de fitofármacos gracias a la
identificación de flavonoides en su composición.
El método cromatográfico permitió la determinación de flavonoides presentes
en el Eucaliptus globulus L., permitiendo al mismo tiempo corroborar los
resultados obtenidos realizado a través de un estudio fitoquímico.
Se requiere seguir con estudios para la identificación de más metabolitos
secundarios en esta planta.
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
VIII. ANEXOS
