UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

Carrera de Biología

Ciclo Básico

Manual de Laboratorio de Investigación

Formativa II

Aprobado por el Comité Académico de Carrera: 23/enero/2020

Vigente hasta 23/enero/2022
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Laboratorio de Investigación Formativa II

AUTORES
Aguiñiga Sánchez Itzen
Alvarado Domínguez María Cristina
Ávila Ortiz Alejandrina Graciela
Bautista Reyes Carlos
Castillo Chaires Irene
Díaz Martínez Sergio
Espitia Licea Rocío
Hernández Anaya Lisandro
Hernández Muñoz Marco Antonio
Jiménez Encarnación María Estela
Longares Méndez Dora Alicia
Luna Vásquez Alfonso
Niño de Rivera Oyarzabal María del Carmen
Ramos Velázquez José Rigoberto
Rivera Martínez Ana Rocío
Roldán Reyes Elia
Saito Quezada Verónica Mitsui
Soriano Martínez Ana María
Zapata Cruz Aida
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CONTENIDO
Introducción 3
Criterios de evaluación de la asignatura 7
Reglamento del laboratorio 8
Consideraciones generales para el manejo de residuos 9
Unidad I. Química orgánica 11
Propedéutica 14
Experimento 1. Aislamiento de sustancias orgánicas a partir de fuentes naturales,
mediante extracción sólido-líquido y líquido-líquido 17
Experimento 2. Separación de los componentes de la mezcla extraída
mediante las técnicas de cromatografía en capa fina y columna 17
Experimento 3. Separación de sustancias orgánicas mediante la técnica de
destilación por arrastre con vapor de agua y purificación por cristalización 24
Criterios de evaluación de la unidad 31
Anexo Química orgánica 34
Unidad II. Genética 46
Práctica 1. Leyes de Mendel y herencia ligada al sexo 48
Práctica 2. Aislamiento, purificación e identificación de ADN 67
Práctica 3. Cromosomas gigantes 76
Práctica 4. Observación de cromatina sexual 85
Práctica 5. Observación de cromosomas de médula ósea de ratón 94
Criterios de evaluación de la Unidad 100
Manejo de residuos 103
Unidad III. Bacterias, algas y hongos 106
Práctica 6. Preparación y manejo de medios de cultivo bacterianos 107
Práctica 7. Aislamiento, siembra, técnica de tinción y observación de bacterias 107
Anexo 1. Técnica para utilizar la autoclave 120
Anexo 2. Técnica de la tinción de Gram 121
Práctica 8. Observación de cianobacterias 123
Anexo 3. Ejemplos de cianobacterias 129
Anexo 4. Montaje de preparaciones 130
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Anexo 5. Clave para algas procariotas. 131

Práctica 9. Observación y determinación de algas eucariotas 132
Anexo 6. Estructuras de algas verdes 145
Anexo 7. Clave para la determinación taxonómica de algas verdes 146
Anexo 8. Algas verdes de cuerpos de agua continentales 147
Anexo 9. Estructuras de algas rojas 150
Anexo 10. Clave para la determinación taxonómica de algas rojas 151
Anexo 11. Estructuras de algas pardas 154
Anexo 12. Clave para la determinación taxonómica de algas pardas 155
Anexo 13. Diatomeas 156
Práctica 10. Observación de hongos. Determinación taxonómica de macromicetos 159
Anexo 14. Etiqueta general de recolecta para macromicetos 170
Anexo 15. Medios de cultivo y solución Melzer 171
Anexo 16. Zigomicetos 172
Anexo 17. Grupos principales de macromicetos 174
Práctica 11. Observación, pruebas químicas y determinación taxonómica de líquenes 179
Anexo 18. Etiqueta para la recolección de líquenes 188
Anexo 19. Soluciones empleadas en liquenología 189
Anexo 20. Clave para determinar líquenes a nivel de género 191
Anexo 21. Guía de imágenes para el reconocimiento de cristales liquénicos 195
Anexo 22. Estructuras de líquenes 196
Criterios de evaluación de la unidad 197
Manejo de Residuos 198
Unidad IV. Proyecto de investigación 200
Criterios de evaluación 218
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INTRODUCCIÓN

La filosofía y la misión de la FES Zaragoza establece que sus egresados deberán tener una
actitud crítica y creativa, además de desarrollar un espíritu científico y humanista; en este
contexto, el Laboratorio de Investigación Formativa es el espacio académico donde cristalizan
dichos ideales. Para ello, se requiere que el laboratorio abandone su papel tradicional en el
que funciona como un acompañante o subordinado de la teoría y en su lugar darle la
relevancia que merece, como el espacio didáctico en donde el alumno desarrolle y construya
su propio proceso de aprendizaje a través de actividades que lo orienten tanto en la búsqueda
de información, como en el diseño de su trabajo experimental.

En el Laboratorio de Investigación Formativa II se privilegia el aprendizaje grupal, con el fin

de promover la formación completa del alumno, esto es, aprender leyes, teorías y principios,
entre otras cuestiones. Aunado a esto, el estudiante debe desarrollar un espíritu de
colaboración y conocimientos, habilidades, actitudes, aptitudes y valores que le permitan la
realización de diversas tareas, en diferentes ámbitos académicos, laborales o de la vida
cotidiana, en donde el alumno:

1. Escucha, interpreta y emite mensajes pertinentes en distintos contextos mediante la

utilización de medios, códigos y herramientas apropiadas.
2. Piensa crítica y reflexivamente, desarrolla innovaciones y propone soluciones a
problemas, a partir de métodos establecidos.
3. Sustenta una postura personal sobre temas de interés y relevancia general, considera
otros puntos de vista de manera crítica y reflexiva.
4. Aprende de forma autónoma, por iniciativa e interés propio.
5. Trabaja en forma colaborativa, participa y colabora de manera efectiva en equipo.
6. Participa con responsabilidad en la sociedad, mantiene una actitud respetuosa hacia la
interculturalidad y la diversidad de creencias, valores, ideas y prácticas sociales.
Asimismo, el alumno aplicará los métodos y procedimientos de las ciencias experimentales
para la resolución de problemas cotidianos y para la comprensión racional de su entorno,
razón por la cual:
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1. Adquirirá un enfoque práctico, para desarrollar acciones que favorezcan el respeto hacia
el ambiente, sus compañeros y hacia sí mismo.
2. Establecerá la interrelación entre la ciencia, la tecnología, la sociedad y el ambiente en
contextos históricos y sociales específicos.
3. Compartirá opiniones sobre los impactos de la ciencia y la tecnología en su vida cotidiana,
asumiendo consideraciones éticas.
4. Identificará problemas, formulará preguntas de carácter científico y planteará las hipótesis
necesarias para responderlas.
5. Obtendrá, registrará y sistematizará la información para responder preguntas de carácter
científico, consultando fuentes relevantes y realizando experimentos pertinentes.
6. Contrastará los resultados obtenidos en una investigación, práctica o experimento con
hipótesis previas y comunicará sus resultados y conclusiones
7. Hará explícitas las nociones científicas que sustentan los procesos para la solución de
problemas cotidianos.
8. Explicará el funcionamiento de equipos y materiales de uso común en la investigación
científica.
9. Diseñará modelos o prototipos para resolver problemas, satisfacer necesidades o
demostrar principios científicos.
10. Relacionará los niveles de organización química, física, biológica y ecológica de los seres
vivos.
11. Aplicará normas de seguridad e higiene en el manejo de sustancias, instrumentos y
equipo en la realización de actividades experimentales.

OBJETIVO GENERAL

Introducir a los alumnos en el conocimiento de la biología básica mediante la integración y

aplicación de conceptos y métodos para realizar prácticas, experimentos y proyectos de
investigación, con la finalidad de plantear y resolver problemas relacionados con: química
orgánica, genética, bacterias, algas, hongos y líquenes.
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CRITERIOS DE EVALUACIÓN

Cada unidad que constituye el LIF II, tiene una duración de cuatro semanas. En todas y cada
una de ellas se debe cubrir al menos el 80% de asistencia. En caso de no cumplir este
requisito no se tendrá derecho a calificación.

Sí alguna o algunas de las unidades, no se aprueban, será necesario presentarlas en el

examen final ordinario A, en caso de no aprobarlo presentará el ordinario B, si en esta
oportunidad, aún quedan una o más unidades reprobadas, no acreditará el laboratorio y por
tanto será necesario recursarlo (si le asiste ese derecho), o bien presentará el examen
extraordinario.

Para el caso del proyecto, seguirá los criterios que indique el asesor con el cual trabaje y
depende de las áreas que concurran en su proyecto, la disponibilidad de material y equipo,
así como, del tiempo que se otorgue para la presentación de éste y obtenga la aprobación del
asesor para la realización de la parte experimental.

Si al término del tiempo dedicado al proyecto no obtiene una calificación aprobatoria, las
observaciones que el profesor haga, serán atendidas por el equipo y lo presentarán en la
fecha asignada al ordinario A, de ser necesario atender aún algunas observaciones la última
oportunidad será presentarlo en la fecha asignada al ordinario B. Si en esta ocasión no se
aprueba, no acreditará el LIF II.
El alumno deberá obtener una calificación aprobatoria (mínimo de seis), en cada una de las
unidades y en el proyecto que desarrolle. Cada unidad tendrá su propio mecanismo de
evaluación y aportará el 25% a la calificación final, igual que el proyecto de investigación. La
evaluación final será el promedio aritmético de todas las unidades.
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REGLAMENTO GENERAL DE LABORATORIO

1. Uso obligatorio de bata.

2. Uso obligatorio de zapato cerrado.
3. No trabajar solo.
4. Trabajar con asesoría continua.
5. Uso obligatorio de identificación (Credencial del CERFyS)
6. Prohibido fumar.
7. Prohibido usar audífonos.
8. Prohibido consumir bebidas y alimentos.
9. Prohibido correr y jugar dentro del laboratorio.
10. Es obligatorio cumplir con el reglamento interno de cada laboratorio.
11. Es obligatorio cumplir con el reglamento de salidas a campo y lineamientos adicionales
de seguridad disponibles en la página de la FES-Zaragoza.

REGLAMENTO DE CAMPO
Consultar la siguiente liga: [Link]
content/Portal2015/Reglamentos/reglamento_practicas_campo.pdf

Lineamientos adicionales de seguridad:

[Link]
content/Portal2015/Reglamentos/[Link]
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CONSIDERACIONES GENERALES PARA EL MANEJO DE RESIDUOS

Los residuos químicos derivados de las prácticas, deben etiquetarse como lo muestra la
siguiente figura, además de colocarlos en el área de color amarillo destinada en cada
laboratorio.

El sobrante de semillas, vegetales o plantas no contaminados deberá colocarse en el área

de composteo. Los materiales contaminados o tóxicos serán colocados en bolsas selladas.
La bolsa deberá estar etiquetada señalando su procedencia.
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El confinamiento de los residuos punzocortantes será de acuerdo a la anterior figura. Los

contenedores rojos deben mantenerse en el área de residuos en la sección roja. Las bolsas
rojas y amarillas deben solicitarse al interlaboratorio y en su defecto a la coordinación del ciclo.
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UNIDAD 1
QUÍMICA ORGÁNICA
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QUÍMICA ORGÁNICA

INTRODUCCIÓN DE LA UNIDAD

La Química Orgánica tiene actualmente un papel importante para la formación profesional del
Biólogo, puesto que su actividad la desarrollará tanto en la industria, la investigación, la
docencia y el sector público; donde empleará una serie de sustancias de origen orgánico. El
estudio de la Química Orgánica debe ser abordado desde el punto de vista teórico hasta la
actividad práctica.

En este laboratorio se trabajará con productos orgánicos naturales y sintéticos, con un enfoque
práctico donde se apliquen conceptos y contenidos en la asignatura teórica de Química
Orgánica.

Durante el desarrollo de la actividad práctica, se espera que el estudiante conozca,

comprenda, analice y aplique toda aquella información relacionada con el uso y manejo de
sustancias orgánicas, así como los métodos y técnicas más comunes, equipos y materiales
que se emplean para aislar, identificar y sintetizar compuestos orgánicos presentes en
productos naturales.

OBJETIVOS DE LA UNIDAD

a. Aplicar el Método Científico en los experimentos que desarrolle en la unidad.

b. Investigar previamente al desarrollo del experimento, los fundamentos teóricos de cada
uno, los métodos y las técnicas que se emplean.
c. Desarrollar las técnicas más comunes de la química orgánica en cada experimento:
c.1. Aislar una sustancia orgánical o sintética
c.2. Purificar el producto aislado
c.3. Identificar el producto purificado
c.4. Almacenar adecuadamente el producto identificado
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c.5. Recuperar la mayor parte posible de los reactivos empleados en las operaciones
anteriores.

HABILIDADES Y DESTREZAS

1. Desarrolle la habilidad de aprendizaje e innovación.

2. La habilidad en el manejo de medios y tecnologías de información.
3. La capacidad para solucionar problemas y toma de decisiones.
4. La habilidad de desarrollar el pensamiento crítico.
5. Habilidad comunicativa: oral y escrita.
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PROPEDÉUTICA

OBJETIVOS

 Conocer cuáles son los accidentes más comunes en un laboratorio.

 Adquirir un criterio sobre prevención de accidentes y aplicar las normas de
seguridad para trabajar en el laboratorio.
 Administrar los primeros auxilios en caso de un accidente.
 Conocer e identificar los materiales y sistemas de uso común en el laboratorio de
química orgánica.
 Reconocer los diferentes tipos de incendios y extintores, así como, en qué caso(s) se
emplea (n ).
 Aplicar las técnicas de lavado y secado de material.

FUNDAMENTO

Se denomina propedéutica a los conocimientos previos que se necesitan estudiar o saber

para poder realizar alguna actividad. Se define también, como el conjunto de conocimientos
que permiten hacer del trabajo experimental una disciplina científica.

En nuestro caso estos conocimientos son:

Las normas de seguridad e higiene en el laboratorio, prevención de accidentes, los primeros

auxilios, manipulación de sustancias, material, equipo y sistemas que se emplean en los
procesos de separación, purificación e identificación de sustancias.

PRIMEROS AUXILIOS
Son las medidas y precauciones que deben adoptarse inmediatamente para socorrer a las
víctimas de un accidente hasta que llegue la asistencia médica. Ante una situación de
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emergencia es importante: tener calma, examinar rápidamente y pensar que hacer

(CONAPRA, 2013).

ACCIDENTES DE TRABAJO
Las principales fuentes de accidentes en un laboratorio de química o bien en una planta
industrial son:
I. Incendios Ocasionadas por corto circuito y sustancias inflamables.

II. Quemaduras Ocasionadas por fuego, ácidos, bases fuertes y otras sustancias corrosivas.

III. Envenenamiento Por vía cutánea, inhalación y/o ingestión de sustancias tóxicas.

IV. Cortaduras Ocasionadas por objetos punzantes y cortantes.

ACTIVIDADES PREVIAS
El alumno realizará una investigación bibliográfica de los siguientes temas:
1. Normas fundamentales para trabajar en el laboratorio.
2. Manejo de sustancias, material y equipo.
3. ¿Cuáles son los accidentes más comunes en el laboratorio?.
4. ¿Cuáles son los primeros auxilios en caso de un accidente?.
5. ¿Qué es un extintor?, tipos y usos.
6. Lavado de material.
7. Definición de los siguientes términos: delicuescente, higroscópico y efluorescente.
8. ¿Cómo se cita una bibliografía según APA?.
9. Ficha de seguridad e higiene y sus características.
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BIBLIOGRAFÍA

Ault, A. (1997).Techniques and Experiments for Organic Chemistry (6th ed). Illinois:
Waveland: Prospect Heights.

Brewester, R.Q. 1979. Curso Práctico de Química Orgánica Experimental (2a ed).
España:

Eaton, D. C. (1989). Laboratory investigations in Organic Chemistry. USA: Mc Graw Hill.

Furniss, B. S., Hannaford, A.J., Smith P.W.G., & Tatchell A.R. (1989). Vogel’s Textbook
of

Practical Organic Chemistry. (5th ed). New York: Longman Sientific &Technical.

Keese, R., Muller, R. K., & Toube, T. P. (1990). Métodos de Laboratorio de Química
Orgánica. México: Limusa.

Lehman, J.W. (1990) Operational Organic Chemistry: A Laboratory Course Second

USA: Prentice Hall.

Lenga, R.E. (1998) The Sigma Aldrich Library of Chemical Safety Data. Milwaukee. W.I.
USA: Sigma Aldrich.

Pavia, L. & Lampman, G.S. (1995). Introduction to Organic Laboratory techniques. A

microscale Aproach (3rd ed). U.S.A: Saunders Cóllege Publishing

Rodríguez Y. M.S. & Gómez C. F. (2008). Curso Experimental en Química Orgánica.

Madrid España: Síntesis.

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EXPERIMENTO 1 - 2
AISLAMIENTO DE SUSTANCIAS ORGÁNICAS A PARTIR DE FUENTES
NATURALES, MEDIANTE EXTRACCIÓN SÓLIDO-LÍQUIDO Y LÍQUIDO-LÍQUIDO
Y
SEPARACIÓN DE LOS COMPONENTES DE LA MEZCLA EXTRAÍDA MEDIANTE
MÉTODOS Y TÉCNICAS DE CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Y COLUMNA

OBJETIVO GENERAL

 Aislar sustancias orgánicas mediante técnicas de extracción sólido-líquido y líquido-

líquido y separar la mezcla extraída por técnicas de cromatografía en capa fina y
columna.

OBJETIVOS PARTICULARES

 Aislar sustancias orgánicas por métodos de extracción sólido-líquido y líquido-líquido.

 Separar mediante cromatografía en capa fina y columna las sustancias orgánicas
aisladas.

FUNDAMENTO TEÓRICO

El estudio de los compuestos orgánicos ha sido motivo de estudio de profesionales de

diferentes áreas, para ello se aplican métodos y técnicas diversas entre las que se encuentran
la extracción sólido-líquido y líquido-líquido.

La extracción sólido-líquido es el proceso en el cual, mediante la acción de un disolvente o

agente extractor se separará un principio activo contenido en un material sólido. Para ello se
usará un disolvente que sea lo más selectivo posible y permita la separación. Por su parte, la
extracción líquido-líquido es el proceso en el cual se desarrolla la transferencia de una
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sustancia “X” desde una fase líquida “A” hasta otra fase líquida “B", inmiscibles entre sí; el
proceso marca un reparto y está dado por la ecuación de Nerst (Ecuación 1) (Seamus, 2008).

RT [X]2
Ex = ––– In –––
zF [X]1
Ex = Diferencia de potencial en el equilibrio.
R = Constante de los gases.
T = Temperatura absoluta.
z = Carga eléctrica del ión considerado.
F = Constante de Faraday.
X1 y X2 = Concentraciones iónicas.

ECUACIÓN 1. Términos de la ecuación de Nerst.

La cromatografía es un método que permite separar los componentes de una mezcla de

compuestos por distribución diferencial entre dos fases, una de las cuales es móvil y la otra
estacionaria. La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido. Si la fase estacionaria es
un líquido, ésta deberá estar soportada en un sólido inerte.

Dependiendo de la naturaleza de las fases involucradas, la cromatografía se clasifica en varios

tipos: sólido-líquido, líquido-líquido, sólido-gas y líquido-gas. La cromatografía en capa fina es
un método analítico que utiliza cantidades en miligramos, requiere poco tiempo y es confiable
para la separación e identificación de compuestos (Smith y Feinberg, 1979).

Los resultados obtenidos de la cromatografía en capa fina son valiosos, pues ayudan a
seleccionar el adsorbente y los eluyentes adecuados que se pueden emplear en la separación
cromatográfica en columna.

MATERIAL Y REACTIVOS
• Aparato de Reflujo (ver anexo 1)
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• Aparato de extracción líquido-líquido (ver anexo 1)

• Aparato Soxhlet (ver anexo 1)
• Portaobjetos
• Papel filtro
• Frascos con tapa
• Buretas
• Probetas
• Vasos de precipitado de volumenes variados
• Pipetas graduadas de volumenes variados
• Columna cromatográfica
• Soporte universal
• Pinzas de tres dedos con nuez
• Pinzas de bureta
• Matraz balón

REACTIVOS
• Hexano (CH3CH2CH2CH2CH2CH3)
• Tolueno (C6H5CH3)
• Cloroformo (CHCl3)
• Alcohol etílico (C2H5OH)
• Alcohol metílico (CH3OH)
• Acetato de etilo (C4H8O2)
• Acetona (CH3(CO)CH3)
• Cloruro de metilo (CH2Cl2)
• Éter etílico ((C2H5)2O)
• Isopropanol (C3H8O)
• Sulfato de sodio (Na2SO4)
• Gel de sílice (SiO2)

EQUIPO
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• Bomba de vacío
• Rotavapor
• Parrillas de calentamiento
• Parrilla de calentamiento con agitación (6 piezas)
• Canastillas de calentamiento con reostato de 500 mL (6 piezas)
• Canastillas de calentamiento con reostato de 500 mL (6 piezas)
• Extensión con adaptador trifásico-difásico
• Estufa eléctrica
• Recirculadores
• Lámpara de luz ultravioleta

SERVICIOS
• Gas
• Sistema de extracción en el laboratorio y campanas
• Vacío
• Energía eléctrica
• Agua
• Drenaje
• Lámpara de luz de emergencia
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PROCEDIMIENTO

Actividades previas
El alumno realizará una investigación bibliográfica sobre los siguientes puntos, antes del
desarrollo experimental:

1. Método de extracción sólido-líquido, líquido-líquido (continúo y discontinúo), fundamento

teórico.
2. Material empleado para la extracción líquido-líquido discontinua.
3. Concepto de reflujo, cuándo se usa y esquema del equipo.
4. ¿Qué es una emulsión? Y las diversas formas de romperlas.
5. Extracción con equipo Soxhlet; cuándo se usa y esquema del equipo.
6. Fuentes de calentamiento directo e indirecto y sus usos.
7. Diferentes tipos de cuerpos de ebullición y sus usos.
8. Tipos de lubricantes empleados en el laboratorio para las juntas esmeriladas.
9. ¿Qué es un agente desecante? Y tipos de desecantes.
10. ¿Qué es un pigmento y cuántos tipos existen?
11. Cromatografía, tipos, técnicas, fundamento teórico de la cromatografía de adsorción y
partición.
12. Cromatografía en capa fina y columna, fundamento teórico.
13. Cromatografía de capa fina y cromatografía de columna, material que se utiliza y esquema
de los sistemas.
14. Precauciones al preparar cada tipo de cromatografía.
15. Preparación de las placas, activación y cámaras de elusión en la cromatografía en capa
fina.
16. Conceptos de polaridad, eluyente y adsorbente.
17. Reveladores empleados en cromatografía.
18. Definición de los términos Rf y Rx. Usos y aplicaciones.
19. Aplicaciones de la cromatografía en capa fina y en columna.
20. Propiedades físicas, químicas y tóxicas de las sustancias empleadas en el experimento.
21. Bibliografía consultada en cada uno de los puntos.
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Desarrollo experimental
El alumno desarrollará la parte experimental considerando lo siguiente:

Extraer el (los) compuesto(s) del material vegetal asignado por el profesor, concentrar el
extracto y realizar la cromatografía en capa fina para determinar el eluyente ideal y
posteriormente efectuar la separación por cromatografía en columna.
RESULTADOS

Deberá incluir en su informe:

1. Las características del extracto obtenido.
2. El registro de resultados de la elusión en las placas cromatográficas, especificando
eluyente y adsorbente utilizado.
3. Determinar los valores de Rf y Rx en su caso.
4. Las figuras y cuadros de resultados

BIBLIOGRAFÍA

Ault, A. (1997).Techniques and Experiments for Organic Chemistry (6th ed). Illinois:
Waveland: Prospect Heights.

Brewester, R.Q. 1979. Curso Práctico de Química Orgánica Experimental (2a ed).
España: Alhambra
Browning, D.R. (1971). Cromatografía. Barcelona: Toray•Masson.
Domínguez, X. (1987). Experimentos de Química Orgánica (4ª edición). México:
CECSA. Alhambra
Eaton, D. C. (1989). Laboratory investigations in Organic Chemistry. USA: Mc Graw
Hill.
Furniss, B. S., Hannaford, A.J., Smith P.W.G., & Tatchell A.R. (1989). Vogel’s

Textbook of Practical Organic Chemistry. (5th ed). New York: Longman Sientific
&Technical.
Keese, R., Muller, R. K., & Toube, T. P. (1990). Métodos de Laboratorio de Química
Orgánica. México: Limusa.
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Landgrebe, J.A. (1992). Theory and Practice in the Organic laboratory with microscale

and Standard Scale Experiments (4th ed) U.S.A: Brooks/Cole.

Lehman, J.W. (1990) Operational Organic Chemistry: A Laboratory Course Second
USA: Prentice Hall.
Lenga, R.E. (1998) The Sigma Aldrich Library of Chemical Safety Data. Milwaukee.
W.I. USA: Sigma Aldrich.
Pavia, L. & Lampman, G.S. (1995). Introduction to Organic Laboratory techniques. A

microscale Aproach (3rd ed). U.S.A: Saunders Cóllege Publishing

Rodríguez Y. M.S. & Gómez C. F. (2008). Curso Experimental en Química Orgánica.
Madrid España: Síntesis.
Seamus P.J.H. (2008). Analytical Chemistry. USA: Oxford University Press.
Skoog, D. A., Holder, F.J., & Stanley P.C. (2012) Principles of Instrumental Analysis.

(6th ed) USA: Thomson Broocks/Cole.

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EXPERIMENTO 3.
SEPARACIÓN DE SUSTANCIAS ORGÁNICAS MEDIANTE LA TÉCNICA DE
DESTILACIÓN POR ARRASTRE DE VAPOR DE AGUA Y PURIFICACIÓN POR
CRISTALIZACIÓN

OBJETIVO GENERAL

 Extraer y separar el aceite esencial de un material vegetal mediante la técnica de

destilación por arrastre de vapor de agua.

OBJETIVOS PARTICULARES

 Aplicar la destilación por arrastre de vapor en la separación de un aceite esencial.

 Separar el aceite esencial contenido en el codestilado por medio de la extracción
líquido-líquido discontinua.
 Realizar las pruebas físicas y químicas para la identificación del aceite esencial.

FUNDAMENTO TEÓRICO

Los aceites esenciales o esencias vegetales son productos contenidos en las plantas,
formados biogenéticamente del ácido mevalónico; se les cataloga como monoterpenoides y
sesquiterpenoides (Figura 1). Los aceites esenciales se encuentran normalmente en los
espacios intercelulares de los tejidos vegetales y pueden estar distribuidos por toda la planta
(flores, hojas, tallos, semillas, frutos, corteza) (Keese et al., 1990; Landgrebe, 2005).

Los aceites esenciales, por lo general son menos densos que el agua, su densidad varía de
0.759 a 1.96 gmL-1; las características de cada aceite son específicas dependiendo de la
fuente de la que se trate.
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FIGURA 1. Compuestos encontrados en los aceites esenciales (fórmulas elaboradas con el

programa ChenBioDraw Ultra 14.0).

La destilación en corriente de vapor o arrastre con vapor de agua, es una técnica para la
separación de sustancias insolubles o ligeramente solubles en agua y en algunos casos
volátiles, con elevados puntos de ebullición.

El arrastre en corriente de vapor hace posible la purificación adecuada de muchas sustancias

de punto de ebullición elevado mediante una destilación a baja temperatura. Esta técnica es
particularmente útil cuando la sustancia en cuestión hierve por encima de 100ºC a la presión
atmosférica, o se descompone en su punto de ebullición, o por debajo de éste.

Algunas sustancias pueden ser arrastradas en corriente de vapor. Esto se debe

principalmente a que algunos compuestos no son solubles entre sí con el agua, en éste caso,
la presión del sistema es la suma de las presiones parciales de los componentes (Ley de las
Presiones Parciales de Dalton).

MATERIAL Y REACTIVOS
• Aparato de reflujo (ver anexo 1)
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• Aparato de extracción líquido-líquido (ver anexo 1)

• Parrillas de calentamiento
• Parrilla de calentamiento con agitación (6 piezas)
• Canastillas de calentamiento con reostato de 500 mL (6 piezas)
• Canastillas de calentamiento con reostato de 500 mL (6 piezas)
• Aparato de arrastre con vapor de agua (ver anexo 1)
• Probetas
• Vasos de precipitado volumenes variados
• Pipetas graduadas volumenes variados
• Soporte universal
• Pinzas de tres dedos con nuez
• Matraz balón
• Portaobjetos
• Papel filtro
• Frascos con tapa

REACTIVOS
• Hexano (CH3CH2CH2CH2CH2CH3)
• Tolueno (C6H5CH3)
• Cloroformo (CHCl3)
• Alcohol etílico (C2H5OH)
• Alcohol metílico (CH3OH)
• Acetato de etilo (C4H8O2)
• Acetona (CH3(CO)CH3)
• Cloruro de metilo (CH2Cl2)
• Éter etílico ((C2H5)2O)
• Isopropanol (C3H8O)
• Sulfato de sodio (Na2SO4)
• Gel de sílice (SiO2)
EQUIPO
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• Bomba de vacío
• Rotavapor
• Parrillas de calentamiento y agitación
• Canastillas de calentamiento con reostato
• Extensión con adaptador trifásico-difásico
• Estufa eléctrica
• Recirculadores
• Lámpara de luz ultravioleta

SERVICIOS
• Gas
• Sistema de extracción en el laboratorio y campanas
• Vacío
• Energía eléctrica
• Agua
• Drenaje
• Lámpara de luz de emergencia

PROCEDIMIENTO

Actividades previas
El alumno realizará una investigación bibliográfica sobre lo siguientes puntos, antes del
desarrollo experimental:

1. Fundamento teórico de la destilación por arrastre con vapor.

2. Usos de la destilación por arrastre con vapor.
3. Características de los compuestos para poder ser arrastrados con vapor.
4. Material y equipo empleados para la destilación por arrastre con vapor.
5. Ventajas que presenta adicionar cloruro de sodio a la fase acuosa donde se encuentra
el producto en una destilación por arrastre de vapor de agua (efecto salino).
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6. ¿Por qué el vapor que se condensa durante la destilación por arrastre con vapor es
generalmente turbio?
7. ¿Qué es un disolvente activo?
8. ¿A qué se le llama codestilado en una destilación por arrastre con vapor?
9. ¿Cuál es la diferencia que existen entre un codestilado y un destilado puro?
10. Pruebas de identificación físicas y químicas.
11. ¿Qué es un derivado, cuál es su utilidad práctica y cómo se prepara en función del
compuesto a trabajar?
12. ¿Cuál es la influencia que tienen los puentes de hidrógeno intermoleculares e
intramoleculares en una destilación por arrastre con vapor de agua?
13. ¿Qué ventajas presenta la destilación por arrastre con vapor sobre la destilación a
presión reducida?
14. Uso de rotavapor, esquema y fundamento.
15. Propiedades físicas, químicas y tóxicas de las sustancias empleadas en el experimento.

Desarrollo experimental
El alumno desarrollará la parte experimental considerando lo siguiente:

El aislamiento del aceite esencial de un material vegetal por el método de destilación y la

técnica de arrastre de vapor de agua, realizará su recuperación mediante la técnica de
extracción líquido-líquido, concentrar por una destilación simple y realizará una recuperación.

La realización de las pruebas de identificación específicas al producto aislado (preparación

de un derivado).

Elaborar el plan de trabajo o anteproyecto seleccionado.

RESULTADOS

Deberá incluir en su informe:

1. Las características del aceite esencial obtenido.
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2. Las características del derivado del principal componente del aceite esencial obtenido.
3. El registro de resultados de la elusión en las placas cromatográficas, especificando
eluyente y adsorbente utilizado.
4. La identificación del grupo funcional.
5. Las figuras y cuadros de resultados

BIBLIOGRAFÍA
th
Ault, A. (1997).Techniques and Experiments for Organic Chemistry (6 ed). Illinois:
Waveland: Prospect Heights.

Brewester, R.Q. 1979. Curso Práctico de Química Orgánica Experimental (2a ed).
España: Alhambra
Browning, D.R. (1971). Cromatografía. Barcelona: Toray•Masson.
Domínguez, X. (1987). Experimentos de Química Orgánica (4ª edición). México:
CECSA. Alhambra
Eaton, D. C. (1989). Laboratory investigations in Organic Chemistry. USA: Mc Graw
Hill.
Furniss, B. S., Hannaford, A.J., Smith P.W.G., & Tatchell A.R. (1989). Vogel’s

Textbook of Practical Organic Chemistry. (5th ed). New York: Longman Sientific
&Technical.
Keese, R., Muller, R. K., & Toube, T. P. (1990). Métodos de Laboratorio de Química
Orgánica. México: Limusa.
Landgrebe, J.A. (1992). Theory and Practice in the Organic laboratory with microscale

and Standard Scale Experiments (4th ed) U.S.A: Brooks/Cole.

Lehman, J.W. (1990) Operational Organic Chemistry: A Laboratory Course Second
USA: Prentice Hall.
Lenga, R.E. (1998) The Sigma Aldrich Library of Chemical Safety Data. Milwaukee.
W.I. USA: Sigma Aldrich.
Pavia, L. & Lampman, G.S. (1995). Introduction to Organic Laboratory techniques. A

microscale Aproach (3rd ed). U.S.A: Saunders Cóllege Publishing

Rodríguez Y. M.S. & Gómez C. F. (2008). Curso Experimental en Química Orgánica.
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Madrid España: Síntesis.

Seamus P.J.H. (2008). Analytical Chemistry. USA: Oxford University Press.
Skoog, D. A., Holder, F.J., & Stanley P.C. (2012) Principles of Instrumental Analysis.

(6th ed) USA: Thomson Broocks/Cole.

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CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA UNIDAD.

1. Lista de cotejo

CRITERIO %
Asistencia 50
Actividades previas
Anteproyecto
Trabajo experimental
Examen (aprobatorio) 30
Informe 20
TOTAL 100
NOTA: Todos los puntos deberán ser aprobados.

2. Deberá realizar TODAS las actividades previas.

3. Anteproyecto o Plan de Trabajo.

GUÍA PARA LA ELABORACIÓN DEL ANTEPROYECTO

a) Título.
b) Objetivo.
c) Hipótesis.
d) Variables.
e) Características del material vegetal a trabajar (nombre científico, origen, endemismo,
nombre científico del compuesto a extraer).
f) Metodología (desarrollada en prosa y lógicamente redactada, con esquemas del o los
aparatos a emplear).
g) Listado de material, reactivos.
h) Diagrama de flujo del procedimiento.
i) Bibliografía consultada, reportada en formato APA.
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NOTA: El anteproyecto es indispensable para poder iniciar el experimento.

4. Informe Final.
Guía para la Elaboración del Informe.

4.1 Portada
Autor o autores.
Título.
Asesor.
Grupo.
Fecha.

4.2 Resumen

Incluye lo que se hizo y los resultados obtenidos comparados con los informados en la
literatura. 2 puntos.

4.3 Introducción

Comentarios breves sobre el tema 0.5 PUNTO

Fundamento teórico 0.5 PUNTO
Objetivo (finalidad del experimento) 0.5 PUNTO
Hipótesis 0.5 PUNTO

4.4 Parte experimental

Técnica lógicamente redactada 0.5 PUNTO

Listado de material y reactivos 0.5 PUNTO
Diagrama de flujo 0.5 PUNTO
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Esquema del aparto 0.5 PUNTO

4.5 Resultados

Cálculos, rendimiento teórico y práctico, gráficas, esquemas, fotografías, todo lo obtenido. 2

PUNTOS.

4.6 Análisis y discusión de los resultados obtenidos

Con base en el análisis de los resultados se contrasta la hipótesis señalando aciertos, errores
y sugerencias que sirvan para mejora el experimento. Además, se incluye en su caso las
reacciones y mecanismos. 2 PUNTOS.

4.7 Bibliografía

Reportada en formato APA.

INSTRUMENTOS DE EVALUACIÓN

1. Antecedentes académicos completos.

2. Anteproyecto o plan de trabajo (establecidos los criterios).
3. Informe final (con los criterios establecidos).
4. Lista de cotejo.
5. Examen.
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ANEXO 1. QUÍMICA ORGÁNICA

Rombo NFPA 704

La NFPA (National Fire Protection Association) es una entidad internacional voluntaria creada
para promover la protección y prevención contra el fuego (Figura 2 y 3).

La Norma NFPA 704 establece un sistema de identificación de riesgos para que en un

eventual incendio o emergencia, las personas afectadas puedan reconocer los riesgos
de los materiales y su nivel de peligrosidad respecto del fuego y diferentes factores.
Establece a través de un rombo seccionado en cuatro partes de diferentes colores (Figura 2),
indica los grados de peligrosidad de la sustancia a clasificar.

FIGURA 2. Rombo de peligrosidad de las sustancias

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(Tomado de: [Link]

FIGURA 3. Manejo del extintor

(Tomada y modificada de [Link]

APAGUE EL FUEGO
TIPO DE FUEGO TIPO DE EXTINGUIDOR
A Madera, Papel, Tela, Plástico A ABC
B Aceites, Grasa, Gasolina, Solventes B BC ABC
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C Equipo eléctrico BC ABC

Metales altamente flamables: Potasio,
D
Sodio, Magnesio, Aluminio D Especial
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FIGURA 4. Tipos de Matraces (Elaborados con el software ChemBioDraw Ultra 14.0).

FIGURA 5. Tipos de embudos (Elaborados con el software ChemBioDraw Ultra 14.0).

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FIGURA 6. Tipos de refrigerantes o condensadores (Elaborados con el software

ChemBioDraw Ultra 14.0).
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FIGURA 7. Tipos de cabezas de destilación (Elaborados con el software ChemBioDraw

Ultra 14.0).

FIGURA 8. Tipos de adaptadores (Elaborados con el software ChemBioDraw Ultra 14.0).

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FIGURA 9. Tipos de material graduado (Elaborados con el software ChemBioDraw Ultra

14.0).
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FIGURA 10. Materiales diversos (Elaborados con el software ChemBioDraw Ultra

14.0).
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Aparato Soxhlet

1. Refrigerante de sosario
2. Cuerpo extractor Soxhelt
3, Matraz bola
4. Parrilla de agitación y calentamiento

FIGURA 11. Aparato Soxhlet (Elaborados con el software ChemBioDraw Ultra 14.0).
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FIGURA 12. Aparato de destilación simple (Elaborados con el software ChemBioDraw Ultra
14.0).
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1. Termómetro
2. Embudo de adición
3. Cabeza de destilación
4. Adaptador Claysen
5. Matraz de bola
6. Condensador recto
7. Tubo colector con ángulo
105°
8. Matraz Erlenmeyer

FIGURA 13. Aparato de destilación por arrastre con vapor de agua (Elaborados con el
software ChemBioDraw Ultra 14.0).
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UNIDAD 2
GENÉTICA
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GENÉTICA

INTRODUCCIÓN DE LA UNIDAD

Bienvenidos al estudio de la genética, campo de la Biología que resulta sumamente

interesante y fascinante. El conocimiento de la información genética permite comprender el
funcionamiento de la célula, el fenotipo de un organismo y la transmisión de la información a
través de las generaciones en todas las especies; procesos necesarios para el entendimiento
de la vida y la biosfera, que contribuyen de manera importante en el desarrollo y formación del
Biólogo.

Los temas que estudia la genética tienen una relación directa con la biología molecular, la
biología celular, la fisiología, la evolución, la ecología, la sistemática, la etología que
determinan un mejor y completo entendimiento de éstas.

El crecimiento y aplicación del conocimiento en este campo es muy dinámico, pues cada año
se realiza un gran número de nuevos descubrimientos. Otra razón por la que el estudio de la
genética es tan atrayente. A lo largo de las últimas décadas, nos hemos visto obligados a
actualizar nuestros conocimientos de forma constante. Cada avance se convierte en piedra
angular en la que se basa el progreso posterior. Por lo tanto, es estimulante encontrarse
inmerso en estos progresos ya sea como alumno, docente e investigador de la genética.

OBJETIVOS DE LA UNIDAD
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Introducir al alumno en el manejo de técnicas que se aplican en los procesos genéticos

básicos, que van desde la identificación de fenotipos y manejo de cruzas que da una
aproximación a la genética Mendeliana, hasta la observación de las estructuras que portan el
material genético, los cromosomas. Está conformado por las prácticas: Leyes de Mendel y
herencia ligada al sexo; Aislamiento, purificación e identificación de ADN; Cromosomas
gigantes; Cromatina sexual y Observación de cromosomas de médula ósea de ratón. Todas
ellas con elementos suficientes y adecuados, donde los docentes han vertido un cúmulo de
experiencia adquirida a lo largo de los años, por lo que es de esperar un óptimo desarrollo de
las mismas, logrando la adquisición de conocimientos y habilidades por parte de los
estudiantes que cursan el segundo semestre de la carrera de Biología.
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PRÁCTICA 1.
LEYES DE MENDEL Y HERENCIA LIGADA AL SEXO

OBJETIVOS GENERALES

 Adquirir la información y destreza necesaria para manipular, mantener y reconocer las

cepas de Drosophila melanogaster que se le entreguen al alumno para experimentos
posteriores.
 Adquirir la habilidad de identificar las diferencias fenotípicas entre hembras y machos
de Drosophila melanogaster.
 Desarrollar de manera teórica el manejo de las leyes de Mendel, utilizando como base
los diferentes genotipos de Drosophila melanogaster.

FUNDAMENTO TEÓRICO

Leyes de Mendel
La genética actual parte de las investigaciones de Mendel. El estudio de los patrones que
gobiernan la herencia de los caracteres generación tras generación se conoce como genética
de la transmisión o herencia Mendeliana, la cual se debe a Gregorio Mendel (Figura 1), quién
describió en 1865 las reglas que gobiernan la transmisión de los caracteres hereditarios, al
realizar sus experimentos sobre la hibridación en plantas de chícharo (Pisum sativum), en el
huerto aledaño a su monasterio.
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FIGURA 1. Gregorio Mendel

(Tomado de [Link]/popup_htm/01_mendel.htm).

Mendel estudió siete caracteres del chícharo: la forma de la semilla, el color de la semilla, el
color de la flor, la forma y color de la vaina, la posición de las flores y de las vainas y la longitud
del tallo. El trabajo de Mendel se caracterizó por: a) elegir un material de experimentación
adecuado, b) simplificar la tarea seleccionando caracteres con distribuciones alternativas
claras, examinándolas una por una y solo después procediendo a combinaciones más
complicadas, c) en las evaluaciones de sus resultados no quedó satisfecho con afirmaciones
cualitativas, por lo que las cuantificó y esto le permitió establecer las leyes estadísticas que
rigen estos fenómenos, d) el encontrar la interpretación biológica correcta; las células
germinales contienen los factores hereditarios (Bruce et al., 2011).

A pesar de que en esa época no se sabía nada acerca del ADN ni de los cromosomas, Mendel
observó que cada progenitor contribuye con un número de elementos individuales a la herencia
del carácter. Estos elementos llamados por Mendel “factores” son, en términos modernos, los
genes.

La primera ley de Mendel se puede enunciar como sigue: un gameto recibe uno de los dos
alelos que posee un organismo; la fecundación restablece el número diploide.
Mendel realizó sus primeros experimentos con base en la herencia de un solo carácter lo que
se denomina cruza monohíbrida.

La segunda ley de Mendel o ley de la distribución independiente se puede enunciar como

sigue: los miembros de pares de alelos diferentes (genes), se distribuyen independientemente
uno del otro durante la formación de los gametos.
Herencia ligada al sexo
La primera prueba completa de naturaleza experimental de la herencia ligada al sexo se obtuvo
en 1910 por T. H Morgan, de un mutante de ojos blancos de Drosophila melanogaster. Un gen
había experimentado un cambio que resultó en una alteración fenotípica. Este cambio se
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expresó como ojos blancos en lugar de los ojos rojos normales. El macho de ojos blancos que
se descubrió, primero se cruzó con una hembra de ojos rojos. Todas las moscas de la
generación F1 tenían ojos rojos, pero la F2 incluyó tanto moscas de ojos rojos, como moscas
de ojos blancos en una proporción de alrededor de tres rojos a uno blanco. Sin embargo,
todas las moscas con ojos blancos de la generación F 2 fueron machos. Alrededor de la mitad
de los machos de la F2 tenían ojos blancos y la otra mitad ojos rojos, pero todas las hembras
tenían ojos rojos. En este experimento, el alelo recesivo se expresa solo en machos. Morgan
llegó a una explicación asociando a este gen con el cromosoma X (Valpuesta, 2008).

Por lo tanto, en la herencia ligada al sexo, la característica se hereda del abuelo al nieto a
través de la hija que funciona como portadora; las cruzas reciprocas producen resultados en
la progenie diferentes; la expresión fenotípica de los genes ligados al sexo es más frecuente en
los machos que en las hembras, un gen ligado al cromosoma X nunca se transmite
directamente del padre al hijo. La explicación a estos resultados se obtuvo posteriormente con
la comprensión de los mecanismos de determinación del sexo.
Drosophila melanogaster como modelo biológico.
Una de las primeras preguntas que debiera surgir en la mente de los alumnos de Biología es,
el porqué de la elección de esta mosca para el desarrollo de una serie de actividades durante
el transcurso del semestre. La respuesta es que Drosophila melanogaster ofrece una serie de
características propicias para cursos de introducción a la genética.

Drosophila es un género cosmopolita

del cual existen alrededor de 1500 spp.,
siendo la más utilizada en los
laboratorios de investigación (Figura 2).
Esta mosca es un insecto
holometábolo, su ciclo vital consta de 4
estadios: huevo, larva de primero,
segundo y de tercer estadio, pupa y el FIGURA 2. Cepas de Drosophila melanogaster
(Tomado de [Link]
imago adulto. AVG/practicas/Drosophila/[Link])
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Ventajas de Drosophila melanogaster como modelo biológico:

● Eucarionte pluricelular.
● Cuatro pares de cromosomas totalmente mapeados.
● Genoma totalmente secuenciado.
● Cientos de mutantes con defectos en miles de genes disponibles.
● Abundante en todo el mundo.
● El cultivo en el laboratorio es fácil y económico.
● Relativamente resistente al manejo.
● Engendra un gran número de descendientes.
● Tiene un corto tiempo de generación (a 10°C es de 57 días, a 20°C de 15 días y a 25°C
de 10 días).
● Su número cromosómico reducido es conveniente para su estudio.
● Algunas de sus células en estadio de larva son muy grandes lo que facilita el estudio de
sus cromosomas.
● Se ha acumulado bastante literatura a la cual podemos remitirnos para solucionar dudas
y tener bases sólidas para estudios posteriores.
● Las mutaciones son comunes y fácilmente inducibles.
● Pueden observarse y manejarse muchos caracteres externos.
● Su embriología y ciclo de vida han sido perfectamente estudiados.

Clasificación taxonómica
Phylum: Artropoda
Subphylum: Hexápoda
Clase: Insecta
Orden: Díptera
Familia: Drosophilidae
Género: Drosophila
Especie: Drosophila melanogaster

Se ha denominado a Drosophila melanogaster con varios nombres comunes como son:

mosca de la fruta y mosca del vinagre.
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Ciclo de vida
Tiene cuatro estadios: huevo, larva, pupa y
adulto (Figura 3). La duración de estos
estadios varía con algunos factores, de los
cuales el más importante es la temperatura.
A 20°C, transcurren 8 días de huevo a larva
y el estado pupal dura 4 a 4.5 días.
Huevo: Las moscas hembras adultas son
capaces de poner huevos 2 días después
de haber alcanzado el estado adulto y
seguir haciéndolo continuamente hasta su
muerte. El huevo mide aproximadamente
0.5 mm de longitud y sus estructuras
visibles son el Corión y dos filamentos o
pliegues anterodorsales, debajo de los
cuales se ve la membrana vitelina (Pierce,
2009).
Larva: Durante este estadio se realizan dos
mudas e incrementan su tamaño de 4 a 4.5
mm lo cual es debido a un aumento en FIGURA 3. Ciclo de vida (Tomada de
tamaño de las células y no a un aumento en [Link]).

el número de éstas.
Pupa: Durante este estadio se desarrollan
los sistemas de la mosca adulta.
Adulto: Las moscas recién emergidas del estado pupal son frágiles y de color claro, con las
alas no totalmente terminadas; sin embargo, pocas horas después oscurecen y toman las
características del estado adulto. (Figura 4). Viven aproximadamente 1 mes y mueren.
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Diferenciación del sexo

FIGURA 4. Macho y hembra adultos (Tomada de [Link]).

Tamaño: Las hembras son generalmente más grandes que los machos.

Forma: En el macho el extremo caudal es redondeado, mientras que en la hembra es

alargado y poco protuyente.

Color: La pigmentación oscura es más extensa en el extremo caudal del macho y los anillos
rodean el abdomen, mientras que en la hembra solo son dorsales.

El abdomen de la hembra tiene 7 segmentos, mientras que el del macho tiene solo 5
segmentos. Los machos tienen un peine sexual que consiste en una fila de aproximadamente
10 cerdas gruesas en la superficie distal del segmento tarsal basal de la pata anterior.

Si se requieren hembras vírgenes para una cruza, éstas pueden colectarse 10 a 12 horas
después de que terminó la pupación, ya que en este tiempo las hembras no permiten la cruza.
Medios de cultivo
Drosophila melanogaster crece sobre frutos suaves como la uva, el plátano y la ciruela,
especialmente cuando éstos están demasiado maduros y la fermentación se ha iniciado. Los
adultos y las larvas se alimentan con los jugos de las frutas fermentadas y de ahí que las
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levaduras parecen ser un factor fundamental de su dieta. Pueden crecer prácticamente en

cualquier medio de fermentación.

Los componentes del medio de cultivo son: harina de maíz, levadura de cerveza seca activa,
miel de maíz, agar-agar y nipagín, todo esto se emplea para obtener un medio semisólido,
rico en nutrientes y libre de contaminación de hongos, que favorecen el desarrollo y
propagación que se requieren en las etapas sucesivas del cultivo de Drosophila (Demerec et
al., 1975).

MATERIAL Y REACTIVOS

Material biológico
• Moscas Drosophila melanogaster tipo silvestre en sus diferentes estadios de desarrollo.
• Cepas mutante de Drosophila melanogaster en sus diferentes estadios de desarrollo:
White, Vestigial, Yellow, Ebony y Brown.

Materiales diversos
• Probetas de 50 y 1000 mL
• Vidrio de reloj
• Pipeta de 5 mL
• Agujas de disección
• Recipiente de 500 mL de peltre o aluminio
• Pincel de cerdas finas
• Tapones de esponja de 5 cm de espesor
• Eterizador
• Frascos de 250 mL de boca ancha
• Cajas Petri
• Frascos y bolsas para residuos biológico-infecciosos
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REACTIVOS
• Éter etílico ((C2H5)2O)
• Medio de cultivo: Preparar 300 mL
 Agar-agar 3g
 Harina de maíz 18 g
 Levadura seca activa 9g
 Miel de maíz 42 g
 Agua de la llave 300 mL
 Nipagin (CH3(C6H4(OH)COO)) 10% P/V en etanol al 96% 3 mL

EQUIPO
• Balanza granataria
• Parrilla de calentamiento
• Microscopio estereoscópico

SERVICIOS
• Agua
• Vacío
• Gas
• Energía eléctrica
• Campanas de extracción
• Extractores de ventilación
• Tarjas de lavado
• Extintores
• Regaderas de seguridad
• Gavetas
• Mesas de trabajo
• Ventanas para la ventilación
• Botiquín de emergencia
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PROCEDIMIENTO

Actividades previas
El alumno realizará una investigación bibliográfica sobre los siguientes puntos, antes del
desarrollo de la práctica.

1. ¿Qué ventajas presenta utilizar D. melanogaster en estudios de genética?

2. Descripción del ciclo de vida de D. melanogaster.
3. Características que permiten diferenciar el sexo en D. melanogaster.
4. ¿Cuáles son los elementos básicos del medio de cultivo? Indique su función.
5. Significado de los conceptos: gen, alelo, cromosoma, homocigoto, heterocigoto, locus,
fenotipo, genotipo, cruza monohíbrida y dihíbrida.
6. Realizar diagramas que ejemplifiquen la primera y la segunda ley de Mendel, indicando la
frecuencia genotípica y fenotípica de la F1 y F2.
7. ¿Cómo afecta la temperatura la duración del ciclo de vida de este insecto?
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Desarrollo de la práctica

Preparación del medio de cultivo

En un recipiente de peltre o aluminio colocar 200 mL de agua de la llave, adicionar el agar-
agar lentamente y agitando para evitar la formación de grumos (la disolución completa del agar-
agar se logra en el momento en que la mezcla toma un aspecto transparente), póngalos a
calentar en una parrilla eléctrica. Los 100 mL restantes ocúpelos para disolver en frío los
componentes sólidos del medio y lavar los recipientes para incorporar todo al medio. Añadir la
miel mezclando hasta su disolución completa; posteriormente agregar la levadura y harina ya
disueltas en agua, mantenga en agitación hasta ebullición, hervir de 10 a 20 min (tener
cuidado de agitar durante toda la ebullición para que no se pegue el medio al recipiente).

Lavar con agua y jabón los frascos, secarlos perfectamente y humedecer las paredes internas
con solución de nipagín.

Dejar enfriar el medio de cultivo un poco (hasta tolerar con el dorso de la mano) agregue la
solución de nipagín y agitar, inmediatamente después, vaciar el medio de cultivo a los frascos,
vierta en ellos aproximadamente 2 cm de altura de medio en cada frasco, tapar con hule
espuma de 5 cm de espesor.

Manejo de las moscas

Para el examen y selección de las moscas el primer paso es anestesiarlas, esto se hace
poniendo unas gotas de éter en el algodón del eterizador y uniendo la boca de éste a la boca
de la botella de cultivo. Debe hacerse pasar a las moscas de un frasco a otro por movimiento
o por fototactismo; se coloca rápidamente la tapa del eterizador y se mantiene una forma
vertical con la tapa hacia arriba por 30 s. Después de que haya cesado el movimiento de las
moscas son transferidas a la placa del estereoscopio para analizarlas (para transferir las
moscas anestesiadas, ayúdense con el pincel de cerdas finas). En caso de que empiecen a
reaccionar antes de haber terminado el análisis se usa el eterizador en el que se han puesto
unas gotas de éter y se pone sobre el conjunto de moscas por unos segundos. Se debe tener
cuidado para evitar una sobreanestesia que mataría a las moscas.
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Comparación entre cepas mutantes y el tipo silvestre de D. melanogaster

Para el desarrollo de esta práctica se utilizarán las siguientes cepas de Drosophila
melanogaster (Figura 5).

FIGURA 5. Cepas de Drosophila melanogaster

(Tomada de [Link] /genetica/AVG/practicas/Drosophila/[Link]).

Pasar moscas de cada una de las cepas a frascos vacíos diferentes, evitando que las moscas
escapen tapándolos inmediatamente.

Anestesiar a las moscas empleando algodón con unas gotas de éter, una vez que ha cesado
el movimiento de las moscas esperar 20 s. y destapar el frasco, pasar las moscas ya
anestesiadas a una caja petri y colocar éstas en la base de un estereoscopio.

Proceder a comparar el fenotipo de las moscas mutantes con el de las silvestres

manipulándolas con mucho cuidado y con la ayuda de un pincel delgado, también realizar la
comparación de los sexos de las moscas, utilizando los esquemas adjuntos.

En caso de que las moscas se recuperen de la anestesia durante la observación proceder a

reanestesiarlas utilizando un algodón que contenga unas gotas de éter, máximo por tres
ocasiones para no sobreanestesiarlas. Al terminar la observación regresar las moscas al
frasco original.
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Manejo de moscas
Los alumnos deberán anestesiar las moscas como se planteó anteriormente, colocar las
moscas anestesiadas en una caja petri y observar al microscopio, teniendo los cuidados
necesarios mencionados con anterioridad. La diferenciación sexual se realizará con los
criterios siguientes:

Para la identificación y diferenciación del sexo de D. melanogaster, esta especie presenta un

claro dimorfismo sexual (Figura 6):

Características de las hembras:

● Es ligeramente más grande en comparación con el macho.
● Abdomen acabado en punta y más grueso que el del macho.
● Dorso del abdomen con bandas transversales oscuras y separadas unas de otras hasta el
final del mismo.
● Presenta siete bandas a lo ancho de su cuerpo.

Características de los machos:

● Menor tamaño que las hembras.
● Extremo del abdomen redondeado.
● Las últimas bandas transversales del abdomen están fusionadas, lo que da una apariencia
oscura al final del mismo, visible a simple vista.
● Presenta cinco bandas en lo ancho de su cuerpo, ya que las últimas están
fusionadas y se ve una sola obscura.
● Poseen un peine sexual (quetas modificadas) en el primer segmento tarsiano del primer
par de patas (Figura 6).
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FIGURA 6. Morfología de Drosophila melanogaster y

peine sexual del macho (Tomada de
[Link]
Drosophila/[Link]).

Para la primera Ley de Mendel

Los alumnos guiados por el maestro deberán:

● En un frasco con medio de cultivo sembrar 5 hembras silvestres vírgenes y 5 machos
mutantes, rotular con la simbología adecuada la cruza e incluir los datos de la fecha de
siembra y el nombre del alumno con un marcador indeleble.
● En un segundo vial realizar la cruza inversa 10 machos silvestres y 10 hembras mutantes,
rotular con la simbología adecuada la cruza e incluir la fecha de siembra y el nombre del
alumno con marcador indeleble.
● Mantener los cultivos a temperatura constante de 25°C, anotar cuando se observen los
huevos sobre el medio, las larvas, las pupas y los adultos. Cuando se tengan larvas, sacar
y sacrificar a los progenitores.
● Cuando emerjan todas las moscas de los cultivos (F1), observarlas al estereoscopio contar
y anotar el número de hembras y machos y el fenotipo que presenten.
● Sembrar 10 parejas de la generación obtenida en frascos con medio de cultivo nuevo.
Cuando se obtengan los adultos de la segunda generación (F2) observarlas, contar y anotar
el número de hembras y machos de cada fenotipo.
● Elaborar el reporte de la práctica.

Para la segunda Ley de Mendel

● En un frasco con medio de cultivo, sembrar 5 hembras silvestres vírgenes Ebony con alas
vestigiales y 5 machos silvestres. Rotular con la simbología adecuada la cruza e incluir la
fecha de siembra y el nombre del alumno con marcador indeleble.
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● En un segundo frasco realiza la cruza inversa sembrar 10 machos Ebony con alas
vestigiales y 10 hembras silvestres. Rotular con la simbología adecuada la cruza e incluir
los datos de la fecha de siembra y el nombre del alumno con marcador indeleble.
● Mantener los cultivos a temperatura constante de 25°C, anotar cuando se observen los
huevos sobre el medio, las larvas, las pupas y los adultos. Cuando se tengan larvas, sacar
y sacrificar a los progenitores.
● Cuando emerjan todas las moscas de los cultivos (F1) observarlas al estereoscopio contar
y anotar el número de hembras y machos y el fenotipo que presenten.
● Sembrar 5 parejas de la generación obtenida en frascos con medio de cultivo nuevo.
Cuando se obtengan los adultos de la segunda generación (F2) observarlas, contar y anotar
el número de hembras y machos de cada fenotipo.
● Elaborar el reporte de la práctica

Para herencia ligada al sexo

● Realizar una cruza utilizando 10 hembras vírgenes normales y 10 machos con ojos blancos.
● Al quinto día eliminar a los progenitores y esperar a que emerja la F1.
● Observar los fenotipos de las hembras y de los machos de la F1 y anotar sus observaciones
en las hojas de registro.
● Colocar en un frasco con medio de cultivo nuevo toda la F1.
● Al quinto día eliminar a los progenitores y esperar que emerja la F2. Observar con ayuda
del estereoscopio, los fenotipos de las hembras y de los machos.
● Anotar las observaciones en la hoja de registro.

RESULTADOS
Con base a las cepas trabajadas en el laboratorio conteste las siguientes preguntas:
● Registre las diferencias fenotípicas de las cepas mutantes y tipo silvestre observadas.
● Registre las características fenotípicas que permiten diferenciar el sexo de las moscas.
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● Esquematice de las moscas observadas, las características fenotípicas que permiten

diferenciar cepas mutantes y el sexo de las mismas.
● Esquematice las moscas observadas, anotar las características fenotípicas que permiten
diferenciar las cepas mutantes y el sexo de las mismas.

Reporte el resultado de las cruzas de la siguiente forma:

Actividad Fecha

Cruza progenitora

Retirar a los progenitores

Emerge F1

Sembrar F1 x F1

Retirar a los progenitores

Emerge F2
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GUÍA DE CRUZAS EN EL LABORATORIO

Escriba en los espacios vacíos con la nomenclatura adecuada el producto de cruza
monohíbrida.

P ♂____________ x ♀___________
Fenotipo Fenotipo

Genotipo ____________ x ___________

Gametos

Genotipo F1 __________________

Fenotipo __________________

F1 X F1 ♂____________ x ♀___________
Fenotipo Fenotipo

Gametos
1 2 1 2
Cuadro de Punnett
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♂
♀ 1 2

Escriba en los espacios vacíos con la nomenclatura adecuada el producto de cruza dihíbrida.

P ♂____________ x ♀___________
Fenotipo Fenotipo

Genotipo ____________ x ___________

Gametos

Genotipo F1 __________________

Fenotipo __________________

F1 X F1 ♂____________ x ♀___________
Fenotipo Fenotipo
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Gametos
1 2 3 4 1 2 3 4

Cuadro de Punnett

♂
♀ 1 2 3 4

4
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BIBLIOGRAFÍA
Bruce, A., Bray, D., Hopkin, K., Lewis, J., y Johnson, A. (2011). Introducción a la Biología
Celular. (3a ed.), Buenos Aires, Argentina; Editorial Médica Panamericana.
Demerec, M., Petersen, B., y Féliz, R. (1975). Guía de Drosophila: introducción a la
genética y citología de Drosophila melanogaster. D.F., México; Instituto Nacional de
Energía Nuclear.
Pierce, B. (2009). Genética: Un enfoque conceptual. (3a ed.), Madrid, España; Editorial
Médica Panamericana.
Valpuesta, J. (2008). A la búsqueda del secreto de la vida: Una breve historia de la
Biología Molecular. Madrid, España; Editorial Hélice.
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PRÁCTICA 2.
AISLAMIENTO, PURIFICACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE ADN
OBJETIVO GENERAL

 Obtener, purificar e identificar el ácido desoxirribonucleico (ADN) de una muestra de

material vegetal seco, mediante una técnica sencilla y de fácil aplicación.

FUNDAMENTO TEÓRICO
El ácido desoxirribonucleico (DNA por sus siglas
en inglés) fue aislado por primera vez en 1869
por Miescher, desde entonces ha sido objeto de
múltiples investigaciones, es un biopolímero,
que por diversos estudios fisicoquímicos ha
demostrado su elevado peso molecular, en
donde las unidades que se repiten son
nucleótidos, éstos están formados por una base
nitrogenada (adenina, guanina, timina y
citosina), ácido fosfórico y un azúcar, en este
caso desoxi-D-ribosa. Una de las propiedades
que destacan al ADN es su elevada viscosidad FIGURA 1. Watson y Crick
(Tomada de [Link]
en soluciones acuosas, así como su fragilidad
(Hardin, 2001).

En cuanto a la estructura del ADN, Watson y Crick (Figura1) en 1953, propusieron un modelo
constituido por dos cadenas de ADN que se enrollan helicoidalmente en torno a un eje central
común, originando una molécula de cadena doble de unos 20Å de diámetro, las cadenas de
azúcar-fosfato están situadas en la parte externa, las bases púricas y pirimídicas se
encuentran enlazadas por puentes de hidrógeno (Figura 2), en la parte interna de las hélices
solo se complementa el apareamiento de bases entre adenina y timina o entre guanina y
citosina (Figura 3) (Karp, 2013). Los ácidos nucleicos se encuentran en su mayoría asociados
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a nucleoproteínas, complejos formados por proteínas básicas (protaminas e

histaminas).

FIGURA 2. Estructura secundaria FIGURA 3. Apareamiento de bases en

del ADN (Tomada de Karp, 2013). el ADN (Tomada de Krebs et al., 2017).

El ADN de un organismo determinado, es relativamente homogéneo en lo que se refiere a: las

bases que entran en su composición; peso molecular y localización intracelular. En esta
molécula se encuentra almacenada la información genética de las células vivientes (Krebs et
al., 2017). La obtención del ADN se realiza con una metodología basada en las propiedades
fisicoquímicas de éste, de tal forma que no se modifique su estructura y pueda identificarse
mediante la reacción de uno de sus componentes, en este caso la desoxi-D-ribosa con la
difenilamina (Pierce, 2009).
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MATERIAL Y REACTIVOS

Material biológico
• Muestra de material vegetal seco (5 g de germen de trigo).

Materiales diversos
• Espátula
• Vidrio de reloj
• Mortero con pistilo
• Vasos de precipitados de 100 mL
• Vasos de precipitados de 250 mL
• Agitador de vidrio
• Probeta de 50 mL
• Tubos de ensaye de 13 x 100
• Tubos de ensaye de 16 x 150
• Pipetas de 5 mL
• Frasco con tapón esmerilado de 1000 mL
• Pipetas de 1 mL
• Gasa
• Bolsa de plástico nueva
• Guantes de látex
• Termómetro
• Cubrebocas
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REACTIVOS
• Hielo seco
• Buffer CSC
 Citrato de sodio (Na3C6H5O7) 0.15 M.
 Cloruro de sodio (NaCl) 1.5 M.
• Buffer SAS.
 Tris (C4H11NO3) 0.01 M.
 Sacarosa (C12H22O11) 0.30 M.
 Cloruro de Magnesio (MgCl2) 0.005 M.
 Mercaptoetanol (C2H6OS) 0.005 M. (PM 78 d=1.114 gmL-1) *se adiciona al momento
de usar el buffer.
• EDTA (C10H16N2O8) Salino pH 8.0
 EDTA (C10H16N2O8) 0.1 M.
 NaCl 0.15 M.
• TRIS 0.4 M. pH 8.5
• Lauril sulfato de sodio (CH3(CH2)10CH2(OCH2CH2)nOSO3Na) al 4% en agua P/V
• Etanol (C2H5OH) 96º frío
• DSC Dilución 1:100 del buffer CSC
• Cloruro de sodio (NaCl)
• Mezcla Sevag
 Cloroformo (CHCl3) 24 partes
 Alcohol isoamílico (C5H12O) 1 parte
• Ácido tricloroacético (C2HCl3O2) al 10%
• Difenilamina (C12H11N)
Disolver 1.5 g. de difenilamina en 100 mL de ácido acético glacial (CH3COOH),
agregar 1.5 mL de ácido sulfúrico (H2SO4) concentrado. Guardar en frasco ámbar
y en la oscuridad.
EQUIPO
• Centrífuga clínica
• Parrilla eléctrica
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• Balanza de dos platos

• Balanza analítica

SERVICIOS
• Agua
• Vacío
• Gas
• Energía eléctrica
• Campanas de extracción
• Extractores de ventilación
• Tarjas de lavado
• Extintores
• Regaderas de seguridad
• Gavetas
• Mesas de trabajo
• Ventanas para la ventilación
• Botiquín de emergencia
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PROCEDIMIENTO

Actividades previas
El alumno realizará una investigación bibliográfica sobre los siguientes puntos, antes del
desarrollo de la práctica.
1. ¿Qué azúcar forma parte de los ácidos nucleicos?
2. ¿Cuáles son las bases nitrogenadas características del ADN?
3. ¿Cómo está formado un nucleótido?
4. ¿Cómo se aparean las bases nitrogenadas en el ADN?
5. ¿Dónde se localiza el ADN de una célula eucariótica?
6. ¿Cómo se puede producir la desnaturalización del ADN?
7. ¿Cuáles son las precauciones que se deben tomar en cuenta para obtener el ADN?
8. Describa la estructura primaria y secundaria del ADN.

Desarrollo de la práctica
● Se recomienda manejar siempre la muestra con guantes y usar el cubrebocas
durante toda la extracción.
● Macerar 5 g de germen de trigo o material vegetal seco en un mortero, agregando
pequeños trozos de hielo seco hasta homogeneizar finamente el material (apariencia de arena
de mar).
● Pasar el material a un vaso de precipitados de 100 mL y adicionar lentamente 30 mL
de buffer SAS y mantener agitando, una vez que está todo el material húmedo, agregar un
trozo pequeño de hielo seco muy fragmentado y mezclar, dejar congelar durante 10 minutos.
Transcurrido ese tiempo descongelar en baño maría a 30°C.
● Una vez descongelado el material, pasar éste homogeneizado a través de una gasa
doble, que se encuentre dentro de una bolsa de plástico, que tenga un pequeño orificio en
una de las esquinas, a través de éste exprimir el material de la gasa y recolectar el filtrado en
un tubo.
● Centrifugar el filtrado a 3000 rpm durante 5 min.
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● Desechar el sobrenadante y resuspender el botón

en 5 mL de TRIS 0.4 M., después añadir 5 mL de lauril
sulfato de sodio y homogeneizar suavemente, agregar 0.5
mL de EDTA salino y por último adicionar 1 mL de CSC.
● Vaciar el contenido del tubo lentamente a un vaso
de precipitados de 250 mL que contenga 50 mL de etanol
frío (en baño de hielo). El ADN asciende como FIGURA 4. ADN precipitado
una nata blanca (Figura 4). (Figura: Carlos Bautista).
● Colectar con la ayuda de una varilla esta nata blanca
y transfiérala a un vaso de precipitado de 100 mL, eliminar el excedente de alcohol con un
papel filtro.
● Disolver el ADN en 40 mL de DSC (agregar la cantidad necesaria de NaCl para que
estos 40 mL queden a una concentración 1 M. de NaCl, ecuerde que el DSC, es una dilución
del CSC 1:100 por lo tanto ya existe NaCl en ella, considérelo para su cálculo).
● Añadir 40 mL de la mezcla Sevag y en un frasco con tapón esmerilado agitar durante
10 minutos, haciendo chocar suavemente el contenido con las paredes del frasco.
● Centrifugar el material a 3000 rpm durante 5 minutos; se
obtienen 3 fases, en la superior se encuentra el ADN, en la
intermedia las proteínas histonas y no histonas (que se
encontraba asociada al ADN) y en la fase inferior translúcida la
mezcla Sevag (Figura 5).
● Colecte en un vaso de precipitados la dos capas
superiores de todos los tubos, ahora vierta lentamente lo
colectado a otro vaso de precipitados que contenga 50 mL de
FIGURA 5. Formación de tres fases
etanol frío (en baño de hielo). (Figura: Carlos Bautista).

Colectar el ADN libre de proteína con una varilla de vidrio sobre un vidrio de reloj y
elimine el exceso de alcohol con un papel filtro. Obtenga por diferencia el peso del ADN.
Identificación
● Depositar aproximadamente la mitad del ADN en un tubo de 16 x 150, agregar 1 mL
de ácido tricloroacético al 10%, calentar en baño maría a ebullición durante 15 minutos, tape
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la boca del tubo con aluminio para evitar en lo posible la evaporación, en éste hidrolizado
estará presente la desoxirribosa libre, de tal forma que es posible identificarla.
● Prepare un tubo testigo similar al descrito en el punto anterior, sustituya el ADN por 1
mL de agua. Dé el mismo tratamiento a ambos tubos simultáneamente. Márquelos para poder
identificarlos.
● Al término del calentamiento agregue a cada tubo 3 mL del reactivo de difenilamina.
● Calentar ambos tubos en baño de agua hirviendo durante 15 minutos.
● Compare la coloración que obtuvo en los tubos.

RESULTADOS

Deberá incluir en el informe:

● La estructura y función del ADN, recupere datos históricamente importantes.
● Describa las reacciones que ocurren durante la identificación.
● Indique si la reacción del hidrolizado de ADN con la difenilamina fue positiva o negativa
y explique. Esquematice el resultado.
● Indique el porcentaje de ADN obtenido por la diferencia del peso, con relación a los 5
gramos de germen con los que inició la práctica.
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BIBLIOGRAFÍA

Hardin, C. (2001). Cloning, gene expression, and protein purification: experimental

procedures and process Rationale. New York, USA; Oxford University Press
Incorporated.
Karp, G. (2013). Cell and Molecular Biology: Concepts and Experiments . (7 a ed.), New
York, USA; Wiley.
Krebs, J., Goldstein, E., y Kilpatrick, S. (2017). Lewin’s GENES XII. New York, USA;
Jones and Bartlett Publishers.
Pierce, B. (2009). Genética: Un enfoque conceptual. (3a ed.), Madrid, España; Editorial
Médica Panamericana.
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PRÁCTICA 3.
CROMOSOMAS GIGANTES

OBJETIVOS GENERALES

 Elaborar preparaciones citológicas de glándulas salivales de Drosophila

melanogaster.
 Identificar los cromosomas gigantes de Drosophila melanogaster utilizando
preparaciones citológicas elaboradas por el alumno.
 Analizar la importancia de los cromosomas gigantes en los estudios de Genética.

FUNDAMENTO TEÓRICO

La presencia de cromosomas gigantes es un fenómeno que se presenta en la naturaleza en

casos muy específicos, de ésta manera se han identificado dos tipos:

1. Los cromosomas gigantes plumulados o plumosos (Figura 1) presentes en ovocitos de

anfibios, denominados así por su forma evidenciada al microscopio.
2. Los cromosomas politénicos se han identificado en insectos de Chironomus y en
dípteros, específicamente en la etapa larvaria (Bruce et al., 2002); como el material
biológico que se utilizara en esta práctica.

En 1881, E. G. Balbiani describió unas estructuras en forma de bandas en los núcleos de un

insecto Chironomus, sin que esta observación tuviera mayor relevancia.

En 1884, J. B. Carnoy confirmó los hallazgos hechos por Balbiani. En 1933, T. S. Painter
identificó los cromosomas politénicos en glándulas salivales de Drosophila melanogaster. En
1934, Bridges hizo extensos y detallados estudios de los cromosomas politénicos,
correlacionando su estructura con el genoma de la mosca.
Los cromosomas gigantes son fácilmente observables en Drosophila melanogaster,
específicamente en las células interfásicas de las glándulas salivales de larvas de tercer
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estadio, presentando un mayor diámetro y una mayor longitud que los cromosomas
metafásicos. Aunque cabe hacer mención que los cromosomas gigantes se pueden encontrar
en algunas otras estructuras de la larva de tercer estadio (Figura 2).

FIGURA 1. Cromosomas plumosos (Tomada de Bruce et al., 2002).

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FIGURA 2. Larva de Drosophila melanogaster en tercer estadio

(Tomada y modificada de Gilbet y Barresi, 2016)

Los cromosomas gigantes politénicos son producto de un proceso llamado endomitosis, que
en la actualidad se denomina endoautoreplicación, el cual consiste en lo siguiente: los
cromosomas normales inician una serie de duplicaciones sin que éstas se acompañen de
división celular, con lo cual el material genético neoformado se va acumulando a los lados de
los cromosomas originales en perfecta concordancia, dando la apariencia de un cable con
gran cantidad de filamentos (Demerec, 1975).

Derivado del acomodo ya mencionado encontramos la presencia dentro de estos cromosomas

de bandas obscuras, las que denotan la presencia de gran cantidad de ADN, además de que
son sitios específicos de asentamiento invariable del locus génico, por lo cual la longitud de
cada banda variará de acuerdo a la información génica que contenga; las interbandas claras
denotan una escasa cantidad de ADN. En algunos sitios del cromosoma se encuentran
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abultamientos llamados anillos de Balbiani o Puffs y son sitios de intensa síntesis de ARN
(Figura 3).

FIGURA 3. Anillos de Balbiani o Puffs

(Tomada de [Link]

Las siguientes son características de los cromosomas gigantes de Drosophila melanogaster:

La forma y el tamaño son totalmente diferentes de los correspondientes cromosomas
metafásicos (Figura 4). Son cromosomas politénicos, producto de una serie de nueve ciclos
de replicación. Están formados por aproximadamente 1024 filamentos. Presentan alrededor
de 5000 bandas que representan todo el genoma de la mosca. Su estudio ha permitido lograr
grandes avances en citogenética (Gilbert y Barresi, 2016).

El tamaño del cromosoma facilita el análisis de secuencia de bandas, comparando el patrón

de bandas de un individuo con el bandeo normal y las diferencias que se hallan pueden
correlacionarse con las diferencias fenotípicas que se detectan (Figura 5).
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FIGURA 4. Comparación entre cromosomas gigantes y metafásicos (Tomada de Gilbet y

Barresi, 2016).
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A B C

FIGURA 5. Cromosomas gigantes: A) teñido con acetorceína.

(Foto: Raúl Zavala). B) y C) Teñido con acetocarmín (Fotos: Itzen Aguiñiga).

El método de “aplastado” (squash) y la tinción con colorantes básicos permiten obtener

preparaciones citológicas adecuadas para estudios citogenéticos. Las glándulas salivales de
Drosophila melanogaster, representan un modelo valioso para la observación de los
cromosomas gigantes.

MATERIAL Y REACTIVOS

Material biológico
• Larvas de tercer estadio de Drosophila melanogaster

Materiales diversos
• Varilla de vidrio
• Papel filtro
• Papel seda
• Cubreobjetos
• Portaobjetos
• Cajas petri
• Agujas de disección
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REACTIVOS
• Ácido acético (CH3COOH) al 30% v/v
• Aceite de inmersión
• Sellador de parafina para las preparaciones temporales
• Solución colorante de acetorceína (C28H24N2O7)
• Solución colorante de acetocarmín (C22H20O13)

EQUIPO
• Microscopio óptico
• Microscopio estereoscópico

SERVICIOS
• Agua
• Vacío
• Gas
• Energía eléctrica
• Campanas de extracción
• Extractores de ventilación
• Tarjas de lavado
• Extintores
• Regaderas de seguridad
• Gavetas
• Mesas de trabajo
• Extractores generales para la ventilación
• Botiquín de emergencia

PROCEDIMIENTO

Actividades previas
El alumno realizará una investigación bibliográfica sobre los siguientes puntos, antes del
desarrollo de la práctica.
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1. ¿Qué son los discos imaginales y cuál es su importancia?

2. ¿Cómo y porqué se forman los cromosomas gigantes en Drosophila melanogaster?
3. ¿Por qué se obtienen las glándulas salivales durante el tercer estadio larvario y no en
otros?

Desarrollo de la práctica
● Coloque la larva de tercer estadio en un portaobjetos limpio y agregue una gota de
ácido acético al 30% (Nota: El color de las larvas elegidas debe ser blanco y éstas deben de
tener movilidad activa).
● Diseccione con cuidado en el estereoscopio, utilizando las agujas de disección para
obtener las glándulas salivales.
● Con una de las agujas fije la larva firmemente por la parte media, la otra aguja
colóquela detrás de las partes bucales para desprender la cabeza. Las glándulas por lo
general son expulsadas de su sitio con el movimiento de decapitación. (Nota: Las glándulas
salivales son un par de bolsas muy transparentes).
● Retire del portaobjetos las partes quitinosas y el resto del cuerpo de la larva.
● Macere las glándulas utilizando la punta de la aguja de disección, teniendo cuidado de
no macerar demasiado.
● Agregue una gota de colorante sobre el material y remueva para que entre en contacto
con él, espere durante 5 min, no permita que la preparación se seque y si esto sucede añada
otra gota de colorante.
● Coloque un cubreobjetos limpio sobre el material y con la goma de un lápiz presione
ligeramente en forma vertical para hacer el squash.
● Coloque la preparación con el cubreobjetos hacia abajo en medio de un círculo de
papel filtro doblado por la mitad.
● Presione firmemente con la yema del dedo pulgar evitando movimientos laterales del
cubreobjetos.
● Observe las preparaciones al microscopio para determinar si se logró una buena
separación y coloración de cromosomas. (Notas: Se deberá observar, en una buena
preparación, los cromosomas como estructuras definidas, en caso de duda consulte a su
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asesor. Si la separación de los cromosomas no fue la adecuada, deberá presionar

nuevamente la preparación. Si la tinción no fue adecuada, deje actuar más tiempo el
colorante).
● Selle los bordes del cubreobjetos, utilizando para tal fin el sellador temporal de
parafina, caliente la aguja de disección con la ayuda de un encendedor y funda el sellador,
tome una gota de éste y extiéndala en los bordes del cubreobjetos a fin de evitar que el
montaje se evapore rápidamente.
● Observe al microscopio la preparación y localice los cromosomas gigantes, poniendo
especial interés en su morfología y la presencia de bandas e interbandas a lo largo del cuerpo
cromosómico (Figura 5).
● Guarde si se requiere las preparaciones temporales en una caja de Petri con papel
filtro impregnado en ácido acético al 30% y bajo refrigeración. Así almacenadas las
preparaciones pueden durar en buen estado de 4 a 5 días.

RESULTADOS

Esquematice los cromosomas observados e identificados, haciendo notar la presencia de

bandas, interbandas y puffs.

BIBLIOGRAFÍA

Bruce, A., Bray, D., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., y Watson, D. (2002). Biología
Molecular de la Célula. (3ª ed.), Barcelona, España; Omega.
Demerec, M., Petersen, B., y Féliz, R. (1975). Guía de Drosophila: introducción a la
genética y citología de Drosophila melanogaster. D.F., México; Instituto Nacional de
Energía Nuclear.
Gilbert, S., y Barresi, M. (2016). Developmental Biology. (11ª ed.), New York, USA;
Sinauer Associates Inc.
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PRÁCTICA 4.
OBSERVACIÓN DE CROMATINA SEXUAL

OBJETIVOS GENERALES

 Determinar citológicamente el sexo de un individuo mediante la observación de las

laminillas histológicas.
 Analizar sangre y epitelio bucal para identificar la cromatina sexual.
 Aplicar diferentes métodos para elaborar laminillas en las que identifique la cromatina
sexual.

FUNDAMENTO TEÓRICO

La cromatina sexual se deriva de un

cromosoma “X” de origen materno o
paterno, condensado precozmente durante
el desarrollo embrionario femenino normal,
de manera aleatoria en cada una de las
células que componen a dicho embrión
(Bruce et al., 2002); a partir de esto las
células hijas resultantes seguirán
condensando el mismo cromosoma “X” de
su progenitora (Figura 1). El cromosoma “X”
único de las células masculinas normales
no se inactiva.

FIGURA 1. Condensación del

cromosoma X
(Tomada de Bruce et al., 2002).
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En 1923, Painter demostró citológicamente la existencia de los

cromosomas X y Y en el humano. En 1949, Barr y Bertram
consecuencia de una serendipia descubrieron a la cromatina sexual
en neuronas interfásicas de gato, en hembras y no en machos. En
1959, Kaplan y Kinosita demostraron que la cromatina sexual
corresponde a un solo cromosoma “X” condensado; en 1961 Mary
Lyon propuso su hipótesis de la cual los puntos más importantes son:

a) El cromosoma “X” condensado es genéticamente inactivo, b) La

primera inactivación del cromosoma “X” materno o paterno es al azar
en etapa de blastocisto, c) Una vez establecida la inactivación el mismo
cromosoma “X” (paterno o materno) seguirá inactivándose en las
células descendientes generando un mosaico (Figura 2) (Del Castillo
et al., 2012).
De lo anterior se deduce que la inactivación del cromosoma “X” en FIGURA 2. Condensación
la hembra un corpúsculo de Barr tiene como consecuencia una del cromosoma X (Tomada
de Eynard et al., 2008).
compensación de dosis cromosómica en relación con el macho (sin
corpúsculo de Barr) (Eynard et al., 2008).

La cromatina sexual se encuentra en los núcleos interfásicos de las células y puede ocupar
diferentes posiciones dentro de éstos dependiendo del tipo de tejido. En las células de tejido
epitelial de la mucosa bucal se encuentra pegado a la membrana interna del núcleo (Figura
3). En un frotis sanguíneo se puede identificar en los leucocitos Neutrófilos o
polimorfonucleares en forma de palillo de tambor (Drumstick) por su forma como una
prolongación de uno de los lóbulos de dichas células sanguíneas (Figura 4). También puede
observarse fácilmente en preparaciones citológicas de raíz de cabello y en neuronas
(suspendida en el jugo nuclear) donde originalmente fue identificada. En general se observa
en cualquier tejido cuyas células tengan núcleos grandes y con cromatina dispersa (Figura 5)
(Ahn y Lee, 2008).
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FIGURA 3. Célula epitelial (Tomada de [Link]. FIGURA 4. Células polimorfonucleares

(Tomada de McDonald, 1989).
es/MaterialesEducativos/biologia/nucleo
/ [Link]).

La fórmula para determinar el número de corpúsculos de Barr es la siguiente:

N. Barr = N. “X” – 1 (Cuadro 1).

Donde N. Barr es = a número de corpúsculos de Barr

y N. “X” = a número de cromosomas “X”.
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45, X
Cromatina X
46, XY
ausente
47, XYY

46, XX
Una cromatina
47, XXY
X
48, XXYY

47, XXX
Dos cromatina
48, XXXY
X
49, XXXYY

Tres cromatina 48, XXXX

X 49, XXXXY

Cuatro
49, XXXXX
cromatina X

CUADRO 1. Relación entre el número de cromatinas X y el número de cromosomas X en

una célula.
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FIGURA 5. Células epiteliales masculinas y femeninas, donde se observa la cromatina

sexual condensada (Tomada de [Link]

En las células con dos cromosomas X o más, sólo uno de ellos se encuentra laxo y disperso
en el núcleo mientras que los restantes se encuentran en estado condensado por lo que se
tiñen más intensamente, a los individuos que lo presentan se les denomina cromatinas
positivas (Cuadro 1).

FUNDAMENTO DE LA TÉCNICA

La sexocromatina es un método diagnóstico clínico específico para determinar aberraciones

cromosómicas de tipo numérico ligadas a cromosoma sexual (Cromosoma “X”); por lo tanto,
se pueden determinar síndromes como Turner, Superhembra, Klinefelter entre otros.

Para el estudio de la cromatina sexual, se utiliza un tejido de fácil obtención (epitelio de carrillo
bucal y frotis sanguíneo), un ulterior tratamiento con un fijador, el cual tiene por objeto
preservar las estructuras con un mínimo de alteraciones, seguido del uso de un colorante
mixto que permite teñir tanto las estructuras cromosómicas de carácter ácido, como el
citoplasma de carácter básico.

MATERIAL Y REACTIVOS
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Material biológico
• Raspado de la mucosa bucal (células de descamación)
• Gotas de sangre obtenidas por punción capilar

Materiales diversos
• Portaobjetos
• Cajas Petri
• Probeta de 25 mL
• Pipeta de 10 mL
• Abatelenguas
• Varilla de vidrio
• Papel seda
• Lancetas estériles
• Cámara de tinción

REACTIVOS
• Etanol (C2H5OH) al 70%
• Solución colorante Giemsa (C14H14ClN3S) diluido 1:10 (V/V)
• Solución colorante de Wright
• Alcohol metílico (CH3OH)
• Solución buffer de fosfatos pH. 7
• Aceite de Inmersión

EQUIPO
• Microscopio óptico

SERVICIOS
• Agua
• Vacío
• Gas
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• Energía eléctrica
• Campanas de extracción
• Extractores de ventilación
• Tarjas de lavado
• Extintores
• Regaderas de seguridad
• Gavetas
• Mesas de trabajo
• Ventanas para la ventilación
• Botiquín de emergencia

PROCEDIMIENTO

Actividades previas
El alumno realizará una investigación bibliográfica sobre los siguientes puntos, antes del
desarrollo de la práctica.

1. Explique si el cromosoma “X” se condensa totalmente o no.

2. Defina el término “compensación de dosis” mencionado en el texto.
3. Describa brevemente los síndromes de Turner, Superhembra y Klinefelter.

Desarrollo de la práctica
Métodos de tinción de células epiteliales con Giemsa.
● Enjuagar la boca repetidas veces con agua y raspar la mucosa interna de la mejilla
con un abatelenguas, desechar este primer raspado por el alto contenido de bacterias.
● Repetir la operación y extender la muestra sobre un portaobjetos.
● Dejar secar al aire.
● Colocar el porta objetos en una caja Petri que contenga alcohol metílico para su fijación
durante 5 min.
● Escurrir el exceso de alcohol metílico.
● Dejar secar al aire.
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● Pasar el portaobjetos a una cámara de tinción que contenga Giemsa diluida 1:10 (V/V)
para su tinción por 15 a 20 min.
● Lavar la preparación al chorro de agua y dejar secar al aire.
● Observar las preparaciones al microscopio a 10X, 40X y 100X; localizar las células
epiteliales, poniendo especial interés en la cromatina. En mujeres normales el número
promedio de células de frotis bucales con corpúsculos de Barr es de 18-60 %.

Nota: Una buena preparación se observa libre de bacterias y en ella las células deben verse
en monocapa y la cromatina sexual aparece como una estructura más teñida pegada a la cara
interna de la membrana nuclear y que no desaparece al mover el tornillo micrométrico del
microscopio (Figura 3).

Método de tinción para frotis sanguíneo con Wright.

● Calentar la yema de los dedos con fricción ligera y limpiar con alcohol al 70%, para
obtener una muestra adecuada de sangre capilar.
● Dejar secar la yema del dedo y con una lanceta estéril, picar una sola vez firme y
rápidamente. No presionar el dedo para sacar la sangre, ésta debe fluir libremente.

● Eliminar las 2 primeras gotas de sangre y depositar la tercera en el extremo de un

portaobjetos.
● Realizar el frotis. Consultar con su asesor.
● Dejar secar al aire la preparación.
● Añadir 3 a 5 gotas de colorante Wright, teñir durante 3 min sin dejar secar el colorante,
y añadir sobre el colorante la misma proporción de solución buffer durante 7 min más. Sin
dejar secar la muestra durante el tiempo de tinción.
● Lavar la preparación al chorro de agua y secar al aire.
● Observar las preparaciones al microscopio a 10X, 40X y 100X localizar los neutrófilos
(polimorfonucleares) poniendo especial interés en los palillos de tambor (Drumstick).
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Nota: La cromatina sexual se observa como una prolongación del núcleo del neutrófilo (Figura
4). En mujeres normales el promedio calculado de polimorfonucleares con palillo de tambor
es de 3 de cada 100 células.

RESULTADOS

Dibuje las células epiteliales observadas, señalando las estructuras y la cromatina sexual, si
la identificó.

Dibuje los polimorfonucleares (neutrófilos) observados señalando las estructuras y los palillos
de tambor, si los identificó.

BIBLIOGRAFÍA

Ahn, J., y Lee, J. (2008). X chromosome: X inactivation. Nature Education 1(1):24.

Bruce, A., Bray, D., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., y Watson, D. (2002). Biología
Molecular de la Célula. (3ª ed.), Barcelona, España; Omega.
Eynard, E., Valentich, M., y Rovasio, R. (2008). Histología y embriología del ser humano:
bases celulares y moleculares. (4ª ed.), Buenos Aires, Argentina; Editorial Médica
Panamericana.
Del Castillo, V., Uranga, R., y Zafra, G. (2012). Genética Clínica. D.F., México; El Manual
Moderno.
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PRÁCTICA 5.
OBSERVACIÓN DE CROMOSOMAS DE MÉDULA ÓSEA DE RATÓN

OBJETIVO GENERAL

 Aplicar una metodología para realizar la observación de cromosomas de ratón, a partir

de un tejido somático en crecimiento activo, en este caso la médula ósea.

FUNDAMENTO TEÓRICO

Ratones, ratas y hámster chino son las especies más comúnmente utilizadas para estudios
de citogenética in vivo. El procedimiento básico es tratar a los animales por varias rutas de
aplicación y tomar muestra de diferentes tejidos después de un intervalo de tiempo apropiado.
Son posibles dos tipos de evaluaciones citogenéticas: el análisis de metafases para
aberraciones cromosómicas y/o la evaluación de la frecuencia de micronúcleos. Ambas
técnicas son comúnmente aplicadas y evaluadas en médula ósea; sin embargo, también son
utilizados órganos como el bazo, riñón, hígado, embriones completos, órganos fetales y
células germinales.

El complemento cromosómico del hámster chino

(2n=22) contiene pares de cromosomas que se
distinguen muy bien lo cual facilita el conteo. El juego
cromosómico de la rata (2n=42), presenta
cromosomas metacéntricos y acrocéntricos,
mientras que los ratones (2n=40) (Figura 1),
únicamente acrocéntricos. Ratas y ratones son
comúnmente utilizados en toxicología, así que los
FIGURA 1. Ratón cepa CD-1
datos de dosificación están disponibles.
(Foto: Elia Roldán).
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Para la mayoría de pruebas se escogen animales jóvenes, maduros sexualmente y se

distribuyen azarosamente en grupos control y tratado. Es prudente utilizar ambos sexos
(machos y hembras), en pruebas citogenéticas de tejidos somáticos. Se incluyen de cuatro a
cinco animales por sexo, dosis, e intervalo de tiempo. Los animales se albergan en cubículos
con aire acondicionado, con ciclos de luz constante y, se les provee de alimento y agua ad
libitum (Adler, 1984; Altamirano et al., 1993; Álvarez y Altamirano, 1999).

Para este estudio de los cromosomas se utilizan células en división, en este caso se elige la
médula ósea por ser un tejido somático en crecimiento activo; la acumulación de células en
metafase se logra inhibiendo la formación del huso acromático con colchicina (Galloway,
2000); el tratamiento hipotónico esparce los cromosomas dentro de la célula y los hace
distinguibles individualmente.

MATERIAL Y REACTIVOS

Material biológico
• Ratones (de dos meses y medio (60 a 75 días) de edad y de 25 a 30 g de peso)

Materiales diversos
• Jeringas de 1 y 5 mL
• Estuche de disección
• Tabla de disección
• Tubos de ensaye de 13 x 100
• Pipetas de 5 y 10 mL
• Portaobjetos desengrasados
• Pipetas Pasteur
• Papel seda

REACTIVOS
• Colchicina (C22H25NO6) al 0.1%
• Solución hipotónica de cloruro de potasio KCl (0.057 M)
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• Solución fijadora. - Mezcla de metanol (CH3OH): ácido acético (CH3COOH) en

proporción 3:1 (V/V) (fría)
• Solución colorante de Giemsa (C14H14ClN3S). - Diluir el Giemsa con agua destilada
1:10 (V/V)
• Aceite de inmersión

EQUIPO
• Centrífuga clínica
• Balanza analítica
• Balanza de dos platos
• Baño maría a 37 °C
• Microscopio óptico
• Vortex (agitador de toque)

SERVICIOS
• Agua
• Vacío
• Gas
• Energía eléctrica
• Campanas de extracción
• Extractores de ventilación
• Tarjas de lavado
• Extintores
• Regaderas de seguridad
• Gavetas
• Mesas de trabajo
• Ventanas para la ventilación
• Botiquín de emergencia
PROCEDIMIENTO

Actividades previas
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El alumno realizará una investigación bibliográfica sobre los siguientes puntos, antes del
desarrollo de la práctica.

1. ¿Qué tipo de colorantes se utilizan para teñir los cromosomas y por qué?
2. ¿Cuál es el mecanismo de acción de los siguientes reactivos?
a. Solución hipotónica de KCI
b. Solución fijadora.
c. Solución de colchicina.
3. Investigar y describir como se elabora el ideograma o cariotipo del ratón.
4. Indique el número cromosómico del ratón.

Desarrollo de la práctica
El procedimiento que a continuación se describe en apego a la NOM-062-ZOO-1999.
Especificaciones técnicas para la producción, cuidado y uso de animales de laboratorio.
● Inyectar al ratón vía intraperitoneal con colchicina al 0.1% (0.1 mL por cada 10 g. de
peso) (Nota: La solución de colchicina debe ser preparada con agua destilada).
● Sacrificar al animal por dislocación cervical, después de una hora.
● Colocar al animal en la tabla de disección y diseccionar los dos fémures.
● Cortar las cabezas femorales. (Nota: Cada fémur se corta por sus dos extremos).
● Extraer la médula ósea inyectando 5 mL de solución hipotónica, previamente incubada
a 37° C. por el extremo superior del fémur. El líquido debe fluir a través del hueso de tal forma
que ‘’arrastre’’ la médula ósea. (Nota: La suspensión celular deberá ser recuperada en un tubo
de cónicos o tubo de 13 x 100).
● Colectar la médula ósea en tubos cónicos. Incubar en baño maría a 37°C durante 20
min.
● Transcurrido el tiempo de incubación, centrifugar a 1500 rpm. durante l0 min, desechar
el sobrenadante.
● Agregar lentamente 3 mL de fijador (metanol - ácido acético 3:1 V/V) con agitación
continua.
● Dejar reposar 10 min. (Nota: La primera fijación es un paso crítico; debe evitarse la
formación de grumos. Consulte a su asesor).
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● Centrifugar a 1500 rpm por 10 minutos, desechar el sobrenadante.

● Repetir los 2 pasos anteriores dos veces más.
● Al finalizar la última centrifugación, resuspender el botón celular en 0.5 mL de fijador
limpio y frío.
● En un portaobjetos desengrasado y glaseado, dejar caer con una pipeta Pasteur 3
gotas de la suspensión desde una altura de 80 cm, dejar secar al aire las laminillas. (Nota:
Para desengrasar los portaobjetos, se recomienda sumergirlos en xilol durante 24 h; el
glaseado se logra dejando permanecer los portaobjetos en el refrigerador cuando menos una
hora antes de depositar la muestra).
● Cubrir las laminillas durante 10 min con una solución de colorante Giemsa diluido en
agua, 1:10 (V/V), eliminar el exceso de colorante bajo el chorro de agua, secar al aire las
preparaciones. (Nota: No debe secarse el colorante sobre la preparación durante el tiempo
que dura la tinción, si esto ocurre añada más colorante).
● Observar al microscopio a seco débil, seco fuerte e inmersión. Analizar en metafases
completas y bien extendidas la morfología y el número cromosómico.

RESULTADOS

Indique el número de cromosomas observados por célula.

Esquematice los cromosomas observados e identificados, haciendo notar su tamaño relativo

y la posición del centrómero.

BIBLIOGRAFÍA
Adler, I. (1984). Cytogenetic Test in Mammals. Washington, USA. OIRL PRESS, Oxford.
DC.
Altamirano, M., Álvarez L., y Roldán, E. (1993). Citogenétic and teratogenic effects of
vanadium pentoxide on mice. Medical Science Research, 21:711-713.
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Álvarez, L., y Altamirano, M. (1999). Differential response to induction of

chromosomal aberrations between female and male mice treated with a low dose
of cyclophosphamide. Medical Science Research, 27:193-196.
NOM-062-ZOO-1999. Especificaciones técnicas para la producción, cuidado y uso de
animales de laboratorio.
Galloway, S. (2000). Cytotoxicity and chromosome aberrations in vitro: experience
in industry and the case for an upper limit on toxicity in the aberration assay.
Environmental and Molecular Mutagenesis, 35(3):191-201.
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CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA UNIDAD.

Cada una de las unidades tendrá una mecánica de evaluación independiente que al finalizar
el curso se plasmará en calificaciones específicas por unidad, que deberán ser aprobatorias
para poder exentar de primera y segunda vuelta dicho laboratorio.

REGLAS GENERALES

La asistencia al laboratorio es obligatoria y el alumno deberá de tener por lo menos 80% de

asistencia para poder tener derecho a la calificación correspondiente.

La puntualidad es importante y se dará una tolerancia máxima de 15 min para poder llegar al
laboratorio y tener derecho a la asistencia correspondiente.

El alumno tiene estrictamente prohibido ingerir alimentos y bebidas en el laboratorio.

El alumno tiene la obligación de usar bata durante su permanencia en el laboratorio; no podrá

trabajar sin bata.

Durante una sesión de laboratorio el alumno solo podrá abandonarlo bajo consentimiento del
profesor de laboratorio correspondiente.

En el caso específico de ésta unidad se dará una introducción previa a cada práctica, donde
se tocarán los contenidos más importantes de la teoría y de la fundamentación metodológica,
para iniciar la metodología correspondiente.

Para el trabajo en el laboratorio los alumnos formarán equipos.

Los cuestionarios e informes de las prácticas serán entregados escritos a mano y en un

cuaderno específico para esta unidad, que será revisado por el profesor.
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Al inicio de cada práctica el alumno entregará de manera individual la metodología en un

diagrama de flujo y las actividades previas realizadas incluidas en cada práctica.

Se entregará de manera individual un informe por cada una de las prácticas; con los siguientes
rubros:
a) Título.
b) Introducción.
c) Objetivos.
d) Metodología fundamentada
e) Material y equipo.
f) Resultados.
g) Análisis de resultados.
h) Conclusiones
i) Bibliografía.

La evaluación de la unidad Genética está dada por dos parámetros que son:

Promedio de calificaciones por práctica (5 en total) que a su vez contemplara los siguientes
rubros:

a) Asistencia y puntualidad,
b) Comportamiento y desempeño del alumno en el laboratorio,
c) Entrega de trabajos de laboratorio (cuestionarios, reportes de práctica etc.).

Tendrá un valor de 70% de la calificación de la unidad.

Promedio de calificaciones de exámenes uno por cada una de las prácticas de la unidad (5
prácticas) abarcando teoría y fundamentación metodológica; Tendrán un valor de 30% de la
calificación de la unidad.
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Ambos promedios deberán de ser aprobatorios para obtener la calificación de exención. En

caso contrario el alumno presentará esta unidad en la primera vuelta mediante un examen
global teórico de todas las prácticas la calificación mínima aprobatoria será de 6; en caso de
reprobar ésta, tendrá que presentar en segunda vuelta un examen global teórico práctico que
será la calificación definitiva de la unidad.
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MANEJO DE RESIDUOS

Residuos Peligrosos Biológico-Infecciosos (RPBI)

Son cualquier material como lancetas, guantes, frascos de recolección de muestra, algodón
o cualquier otro que hubiera estado en contacto con sangre, saliva o alguna otra muestra
biológica, principalmente de origen humano o de ratón.
• Etiquetar correctamente el recipiente indicando: fecha, grupo y laboratorio donde se
generó, así como la descripción. Los residuos se deberán separar en las siguientes
categorías: 1) sangre, 2) cultivos y cepas de agentes biológico-infecciosos, 3) patológicos 4)
residuos no anatómicos 5) objetos punzocortantes.
• Los desechos de origen humano como sangre, saliva y semen, primero deberán ser
inactivados con solución comercial de hipoclorito de sodio (cloro), colocados en un recipiente
de vidrio o de plástico rígido debidamente etiquetado y que debe ubicarse en el área asignada
de desechos para ser recogidos por el personal adecuado.
• Los recipientes de los RPBI punzocortantes deberán ser rígidos, de polipropileno color
rojo, resistentes a fracturas y pérdidas de contenido al caerse, tener separador de agujas y
abertura para depósito, con tapa(s), deberán contar con la leyenda que indique “RESIDUOS
PELIGROSOS PUNZOCORTANTES BIOLÓGICO-INFECCIOSOS” y marcados con el
símbolo universal de riesgo biológico.
• Las bolsas deberán ser de polietileno de color rojo traslúcido de calibre mínimo 200 y
de color amarillo traslúcido de calibre mínimo 300, impermeables y libres de cloro, además
deberán estar marcadas con el símbolo universal de riesgo biológico y la leyenda “RESIDUOS
PELIGROSOS BIOLÓGICOINFECCIOSOS”.
• Los desechos de animales rata y/o ratón provenientes de bioterio deberán colocarse
en una bolsa exclusiva y ser trasladados al bioterio para el adecuado manejo final.
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Residuos químicos
Todos los residuos generados durante las diferentes prácticas deberán ser recolectados en
frascos de vidrio, debidamente etiquetados y debe ubicarse en el área asignada de desechos
para ser recogidos por el personal adecuado. En caso de desechos de ácidos deberán ser
neutralizados con una base como bicarbonato de sodio comercial (proporcionado por el
alumno y deberá tenerlo disponible en todo momento).
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UNIDAD 3
BACTERIAS, ALGAS Y HONGOS
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BACTERIAS, ALGAS Y HONGOS

INTRODUCCIÓN DE LA UNIDAD
La Biología estudia los seres vivos, quienes en su conjunto interactúan y constituyen la
biodiversidad como resultado de su historia evolutiva. El alumno en el laboratorio desarrollará
destrezas en el manejo y buen uso de material y equipo. Así como la capacidad para observar
estructuras de organismos unicelulares y pluricelulares.

Como actividades complementarias, el alumno conocerá en campo el hábitat de algas,

hongos y líquenes. También aplicará técnicas de recolecta, preservación de especímenes y
registro de datos. Esta unidad comprende seis prácticas, la sexta y la séptima se refieren al
uso de técnicas microbiológicas básicas, manejo de cultivo, siembra, aislamiento y tinción
diferencial empleadas en bacterias. La octava práctica está dedicada a procariontes
fotosintéticos oxigénicos o cianoprocariotas.

Los primeros eucariotas fotoautótrofos se revisarán en la novena práctica, la cual esta

subdividida para la observación de especímenes de algas verdes de la división Chlorophyta,
algas rojas de la división Rhodophyta y algas pardas de la clase Phaeophyceae división
Heterokontophyta.

La décima práctica comprende una muestra de la diversidad fúngica donde se aplicarán

algunas técnicas microbiológicas de aislamiento y cultivo. Además observarán estructuras
vegetativas y reproductivas de Cigomicetos, Ascomicetos y Basidiomicetos. Para finalizar, en
la undécima práctica se estudiarán los líquenes, la más compleja de las simbiosis entre algas
y hongos, que dan como resultado un talo de composición química particular que tiene
importancia taxonómica y potencial en la medicina y la industria.
OBJETIVOS DE LA UNIDAD
Diferenciar organismos procariontes y los primeros eucariotas mediante el análisis de su
patrón estructural básico con ejemplares representativos de bacterias, algas, hongos y
líquenes.
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PRÁCTICA 6-7.
PREPARACIÓN Y MANEJO DE MEDIOS DE CULTIVO BACTERIANOS Y

AISLAMIENTO, SIEMBRA, TÉCNICA DE TINCIÓN Y OBSERVACIÓN DE

BACTERIAS

OBJETIVO GENERAL
 Adquirir la destreza para elaborar un medio de cultivo, observar y caracterizar células
bacterianas.

OBJETIVOS PARTICULARES
 Preparar un medio de cultivo y esterilizar material para siembra de bacterias.
 Aplicar técnicas de siembra para bacterias.
 Caracterizar las colonias bacterianas.
 Diferenciar las bacterias con la técnica de tinción de Gram.
 Reconocer formas bacterianas.

FUNDAMENTO TEÓRICO

Los microorganismos se pueden encontrar en todos los ambientes, incluidos el suelo, el agua
y el aire. Su papel en la naturaleza es relevante por sus contribuciones a los ciclos
biogeoquímicos, la descomposición de materia orgánica, son importantes simbiontes de
plantas leguminosas por mencionar algunos aspectos ecológicos de relevancia.

La taxonomía de las bacterias es muy compleja debido a que su clasificación se basa en gran
medida en sus procesos metabólicos, lo que implica una serie de pruebas bioquímicas. Sin
embargo, es posible reconocer básicamente cuatro grupos morfológicos: células esféricas o
cocos, bastón o bacilos, espiral o espirilos y con forma de coma llamadas vibriones (Figura
1). Una cepa bacteriana se define como una población de células que descienden de una
sola, que al compartir características comunes puede considerarse como una especie.
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Para el estudio de las bacterias se utilizan técnicas microbiológicas convencionales:

preparación de medios de cultivo, toma de muestras, aislamiento, técnicas de tinción, pruebas
bioquímicas y observación al microscopio. (Bradshaw, 1973; Madigan et al. 2006)

Un medio de cultivo es una mezcla que permite manipular el crecimiento de microorganismos

según su naturaleza. Este medio puede ser líquido (caldo), semisólido o sólido enriquecido
con diversos nutrimentos. Los medios semisólidos y sólidos se preparan con agar, el cual es
un ficocoloide inerte que se extrae de las algas rojas, cuyas propiedades de punto de fusión
permiten manejarlo para diferentes fines.

Los medios de cultivo pueden ser no selectivos y selectivos o diferenciales, los no selectivos
carecen de inhibidores, y sustentan el crecimiento de la mayoría de los microorganismos que
se encuentran en la muestra. Este medio se puede hacer selectivo si se adiciona uno o más
antibióticos o ciertos agentes químicos. (Forbes et al. 2004; Granados y Villaverde, 1997; Vullo
et al., 2000; Washington et al., 2008; Wistreich y Lechtman, 1983)

FIGURA 1. Formas bacterianas recuperado de

[Link]
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MATERIAL Y REACTIVOS
Material biológico
• Cepas bacterianas: Escherichia coli, Bacillus subtilis, etc.
Materiales diversos
• Algodón.
• Gasa.
• Asa bacteriológica.
• Mechero bunsen.
• Termómetro (-10 a 150).
• Papel de estraza.
• Papel aluminio.
• Bandeja de teñido.
• Guantes de látex.
• Vidrio de reloj.
• Etiquetas.
• Abatelenguas.
• Hisopos.
• Papel seda.
• Franela.
• Papel absorbente.
• Pipetas Pasteur.
• Piseta.
• Cubre boca desechable.
• Guantes de asbesto.
• Cajas Petri.
• Matraz Erlenmeyer de 500, 1000 mL.
• Tubos de vidrio capacidad 20 mL con tapón de rosca.
• Portaobjetos y cubreobjetos.
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REACTIVOS
• Aceite de inmersión.
• Agar bacteriológico o medios de cultivo selectivos.
• Solución alcohol (C2H5OH)-acetona (C3H6O) 1:1.
• Solución de cristal violeta (C24H28N3Cl + CH3OH).
• Lugol (I3K + H2O).
• Acetona (C3H6O).
• Safranina (C20H19ClN4 +·Cl-).
• Agua destilada (H2O)

EQUIPO
• Autoclave
• Microscopio estereoscópico
• Microscopio de campo claro
• Incubadora
• Balanza analítica

SERVICIOS
• Agua
• Vacío
• Gas
• Energía eléctrica
• Campanas de extracción
• Extractores de ventilación
• Tarjas de lavado
• Extintores
• Regaderas de seguridad
• Gavetas
• Mesas de trabajo
• Ventanas para la ventilación
• Botiquín de emergencia
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PROCEDIMIENTO

Actividades previas
El alumno realizará una investigación bibliográfica sobre los siguientes puntos, antes del
desarrollo de la práctica.

1. Menciona las características biológicas y morfológicas más importantes de las bacterias.

2. Explique en qué casos se emplean medios de cultivo líquidos y semisólidos.
3. Explique los fundamentos de la esterilización por medio de la autoclave.
4. ¿Cuál es el fundamento de la Tinción de Gram?
5. Explique la técnica de conteo de bacterias por dilución.

Desarrollo de la práctica
Recolección de la muestra
La muestra puede obtenerse de sustratos diversos: exudado faríngeo, alimentos lácteos con
probióticos, agua, o puede ser traída una cepa directamente de algún cepario (se recomienda
el de campus I de la Facultad) que no sea patógena, favor de asegurarse de esto.

Preparación del medio de cultivo

Preparar medio de cultivo correspondiente para un litro (ver instrucciones del fabricante para
su preparación, así como los requerimientos particulares). Generalmente se usan de 15 a 20
g; calcular de 10 a 15 mL por caja o tubo. Siempre se recomienda esterilizar en un matraz del
doble de la capacidad del medio a utilizar. Colocar en la boca del matraz un tapón hecho con
algodón envuelto con gasa de tal forma que quede bien sellada, esto se comprueba al levantar
el matraz sólo por el tapón (Gaviño, 2005).

Esterilización del material y del medio de cultivo

En microbiología, es fundamental emplear técnicas de esterilización y desinfección que
permitan asegurar el trabajo libre de agentes biológicos contaminantes.
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Desinfección
Se utiliza para la limpieza de materiales o superficies inertes y se puede realizar con
desinfectantes (fenol al 5% en agua). Para la limpieza de manos se pueden emplear
antisépticos. En ambos casos se recomienda primero lavar con agua corriente y jabón.

Esterilización
Es importante asegurarnos que el material y medio de cultivo que vamos a utilizar esté libre
de gérmenes que alteren nuestros resultados. Para ello existen distintas técnicas para la
destrucción de cualquier forma de vida: calor seco (flameado, incineración, horno seco) y calor
húmedo (ebullición y vapor a presión). Con el Autoclave (Anexo 1) se esterilizará el matraz
que contiene el medio de cultivo y el material de cristalería previamente envuelto de manera
individual en papel de estraza.

Llenado de cajas y tubos

Se colocan un par de mecheros con una separación de 30 cm entre ellos para delimitar una
zona estéril. Se vierten 10 mL del medio de cultivo en las cajas y en caso de los tubos se
inclinan para aumentar el área de cultivo.
Sembrado bacteriológico o inoculación
Se requiere un asa de inoculación de nicrom o platino, con un extremo insertado en un mango
cilíndrico. La superficie del medio de cultivo en una caja Petri puede ser inoculada con la
muestra por distintas técnicas: punteadura, estría o picadura. El asa debe ser esterilizada a
fuego directo hasta alcanzar una coloración rojo-anaranjada intensa, esperar dentro del área
estéril de los mecheros a que se enfríe, es decir, que retome su color plomizo y tomar la
muestra e inocular. Esto debe hacerse por cada inoculación. Cuide de no quemar ni la muestra
ni el medio de cultivo con el asa todavía caliente. Las colonias aisladas pueden ser entonces
resembradas individualmente a otros medios, para obtener cultivos puros. Cuide de que las
colonias no se encimen para evitar contaminaciones si se quiere realizar una resiembra
(Figura 2).

Incubación
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Hecho el inóculo se procede a la incubación. Los microorganismos difieren en su temperatura

óptima de incubación. La mayoría crecen a 35ºC, pero también puede ser a temperatura
ambiente no obstante se debe tener en cuenta que las fluctuaciones de temperatura pueden
causar problemas en la incubación.
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FIGURA 2. Técnicas de siembra o inoculación (tomada de la

literatura)
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Observación de colonias bacterianas

La valoración de las características de las colonias será mediante la observación del
crecimiento en la superficie de las placas de agar. La inspección se lleva a cabo en el
microscopio estereoscópico observando la superficie del agar para detectar crecimiento
bacteriano. Cada placa debe revisarse cuidadosamente debido a que las muestras iniciales
son generalmente cultivos mixtos que presentan diversos tipos de colonias.

Para caracterizar una colonia de bacterias deben considerar los siguientes aspectos (Figura
3):
● Tamaño: diámetro en milímetros.
● Forma: puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide, con forma de huso
● Elevación: plana, elevada, convexa, pulvinada, umbonada, umbilicada
● Margen (borde de la colonia): entero, ondulado, lobulado, lacerado filamentoso,
enrulado.
● Color: blanco, amarillo, negro, sepia, naranja, otros.
● Superficie: brillante, opaca, lisa, rugosa.
● Densidad: opaca, translúcida, transparente, otras.
● Consistencia: butirosa (como mantequilla), viscosa, membranosa, quebradiza, otras.
● Aspecto: mucoso y seco.
● Tamaño: grande (5 mm), mediana (2-3 mm), pequeña (1-2 mm).
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FIGURA 3. Características de los cultivos de bacterias (Tomado de American Society for

Microbiology. Detroit, Michigan).
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Tinción de la pared celular (Tinción de Gram)

La identificación preliminar de bacterias requiere no solo de la observación de las
características, sino también de su morfología y coloración diferencial de la pared celular.

La estructura de la pared bacteriana tiene una importancia directa y práctica para los
microbiólogos debido a su estructura y composición química que es responsable de la
reacción frente a los reactivos usados en la Tinción de Gram. Esta tinción diferencial divide a
la mayoría de las bacterias en dos grupos: bacterias Gram positivas y bacterias Gram
negativas (Anexo 2).

Caracterización de bacterias

Se refiere a la descripción de la morfología bacteriana (Figura 1):

● Oval o esférica (coco)
● Cilíndrica o en forma de bastón (bacilo)
● Espiral o helicoidal (espirilo)
● Filamentosa
● Formas intermedias de algunos casos anteriores
● Como agrupación bacteriana pueden ser:
● Agrupaciones cocoides (diplococos, estreptococos, estafilococos)
● Agrupaciones bacilares (diplobacilos, estreptobacilos)
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RESULTADOS

Se presentarán características de las principales colonias observadas que se pueden

identificar en forma de cuadros sinópticos que incluyan los esquemas correspondientes.

Ejemplo

MUESTRA FORMA TAMAÑO BORDE ELEVACIÓN COLOR SUPERFICIE

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BIBLIOGRAFÍA

Bradshaw, L. J. (1976). Microbiología de Laboratorio. D.F., México: El Manual Moderno.

Collins, C., y Líen, P. (1990). Métodos Microbiológicos. España: ACRIBIA.

Forbes, B., Sahm, D., y Weissfeld, A. B. (2009). Bailey and Scott. Diagnóstico
Microbiológico. Madrid, España: Medica Panamericana.

Granados, P. y Villaverde, P. (1997). Microbiología. Madrid, España: Thomson

paraninfo.

Madigan, T., Martinoko, M., y Parker, J. (2004). Brock. Biología de los microorganismos.
Madrid, España. Pearson Educación.

Vullo, D. L., Wachsman, M. B., & Alche, L. E. (2000). Microbiología en práctica Manual
de técnicas de laboratorio para la enseñanza de microbiología básica y aplicada.
Argentina: Atlante.

Washington, C. W., Allen, S. D., Janda, W. M., Koneman, E. W., Procop, G. W.,
Schrenckenberger, P. C., Woods, G. L. (2008). Koneman Diagnóstico Microbiológico
Texto y Atlas a color. Madrid, España. Medica Panamericana.

Wistreich, G. A., y Lechtman, M. D. (1983). Prácticas de Laboratorio en Microbiología.

D.F., México. Limusa.
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ANEXO 1. Técnica para utilizar la autoclave.

Resumen de las instrucciones para el manejo de la autoclave:

1. Comprobar el nivel de agua y la carga

2. Atornillar la tapa: apretar las tuercas por parejas diametralmente opuestas, de

forma que la tapa encaje perfectamente sobre la arandela.

3. Abrir la válvula de vapor y encender el gas.

4. Una vez que salga vapor por la válvula, esperar al menos 5 minutos para
expulsar todo el aire y cerrar la válvula.

5. Vigilar el manómetro y la válvula de seguridad. Cuando la válvula deje escapar

vapor, comprobar la presión y disminuir la llama de gas o corriente.

6. Dejar que actué el tiempo requerido, cerrar el gas o desconectar.

7. Esperar a que el manómetro descienda a cero y abrir entonces la llave de

vapor.

8. Esperar 5 minutos y abrir la tapa. Esperar algunos minutos antes de quitar la

carga.

9. Para la esterilización de medios de cultivo de 107 a 121º C durante 10-15

minutos está bien.
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ANEXO 2. Técnica de la tinción de GRAM.

1. Se flamea el asa

2. Toca el centro de la colonia a estudiar con el extremo del asa

3. La porción de la colonia a examinar se emulsifican una gotita de agua o

solución fisiológica en un portaobjeto para dispersar las células bacterianas, permitir
que se seque al aire.

4. Fijar el material al portaobjeto, pasándolo tres o cuatro veces a través de la

llama de un mechero de Bunsen, de modo que el material no se lave durante el
procedimiento de tinción.

5. Colocar el extendido en una bandeja

para teñido, y cubrir la superficie con solución
de cristal violeta.

6. Después de 1 minuto (con algunas

soluciones puede emplearse menos tiempo)
de exposición al colorante cristal violeta, lavar
minuciosamente con agua destilada o buffer.

7. Cubrir el extendido con la solución de

yodo para Gram durante 1 minuto. Lavar
nuevamente con agua.

8. Sostener el extendido entre el pulgar

y el índice, y cubrir la superficie con unas
pocas gotas del decolorante alcohol acetona,
hasta que no se arrastre más violeta. Esto Preparación de un frotis para
lleva usualmente diez segundos o menos. tinción.

9. Lavar con agua corriente y volver a ubicar el extendido sobre la bandeja de

tinción. Colocar sobre la superficie safranina de contraste durante 1 minuto. Lavar con
agua corriente.
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10. Ubicar el extendido en posición vertical en una bandeja de tinción, permitiendo

que se escurra el exceso de agua y el extendido se seque.

11. Examinar el extendido bajo un objetivo de inmersión X100 (aceite). Las

bacterias Gram positivas se tiñen de azul oscuro; las Gram negativas aparecen rosa
pálidas.
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PRÁCTICA 8.
OBSERVACIÓN DE CIANOBACTERIAS

OBJETIVO GENERAL

 Identificar la morfología y reconocer los niveles de organización de las cianobacterias.

OBJETIVOS PARTICULARES

 Adquirir la destreza en la preparación en fresco y semipermanente con gelatina

glicerinada.
 Reconocer caracteres morfológicos de células especializadas (heterocitos y acinetos).
 Adquirir destreza en el uso de claves para la determinación taxonómica.

FUNDAMENTO TEÓRICO

Las cianobacterias, anteriormente conocidas como algas verde-azules o cianofitas por ser
fotosintéticas oxigénicas y presentar niveles de organización y hábitats semejantes a las
algas, son un grupo natural de bacterias muy antiguos. Su registro fósil se remonta al
Precámbrico y son responsables del cambio de la atmósfera primitiva al incrementar las
cantidades de oxígeno, evento que permitió la evolución de los eucariotas.

Carecen de núcleo verdadero y otros organelos de doble membrana y es en el citoplasma

donde se localiza el material genético o ADN dispuesto en fibrillas asociadas a los cuerpos
poliédricos, los cuales contienen carboxisomas que fijan el dióxido de carbono. Son
fotosintéticas, presentan como pigmento fotosintético principal la clorofila a, carotenos y
xantofilas contenidos en lamelas o también llamados tilacoides bacterianos y además
presentan ficobiliproteínas en gránulos o ficobilosomas asociados a los mencionados
tilacoides.
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Existen otras “algas procariotas”, las proclorobacterias (proclorofitas) que, a diferencia de las
cianobacterias, éstas contienen clorofila a y b pero no contienen ficobilinas. Desde el punto
de vista evolutivo, ambas están relacionadas (Madigan et al., 2006).

La pared celular de las cianofitas es similar a las bacterias Gram negativas, lo que indica la
posible relación entre ellas, está formada por peptidoglicanos o mureínas (glicopéptidos,
mucopéptidos) y ácido diaminopimélico exclusivo de los procariotas. Las células están
rodeadas por un mucílago o vaina que las protege contra la desecación, está compuesta de
azúcares neutros como galactosa, glucosa, manosa, rhamnosa, 2-O-metil-D-xilosa, ácido
glucurónico y galacturónico, también puede contener proteínas y fosfatos (Wistreich y
Lechtman, 1983).

La reproducción es principalmente asexual o vegetativa mediante la

producción de: nanocistes, endosporas, exosporas, hormogonios y
hormocistes. Existen dos formas de intercambio genético, llamado
parasexualidad: transducción y conjugación (Lee, 2008). En la
actualidad se han descrito aproximadamente 4500 especies, en 10
órdenes (Guiry y Guiry, 2016). Para su clasificación se consideran
aspectos fisiológicos, reproductivos, morfológicos y hábitat.

Las cianofitas son unicelulares, coloniales, filamentosas y

parénquimas simples (Figura 1). Son acuáticas: agua dulce, salobres
marinas y de ambiente terrestre (Hoeck et al., 1995).
FIGURA 1. Nostoc
sp. (Filamento con
heterocitos).

Las aguas que contienen Fósforo, CO2, Nitrógeno e incremento de temperatura propician el
crecimiento de cianobacterias potencialmente tóxicas, entre ellas: Microcystis, Oscillatoria,
Calothrix, Merismopedia, y Leptolyngbya (Anexo 3).
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MATERIAL Y REACTIVOS

Material biológico
• Preparaciones semipermanentes de cianobacterias, muestras de agua (lago, arroyo,
charca) y raspados de rocas o paredes húmedas que presenten lama

Materiales diversos
• Agujas de disección
• Papel seda
• Pinzas de disección
• Etiquetas
• Franela
• Pipetas Pasteur
• Portaobjetos y portaobjetos
• Caja Petri

REACTIVOS
• Aceite de inmersión
• Gelatina glicerinada

EQUIPO
• Autoclave.
• Microscopio estereoscópico.
• Microscopio de campo claro.

SERVICIOS
• Agua
• Vacío
• Gas
• Energía eléctrica
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• Campanas de extracción
• Extractores de ventilación
• Tarjas de lavado
• Extintores
• Regaderas de seguridad
• Gavetas
• Mesas de trabajo
• Ventanas para la ventilación
• Botiquín de emergencia

PROCEDIMIENTO

Actividades previas
El alumno realizará una investigación bibliográfica sobre los siguientes puntos, antes del
desarrollo de la práctica.

1. ¿Cuáles son los niveles de organización presentes en las cianobacterias?

2. ¿Cuáles son las estructuras de una célula de cianobacteria?
3. ¿Cuál es la función de un acineto, heterociste y hormogonio?
4. ¿Qué es la vaina y cuál es su función?
5. ¿Cuál es el hábitat e importancia económica y ecológica de las cianobacterias?
6. Elabore un glosario de 20 términos de cianobacterias.
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Desarrollo de la práctica
1. Observar las preparaciones semipermanentes que sean proporcionadas por los
profesores.

2. Elaborar preparaciones en fresco:

3. Colocar sobre un portaobjetos una gota de la muestra de agua (usar pipeta Pasteur) y
colocar un cubreobjetos. Observar.

4. La muestra de lama se disgrega con las agujas de disección en una gota de agua
sobre un portaobjetos y colocar un cubreobjetos. Observar.

5. Reconocer los niveles de organización, células especializadas (heterocitos y acinetos),

hormogonios, vaina y tricoma (Anexo 3).

6. Elabore dibujos de lo que observa, indique el aumento del objetivo empleado, nombre
de estructuras.

7. Las preparaciones que resulten interesantes, fijarlas con formol al 4% y montarlas con
gelatina glicerinada (Anexo 4).

8. Utilice la clave para determinar los géneros observados (Anexo 5).

9. Con la ayuda de bibliografía especializada elabore las diagnosis de las especies

observadas.
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RESULTADOS

Elabore un cuadro comparativo con las muestras revisadas. Así como una descripción de
cada género con los caracteres observados, incluya los esquemas correspondientes.

Estructuras
Nivel de Células de
Género Vaina Tricoma
organización especializadas reproducción
asexual

BIBLIOGRAFÍA

Bellinger, E. G. & Sigee, D. C. (2010). Fheshwater Algae: Identification and Use as

Bioindicators. John Wiley & Sons.
Guiry, M, y Guiry, G. (2016). AlgaeBase. World-wide electronic publication, National
University of Ireland, Galway. [Link] Consultado el 01de mayo de
2019.
Hoeck, C., Mann, D., y Jahns, H. (1995). Algae. An introduction to Phycology. New York,
USA: Cambridge University Press.
Lee, R. (2008). Phycology. United Kingdom: Cambridge University Press.
Madigan, T., Martinoko, M., y Parker, J. (2004). Brock. Biología de los microorganismos.
Madrid, España. Pearson Educación.
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ANEXO 3. Ejemplos de cianobacterias (Tomadas de Ortega, 1984).

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ANEXO 4. Montaje de preparaciones.

Gelatina glicerinada
Gelatina en polvo 3.5 g
Agua destilada (H2O) 21 mL
Glicerina (C3H8O3) 25 mL
Ácido fénico (C6H6O) 1 g

Agregue agua a la gelatina, dejándola durante una a dos horas, y después la glicerina. Funda
de inmediato la mezcla en baño maría, sin dejar de agitar. Una vez fundida, sáquela del frasco
y agregue el ácido fénico. Filtre enseguida a través de un lienzo fino (Gaviño, 2005).

Elaboración de preparaciones
1. Agregar sobre la muestra una o dos gotas de gelatina glicerinada, coloque un
cubreobjetos y deje secar.

Solución fijadora (formol al 4%):

Formol (CH2O) 40 mL
Agua (H2O) 960 mL

Nota: el agua debe ser de donde se obtuvieron las muestras algales.

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ANEXO 5. Clave para algas procariotas.

1a Células formando colonias................................................................... Chroococcus

1b Células formando filamentos uniseriados......................................................... 2
2a Sin heterocito................................................................................................... 3
2b Con heterocito….............................................................................................. 4
3a Tricomas en espiral, sin que atraviesen la pared...................................... Spirulina
3b Tricomas raramente en espiral, multicelulares, pared de la célula apical
ensanchada.............................................................................................. Oscillatoria
3c Un sólo tricoma dentro de la vaina, generalmente con una matriz
gelatinosa. ....................................... .......................................................... Lyngbya
4a Células esféricas, tricomas dentro de o irregularmente con matriz
gelatinosa... .................................................................................................. Nostoc
4b Células cilindricas, tricomas sin vaina o poco evidente……....................... Anabaena
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PRÁCTICA 9.
OBSERVACIÓN Y DETERMINACIÓN DE ALGAS EUCARIOTAS

OBJETIVO GENERAL

Adquirir la destreza para reconocer caracteres vegetativos y reproductivos de Chlorophyta

(algas verdes), Rhodophyta (algas rojas) y Phaeophyceae (algas pardas), así como consultar
literatura especializada para la determinación taxonómica de especímenes.

OBJETIVOS PARTICULARES
● Reconocer el hábito y caracteres externos.
● Identificar caracteres internos vegetativos y reproductivos, mediante cortes en plano
transversal y longitudinal o disgregación de talos.
● Distinguir entre talos de organización filamentosa, parenquimatosa, sifonal y polisifonal.
● Conocer diversas claves para la determinación taxonómica de los especímenes
estudiados.
● Aprender a elaborar preparaciones en fresco y semipermanentes de diferentes talos de
algas.

FUNDAMENTO TEÓRICO
Las algas están consideradas entre las talofitas (plantas que carecen de raíz, tallo y hojas).
En su mayoría son fotosintéticas excepto las parásitas. Poseen clorofila a, b y c como
principales pigmentos fotosintéticos además de carotenos y xantofilas. Comúnmente son
acuáticas; agua dulce y marina, también las hay terrestres, algunas algas verdes se asocian
con hongos para formar líquenes (Lee, 2008).
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Las células de las algas eucariotas están rodeadas por una

pared compuesta de celulosa o puede ser reemplazada por
manosa, xilano o diferentes polímeros, además de
polisacáridos, secretados por el aparato de Golgi, la membrana
plasmática es la responsable de controlar la entrada y salida de
sustancias del protoplasma. Algunas especies presentan
undulipodios en células vegetativas y reproductivas para su
locomoción. Los cloroplastos o cromoplastos están rodeados
por dos, tres, cuatro o cinco membranas según el grupo. Los
leucoplastos o amiloplastos son incoloros están adaptados al
almacenamiento de material de reserva (Hoeck, et al., 1995).

Las algas son unicelulares, coloniales, palmeloides,

filamentosas, pseudoparenquimatosas, parenquimatosas y
sifonales. Su reproducción es asexual o vegetativa mediante; FIGURA 1. Chaetomorpha
división celular, esporas, fragmentación. En la sexual, se antennina. Foto S. Díaz-Martínez
diferencian gametos en células especializadas o gametangios.

En esta práctica se observarán ejemplares de algas verdes (División Chlorophyta), algas rojas
(División Rhodophyta) y algas pardas (Clase Phaeophyceae) (Evert y Eichhorn, 2015;
Graham y Wilcox 2000).

División Chlorophyta (algas verdes). Estas algas presentan clorofila a y b semejante a la

que se encuentra en las plantas terrestres, además de carotenos y xantofilas. El material de
reserva es el almidón. Esta división comprende aproximadamente 6200 especies distribuidas
en ambientes de agua dulce, marino y terrestre. Las formas unicelulares forman parte del
plancton, mientras que las pluricelulares se encuentran formando parte del bentos (Anexo 6).
Las especies marinas son abundantes en la zona intermareal algunas adheridas a rocas, por
ejemplo: Ulva y Enteromorpha, que desarrollan estructuras de fijación, como la célula basal
en Chaetomorpha (Figura 1), estolones y rizoides en Caulerpa y bulbos en Halimeda. Otras
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especies crecen sobre tronco de árboles y suelo, algunas son simbiontes como Trebouxia que
se asocia con hongos para formar líquenes. La pared celular es de celulosa u otros
polisacáridos xilanos, manosa, entre otros.

La reproducción asexual es por medio de zoosporas, aplanosporas y autosporas. En la sexual,

se diferencian gametos de igual o diferente forma y tamaño, además se presentan tres
diferentes tipos de ciclos de vida (Evert y Eichhorn, 2015; Hoeck, et al., 1995; Figura 2).

División Rhodophyta (algas rojas). El color rojo de estas algas de debe a la presencia de
ficoeritrina en una mayor proporción que otros pigmentos ficobilínicos (ficocianina y
aloficocianina), también presentan clorofila a, carotenos y xantofilas.

Existen alrededor de 5500 especies, la mayoría son marinas, se les encuentra adheridas a
diversos sustratos (plantas, algas, conchas, rocas, entre otros), algunas son parásitas y
endosimbiontes. Tienen la capacidad de realizar la fotosíntesis con un mínimo de luz incluso
las marinas a profundidades mayores a 200 m.
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FIGURA 2. Ciclo de vida con alternancia de generaciones de Ulva sp. Tomado de Evert &
Eichhorn, (2013).

La pared celular está constituida por celulosa, algunas especies presentan xilosa, manosa.
En espacios intercelulares se forma un polímero sulfatado o galactano del que se extrae el
agar y la carragenina, los cuales son usados para la preparación de geles. Por ejemplo, el
agar que tiene gran importancia en la investigación microbiológica. El agar se obtiene de
varias especies de Gelidium, Gracilaria y Pterocladia.

La carragenina es parecida al agar, es

usado en la industria farmacéutica, textil y
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alimentaria por sus propiedades coloidales

y como estabilizador de emulsiones y
suspensiones. La carragenina se obtiene de
Chondrus crispus y Mastocarpus estellatus,
especies del género Eucheuma son
cultivadas para la producción de este
ficocoloide (Evert y Eichhorn, 2015; Lee,
2008).

FIGURA 3. Tayloriella dictyurus con

En cistocarpos. el
orden Corallinales, la pared celular tiene
impregnaciones de cristales de calcita, estas algas
calcificadas son abundantes en mares tropicales
del mundo y contribuyen a la formación de arrecifes
coralinos entre ellas se encuentran; Lithothamnion,
Lithophyllum y Jania.

La reproducción es asexual mediante diferentes

tipos de esporas y la sexual presenta ciclos de vida
con alternancia de dos o tres fases: gametofito,
carposporofito (Figura 3) y tetrasporofito (Lee,
2008; Figura 4).

FIGURA 4. Ciclo trifásico. Tomado

de Lee (2008)
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Clase Phaeophyceae o (algas pardas). Estas

algas presentan clorofila a, c1 y c2, carotenos y
xantofilas, la fucoxantina es la más importante y
responsable de su color característico. El
material de reserva es laminarina. No hay formas
unicelulares ni coloniales, son
principalmente filamentosos,
seudoparenquimatosos o parenquimatosos, por
ejemplo, Sargassum (Figura 5). Esta clase
comprende cerca de 2000 especies, la mayoría
son marinas, se les encuentra en la zona
FIGURA 5. Sargassum sp. a) aerocisto, v)
intermareal hasta profundidades más de 120 m, vena y r) receptáculo (Bold et al., 1980).
sólo cuatro géneros se han reportado de agua
dulce. La reproducción es asexual o vegetativa y sexual con dos tipos de ciclos de vida. La
pared celular es de celulosa y un componente amorfo de ácido algínico y fucoidina, en algunas
especies del género Padina, presentan carbonato de calcio en forma de cristales de aragonita
en bandas concéntricas (Evert y Eichhorn, 2015; Graham y Wilcox, 2000).
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MATERIAL Y REACTIVOS

Material biológico
• Preparaciones semipermanentes de algas verdes, rojas y pardas, muestras de
ejemplares fijados en formol (Gaviño et al., 2005).

Materiales diversos
• Agujas de disección
• Aceite de inmersión
• Pinzas de disección
• Franela
• Gelatina glicerinada
• Pipetas Pasteur
• Portaobjetos y cubreobjetos
• Cajas Petri
• Navaja de doble filo
• Charola de disección
• Guantes de látex
• Cubre bocas
• Piseta

REACTIVOS
• Lugol (I3K + H2O)
• Agua destilada (H2O)

EQUIPO
• Microscopio estereoscópico
• Microscopio de campo claro

SERVICIOS
• Agua
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• Vacío
• Gas
• Energía eléctrica
• Campanas de extracción
• Extractores de ventilación
• Tarjas de lavado
• Extintores
• Regaderas de seguridad
• Gavetas
• Mesas de trabajo
• Ventanas para la ventilación
• Botiquín de emergencia

PROCEDIMIENTO

Actividades previas
El alumno realizará una investigación bibliográfica sobre los siguientes puntos, antes del
desarrollo de la práctica.
1. ¿En qué consiste la alternancia de fases?
2. Investigue sobre las estructuras reproductivas que se forman en un ciclo de vida
trifásico ¿en qué división se presenta?
3. ¿Cuántos tipos de crecimiento se presentan en las algas pardas?
4. ¿Cuáles son las características generales de las carofíceas?
5. ¿Cuántas clases comprende la división Rhodophyta y cuáles son las características
mássobresalientes de cada una de ellas?
6. ¿Cuáles son las características generales de diatomeas?
7. Elabore un glosario con 30 términos en orden alfabético
Desarrollo de la práctica
Esta práctica será dividida en tres etapas, las cuales se cubrirán en tres o cuatro sesiones, en
la primera se observarán algas rojas, en la segunda algas pardas y en la tercera algas verdes.

Chlorophyta (algas verdes)

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1. Observar en ejemplares y preparaciones semipermanentes proporcionadas por el

profesor, caracteres vegetativos y reproductivos.

2. Coloque en una charola de disección, los ejemplares fijados en formol, agregue un

poco de agua, extienda con las agujas de disección desde la base del talo hacia los extremos
de las ramas en caso de presentarlas, para observar el hábito.

3. Elabore los dibujos del hábito de cada uno de ellos (forma del talo completo) así como
estructuras, indique aumento.

4. En el caso de talos filamentosos, desprender un fragmento del filamento y colocarlo

sobre un portaobjetos, agregar una gota de lugol y observe la disposición, forma de las células
y cloroplastos.

5. Proceda a realizar cortes en plano transversal de talos laminares, para reconocer el

número de capas celulares (Figura 1 y 2 del Anexo 6).

6. De los talos cenocíticos (Figuras 3-5 del Anexo 6), tomar una muestra pequeña (0.5
cm), colocarlo sobre un portaobjeto, agregar una gota de agua destilada y lugol, proceda con
las agujas de disección a disgregarlo, colocar un cubreobjeto y observe cenocitos (González
y Novelo, 1986).

7. Observe estructuras de una carofícea (talo, rámulas, núcula y glóbulo) (Figura 6 del
Anexo 6).

8. Con base en los caracteres observados se hará la determinación taxonómica de los

ejemplares (Font Quer, 2000; Guiry y Guiry, 2016; Littler y Littler, 2000) (Anexo 7).

9. Actividad opcional: Observe muestras de agua de florero, charcas, lago, entre otros
(Ortega, 1984) (Anexo 8).

Rhodophyta (algas rojas)

1. Observar en ejemplares y preparaciones semipermanentes proporcionadas por el

profesor, caracteres vegetativos y reproductivos
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2. Coloque en una charola de disección los ejemplares fijados en formol, agregue un poco
de agua, extienda con las agujas de disección desde la base del talo hacia los extremos de
las ramas (en caso de presentarlas), para observar el hábito

3. Elabore dibujos del hábito de cada uno de ellos (forma del talo completo), así como
estructuras vegetativas o reproductoras, en caso de presentarlos e indicar aumento

4. Para reconocer la estructura interna del talo, tome una muestra pequeña (0.5 cm) del
eje principal o ramas del talo, realice cortes en sentido transversal y observe: la diferencia
entre médula y corteza, tipos de cada una de ellas (parenquimatosa o filamentosa),
estructuras reproductoras (tetrasporangios, cistocarpos, espermatangios, estiquidios, entre
otros) (Font Quer, 2000) (Anexo 9).

5. En los talos con organización polisifónica, reconozca: células centrales y pericentrales,

conexiones “pit” y reproductores en caso de presentarlos.

6. Compare talos calcificados con los no calcificados.

7. Con base en los caracteres observados se hará la determinación taxonómica de los

ejemplares (Guiry y Guiry, 2016; Littler y Littler, 2000) (Anexo 10).
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División Heterokontophyta

Clase Phaeophyceae (algas pardas)

1. Observará en ejemplares y preparaciones semipermanentes proporcionadas por el

profesor, caracteres vegetativos y reproductivos

2. Coloque en una charola de disección los ejemplares fijados en formol, agregue un poco
de agua, extienda con las agujas de disección desde la base del talo hacia los extremos de
las ramas en caso de presentarlas, para observar el hábito

3. Elabore los dibujos del hábito de cada uno de ellos (forma del talo completo), así como
estructuras vegetativas o reproductoras, indicar aumento.

4. En el caso de talos filamentosos, desprender un fragmento del talo, disgregarlo y

colocarlo sobre un portaobjetos, agregar una gota de agua, observe: tipo de ramificación,
zonas de crecimiento, forma de cloroplasto, plurangios y meiosporangios.

5. Para otros tipos de talos, tome una pequeña muestra y proceda a realizar cortes en
sentido transversal, agregue una gota de agua coloque un cubreobjeto, observe: médula y
corteza, así como estructuras reproductoras, indique de qué tipo son.

6. En talos foliosos observe: forma de las hojas, ramas fértiles (receptáculos), en caso de
presentarlos y haga cortes del talo en plano transversal para observar conceptáculos (Figura
4 del Anexo 11).

7. Con base en los caracteres observados, se hará la determinación taxonómica de los

ejemplares (Guiry y Guiry, 2016; Littler y Littler, 2000; Ortega et al., 1993) (Anexo 12).

8. Tome una muestra de suelo de jardín o maceta para observar Diatomeas (Anexo 13).
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RESULTADOS

Elabore un cuadro comparativo con las muestras revisadas para cada phylum. Así como una
descripción de cada género con los caracteres observados, incluya los esquemas
correspondientes.

Nivel de Estructuras de
Phylum Género
organización reproducción

BIBLIOGRAFÍA

Bellinger, E. G. & Sigee, D. C. (2010). Fheshwater Algae: Identification and Use as

Bioindicators. John Wiley & Sons.

Bold, H., Alexopoulos, C., y Delevoryas, T. (1980). Morphology of plants and fungi. New
York, USA: Harper & Row.

Raven, P. H., Evert, R. F. & Eichhorn, S. E. (2013). Biology of plants. Washington, USA:
Freeman and Company Worth.

Font Quer, P. (2000). Diccionario de Botánica. Barcelona. Labor.

Gaviño, G., Juárez, C. L., y Figueroa, H. H. (2004). Técnicas Biológicas. Selectas de

Laboratorio y de Campo. México: Limusa.

González- González, J. y Novelo-Maldonado, E. (1986). Algas. En: Lot, A. y Chiang, F.

(Eds.). Manual de Herbario, administración y manejo de colecciones, técnicas de
recolección y preparación de ejemplares botánicos. D.F., México: Consejo Nacional de
la Flora de México.

Graham, E., y Wilcox, L. (2000). Algae. USA: Prentice Hall.

Guiry, M, y Guiry, G. (2016). AlgaBase. World-wide electronic publication, National

University of Ireland, Galway. http//[Link], 01 May 2019.
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Hoeck, C., Mann, D., y Jahns, H. (1995). Algae. An introduction to Phycology. New York,
USA: Cambridge University Press.

Lee, R. (2008). Phycology. United Kingdom: Cambridge University Press.

Littler, S., y Littler, M. (2000). Caribbean Reef Plants. An Identification guide to the reef
Plants of the Caribbean, Bahamas, Florida and Gulf of Mexico. Washington, USA: Off
Shore Graphics, INC.

Ortega, M. (1984). Catálogo de algas continentales recientes de México. México:

Universidad Nacional Autónoma de México.

Ortega, M. M., Godínez, J. L. y Ruvalcaba, M.M. (1993). Una clave de campo de las
algas pardas de las costas mexicanas del Golfo de México y Mar Caribe. México: AGT.
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ANEXO 6. Estructuras de algas verdes (Chlorophyta).

FIGURA 1. Talo laminar, FIGURA 2. Corte longitudinal de la

género Ulva sp. Foto A. Avila lámina, Ulva sp. Foto I. Escalante

FIGURA 3. Talo cenocítico FIGURA 4. Talo cenocítico,

ramificado. I Cladophora sp.: Izq. Caulerpa sp. Foto S. Díaz-
Fotografía en campo claro. Der. Martínez
Fotografía con fluorescencia
mostrando células multinucleadas.
Fotos S. Díaz-Martínez

FIGURA 5. Talo cenocítico, Codium sp. FIGURA 6. Talo seudoparenquimatoso Chara sp.

Algunas de estas imágenes fueron tomadas de los textos citados en la bibliografía.

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ANEXO 7. Clave para la determinación taxonómica de algas verdes.

División Chlorophyta

1a Talo filamentoso............................................................................................ 2

1b Talo de otra forma.......................................................................................... 3

2a Talo filamentoso, cenocítico ramificado..................................................... Cladophora

2b Talo filamentoso, celular no ramificado................................................ Chaetomorpha

3a Talo sifonal..................................................................................................... 4

3b Talo no sifonal................................................................................................ 5

4a Talo cenocítico con trabéculas y estolón....................................................... Caulerpa

4b Talo cenocítico sin trabéculas....................................................................... Bryopsis

4c Talo sifonal con células cenocíticas o utrículos............................................. Codium

5a Talo hueco monostromático.................................................................. Enteromorpha

5b Talo distromático laminar................................................................................ Ulva

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ANEXO 8. Algas verdes de cuerpos de agua continentales; tomado de Ortega, 1984.

ANEXO 8. Pie de figuras.

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Figura 1 Chlorella miniata (Kützing) Oltmanns (según Oltmanns).

Figuras 2, 3 Chlorella saccharophilla var. ellipsoidea (Gerneck) Fott et Nováková in Fott.

Figura 4 Oocystis solitaria Wittrock in Wittrock et Nordstedt.

Figuras 5, 6 Oocystis pusilla Hansgirg. 5: célula aislada, 6: colonia.

Figura 7 Oocystis lacustris Chodat.

Figura 8 Scenedesmus obliquus (Turpin) Kützing.

Figura 9 Scenedesmus quadricauda var. longispina (Chodat) G.M. Smith.

Figura 10 Scenedesmus dimorphus (Turpin) Kützing.

Figura 11 Pediastrum simplex var. duodenarium (Bailey) Rabenhorst

Figura 12 Pediastrum duplex var. reticulatum Lagerheim

Figura 13 Pediastrum heptactis (Ehrenberg) Meneghini.

Figura 14 Ulothrix aequalis Kützing.

Figura 15 Ulothrix tenerrima (Kützing) Kützing.

Figura 16 Oedogonium oboviforme Wittrock ex Hirn. Filamento con oogonio.

Figura 17 Oedogonium landsboroughii Hirn. Filamento con anteridios.

Figura 18 Rhizoclonium hierogglyphicum (C. Agardh) Kützing.

Figuras 19, 20 Cladophora glomerata (Linnaeus) Kützing var. kuetzingiana (Grunow)

19: porción del talo, 20: estructura de la célula.

Figuras 21, 22 Mougeotia scalaris Hassall.

Figsura 23, 24 Spirogyra weberi Kützing

Figura 25 Closterium subulatum Brébisson.

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Figura 26 Closterium striolatum var. subtruncatum (W. West et G.S. West) KriegerIn
Rabenhorst.

Figura 27 Cosmarium subcrenatum Hantzsch in Rabenhorst.

Figura 28 Cosmarium subcucumis Schmidle.

Figura 29 Cosmarium undulatum Corda ex Ralfs var. undulatum

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ANEXO 9. Estructuras de algas rojas (Rhodophyta)

FIGURA 1. Tipos de tetrasporangio a) cruzado, b)

decusado, c) zonado, d) tetraédrico ( tomado de
FIGURA 2. Ceramium taylorii.
Hoeck, 1995)
Tetrasporangios Foto A. Avila

FIGURA 3. Cistocarpo. Foto A. Avila.

FIGURA 4. Carpospora. Foto A. Avila.

FIGURA 5. Nemalion. Médula (m) y FIGURA 6. Talo con médula (m) y

corteza (c) filamentosa (Scagel et al., corteza (c) parenquimatoso.
1983)
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ANEXO 10. Clave para la determinación taxonómica de algas rojas.

1a Talo filamentoso o filiforme............................................................................... 2

1b Talo de otra forma, cilíndrico o complanado (polisifónico o parenquimatoso).. 7

2a Talo corticado.................................................................................................. 5

2b Talo sin corticación.......................................................................................... 3

3a Talo epífito erecto............................................................................................ 4

3b Talo epífito postrado, con ramas erectas irregulares................................. Lejolisia

4a Talo con células más anchas que largas................................................ Erytrotrichia

4b Talo con células más largas que anchas.............................................. Acrochaetium

5a Talo totalmente corticado, espinas verticiladas a nivel desnudo............ Centroceras

5b Talo parcialmente corticado (ramas, ejes o nudos)........................................ 6

6a Talo con corticación sólo en nudos.............................................................. Ceramium

6b Talo con corticación en ramas y ejes................................................... Pleonosporium

7a Talo calcificado............................................................................................... 8

7b Talo no clacificado.......................................................................................... 9

8a Talo con genículas e intergenículas de 2 mm de diámetro y tallas de hasta

5 cm.............................................................................................................. Amphiroa

8b Talo con genículas e intergenículas con un diámetro menor a 2mm y tallas de

1-2.5 cm............................................................................................................... Jania

9a Talo monosifónico o polisifónico..................................................................... 10

9b Talo parenquimatoso...................................................................................... 16

10a Talo monosifónico........................................................................................... 11

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10b Talo polisifónico.............................................................................................. 12

11a Talo con ejes monosifónico y ápices curveados............................... Antithamnionella

11b Talo con ramas monosifónicas y sin ápices curveados........................Heterosiphonia

12a Talo polisifónico con arreglo superficial de células......................................... 13

12b Talo polisifónico sin arreglo superficial de células.................................... Chondria

13a Talo polisifónico de 4 células pericentrales..................................................... 14

13b Talo polisifónico de 9-12 células pericentrales............................................... 15

14a Talo postrado; ramas liguladas, con una línea media............................ Platysiphonia

14b Talo erecto, con algunas porciones postradas, ramas erectas.............. Polysiphonia

15a Talo sáxicola; de 9-12 células pericentrales, ramas curveadas, con

tricoblastos................................................................................................. Tayloriella

15b Talo epífito; de 10 -12 células pericentrales y ramas erectas, determinadas e

indeterminadas con o sin tricoblastos.................................................. Herposiphonia

16a Talo con médula filamentosa.......................................................................... 17

16b Talo con médula parenquimática.................................................................... 18

17a Talo con corteza de filamentos subdicotómicos, rodeadas de abundante mucílago y

médula con filamentos no compactos....................................................... Dermonema

17b Talo con corteza de filamentos anastomosados, sin mucílago y médula con

filamentos esparcidos entremezclados...................................................... Grateloupia

18a Talo rosado, formando matas, ramas cilíndricas con depresiones en sus
ápices......................................................................................................... Laurencia

18b Talo de color verde claro o rosado, frondoso o cespitoso, ramas complanadas, sin
depresiones en ápice................................................................................... 19
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19a Talo cespitoso, rosado; médula incolora parenquimatosa con células grandes y
corteza con células pequeñas pigmentadas que no forman hileras............ Hypnea

19b Talo no cespitoso, que forma frondas, de color verde claro, médula con células
pequeñas y corteza con......................................................................................... 20

20a Talo firme y rígido, de color verde claro, con médula parenquimatosa con
células de pequeñas a grandes y corteza de células muy pequeñas en líneas
anticlinales que forman4-5 hileras....................................................... Gymnogongrus
20b Talo rígido, con médula compuesta por células grandes, isodiamétricas y corteza con
células pequeñas ovoides de 2-12 capas celulares en posición
anticlinal..................................................................................................... Gracilaria
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ANEXO 11. Estructuras de algas pardas (Phaeophyceae).

FIGURA 1. Ectocarpus sp. Talo FIGURA 2. Talo folioso Sargassum

filamentoso ramificado con plurangios. sp.
Foto A. Ubaldo

FIGURA 4. Corte de un conceptáculo

Sargassum liebmanni. Foto I. Escalante.
FIGURA 3. Padina boergesenii. Talo
laminar. Foto A. Avila.

FIGURA 5. Padina crispata. Soro

anteridial. Foto A. Avila.
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ANEXO 12. Clave para la determinación taxonómica de algas pardas.

División Heterokontophyta

Clase Phaeophyceae

1a Talo filamentoso................................................................................................. 2

1b Talo de otra forma (laminar, acintado, parenquimatoso)................................... 3

2a Formando densos penachos, ramas agudas, plurangios pluriloculares,

cloroplastos en forma de banda................................................................ Ectocarpus

2b Formando densos penachos, ramas agudas o curvas, plurangios pluriloculares,

cloroplastos en forma discoidal u otra forma.................................................. Hincksia

2c Formando pequeñas matas, ramas multiseriadas, con propágulos.......... Sphacelaria

3a Talo parenquimatoso........................................................................................... 6

3b Talo acintado...................................................................................................... 4

4a Talo con nervadura central..............................................................……… Dictyopteris

4b Talo sin nervadura central.................................................................................. 5

5a Talo de 2-4 células de grosor........................................................................ Dictyota

5b Talo con más de 4 células de grosor...................................................... Spatoglossum

6a Talo laminar plano en forma de abanico......................................................... Padina

6b Talo frondoso...................................................................................................... 7

7a Talo con ramas complanadas dicotómicas................................................ Chnoospora

7b Talo folioso con filoides, caulidio y receptáculos....................................... Sargassum

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ANEXO 13. Diatomeas; tomado de Ortega, 1984.

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ANEXO 13. Pie de figuras.

Figuras 1 -2 Melosira distans (Ehrenberg) Kützing. Vista valvar.

2, colonia en vista conectiva.

Figura 3 Melosira ambigua (Grunow) O. Müller.

Figura 4 Melosira granulata (Ehrenberg) Ralfs var. angustissima O. Müller

Figura 5 Melosira granulata (Ehrenberg) Ralfs var. curvata Grunow

Figura 6, 7 Fragilaria striatula (J. E. Smith) Lyngbye. 6. colonia en vista conectiva.

7, vista valvar.

Figuras 8, 9 Fragilaria pinnata Ehrenberg. Colonia en vista conectiva. 9. vista valvar.

Figura 10 Eunotia lunares (Ehrenberg) Grunow.

Figura 11 Eunotia formica Ehrenberg .

Figura 12 Eunotia arcus Ehrenberg

Figura 13 Cymbella cistula (Ehrenberg) in Hemprich et Ehrenberg.

Figura 14 Cymbella cistula var. maculate (Kützing) Grunow in A. Schmidt.

Figura 15 Gomphonema subclavatum var. mexicanum (Grunow) Patrick in Hon

Figura 16 Gomphonema truncatum Ehrenberg var. capitatum (Ehrenberg) Patrick.

Figura 17 Navicula cuspidate (Kützing) Kützing.

Figura 18 Navicula dorenbergii Reichelt.

Figura 19 Pinnularia cardinalicuslus Cleve

Figura 20 Pinnularia gibba (Ehrenberg ) Ehrenberg

Figura 21 Pinnularia nobillis (Ehrenberg) Ehrenberg

Figura 22 Gomphonema lungiceps Ehrenberg

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Figura 23 Gomphonema subclavatum Grunow in Van Heurck var. subclavatum.

Figura 24 Nitzschia amphibian Grunow

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PRÁCTICA 10.
OBSERVACIÓN DE HONGOS. DETERMINACIÓN TAXONÓMICA DE
MACROMICETOS

OBJETIVO GENERAL

 Adquirir la habilidad para reconocer caracteres vegetativos y reproductivos de los

diferentes grupos de hongos, así como de consultar literatura especializada para la
determinación taxonómica de especímenes.

OBJETIVOS PARTICULARES

 Reconocer el hábito y caracteres externos de hongos.

 Aplicar las técnicas de recolecta para hongos.
 Elaborar preparaciones en fresco para la observación de estructuras.
 Conocer diversas claves para la determinación taxonómica de los especímenes

FUNDAMENTO TEÓRICO

Los hongos constituyen el reino Fungi el cual ha ido cambiando con base en caracteres:
morfológicos, ultraestructurales y moleculares (Herrera y Ulloa, 2013; Margulis y Schwartz,
1982; Moore-Landecker, 1996; Webster y Weber, 2007). En el presente manual se sigue la
propuesta por Hibbett et al. (2007). Es necesario resaltar que se consideran como hongos
verdaderos o fungales todos aquellos organismos eucariotas heterótrofos por absorción que
secretan enzimas degradadoras (hidrolíticas y oxidativas) para transformar los nutrimentos y
asimilarlos. Sus paredes celulares están compuestas de quitina, glucanos y proteínas. Su
nivel de organización es unicelular (levaduriformes, quitridiformes) o filamentoso de dos tipos
(hifas cenocíticas aseptadas o septadas con poros simples o doliporos); sólo el grupo de los
quitridiomicetos presentan flagelos (zoosporas) mientras que los microsporidios (no tratados
en este manual), glomeromicetos, cigomicetos, ascomicetos y basidiomicetos no los
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presentan (Alexopoulos y Mims, 1985; Bold et al., 1980). Tienen reproducción sexual y
asexual por esporas. Es necesario mencionar el caso especial de los Deuteromicetos, fue
constituido únicamente por las fases asexuales –anamorfos- (productoras de conidios) de
ascomicetos y basidiomicetos de los que se desconocía su ciclo completo. Estas fases unidas
a su respectiva fase sexual (teleomorfo) constituyen el holomorfo (Kiffer y Morolet, 2000).

Quitridiomicetos. Talo unicelular llamado quitridial, de pared gruesa y con un opérculo apical
por donde se liberan zoosporas. En la base tiene un rizomicelio cenocítico para fijación y
mediante el cual por somatogamia se reproduce sexualmente. Existen también especies
filamentosas. Son saprobios o parásitos (Steciow y Arambarri, 2001; Herrera y Ulloa, 2013;
Ulloa y Hanlin, 1978).

Glomeromicetos. Talo filamentoso, no forman esporomas y su reproducción es sólo asexual.

Son simbiontes endomicorrízicos con plantas vasculares, forman vesículas y arbúsculos
mediante los cuales intercambian agua y sales minerales por sustancias elaboradas por las
plantas (Herrera y Ulloa, 2013; Ulloa y Hanlin, 1978).

Cigomicetos. Talo filamentoso de hifas cenocíticas con rizoides o bien una base de fijación.
Reproducción asexual por esporas en esporangios y sexual por conjugación gametangial que
forma una cigospora. Son saprobios o parásitos (Fassatiová, 1986; Herrera y Ulloa, 2013;
Ulloa y Hanlin, 1978).

Ascomicetos. Talos levaduriformes o filamentosos de hifas septadas. Reproducción asexual

por conidios producidos en diversas estructuras y sexualmente por ascosporas (endosporas)
dentro de ascas. Desarrollan esporomas (ascomas) pluricelulares cerrados (cleistotecios),
semiabiertos (peritecios) o abiertos (apotecios). Son saprobios o parásitos (Beug et al. 2014;
Herrera y Ulloa, 2013; Ulloa y Hanlin, 1978).

Basidiomicetos. Talos de hifas septadas, presentan conexiones de grapa (fíbulas).

Reproducción asexual por conidios y sexualmente por basidiosporas (exosporas) sobre
basidios septados (Fragmobasidios) o aseptados (Holobasidios). Desarrollan esporomas
(basidiomas) pluricelulares con himenio expuesto (Himenomicetos) o cerrado
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(Gasteromicetos). Son saprobios o parásitos (Herrera y Ulloa, 2013; Singer, 1975; Ulloa y
Hanlin, 1978).

MATERIAL Y REACTIVOS

Material biológico
• De preparación previa (una semana antes): Agua estancada o de florero con carnadas
de papel celofán de color. Tortilla, pan bolillo (no de caja), jitomate previamente
humedecidos y conservados por separado dentro de bolsas de plástico.
• Preparaciones permanentes y ejemplares de diferentes tipos de hongos.
Glomeromicetos, Cigomicetos, Ascomicetos y Basidiomicetos.

Materiales diversos
• Agujas de disección
• Cajas de Petri
• Frascos de vidrio 250 mL con tapa de rosca
• Navajas para rasurar de doble filo
• Tijeras
• Papel celofán de color (no transparente)
• Papel seda
• Pipetas Pasteur
• Porta y cubre objetos
• Franela

REACTIVOS
• Aceite de inmersión
• Agua destilada (H2O)
• Gelatina glicerinada
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Para recolecta de hongos

• Cajas blancas pequeñas de cartón
• Canasta
• Etiquetas de recolecta (Anexo 14)
• Marcador de cera
• Papel encerado
• Bolsas de polipapel
• Secadora con focos
• Gelatina glicerinada

EQUIPO
• Microscopio estereoscópico
• Microscopio de campo claro

SERVICIOS
• Agua
• Vacío
• Gas
• Energía eléctrica
• Campanas de extracción
• Extractores de ventilación
• Tarjas de lavado
• Extintores
• Regaderas de seguridad
• Gavetas
• Mesas de trabajo
• Ventanas para la ventilación
• Botiquín de emergencia
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PROCEDIMIENTO

Actividades previas
El alumno realizará una investigación bibliográfica sobre los siguientes puntos, antes del
desarrollo de la práctica.

1. Explique la diferencia entre anamorfo, teleomorfo y su relación en el ciclo de vida de

ascomicetos y basidiomicetos.
2. Busque 5 ejemplos para cada caso: hongos micorrízicos, hongos de importancia industrial;
hongos de importancia médica; hongos de importancia alimentaria.

Desarrollo de la práctica

Quitridiomicetos

Se obtienen mediante la colocación de “carnadas” dentro de agua estancada o de florero; las

carnadas son pequeños cuadritos de papel celofán de color (para su fácil localización)
recortados a un tamaño menor de un cubreobjetos. Después de dejarlos unos días en el agua,
los talos quitridiales deberán buscarse en los márgenes de la carnada. Son fácilmente
identificables por su aspecto casi esférico, sus paredes gruesas muy refringentes a la luz,
generalmente un poro apical y crecimiento basal de rizomicelio.

Glomeromicetos

Observar preparaciones de esporas y raíces micorrizadas. Localizar hifas, vesículas y

arbúsculos dentro de las células.

Cigomicetos (Anexo 16)

En el caso de los cigomicetos se pueden conservar trozos de las tortillas, pan, harina, pastas
o frutas en una cámara húmeda (frasco, caja Petri o bien, una bolsa de plástico ligeramente
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inflada). Revisar las colonias negruzcas. Otro sustrato interesante es el estiércol de vaca o
caballo. Se deja en una cámara húmeda durante algunos días se debe revisar diariamente.

Observación de gametangios jóvenes o maduros (protuberancias hifales cercanas entre sí o

en franco contacto) y la formación de zigosporas cuya coloración oscura las hace fácilmente
localizables. Otras características se mencionan en los respectivos géneros listados a
continuación. Se recomienda colocar sólo un poco de muestra procurando no raspar en
exceso el sustrato de donde se tome ésta, así la observación será más fácil.

Rhizopus. Las hifas presentan estolones arqueados, éstos en los puntos que hacen contacto
con el sustrato tienen rizoides que los fijan y del lado contrario surgen erectos los
esporangióforos. Los esporangios presentan una apófisis incospicua y contienen numerosas
esporas. Observe si hay ornamentación en las esporas y diferencie esporangios enteros de
los que han perdido la pared esporangial. Se obtiene de sustratos como las tortillas, pan,
harina, pastas o frutas.

Mucor. Micelio es sencillo que no forma estolones ni rizoides especiales; sus esporangióforos
nacen en cualquier sitio del micelio, el esporangio contiene muchas esporas y una columela
de diversa forma que posee un aspecto vesicular y queda a la vista al romperse la pared
esporangial. Se obtiene de los mismos sustratos que la especie anterior.

Pilobolus. Talos muy hialinos que tienen un esporangióforo erecto que en su parte apical se
engrosa y forma una característica vesícula transparente que porta a su vez el esporangio
negruzco. Por debajo de la vesícula se distingue una zona anaranjada que es fotosensible y
desencadena un mecanismo de disparo que lanza un esporangio a más de un metro de
distancia. Se obtiene a partir de estiércol fresco conservado un tiempo en cámara húmeda.

Entomophthora. Parásito de moscas presenta prolongaciones alargadas irregulares

cenocíticas con septos apicales que separan al “conidióforo” que a su vez forma un “conidio”
globoso que en realidad es un esporangio unisporado. Se pueden obtener a partir de moscas
en cámara húmeda. Las moscas infectadas son poco activas, su abdomen brilla y tienen los
ojos color rojo ladrillo.
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Deuteromicetos. Se pueden observar también sobre los trozos de las tortillas, pan, harina,
pastas semillas o frutas en una cámara húmeda (frasco, caja Petri o bien, una bolsa de
plástico ligeramente inflada). Revisar las colonias verduscas.

Penicillium. Presenta sobre los conidióforos de manera ramificada métulas y fiálides

productoras de conidios.

Aspergillus. Sobre los conidióforos presenta vesículas conidiales con métulas y fiálides sobre
los que se producen los conidios.

Macromicetos recolecta y observación

La recolección de macromicetos (ascomicetos y basidiomicetos) requiere el ejemplar

completo desde su base. Se envuelve en papel encerado en el que previamente se anotan
con un marcador de cera los datos de sustrato, tipo de vegetación y número de recolecta. Es
recomendable colocar el material en una canasta para permitir la circulación del aire (esto
evita que se pudran) y de ser posible fotografiar cada ejemplar. Se anotan todas las
características morfológicas (Anexo 14) poniendo especial atención a las medidas del
esporoma y los colores que presente. El ejemplar debe cortarse longitudinalmente para
observar tamaño de contexto e inserción laminar o de tubos y otras características internas.
La manera de conservarlos es deshidratándolos completamente en una secadora cuya fuente
de calor la provean una serie de focos de 100 W. Posteriormente, ejemplar y etiqueta se
guardan en cajitas blancas de tamaño apropiado y a éstas se les escriben los datos principales
(nombre científico, recolector, fecha, estado, número de foto entre otros) (Beug et al., 2014;
Cifuentes et al., 1986; Delgado et al., 2004; Guzmán, 1977; Lincoff, 1981).

Ascomicetos (Anexo 17)

Para observar levaduras se recomienda hacer preparaciones de pulque en donde la más

abundante es Saccharomyces (Webster y Weber, 2007).

Xylaria: hacer cortes del estroma peritecial para observar peritecios, ascas y ascosporas
(Beug et al. 2014).
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Helvella, Morchella, Peziza. Hacer cortes transversales de los apotecios para observar
paráfisis y ascas con ascosporas (Beug et al., 2014).

Basidiomicetos (Anexo 17)

En el huitlacoche (Ustílago maydis) se pueden apreciar los llamados soros o agallas que
contienen teliosporas oscuras y ornamentadas (observe las hifas con fíbulas) (Herrera y Ulloa,
2013).

En los hongos gelatinosos es posible apreciar fragmobasidios en Auricularia con septos

transversales y en Tremella con septos longitudinales (Webster y Weber, 2007).

Observar diversos tipos de himenio: con poros (Boletus, Polyporus), venoso (Gomphus,
Cantharellus), laminar (Agaricus, Amanita) o liso (Ramaria). En hongos con gleba ver
capilicio - si está presente- y esporas. (Lycoperdon, Scleroderma).

Es fácil evidenciar holobasidios con basidiosporas en cualquiera de los ejemplares

mencionados siempre y cuando estén maduros. En el caso de Russula y Lactarius se puede
acentuar la ornamentación de las esporas con solución de Melzer. En ambos casos hacer uso
de claves taxonómicas especializadas para determinar algunos ejemplares (Guzmán, 1977;
Largent, 1977; Largent et al. 1981; Largent et al. 1988; Moser, 1983; Phillips, 2010).

RESULTADOS

Elabore un cuadro comparativo con las muestras revisadas para cada phylum. Así como una
descripción de cada género con los caracteres observados, incluya los esquemas
correspondientes.

Estructuras Estructuras de
Phylum Género
vegetativas reproducción
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BIBLIOGRAFÍA

Alexopoulos, C. y Mims, C. (1985). Introducción a la Micología. Barcelona, España:

Omega.

Beug, W., Bessette, A. E. y Bessette, A. R. (2014). Ascomycete Fungi of North America:

a mushroom reference guide. USA: University of Texas Press.

Bold, H., Alexopoulos, C., y Delevoryas, T. (1980). Morphology of plants and fungi. New
York, USA: Harper & Row.

Bresinsky, A., y Besl, H. (1990). A colour atlas of poisonous fungi: A handbook for
pharmacists, doctors, and biologists. London, United Kigdom: Wolfe Publishing Ltd.

Cifuentes, J., Villegas, M. y Pérez-Ramírez, L. (1986). Hongos. En: Lot, A. y Chiang, F.

(Eds.). Manual de Herbario, administración y manejo de colecciones, técnicas de
recolección y preparación de ejemplares botánicos. D.F., México: Consejo Nacional de
la Flora de México.

Delgado, A. F., Villegas, M.R., y Cifuentes, J. B. (2005). Glosario ilustrado de los

caracteres macroscópicos en Basidiomycetes con himenio laminar. D.F., México:
Facultad de Ciencias, UNAM.

Fassatiová, O. (1986). Moulds and filamentous fungi in technological microbiology.

Progress in industrial microbiology. New York, USA: Elsevier.

Guzmán, G. (1977). Identificación de los hongos: comestibles, venenosos, alucinantes

y destructores de madera. D.F., México: Limusa.

Herrera, T. y Ulloa, M. (2013). El Reino de los hongos. Micología básica y aplicada. D.F.,
México: Fondo de Cultura Económica.

Hibbett, D. S., et al. (2007). A higher-level phylogenetic classification of the Fungi.

Mycological research, 111, 509-547.

Kiffer, E. y Morolet, M. (2000). The Deuteromycetes. Mitosporic Fungi. Classification and

Generic keys. New Hampshire. USA: Science Publishers Inc.
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Largent D. L. & Johnson, D. (1977). How to Identify Mushrooms to Genus: Macroscopic

Features. Eureka. United States of America: Mad River Press.

Largent D. L., Johnson D. y Watling R. (1981). How to Identify Mushrooms to Genus III:
Microscopic Features. Eureka. USA: Mad River Press.

Largent D. L.& Baroni T. J. (1988) How to Identify Mushrooms to Genus VI: The Modern
Genera Keys and Descriptions. Mad River Press

Lincoff, C. (1981). The Audubon field guide to North American Mushrooms. New York,
USA: Chanticler Press.

Margulis, L., y Schwartz, K. (1982). Five kingdoms. An illustrated guide to the Phyla of
life on Earth. New York, USA; W. H. Freeman.

Moore-Landecker, E. (1996). Fundamentals of the fungi. Engelwood Cliffs, USA:

Prentice Hall.

Moser, M. (1983). Keys to Agarics and Boleti (Polyporales, Boletales, Agaricales,

Russulales). En: Games, H. Kleine Kryptogamenflora. USA: Phillips.

Müller, E., y Loeffler, W. (1976). Micología. Barcelona, España: Omega.

Perry, J., y Morton, D. (1998). Photo Atlas for Botany. Belmont, USA: Wadsworth
Publishing Co. Phillips, R. (2010). Mushrooms and other Fungi of North America. USA:
Firefly Books.

Singer, R. (1975). The Agaricales in the modern Taxonomy. J. Cramer, Weinheim. USA.

Smith, H. V. & Smith, A. H. (1973). How to know the non-gilled fleshy fungi. Wm. C.
Brown, Duburque.

Steciow, M. M., Elíades, L. A. & Arambarri, A. M., (2001). Nuevas citas de

Blastocladiales (Chytridiomycota) en ambientes contaminados de Ensenada (Buenos
Aires). Darwiniana, 231-237.
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Ulloa, M. (1991). Diccionario ilustrado de Micología. México: Instituto de Biología.

UNAM. Ulloa, M., y Hanlin, R. (1978). Atlas de Micología básica. D.F., México:
Concepto.

Webster, J. y R. Weber. (2007). Introduction to Fungi. New York, USA: Cambridge

University Press.
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ANEXO 14. Etiqueta general de recolecta para macromicetos.

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ANEXO 15. Medios de cultivo y solución Melzer.

H.M.A. (harina de maíz-agar)

Composición:

● 20 g harina de maíz
● 15 g de agar
● 20 g dextrosa (C6H12O6)
● 20 g peptona
● Agua destilada (H2O) 1000 mL

Hervir la harina en medio litro de agua por 30 minutos a fuego lento, filtrarla y desechar los
sólidos. Completar con agua destilada a un litro. Agregar el agar, la dextrosa, la peptona y
mezclar todo en un matraz de dos litros, hacerle un tapón ajustado con algodón y gasa (de tal
forma que el tapón soporte el peso del matraz y su contenido al levantarlo en vilo tan solo
sosteniéndolo del tapón). Esterilizar en la autoclave (15 lb/120°C) 15 min o en olla de presión
por 30 min. Puede omitirse la dextrosa y la peptona para forzar esporulación. En caso de que
el matraz no quepa en la autoclave o la olla de presión, entonces hacer por separado dos
mezclas con la mitad de las cantidades y ponerlas en matraces de un litro.

P.D.A. (papa-dextrosa-agar)

Composición:

● 250 g de papas sin cáscara (puede usarse puré en polvo)

● 15 g de agar
● 20 g dextrosa (C6H12O6)
Lavar las papas y hervirlas 30 minutos. Filtrar el resultado y desechar las papas. Aforar con
agua destilada a 1 l, agregar agar, dextrosa y mezclar todo. Seguir los mismos pasos que el
caso anterior.
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Agar base (puede usarse agar nutritivo que ya viene preparado)

Composición:

● agar base 15 g
● agua destilada (H2O) 1000 mL

Mezclar ingredientes y esterilizar en la autoclave según lo indicado anteriormente.

Solución MELZER

Composición:

● Cristales de Yodo (I2) 0.5 g

● Yoduro de potasio (KI) 1.5 g
● Hidrato de cloral (C2H3Cl3O2) 20 g
● Agua destilada (H2O) 20 mL

Disolver los cristales de yodo en el agua (pueden disolverse primero en un poco de alcohol
96°) después el yoduro de potasio y el hidrato de cloral. Guardar en frasco ámbar.

Las reacciones obtenidas al aplicarlo en las muestras pueden ser variadas en función de la
coloración adquirida por las estructuras (hifas, esporas, ascas) y tienen la siguiente
terminología:

● Amiloide: desde tonos azules hasta negruzcos.

● Seudoamiloide o dextrinoide: café amarillenta a café rojiza, tener cuidado en
diferenciarlas de la coloración del reactivo Melzer.
● Inamiloide: si la reacción es negativa.
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ANEXO 16. Zigomicetos. 1. Micelio y esporangios Mucor spp. sobre jitomate. 2.

Esporangios sobre esporangióforos unidos en racimo (Rhizopus spp.). 3. Esporangio,
esporas y esporangióforo con columela (Mucor spp.). 4. Zigosporas de Rhizopus spp.
(Tomado de: http:\\[Link]; http:\\ [Link]\jreynolds\microbiology).
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ANEXO 17. Grupos principales de macromicetos (Fotografías originales de Hernández-

Muñoz y Sánchez Flores excepto las señaladas).
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Levaduriformes. 1. Levaduras de pulque Saccharomyces (triángulo). Tomado de

[Link]
Con peritecios en un estroma (2. Pyrenomycetes) tomado de http:\\[Link]

Xylariaceae. Ascomas muy duros, como madera, diversas formas: delgados con o sin
ramificación o bien cilíndricos gruesos (3. Xylaria spp.); hemiesféricos, pulvinados o
aplanados (4. Daldinia spp.). Son de colores obscuros (negro o café) Lignícolas, algunos
fimícolas.

Clavicipetaceae. Hongos carnosos o cartilaginosos, nunca duros. Largos, delgados o en

forma de clava; colores claros. Parásitos de insectos u hongos (5. Cordyceps spp.) tomado
de [Link] parásitos de gramíneas (6.
Claviceps spp.) Tomado de [Link]

Con apotecios (7. Discomycetes tomado de

[Link] 8. Corte transversal de apotecio
mostrando ascas con ascosporas.

Pezizaceae. Ascomas en forma de copa o discoidales simétrico o no, de consistencia

cartilaginosa- carnosa. Colores oscuros, opacos, raramente claros brillantes. Variado tamaño,
sobre varios sustratos. Himenio liso. 9. Scutellinia scutellata y 10. Aleuria spp.

Helvellaceae. Apotecio plano, plegado y estipitado; varios colores. Cartilaginosos o algo

carnosos. Terrícolas. 11. Helvella spp. y 12. Macropodia spp.

Morchellaceae. 13. Morchella Tomado de http:\\ [Link]

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BASIDIOMICETOS

Heterobasidiomycetes.
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14. Carbones (Ustilaginales). Sin basidioma, forman agallas con teliosporas previas a las
basidioeporas (Huitlacoche). Tomado de [Link]
hongos/ustilago-maydis-2/[Link]

Gelatinosos (Tremellales). Hongos gelatinosos con basidiomas de formas variadas,

generalmente lobulados, plegados o auriculiformes, pueden ser estipitados. Himenio liso,
verrucoso o espinoso. Lignícolas o terrícolas.

Tremellaceae. 15. Tremella spp. Auriculariaceae 16. Auricularia spp.

Holobasidiomycetes. Los basidiomicetos pueden agruparse por su tipo de himenio y

consistencia del basidioma (contexto) en los siguientes ÓRDENES y Familias:

Láminas; carnosos. En forma de seta, pueden carecer de estípite AGARICALES. Varias

familias de acuerdo al color de su esporada (Agaricaceae, Amanitaceae, Cortinariaceae,
Tricholomataceae etc.) 17. Cortinarius spp. 18. Amanita spp.

Basidioma en forma de seta, poros; carnosos. BOLETALES Boletaceae 19. Suillus spp. El
grupo de los APHYLLOPHORALES abarca todos lo demás tipos:

Polyporaceae. Poros; duros, correosos. En forma de seta o repisa. 20. Polyporus spp.

Cantharellaceae. Pliegues que forman arrugas o tienen apariencia laminar; carnosos. En

forma de embudo. 21 Cantharellus spp.

Hydnaceae Dientes o acúleos; carnosos, ligeramente correosos. En forma de seta, pueden

carecer de estípite. 22 Sarcodon spp.

Clavariaceae Liso; carnosos. En forma de clava o coral. 23 Ramaria spp.

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El grupo artificial de los GASTEROMICETOS abarca todos los basidiomicetos que tienen su
parte fértil (gleba) cubierto por tejido (peridio). Por ello al esporoma se le denomina
gasteroma.

LYCOPERDACEAE. Gasteroma globoso, subgloboso, piriforme. Gleba polvosa con capilicio.

24 Lycoperdon spp.

SCLERODERMATACEAE Gasteromas globosos con peridio grueso, gleba polvosa dividida

(peridíolos) sin capilicio. 25 Scleroderma spp.

TULOSTOMATACEAE Gasteromas estipitados, peridio globoso; gleba polvosa con capilicio.

26 Tulostoma spp.

GEASTRACEAE Gasteromas con tres capas de peridio (exo-, meso- y endoperidio) o sólo
dos (exo y endo). La gleba es polvosa y queda contenida en el endoperidio. El exo y el
mesoperidio se abren en forma de estrella y quedan como base del endoperidio. 27 Geastrum
spp.

CLATHRACEAE El receptáculo puede ser sésil, reticular, estipitado o ramificado en brazos a

manera de tentáculos o cortos y anastomosados. Existe volva y la gleba está en la parte
inferior del receptáculo.28 Laternea spp.

NIDULARIACEAE Hongos correosos en forma de embudo conteniendo uno o varios cuerpos

lenticulares que contienen la gleba (peridiolos). Lignícolas o fimícolas y algunos terrícolas. 29
Cyathus spp.
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PRÁCTICA 11.
OBSERVACIÓN, PRUEBAS QUÍMICAS Y DETERMINACIÓN TAXONÓMICA DE
LÍQUENES

OBJETIVO GENERAL

 Adquirir la habilidad para reconocer caracteres vegetativos y reproductivos de los

diferentes grupos de líquenes, así como de consultar literatura especializada para la
determinación taxonómica de especímenes.

OBJETIVOS PARTICULARES

 Identificar los diferentes tipos de talos liquénicos.

 Observar la morfología externa e interna del talo liquénico.
 Aplicar las técnicas de recolecta para líquenes.
 Observar las estructuras de preparaciones en fresco.
 Utilizar claves taxonómicas para la determinación de especímenes.

FUNDAMENTO TEÓRICO

El liquen es un tipo de “organismo” muy especial en la naturaleza, ya que es producto de la

asociación mutualista entre un hongo (micobionte) y una alga o una cianobacteria (fotobionte)
en combinaciones variables cuyo resultado es un talo liquénico característico. En proporción
las hifas del micobionte constituyen más del 90% de la biomasa del liquen; casi el 30% de
todas las especies de hongos que existen liquenizadas y de éstas el 98% son ascomicetos
(ascolíquenes) y el resto lo forman basidiomicetos (basidiolíquenes) y algunos deuteromicetos
(deuterolíquenes). Sólo el micobionte tiene reproducción sexual mediante asco o
basidiosporas y asexual por la producción de conidios (Brodo, 2001; Nash, 2010).

Los fotobiontes son cianobacterias o pueden ser algas clorofitas unicelulares o filamentosas
y constituyen aproximadamente el 10% de la biomasa del liquen. De todas las especies de
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líquenes (se estiman 18,000 especies distribuidas en 500 géneros) el 90% contiene clorofitas
(clorolíquenes) y el 10% restante cianobacterias (cianolíquenes). Su reproducción es sólo
asexual por bipartición o fragmentación (Galun, 1988).

La estratificación del talo liquénico es variable, ya que las células algales pueden estar
distribuidas de manera uniforme entre las hifas (talo homómero), o se restringen a una zona
más o menos central en el talo y en ese caso se diferencia una corteza superior y una inferior
(donde se forman los órganos de fijación: las rizinas), y el tejido central (médula) donde se
encuentran mezclados los fotobiontes con las hifas (talo heterómero). Existe un estrecho
contacto entre las hifas del hongo y las células del alga, en algunos casos las hifas pueden
penetrar la célula algal pero no es condición necesaria para que las substancias sean
transferidas entre los simbiontes. (Ahmadjian, 1993; Brodo et al., 2001).

La morfología del talo liquénico va desde costras firmemente unidas al sustrato, extensiones
dorsiventrales más o menos foliáceas y de consistencia gelatinosa o coriácea hasta talos
erectos ya sean columnares o bastante ramificados y de apariencia arbustiva o acintada
(fruticosas). Aunque es el micobionte quien provee la estructura de sostén, el fotobionte es
quien determina la morfología del talo liquénico. Fisiológicamente forman ácidos liquénicos
(compuestos alifáticos o fenólicos) que son metabolitos secundarios exclusivos del grupo. Son
cristales extracelulares (atranorina, ácidos úsnico, salazínico, giropórico, norstíctico y
lecanórico entre otros). Su papel fisiológico es discutido y depende de su distribución en el
talo. En el caso de las sustancias corticales pueden ser auxiliares en el control de absorción
de agua y pérdida de humedad o bien filtros auxiliares en caso de alta intensidad luminosa y
tienen efecto antibiótico en contra de bacterias y hongos; actúan como sustancias alelopáticas
y evitan la depredación de muchos animales que encuentran desagradable el sabor del talo.
Por ser algunas repelentes al agua permiten crear cámaras de aire en la médula para el
intercambio de gases. La identificación de estas sustancias mediante diversos reactivos,
microcristalización o cromatografía tiene relevante importancia taxonómica (Brodo et al.,
2001; Córdoba, 1975; Hale, 1979).
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En esta interacción el micobionte aprovecha las sustancias elaboradas por la fotosíntesis,

especialmente azúcares simples y el oxígeno liberado mientras que el fotobionte recibe
protección contra la insolación, pérdida de humedad y daños mecánicos; aprovecha el CO2
desechado en la respiración y el agua y sales minerales captadas por el talo. En el contexto
de la cadena trófica el liquen en sí mismo es un ecosistema en donde coexisten tanto
productores como consumidores (Ahmadjian, 1993; Galun, 1988).

Los líquenes contribuyen con el reciclaje del carbono y la fijación de nitrógeno (cianolíquenes);
son refugio de pequeños animales; alimento de gusanos e insectos incluyendo hasta grandes
herbívoros como los renos e incluso el hombre. Son colonizadores primarios importantes:
intemperizan rocas, forman suelo y contribuyen a la sucesión vegetal. Sus usos son diversos
ya sea como fijadores de perfume, como colorantes textiles, ornamentos y son fuente
potencial de antibióticos en el área médica (Brodo et al., 2001; Córdoba, 1975; Galun, 1988;
Hale, 1983; Hawksworth, 1984).

MATERIAL Y REACTIVOS

Material biológico
• Talos de diversas especies de líquenes.
• Preparaciones permanentes

Materiales diversos
• Portaobjetos y cubreobjetos.
• Navajas para rasurar de doble filo
• Mechero Bunsen
• Franela
• Papel absorbente
• Papel seda.
• Gelatina gicerinada
REACTIVOS
• Agua destilada (H2O)
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• Acetona (C3H6O)
• Glicerina (C3H8O3)
• Etanol al 96° (C2H5OH)
• O-toluidina (C7H9N)
• Quinolina (C9H7N)
• Hidroxido de potasio (KOH)
• Hipoclorito de sodio (NaClO)
• Parafenilenediamina (C6H8N2)

Recolecta de líquenes
• Morral
• Botes de plástico de diversos tamaños
• Papel encerado.
• Marcador de cera.
• Cajas blancas pequeñas de cartón.
• Etiquetas de campo (Anexo 18)

EQUIPO
• Microscopio estereoscópico.
• Microscopio de campo claro.

SERVICIOS
• Agua
• Vacío
• Gas
• Energía eléctrica
• Campanas de extracción
• Extractores de ventilación
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• Tarjas de lavado
• Extintores
• Regaderas de seguridad
• Gavetas
• Mesas de trabajp
• Ventanas para la ventilación
• Botiquín de emergencia

PROCEDIMIENTO

Actividades previas
El alumno realizará una investigación bibliográfica sobre los siguientes puntos, antes del
desarrollo de la práctica.

1. Analice cuidadosamente al liquen como una especie.

2. Enliste algunos de los principales géneros de micobiontes y fotobiontes.
3. Indique cuáles son las estructuras características de un liquen, defina cada una de ellas.
4. Enliste algunos compuestos liquénicos.
5. Investigue algunos otros usos aparte de los mencionados en este manual.

Desarrollo de la práctica
Recolección
Durante la recolecta se necesita llevar un registro en una libreta de campo con los siguientes
datos: número de recolecta de cada ejemplar, localidad, altitud, tipo de vegetación, tipo de
suelo, sustrato, fecha y datos complementarios (Anexo 18). El material se puede tomar
directamente o con cuchillo o martillo y cincel según el sustrato donde se encuentre. Colocar
el material liquénico en botes de plástico (diferentes tamaños de manera individual o colectiva
pero en este caso cada ejemplar envuelto en papel encerado) anotando número de registro;
esto se tiene la ventaja de que si se van a tomar fotografías del material en el laboratorio o
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zona de trabajo, éste no estará decolorado por la deshidratación, incluso con esta técnica el
material se puede trabajar dos o tres días después de recolectado. Es aconsejable una bolsa
de lona para cargar la recolecta (Coutiño, 1986; Hale, 1979).

Se deben deshidratar y colocar en cajitas rotuladas (ver metodología en la práctica 10 del

presente manual ya que es la misma usada en macromicetos). En el caso de los líquenes
gelatinosos generalmente tienen adheridos diversos cuerpos extraños. Para eliminarlos se
recomienda lavarlos con agua destilada y después secarlos (procedimiento que modifica
bastante su aspecto) o bien, se introducen en formol-aceto-alcohol (FAA) como fijador dentro
de frascos de vidrio con tapa de plástico. Cuando se requiera de la elaboración de
preparaciones para observaciones con el microscopio compuesto, es conveniente efectuar el
procedimiento anterior y continuar con las técnicas de microscopía convencionales,
empleadas para tejidos vegetales (Coutiño, 1986; Gaviño, 2005).

Morfología y determinación taxonómica

Trabajar los especímenes liquénicos recolectados. Revisar la morfología de cada ejemplar y
mediante el uso de las claves para identificación del Anexo 19 determinar a nivel de género
(Brodo, 2001; Dobson, 1992; Hale, 1979). Aplicar algunas de las pruebas químicas y de
cristalización que se explican a continuación (Anexo 20).

Se recomienda trabajar los siguientes géneros:

● Costrosos: Caloplaca, Graphis, Lecanora y Lepraria.
● Foliáceos: Candelaria, Candelariella, Evernia, Everniastrum, Flavoparmelia,
Flavopunctelia, Heterodermia, Hypotrachyna, Parmelia, Parmotrema, Peltigera,
Pseudevernia, Punctelia, Sticta, Xanthoparmelia y Xanthoria.
● Fruticosos: Cladonia, Cora. Ramalina, Teloschistes y Usnea.

Pruebas químicas
Se utilizan los siguientes reactivos: hidróxido de potasio; hipoclorito de sodio o de calcio y
Parafenilenediamina conocidos por convención por las siglas K, C y P respectivamente
(Anexo 19) (Brodo, 2001; Hale, 1979).
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Se recomienda hacer las pruebas sobre un trozo de papel filtro o en una cápsula de porcelana
para contrastar bien la coloración de la reacción. Use sólo un fragmento pequeño de talo por
cada prueba. Puede hacerse también una combinación KC o CK cuidando ese orden al verter
las gotas (ambas de manera continua e inmediata sobre el mismo trozo de liquen). Debe
observarse la reacción con lupa o en el microscopio estereoscópico para lo cual es necesario
tener los reactivos a la mano ya que algunas reacciones son fugaces.

● Aplicar K y observar la reacción positiva de: Caloplaca y Teloschistes (púrpura). Aplicar

C y observar la reacción positiva de: Flavopunctelia (médula roja); Flavoparmelia (negativa).
● Aplicar P y observar la reacción positiva o negativa de: Usnea.

Cristalización (Brodo, 2001; Hale, 1979)

Para observar cristales es necesario tomar un pedazo pequeño de talo, colocarlo sobre un
portaobjetos y cortarlo muy finamente con navaja. Reunir todos los pedacitos en el centro del
portaobjetos y añadir unas gotas de acetona repetidamente según se evapore. Una vez seco,
retirar los pedacitos para dejar sólo el concentrado seco. Añadir una gota del agente
cristalizador (GE; GAW, GAQ o GaoT descritos en el Anexo 19). Colocar el cubreobjetos.
Calentar en el mechero suavemente hasta apreciar burbujeo. Observar a 40X y 100X en el
microscopio compuesto, describirlos y comparar los cristales con la guía de Hale (1979)
(Anexo 21).

RESULTADOS

Elabore un cuadro comparativo con las muestras revisadas para género. Así como una
descripción de cada uno con los caracteres observados, incluya los esquemas
correspondientes.
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Reacción
Estructuras de
Género Forma Color Sustrato química
reproducción
(KOH, NaClO)
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BIBLIOGRAFÍA
Ahmadjian, V. (1993). The lichen symbiosis. New York, United States of America: John
Wiley & Sons, INC
Brodo, I. M., Sharnoff, S. D. & Sharnoff, S. (2001). Lichens of North America. New
Haven, United States of America: Yale University Press.
Coutiño, B. (1986). Líquenes. En: Lot, A. y Chiang, F. (Eds.). Manual de Herbario,
administración y manejo de colecciones, técnicas de recolección y preparación de
ejemplares botánicos. D.F., México: Consejo Nacional de la Flora de México.
Córdoba, C. V. (1975). Fisiología de las sustancias liquénicas. Madrid, España:
Alhambra.
Dobson, F. S. (2000). Lichens: an illustrated guide to the British and Irish species.
Richmond, USA: The Richmond Publishing Co. Ltd.
Galun, M. (1988). Handbook of Lichenology. Florida, United States of America. CRC
Press, Inc. Boca Raton
Gaviño, G., Juárez, C. L., y Figueroa, H. H. (2004). Técnicas Biológicas. Selectas de
Laboratorio y de Campo. México: Limusa.
Hale, M. E. (1979). How to know the Lichens. The Pictured Key Nature Series. Dubuque
Iowa, United States of America. Wm. C. Brown Company Publishers.
Hale, M. E. (1983). The Biology of lichens. Baltimore, United States of America. Edward
Arnold
Hawksworth, D. L. y Hill, D. J. (1984). The lichen-forming fungi. New York, United States
of America. Blackie, Chapman & Hall.
McCune, B., & Geiser, L. (2009). Macrolichens of the Pacific northwest. Corvallis, OR,
USA: Oregon State University Press.
Nash III, T.H. (2010). Lichen biology. United States of America. Cambridge University
Press.
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ANEXO 18. Etiqueta para la recolección de líquenes.

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ANEXO 19. Soluciones empleadas en liquenología.

FIJADOR FAA: (para preparar 50 mL de solución).

● Formol (CH2O) comercial 10 mL

● Agua destilada (H2O) 35 mL

● Ácido acético glacial (CH3COOH) 5 mL

● Etanol (C2H5OH) (alcohol 96°)

PREPARACIÓN DE REACTIVOS:

Reactivo K

Hidróxido de potasio KOH al 20%

Agua destilada (H2O) 30 mL

Preparar solución concentrada.

Reactivo C

Solución de hipoclorito de sodio (NaClO) (cloro comercial) usado directamente.

Reactivo P (mucho cuidado ya que es cancerígeno y además daña papel y tela)

Cristales de parafenilenediamina (C6H8N2)

Alcohol (C2H5OH)

Colocar un pequeño cristal sobre un papel filtro y en éste el pedazo del ejemplar a probar.
Agregar una gota de alcohol. O bien preparar una pequeña cantidad de solución en alcohol y
usarlo en gotas.
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Agentes recristalizantes:

GE glicerol (C3H8O3): ác. Acético (CH3COOH) (1 : 3)

GAW glicerol (C3H8O3): etanol (C2H5OH) : agua (H2O) (1: 1: 1)

GAoT glicerol (C3H8O3): etanol (C2H5OH): o-toluidina (C7H9N) (2: 2: 1)

GAQ glicerol (C3H8O3): etanol (C2H5OH): quinolina (C9H7N) (2: 2: 1)

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ANEXO 20. Clave para determinar líquenes a nivel de género.

Autor: Biól. Marco Antonio Hernández Muñoz

La clave para géneros de líquenes es de tipo analítico-sinóptico con un formato de diagrama

de flujo que facilita el seguimiento de los caracteres.

Consta de cuatro entradas numeradas según la forma del talo: 1. Líquenes con talo foliáceo,
la ruta de determinación se indica con las líneas interrumpidas de color verde. 2. Líquenes
con talo foliáceo con los lóbulos muy adheridos al sustrato, las opciones se marcan con líneas
punteadas anaranjadas. 3. Líquenes con talo umbilicado, el camino a seguir se indica en
líneas azules. 4. Líquenes fruticosos (y foliáceos con hábito fruticoso pero sin rizinas) las
líneas se resaltan en color rosa.

Para iniciar la lectura de la clave se necesita elegir la entrada (1, 2, 3 ó 4) en función del tipo
de talo y las respectivas líneas de color trazan la ruta de determinación. En la entrada número
cuatro, por optimizar espacio se señalaron cuatro opciones extras: un par de opciones
(entrada 1 debajo de la alternativa “no gelatinosos”) encerradas en paréntesis de colores: la
anaranjada redirecciona la búsqueda por la entrada 2 debido al color del talo y la de color rosa
para redirigir a la entrada 4 hacia Cladonia en caso de ser lobulaciones pequeñas sin córtex
inferior.

Las otras dos opciones son flechas gruesas color rosa en la entrada 4, una guía hacia las
“cladonias” que pueden tener ramificación; la otra indica al género Everniastrum cuyo hábito
es foliáceo pero su talo acanalado le da un aspecto fruticoso. Por esta razón es posible
abordarlo por ambas entradas (1 ó 4) pero la presencia de rizinas y/o cilios lo separa de los
verdaderos líquenes fruticosos.

El nombre de cada género tiene una tipografía característica que contiene información
adicional a manera de una clave pictórica: la gran mayoría de los nombres se iluminaron con
el color de su talo respectivo; algunos mediante la trama de relleno representan ciertas
características particulares como en el caso de las cifelas de Sticta y las seudocifelas de
Pseudocyphellaria y Punctelia, o las venaciones de Peltigera y las arrugas marcadas de
Lobaria. Los dos géneros gelatinosos foliáceos indican su tipo de talo mediante puntuaciones
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en el caso de Collema que no tiene estratificación y por lo tanto el nombre no tiene línea
contínua mientras que Leptogium sí la presenta.

Cladina tiene un contorno difuso por no tener córtex y el interior blanco por ser hueco mientras
que el talo de Alectoria sí tiene córtex (línea contínua) pero es hueco igual que Hypogymnia
y al contrario que Usnea cuyo talo es sólido por presentar médula en forma de un cordón
central (interior amarillo) y también es corticado. Las rizinas se indican cuando sean un
carácter diagnóstico como es el caso de Candelaria y Umbilicaria y los talos ciliados tienen
representados alrededor del nombre los cilios con líneas onduladas (Heterodermia,
Parmotrema) y los bulbilos con protuberancias negras (Bulbothrix).

Cladonia tiene representadas las escuámulas basales con círculos verdes pequeños mientras
que con óvalos cafés se muestran los apotecios recurvados hacia abajo en Nephroma y los
superficiales e incrustados de Solorina. En la entrada 3 se acentuó el carácter umbilicado (un
solo punto de fijación) con el encabezado a manera de “llamada” y se añadió un símbolo de
círculos concéntricos negros para representar los apotecios replegados de Umbilicaria y
Lasallia, mientras que a Dermatocarpon se señalan sus peritecios con puntos.

Hypotrachyna tiene representada su lobulación truncada y sus espacios semicirculares en la

forma de su letra “H”. El talo en forma de repisa de Cora se representa proyectado hacia
adelante y en su interior se marcan las líneas concéntricas del talo; los talos canaliculados se
representan en la misma curvatura del nombre del género (Heterodermia y Everniastrum).

Evernia por ser de talo flexible se representa ondulado pero además su contorno es grueso y
el relleno claro para ejemplificar en este caso el diferente color del córtex superior e inferior al
igual que Pseudevernia pero éste no se representa ondulado ya que el talo es rígido; en
contraste

Ramalina no tiene línea de contorno y color interno para representar que ambos córtex los
tiene de igual color. Algunas reacciones químicas muy evidentes se representan con su
respectivo color en los contornos de Caloplaca, Xanthoria, Teloschistes (K+) por ser el córtex
el que reacciona y en el interior de Flavopunctelia porque la que reacciona es la médula (C+).
Se anexa el significado de las abreviaturas.
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GÉNEROS DE LÍQUENES
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ANEXO 21. Guía de imágenes para el reconocimiento de cristales liquénicos a partir de

reactivo indicados (Tomado de Hale, 1979).
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ANEXO 22. Estructuras de líquenes

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CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA UNIDAD

Esta unidad representa un 25% del total de la calificación del laboratorio y se considerarán
los siguientes aspectos:

a) Reportes de prácticas 40 %

c) Participación y trabajo en el laboratorio 30 %

d) Examen 30 %

1. Los protocolos de prácticas incluyen cuestionario y glosario, los cuales deben

entregarse resueltos al inicio de cada sesión, anotar el o los nombres de quienes lo
elaboraron.

2. Los reportes deben entregarse manuscritos y completos con: carátula (título de la

práctica, No. de equipo, nombre de los integrantes que participaron), introducción (una
cuartilla con citas bibliográficas) objetivo, material y método o procedimiento, resultados
(esquemas, figuras, estructuras, aumento, diagnosis, etc.) discusión de resultados, conclusión
(es) y bibliografía consultada.

3. Los reportes deben entregarse durante las dos sesiones siguientes con un máximo
de una semana después de realizada la práctica.

4. La asistencia es importante para que se tomen en cuenta: cuestionarios, glosarios y

reportes

5. Presentarse al laboratorio con el material que se le solicite (bata, muestras,

instrumental u otros materiales).

6. Durante la práctica de campo, en caso de cometer una falta, se suspenderá de

inmediato y se regresará a la FES-Zaragoza.
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MANEJO DE RESIDUOS

Las cajas Petri con medio de cultivo inoculado se deben inactivar para ser desechadas en
bolsas negras debidamente etiquetadas o lavadas en caso de ser cajas Petri de vidrio, el
medio de cultivo inactivado debe colocarse en frascos de vidrio etiquetado.

Los guantes de látex y cubrebocas utilizados en las prácticas deben ser desechados en bolsas
negras debidamente etiquetadas.

Los residuos generados de la técnica de tinción de Gram deberán ser recolectados en frascos
de vidrio, debidamente etiquetados y colocarlos en el área asignada dentro del laboratorio.

El material de cristalería roto debe ser colocado en el respectivo contenedor que se ubica en
el laboratorio.
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UNIDAD 4
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN
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PROYECTO DE INVESTIGACIÓN

INTRODUCCIÓN DE LA UNIDAD

En esta unidad se realizará un proyecto de docencia-investigación, con los siguientes

lineamientos: El proyecto lo llevaran a cabo en equipo y tendrá una duración de cuatro
semanas, el cual se podrá apoyar con el material recolectado en la práctica de campo, misma
que estará sujeta a las condiciones climatológicas y de seguridad del área de estudio.

Los alumnos serán asignados de forma equitativa a cada profesor.

El alumno debe leer y seguir los lineamientos establecidos en los reglamentos: de laboratorio,
salidas a campo y de seguridad. Consultar las siguientes ligas:
 [Link]
content/Portal2015/Reglamentos/reglamento_practicas_campo.pdf

 [Link]
content/Portal2015/Reglamentos/[Link]

El proyecto debe involucrar al menos dos de las unidades del laboratorio. Una de esas dos
unidades debe ser la del profesor que les asesora.

El tema será propuesto por los alumnos integrantes del equipo.

El proyecto debe incluir una parte experimental viable en el laboratorio.

La calificación obtenida en esta unidad, representa el 25% de la calificación total del

laboratorio. Para promediarse todas y cada una de las calificaciones por unidad debe ser
aprobatorias.
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OBJETIVO DE LA UNIDAD

Desarrollar la capacidad de integrar los conocimientos de las unidades química orgánica,

genética, bacterias, algas y hongos en el diseño e implementación de un proyecto de
docencia-investigación, donde reforzara las habilidades obtenidas durante las prácticas y
experimentos del curso.
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EXTRACCIÓN DE COMPUESTOS ORGÁNICOS DE ALGAS, HONGOS Y

LÍQUENES DE LOS ESTADOS DE PUEBLA O VERACRUZ Y SU EFECTO EN UN
MODELO BIOLÓGICO

PARTICIPANTES:
Dra. Aguiñiga Sánchez Itzen
MES. Alvarado Domínguez María Cristina
Dra. Ávila Ortiz Alejandrina Graciela
M. en C. Bautista Reyes Carlos
Biól. Castillo Chaires Irene
Dr. Díaz Martínez Sergio
M. en C.E. Espitia Licea Rocío
M. en C. Hernández Anaya Lisandro
Q. Jiménez María Encarnación Estela
Biól. Longares Méndez Dora Alicia
Mtro. Luna Vásquez Alfonso
Q.F.I. Niño de Rivera Oyarzabal María del Carmen
M. en Biotec. Ramos Velázquez José Rigoberto
M. en C. Rivera Martínez Ana Rocío
Dra. Saito Quezada Verónica Mitsui
Dra. Soriano Martínez Ana María
Biól. Zapata Cruz Aida
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EXTRACCIÓN DE COMPUESTOS ORGÁNICOS DE ALGAS, HONGOS Y

LÍQUENES DE LOS ESTADOS DE PUEBLA O VERACRUZ Y SU EFECTO EN UN
MODELO BIOLÓGICO

MARCO TEÓRICO

En el Laboratorio de Investigación Formativa II se cursan las unidades de Química Orgánica,

Bacterias, Algas, Hongos y Líquenes, así como Genética y el Proyecto de Investigación, para
que el alumno construya su propio proceso de aprendizaje a través de actividades que lo
orienten, tanto en la búsqueda de información, como en el diseño de su trabajo experimental.
El alumno debe relacionar los conocimientos previos y los adquiridos en este laboratorio para
elaborar y desarrollar su proyecto de investigación.

Los organismos vivos, entre ellos las algas, hongos y líquenes, han constituido una fuente
principal de productos naturales de uso medicinal. Desde la antigüedad, la gente ha buscado
la cura de muchas enfermedades basadas en sustancias derivadas de dichos organismos.
Con el tiempo, se descubrieron las propiedades curativas de plantas medicinales específicas
para el tratamiento de ciertos padecimientos. Gradualmente el uso de estas plantas abandonó
el marco empírico y se fundó en hechos explicativos (Petrovska, 2012).

Las algas, hongos y líquenes son la fuente de compuestos químicos. En el caso de las algas
y hongos como alimento, ricos en proteínas, minerales y vitaminas. Estos organismos poseen
compuestos activos con gran potencial en la cosmética, medicina y farmacéutica.

Cianobacterias

Las cianobacterias, también conocidas como algas verde-azules o cianofitas, son organismos
procariotas fotosintéticos, presentan clorofila a y b, carotenoides y ficobiliproteínas asociadas
a lamelas fotosintéticas. Carecen de núcleo verdadero, su material genético se encuentra
dispuesto en el citoplasma. Las células están rodeadas por un mucílago o vaina que las
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protege contra la desecación, la cual está compuesta de azúcares neutros como galactosa,
glucosa, manosa, rhamnosa, 2-O-metil-D-xilosa, ácido glucurónico y galacturónico; también
puede contener proteínas y fosfatos. Su reproducción es asexual por medio de nanocistes,
endosporas, exosporas u hormogonios. Existe intercambio genético por conjugación y
transducción (Lee, 2008; Graham & Wilcox, 2000). Actualmente se encuentran descritas
aproximadamente 4500 especies (Guiry & Guiry, 2019).

Algas eucariotas

Las algas eucariotas son organismos fotosintéticos que carecen de raíz, tallo y hojas, así
como de un sistema vascular, por lo que son denominadas talofitas (Barsanti & Gualtieri,
2014); pertenecen a diferentes grupos taxonómicos entre los que se encuentran: Phylum
Chlorophyta (algas verdes), Phylum Rhodophyta (algas rojas) y Clase Phaeophyceae del
Phylum Ochrophyta (algas pardas). Han sido objeto de varios estudios debido a los
compuestos obtenidos y su uso tanto alimenticio como farmacológico (Ye et al., 2008;
Ermakova et al., 2011; Pádua et al., 2015).

Phylum Rhodophyta

A nivel mundial se han descrito más de 7000 especies de algas rojas (Guiry & Guiry, 2019).
Este grupo se caracteriza por presentar talos desde unicelulares hasta parenquimatosos,
presentan diferentes pigmentos entre ellos: clorofila a, ficobiliproteínas y carotenoides; el
producto de reserva es almidón floridano; sus plastidios son primarios (Graham & Wilcox,
2000). El ciclo de vida de este grupo son haplobiónticos o diplobiónticos heteromórficos (Lee,
2008). Su distribución es en regiones templadas y tropicales. Han sido registradas tanto en
ambiente marino como dulceacuícola.

Phylum Chlorophyta

Las algas verdes son marinas, terrestres o dulceacuícolas, se distribuyen en regiones

tropicales y templadas. Estos organismos se caracterizan por presentar diferentes pigmentos:
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clorofila a y b, carotenoides; su material de reserva es almidón. Los talos presentes pueden

ser unicelulares, coloniales, sifonales, parenquimatosos. Los ciclos de vida que llevan a cabo
son haplobióntico y diplobióntico iso- o heteromórficos. Al igual que Rhodophyta, Glaucophyta
y Streptophyta presentan plastidios primarios. A nivel mundial se han descrito
aproximadamente 6500 especies (Guiry & Guiry, 2019).

Clase Phaeophyceae

Las algas pardas (clase Phaeophyceae), se caracterizan por presentar talos desde
filamentosos hasta parenquimatosos. Los pigmentos presentes en las algas pardas tienen
clorofila a y c, así como carotenoides; su producto de reserva es la laminarina (Graham &
Wilcox, 2000). La mayoría de las especies son marinas y algunas dulceacuícolas, su ciclo de
vida puede ser haplobióntico o diplobióntico iso- o heteromórficos (Lee, 2008). Actualmente
se han registrado más de 2000 especies a nivel mundial (Guiry & Guiry, 2019).

Macromicetos

Los hongos son organismos eucariotas heterótrofos, con paredes de quitina, hemicelulosa y
lípidos o celulosa, quitosana y otros polímeros. Tienen reproducción sexual y asexual por
esporas, en su mayoría no presentan flagelos excepto Quitridiomicetes (Herrera & Ulloa,
1990). Este grupo es cosmopolita e incluye Quitridiomicetos, Glomeromicetos, Ascomicetos y
Basidiomicetos. Varias especies de hongos han sido registrados como medicinales y son
importantes tanto cultural como económicamente. Para fines del proyecto se considerarán
Ascomycota y Basidiomycota.

Phylum Ascomycota

Los ascomicetes se caracterizan por desarrollar hifas modificadas derivadas de la

reproducción sexual llamadas ascas, en los cuales se desarrollan ascosporas. El talo puede
ser unicelular pero generalmente está constituido por un micelio bien desarrollado con hifas
ramificadas y septadas que pueden constituir ascomas de diferentes formas. A nivel mundial
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se han descrito más de 50,000 especies (Hawksworth, 2001), varias de ellas establecen
simbiosis con algas para la formación de líquenes.

Phylum Basidiomycota

Los basidiomicetes presentan talos de hifas bien desarrolladas y tabicadas, el carácter

diagnóstico es la producción de basidiosporas sobre células especializadas llamadas basidios
que generalmente se encuentran en el himenio presente en su cuerpo fructífero (Basidioma).
Actualmente se han descrito de 30,000 a más 80,000 especies (Webster & Weber, 2007;
Hawksworth, 2001), sin embargo, aún se desconoce gran parte de la diversidad de estos
grupos.

Líquenes

Los líquenes son talos duales que resultan de una asociación simbiótica entre un micobionte
y uno o más fotobiontes, es una relación mutualista en la cual el hongo brinda agua, dióxido
de carbono y sales minerales, además de la protección al alga y ésta brinda azúcares
derivados de la fotosíntesis (Herrera & Ulloa, 1990). Presentan diferentes tipos de talo, entre
ellos: crustáceos, foliáceos, escuamulosos, fruticulosos o mixtos, los cuales pueden estar
adheridos a diferentes sustratos (Webster & Weber, 2007).

Los metabolitos primarios de las algas corresponden a los productos relacionados con el
proceso fotosintético, crecimiento y reproducción y los secundarios son aquellos compuestos
que le sirven como protección y defensa. Algunos hongos sintetizan compuestos que los hace
tóxicos o venenosos. Por último, los líquenes sintetizan ácidos liquénicos con propiedades
antibacteriales, antitumorales, antifúngicas, entre otras.

Obtención de compuestos orgánicos

Cuando se realiza la obtención de una serie de compuestos orgánicos o metabolitos, es

interesante conocer la función biológica que pueden presentar frente a diferentes organismos
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en condiciones y concentraciones definidas (Zhan et al., 2011). Para que los organismos vivos
puedan realizar todas sus funciones, necesitan obtener energía del medio en el que se
desarrollan, por medio del metabolismo primario, rompiendo y formando enlaces de
compuestos simples; de éste se deriva otro metabolismo al cual se le denomina metabolismo
secundario (Sepúlveda et al., 2003), en este caso, solo es la formación de compuestos
orgánicos con cierto grado de complejidad los cuales producen adaptativamente algunos
organismos para interactuar con las presiones ambientales (estrés, competencia, defensa,
entre otras).

El desarrollo alcanzado en los métodos de extracción e identificación de los metabolitos y el

nivel de las investigaciones mundiales hacen que el área de los productos naturales sea la de
mayor crecimiento dentro del campo de la química orgánica. En la actualidad se reportan
cerca de un millón de productos naturales aislados a partir de diferentes fuentes (Brizuela et
al., 1998). Para poder obtener, separar, identificar y caracterizar los metabolitos secundarios,
es importante hacer uso de diferentes métodos y técnicas, comunes en los laboratorios de
química orgánica (Skoog et al., 2005) como son:
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Importancia de los estudios en genética

El campo de la genética ha crecido enormemente, tanto en lo que sabemos cómo en lo que

deseamos que aprendan los nuevos estudiantes. Se busca no solo familiarizar a los
estudiantes con los descubrimientos más importantes de los pasados 150 años, sino también
ayudarles a relacionar esta información con los mecanismos genéticos subyacentes que
explican los procesos celulares, la diversidad biológica y la evolución. Además, también se
pretende que integren la genética molecular y la genética toxicológica. En los primeros años
de este nuevo milenio, los descubrimientos en genética continúan siendo numerosos,
productivos y aplicativos. Como estudiante de genética, la excitación de formar parte de esta
era debe estar equilibrada por un fuerte sentido de la responsabilidad y una atención
cuidadosa a muchos temas científicos, sociales y éticos que ya han aparecido y otros que
indudablemente surgirán en el futuro.

Ya que los procesos genéticos son esenciales para la comprensión de la vida misma, muchos
piensan que la disciplina de la genética se asienta en el centro de la biología. La información
genética dirige la función celular, determina en gran medida la apariencia externa de los
organismos y sirve de unión entre generaciones en todas las especies. En sí mismo, el
conocimiento genético es esencial para la comprensión completa de disciplinas, como la
biología molecular, la biología celular, fisiología, evolución, ecología, sistemática y etología.
Por consiguiente, la genética unifica la biología y constituye su núcleo. Así, no es sorprendente
que la genética tenga una larga y rica historia.
El conocimiento y usos de los recursos naturales, es parte de la cultura de muchos pueblos
del mundo. En México, la utilización o aprovechamiento de los recursos naturales, tiene varias
vertientes, juega un papel importante en el área de la Toxicología genética (disciplina que
estudia los efectos genotóxicos producidos en un organismo cuando a este se le expone a un
ompuesto xenobiótico). De ahí la importancia de conocer los efectos que causan las
sustancias de algas, hongos y líquenes en un modelo biológico como Drosophila
melanogaster.
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PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

El Laboratorio de Investigación Formativa II está conformado por tres unidades de

aprendizaje: Química orgánica, Genética y Bacterias, algas, hongos y líquenes. El alumno
elaborará un proyecto de docencia-investigación en el que adquirirá conocimientos
habilidades y actitudes en el manejo de equipos, materiales e instrumentos para la
elaboración de un proyecto de investigación siguiendo el método científico con el propósito
de integrar al menos dos unidades de la asignatura.

OBJETIVO GENERAL

Extraer compuestos orgánicos de algas, hongos y líquenes, y evaluar su efecto en un modelo

biológico.

OBJETIVOS PARTICULARES

● Aplicar las técnicas de recolección y preservación en campo de algas, hongos y

líquenes.
● Identificar taxonómicamente algas, hongos y líquenes recolectados.
● Extraer compuestos orgánicos de algas, hongos y líquenes, utilizando técnicas de
química orgánica.
● Determinar el efecto de los extractos en un modelo biológico.
● Comparar los efectos fenotípicos producidos por las sustancias orgánicas obtenidas
en un modelo biológico.
● Elaborar un informe escrito del proyecto de investigación.

MATERIALES Y MÉTODOS

Zona de estudio
El área de estudio estará sujeta a las condiciones climatológicas y de seguridad, apegándose
a los reglamentos vigentes de las salidas a campo.
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Puebla
El estado de Puebla de los Ángeles (Figura 1) se encuentra localizado entre las coordenadas
norte 20°50'24", al sur 17°51'39"; al este -96°43'29", al oeste -99°04'14". El estado de Puebla
representa el 1.7% de la superficie del país. Colinda al norte con Hidalgo y Veracruz; al este
con Veracruz y Oaxaca; al sur con Oaxaca y Guerrero; al oeste con Guerrero, Morelos,
México, Tlaxcala e Hidalgo.

FIGURA 1. Zona de estudio, Puebla. Fuente INEGI.

Puebla es un estado de alta importancia para la diversidad debido al número de especies que
alberga y su colindancia con los estados de Oaxaca y Veracruz. Sin embargo, aún se
requieren estudios para estimar con precisión su riqueza de especies. Entre los ecosistemas
que se pueden encontrar destacan: selvas, bosques de coníferas, matorrales y bosque
mesófilo de montaña (CONABIO, 2011a) (Fig. 2) La diversidad de hongos y líquenes aún no
es totalmente conocida. De acuerdo con la plataforma Enciclovida (CONABIO, 2016) se
encuentran alrededor de 235 especies de hongos. Por su parte la diversidad liquénica es de
361 especies (Herrera-Campos et al., 2014). Finalmente, la diversidad de algas
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dulceacuícolas, principalmente microscópicas, reporta alrededor de 171 especies (CONABIO,

2011a).

Veracruz

El estado de Veracruz de Ignacio de la Llave (Figura 3) se encuentra localizado entre las

coordenadas norte 22°28'18", al sur 17°08'13"; al este -93°36'29" y al oeste -98°40'54". Con
una superficie de 72, 410 km2, representa el 3.7% de la superficie del país y ocupa el décimo
lugar en extensión por estados (CONABIO, 2013). Veracruz colinda al norte con Tamaulipas
y el Golfo de México; al este con el Golfo de México, Tabasco y Chiapas; al sur con Chiapas
y Oaxaca; al oeste con Puebla, Hidalgo y San Luis Potosí. Debido a su extensión, posee cerca
de 745 km de costa, lo que representa el 10% del litoral de México (CONABIO, 2013).

Veracruz es un estado con alta diversidad biológica, siendo el tercer estado, detrás de Oaxaca
y Chiapas, con mayor número de especies (CONABIO, 2013). Esto se debe principalmente a
la alta diversidad de ecosistemas entre los que destacan: bosques tropicales, matorrales,
bosques de templados, bosque mesófilo de montaña, dunas costeras, sistemas arrecifales
marinos y ecosistemas litorales (CONABIO, 2011b)(Fig. 4). La diversidad fúngica y algal del
estado es muy alta, según datos obtenidos a través de Enciclovida (CONABIO 2016), el
número de macromicetos es cercano a 1500 especies. Por otro lado, se estima que el estado
alberga cerca de 700 especies de líquenes (Herrera-Campos et al., 2014).
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FIGURA 2. Tipos de vegetación del estado de Puebla (CONABIO, 2011a).

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FIGURA 3. Zona de estudio, Veracruz. Fuente INEGI.

Finalmente, el número de algas estimadas, de acuerdo a los estudios de diversidad del

estado, es cercano a las 1500, incluyendo especies tanto de microalgas (diatomeas,
dinoflagelados, entre otros) como de macroalgas (algas rojas, verdes y pardas) (CONABIO,
2011b). Desafortunadamente, el estado de Veracruz ha sufrido de una gran alteración en uso
de suelo (Fig. 4) habiéndose transformado cerca del 85% de su superficie (CONABIO, 2011b).
Por esta razón, el conocimiento de la diversidad y su preservación es de gran relevancia.
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FIGURA 4. Tipos de vegetación del estado de Veracruz (CONABIO, 2011b).

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Especies vegetales asociadas

Entre algunas de las principales especies vegetales que se pueden encontrar en los sitios de
colecta destacan: Pinus pseudostrobus, Pinus patula, Quercus oleoides, Abies religiosa,
Bursera simarub, Parmentiera edulis, Psidium sartorianum, Guazuma ulmifolia, Heliocarpus
appendiculatus, Neobuxbaumia tetetzo, Dasylirion sp., Yucca periculosa, Agave lechuguilla,
Forestiera angostifolia, Panicum barbinode, Pennisetum clandestinum, Cynodon
plectostachyum, Digitaria decumbens, Zea mays, Phaseolus vulgaris, Medicago sativa, Pyrus
malus, Persea americana.

MATERIAL PARA LA SALIDA AL CAMPO

Bolsas de plástico con cierre

Navaja, espátula o cuchillo para recolecta
Frascos de vidrio 125 - 250 mL
Etiquetas de papel albanene
Probeta de plástico 500 -1000 mL
Bolsas de papel estraza de 250 g o 15X30 cm.
Bolsa de malla de plástico.
Contenedor de plástico para transporte de material recolectado
Libreta de campo de pasta gruesa
Marcadores indelebles, bolígrafo y lápiz
Cuerda de 10 m de largo y al menos de 3 cm de diámetro
GPS
Formol 4 -10%
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Material y reactivos para el laboratorio

Equipo, material y reactivos descrito previamente en cada práctica o experimento de éste

Manual.

PROCEDIMIENTO

Recolección y preservación del material biológico

Los hongos, líquenes y algunas algas se recolectarán en áreas continentales de los estados
de Puebla y Veracruz, mientras que los ejemplares de algas marinas serán en la costa de
Veracruz. Las técnicas de recolecta y preservación se aplicarán de acuerdo a lo propuesto
por Lot & Chiang (1986); Sánchez-González & González (2007).

Técnicas de recolección de algas marinas

Los ejemplares se desprenderán del sustrato con ayuda de una espátula, se colocarán en
bolsas de plástico de 10X20 cm y se les agregará formol al 4% hasta cubrir la muestra, los
datos de recolección se anotarán en una etiqueta de papel albanene grueso que se
incorporará en la bolsa. El material será transportado al laboratorio para su revisión y
determinación taxonómica.

Técnicas de recolección de hongos

Los ascomas y basidiomas previo a su recolección se les tomará fotografías “in situ”,
posteriormente serán desprendidos del sustrato con una espátula, se colocarán en bolsas de
papel encerado o recipientes de plástico, con la guía de campo se caracterizarán en fresco,
anotando las características morfológicas, tipo de sustrato y pruebas macro-químicas en las
etiquetas respectivas. Los ejemplares se deshidratarán con una fuente de calor (puede ser un
foco).
Técnicas de recolección de líquenes
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Los talos liquénicos serán desprendidos del sustrato con una espátula, se colocarán en bolsas
de papel de estraza de 15X30 cm o de 250 g. y se colocará la etiqueta de identificación.
Tanto los hongos como los líquenes se transportarán en una bolsa exclusiva para el material
(lona) al laboratorio para su revisión y determinación taxonómica.

Determinación taxonómica

De los ejemplares recolectados de algas, se revisarán los caracteres morfológicos externos e

internos y con la consulta de literatura especializada (p.e. Littler & Littler, 2000; Guiry & Guiry,
2019) serán identificados taxonómicamente.
En el caso de los hongos se harán preparaciones de esporas y observación de caracteres
morfológicos, así como las pruebas macro-químicas y con la consulta de literatura
especializada (p.e. Bessette et al., 2000) serán identificados taxonómicamente.
Para los líquenes además de los caracteres morfológicos, serán necesarias pruebas macro-
químicas con hidróxido de potasio, hipoclorito de sodio y parafenilenediamina y con la
consulta de literatura especializada (p.e Brodo et al., 2001) serán identificados
taxonómicamente.

Aislamiento e identificación de compuestos orgánicos

El aislamiento de compuestos orgánicos presentes en los diferentes organismos recolectados

en campo, se realizará por algún método de extracción, cromatografía en capa fina o columna,
destilación simple y arrastre de vapor. Realización de las pruebas de identificación cualitativa
del producto aislado.
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Prueba en un modelo biológico

El compuesto orgánico obtenido se aplicará para la evaluación de su efecto en un modelo
biológico utilizados en el manual de Laboratorio de Investigación Formativa II.

Elaboración del informe

El informe se entregará por escrito en equipo y se expondrá ante el grupo.

Éste deberá contener la siguiente estructura:
 Carátula
 Título (explícito)
 Resumen
 Introducción
 Hipótesis (cuando aplica)
 Objetivos
 Material y método
 Resultados
 Dicusión
 Conclusiones
 Literatura citada

CRITERIOS DE EVALUACIÓN.

Esta unidad representa el 25% de la calificación final de LIF II y se evaluará bajo los siguientes
puntos:
Anteproyecto de investigación 30%
Trabajo en laboratorio 40%
Entrega del informe final 30%

LITERATURA CITADA
Barsanti, L. & Gualtieri, P. (2014). Algae: Anatomy, Biochemistry, and Biotechnology.
New York: CRC Press.
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Bessette, A. E., Roody, W. C. & Bessette, A. R. (2000). North American Boletes: a color
guide to the fleshy pored mushrooms. United States of America, New York: Syracuse
University Press.
Brizuela, M. A., García, L., Pérez, L., & Mansur, M. (1998). Basidiomicetos: nueva fuente
de metabolitos secundarios. Rev Iberoam Micol, 15, 69-74.
Brodo, I. M., Sharnoff, S. D. & Sharnoff, S. (2001). Lichens of North America. New
Haven, United States of America: Yale University Press.
Comisión Nacional para el Conocimiento y Uso de la Biodiversidad (CONABIO).
(2011a). La Biodiversidad en Puebla: Estudio de Estado. México. Comisión Nacional
para el Conocimiento y Uso de la Biodiversidad, Gobierno del Estado de Puebla,
Benemérita Universidad Autónoma de Puebla. 440 pp.
Comisión Nacional para el Conocimiento y Uso de la Biodiversidad (CONABIO).
(2011b). La biodiversidad en Veracruz: Estudio de Estado. Comisión Nacional para el
Conocimiento y Uso de la Biodiversidad, Gobierno del Estado de Veracruz, Universidad
Veracruzana, Instituto de Ecología, A.C. México. 26 pp.
Comisión Nacional para el Conocimiento y Uso de la Biodiversidad (CONABIO). (2013).
Estrategia para la Conservación y Uso Sustentable de la Biodiversidad del Estado de
Veracruz. Comisión Nacional para el Conocimiento y Uso de la Biodiversidad. México
140 pp.
Comisión Nacional para el Conocimiento y Uso de la Biodiversidad (CONABIO). (2016).
EncicloVida. CONABIO. México, Recuperado en 14 de junio de 2019. Disponible en
línea en [Link]
Ermakova, S., Sokolova, R., Kim, S-M., Um, B-H., Isakov, V. & Zvyagintseva, T. (2011).
Fucoidans from brown seaweeds Sargassum hornery, Eclonia cava, Costaria costata:
Structural characteristics and anticancer activity. Applied Biochemistry and
Biotechnology, 164, 841-850.
Graham, L. E. & Wilcox, L. W. (2000). Algae. USA: Prentice Hall.
Guiry, M.D. & Guiry, G.M. (2019). Algae Base. World-wide electronic publication,
National University of Ireland, Galway. [Link] consultado el 10 de
junio 2019.
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Guiry, M. D. & Guiry, G. M. 2018. AlgaeBase. World-wide electronic publication, National

University of Ireland, Galway. [Link] consultado el 05 de enero de
2019.
Hawksworth, D. L. (2001). The magnitude of fungal diversity: the 1·5 million species
estimate revisited. Mycological research, 105, 1422-1432.
Herrera, T. & Ulloa, M. (1990). El Reino de los hongos. Micología básica y aplicada.
México. Fondo de Cultura Económica.
Herrera-Campos, M. A, Lücking, R, Pérez-Pérez, R. E., Miranda-González, R., Sánchez,
N., Barcenas-Peña, A., Carrizosa, A., Zambrano A., Ryan, Bruce D., & Nash III, Thomas
H. (2014). Biodiversidad de líquenes en México. Revista mexicana de biodiversidad, 85
(Supl. ene), S82-S99.
Lee, R. E. (2018). Phycology. USA: Cambridge University Press.
Littler, S. D. & Littler, M. M. (2000). Caribbean reef plants: an identification guide to the
reef plants of the Caribbean, Bahamas, Florida, and Gulf of Mexico. USA: Offshore
Graphics Inc.
Lot, A. y Chiang, F. (Eds.) (1986). Manual de Herbario, administración y manejo de
colecciones, técnicas de recolección y preparación de ejemplares botánicos. México,
D.F. Consejo Nacional de la Flora de México.
Pádua, D., Rochaa, E., Gargiuloa, D. & Ramosa, A. A. (2015). Bioactive compounds
from brown seaweeds: Phloroglucinol, fucoxanthin and fucoidan as promising
therapeutic agents against breast cáncer. Phytochemistry Letters, 14, 91–98.
Petrovska, B. B. (2012). Historical review of medicinal plants usage. Pharmacognosy
reviews, 6, 1.
Sánchez-González, A. y M. González L. (2007). Técnicas de recolecta y herborización
de plantas. En: Contreras, R. A., Goyenechea, I., Cuevas, C. C. e Iturbe, U. (eds.). La
Sistemática, base del conocimiento de la biodiversidad. Ciencia al Día 5. Instituto de
Ciencias Básicas e Ingeniería. Universidad Autónoma del Estado de Hidalgo.
Sepúlveda, G.; Porta, H.; Rocha, M. (2003). La participación de los metabolitos
secundarios en la defensa de las plantas. Rev. Mex. Fitopato, 21, 355-363.
Skoog, D. A., West, D. M., Holler, F. J. & Crouch, S. R. (2005). Fundamentos de Química
analítica. Barcelona, España: Reverté.
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Ye, H., Wang, K., Zhou, C., Liu, J. & Zeng, X. (2008). Purification, antitumor and
antioxidant activities in vitro of polysaccharides from the brown seaweed Sargassum
pallidum. Food Chemistry, 111, 428 - 432.
Webster, J. & Weber, R. W. S. (2007). Introduction to Fungi. USA: Cambridge University
Press.
William, K., Michael, C., & Charlotte, S. (2006). Conceptos de Genética. Madrid, España:
Pearson Educación.
Zhan, Z.; Ying, Y.; Ma, L.; Shan, W. (2011). Natural disesquiterpenoids., Nat. Prod. Rep.,
28, 594-629.
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Control de cambios

Fecha de Versión Descripción de la modificación Sección

revisión
03/05/2007 1 Ninguna (versión original)
10/06/2009 2 Ninguna (cada unidad de aprendizaje tenía
por separado las prácticas o experimentos y el
proyecto)
23/06/2017 3 Ninguna (versión original para el SGC
laboratorios de docencia de la FES Zaragoza)
22/01/2020 4 Corrección de redacción (reglamento general) 8
Corrección en redacción de objetivos general 17
y particulares de experimentos 1 y 2
Corrección en redacción de objetivos general 24
y particulares experimento 3
Corrección en redacción del planteamiento del 214
problema 18, 224
Incorporación de citas bibliográficas 205
Ampliación de información en la introducción
del proyecto de investigación 215
Modificación en la redacción de objetivos 216
Ampliación de información en material y 225
métodos
Ampliación de información en elaboración del
informe