Siembra y réplica de microorganismos
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1. INTRODUCCIÓN left heating for 30 minutes, then it was allowed to cool, and
the solution was placed in 2 previously sterilized bottles, the
bottles were placed in refrigeration for 7 days, then a yeast
solution was prepared in warm water and sowing proceeded
with the help of a crochet as a sowing instrument and a
candle as a sterilizing medium. This experiment was carried
out in 2 different places, in the first the yeast growth was
null, because it did not work at the optimal growth
temperature, in addition, the measurement of the ingredients
was not correct, in the second experiment it was controlled
the parameters, resulting in a remarkable proliferation of
Siembra y réplica de yeasts and the presence of isolated colonies. Finally, planting
in the laboratory with the appropriate instruments presented a
microorganismos considerable amount of biomass, in this process the
Celi Karen1; Oña Jonathan2
temperature aspects, as well as the sterilization of the
1,2
Escuela Politécnica Nacional, Facultad de Ingeniería Química y equipment were better, therefore, the results were better.
Agroindustria, Quito, Ecuador
Keywords: Culture media, proliferation of microorganisms,
Resumen: Los medios de cultivos son soluciones que YPD Medium
intentan replicar el hábitat de microorganismos para la Los medios de cultivo son soluciones líquidas, sólidas o
proliferación de estos. El objetivo de la práctica fue realizar semisólidas que intentan replicar el hábitat natural para el
la siembra de levaduras en medios caseros con la técnica de crecimiento de microorganismo en un laboratorio a
triple estría y compararlos con una siembra en un medio YPD condiciones óptimas de pH y temperatura con la finalidad de
realizado en laboratorio. Para la elaboración del medio de satisfacer las necesidades vitales para cumplir con las
cultivo casero se disolvió el cubo maggi y la gelatina en agua, exigencias de los microorganismos y lograr un proceso de
se dejó la solución en calentamiento por 30 minutos, después replicación exitoso (Nápoles, 2006).
se dejo enfriar y se colocó la solución en 2 frascos
previamente esterilizados, se colocaron los frascos en Uno de los medios de cultivo más empleado para el
refrigeración por 7 días, después se preparó una solución de crecimiento de levaduras como la Saccharomyces cerevisiae
levadura en agua tibia y se procedió a la siembra con ayuda es el medio YPD o YEPD por sus siglas en inglés Yeast
de un crochet como instrumento de siembra y una vela como Extract Peptone Dextrose. En la composición de este medio
medio esterilizante. Se realizó este experimento en 2 lugares se tiene dextrosa que es la fuente de energía, extracto de
diferente, en el primero el crecimiento de levaduras fue nulo, levadura como fuente de vitaminas, peptona como fuente de
debido a que no se trabajo a la temperatura óptima de nitrógeno, vitaminas y aminoácidos, agar bacteriológico
crecimiento, además que la medición de los ingredientes no como agente solidificante, sales y proteínas, estos
fue la correcta, en el segundo experimento se controló los componentes favorecen al crecimiento de levaduras, además
parámetros antes mencionados obteniendo como resultado de reducir el tiempo de reproducción (CONDALAB, 2019).
una notable proliferación de levaduras y la presencia de
colonias aisladas. Finalmente, la siembra en el laboratorio El agar bacteriológico es el principal agente gelificante
con los instrumentos adecuados presento una considerable empleado en la elaboración de medios de cultivo u otras
cantidad de biomasa, en este proceso los aspectos de aplicaciones, debido a la ausencia de microorganismos que
temperatura, al igual que la esterilización de los equipos fue obstaculizarían el desarrollo de los microorganismos de
mejor, por lo tanto, los resultados fueron mejores. interés, además que poseen resultados transparentes y
reproductividad confiable (CONDALAB, 2019).
Palabras clave: Medios de cultivo, proliferación de
microorganismos, Medio YPD Las levaduras son hongos unicelulares de tipo eucariótico con
paredes rígidas que presentan 2 polisacáridos que son el
manano y el glucano. Tienen gran importancia en la
Sowing and replicating elaboración y deterioro de los alimentos entre los más
microorganisms conocidos comercialmente se tienen panes, vinos y cervezas,
las levaduras más utilizadas se tienen Sacchaomyces,
Abstract: Culture media are solutions that try to replicate the Candida y Kluyveromyces (Chávez, 2008).
habitat of microorganisms for their proliferation. The
objective of the practice was to perform the yeast seeding in En los último años, las levaduras han tenido gran importancia
home media with the triple stria technique and to compare en la industria de alimentos por su colaboración en aspectos
them with a laboratory seeding in a YPD medium. For the nutritivos y aromáticos, por lo que es una fuente de
elaboration of the homemade culture medium, the maggi investigación para el biocontrol de enfermedades en plantas y
cube and the gelatin were dissolved in water, the solution was frutas (Chávez, 2008).
[Link]@[Link]
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Siembra y réplica de microorganismos
Las levaduras requieren de propiedades óptimas para su El objetivo de la práctica fue realizar la técnica de triple
correcta fermentación, entre los cuales se encuentran estría para la siembra de levaduras en medios de cultivos
(Heredia, 2015): caseros y compararlos con los resultados de una siembra
realizada en un laboratorio.
Temperatura
El rango de temperaturas óptimas para el crecimiento de 2. METODOLOGÍA
levaduras como la Saccharomyces cerevisiae se encuentra
entre los 28 a 35°C debido a que las levaduras son Se colocaron 200 mL de agua en una olla, se añadieron 2g de
termofílicas y sobre esta temperatura comienza su caldo de gallina en cubo, se añadieron 3 g de gelatina sin
destrucción. Otro tipo de levaduras pueden crecer a altas sabor, a continuación, se dejó la mezcla en ebullición durante
temperaturas de entre 40 a 55°C y resistir bajas temperaturas 30 minutos y se dejó enfriar la mezcla. Se esterilizaron los
de entre 5 a 10°C. frascos en ebullición, se colocó la mezcla en los frascos
esterilizados y se dejó el medio en refrigeración durante una
Oxígeno semana. Para la siembra se disolvió una cucharadita de
Las levaduras son aerobios por lo que la presencia de oxígeno levadura en agua tibia, después en un medio estéril, se tomó
es importante para la generación de biomasa y dióxido de un crochet como asa casera, se esterilizó en el mechero y se
carbono producidos por los carbohidratos del medio de enfrió el asa en el medio, luego se tomó el inóculo y se
cultivo. La cantidad de oxígeno necesario para producir un sembró en el medio con el método de triple estría. Se dejó
gramo de biomasa es de 0,0015 mg, si la falta de oxígeno reposar los frascos durante 2 días.
empieza a hacerse evidente en el crecimiento de la levadura
se reflejará en una menor cantidad de biomasa producida. A continuación, se muestra la composición de los
ingredientes utilizados para realizar el medio de cultivo
pH casero.
El pH óptimo para el crecimiento de levaduras se encuentra
Tabla 1. Composición Nutricional
entre 4,5 a 6,5, debido a que los ácidos orgánicos se
Componente Caldo de Gelatina sin Levadura
involucran en la sensibilidad de las levaduras. gallina en sabor (7 g)
cubo (2,5 g) (7,5 g)
Los requerimientos nutricionales de las levaduras son Energía 10 kcal 30 kcal 25 kcal
carbono (18-44%), nitrógeno (4-8%), potasio (1-3%), fósforo Energía de las grasas 5 kcal 0 kcal 0 kcal
Grasa Total 0,5 g 0g 0g
(1-3%), vitaminas en trazas. Las fuentes de carbono que se Grasa saturada 0g 0g 0g
tienen son glucosa, fructosa y manosa en concentraciones Colesterol 0 mg 0 mg 0 mg
dependientes del tipo de microorganismos. Las fuentes de Sodio 460 mg 20 mg 0 mg
nitrógenos que se encuentran son nitrato, fosfato y sulfato de Carbohidratos <1 g 0g 3g
Azúcares - 0g 0g
amonio, estos compuestos ayudan a la síntesis de Proteínas 0g 7g 3g
aminoácidos y enzimas. Las fuentes de fósforo son
consumidas por las levaduras como fosfato. Las fuentes de
potasio ayudan a regular la respiración y fermentación 3. RESULTADOS
(Heredia, 2015).
Se realizaron dos experimentos para el crecimiento de
Técnicas de siembra estría cruzada en 3 sectores. - Es la levaduras en un medio de cultivo casero para posteriormente
técnica más empleada para el aislamiento de compararlos con el crecimiento de levaduras en un medio
microorganismos en un medio de cultivo, la siembra se YPD, el cual es el ideal para estos microorganismos.
realiza en forma de barrido en tres lugares del agar con un asa
de inoculación para la separación de colonias del El primer experimento de siembra de levaduras se realizó por
microorganismo de interés como se muestra en la Figura 1 duplicado y los resultados se muestran en la Figura 2 y
(Suárez, 2016). Figura 3.
Figura 1.- Siembra en triple estría (Suárez, 2016).
Figura 2.- Crecimiento de levaduras en un medio casero del experimento 1
(primer frasco)
En el primer cuadrante la siembre es abundante, en el
segundo cuadrante es moderado y en el tercer cuadrante es
escaso (Suárez, 2016).
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Siembra y réplica de microorganismos
En la Figura 4 se determinó el crecimiento de levaduras
debido que las marcas del rayado proliferaron otorgando un
color blanco dentro del cultivo, sin embargo, no se
contabilizó la presencia de colonias aisladas, en la Figura 5 se
evidenció el crecimiento de levadura en menor cantidad, pero
las colonias aisladas fueron más evidentes, contabilizando 4
colonias aisladas, sin embargo, el medio de cultivo después
del segundo día empezó a desintegrarse debido a la falta de
Figura 3.- Crecimiento de levaduras en un medio casero del experimento 1 gelatina sin sabor que cumplió el papel de agente
(segundo frasco) solidificantes impidiendo el crecimiento microbiana, en este
caso las mediciones fueron más exactas debido a que para la
En ambos frascos se aplico la siembra por triple estría realización del medio se contó con probetas y balanza por lo
empleando un crochet como instrumento de siembra, sin que la medición fue más exacta permitiendo el crecimiento
embargo, en ninguno de los 2 casos se evidenció el adecuado de las levaduras, otro aspecto que se controló fue la
crecimiento de levaduras. Uno de los factores que pudo temperatura, a pasar de encontrarse en zonas cercanas a los
afectar el crecimiento fue la temperatura debido que el rango frascos del experimento uno, estos fueron abrigados para
de crecimiento óptimo para las levaduras se encuentra entre obtener la máxima temperatura posible para el crecimiento de
28 a 35 °C y la temperatura ambiente en el Valle de los levaduras. Al igual que el experimento 1 la siembra se realizó
Chillos durante el período de incubación fue con un crochet, sin embargo, en el primer experimento se
aproximadamente 18 °C, por lo que las levaduras no tuvieron cubrió los frascos con plástico film, mientras que en el
un correcto crecimiento. Otra de las causas se adjudicó a la segundo se utilizó las tapas propias del frasco, en el primer
falta de equipos para la medición de los ingredientes por lo caso el frasco empezó a sudar causando la presencia de agua
que al no encontrarse en las cantidades necesario el medio de entro del cultivo, algo que no sucedió en el experimento 2.
cultivo no permitió el correcto crecimiento como se muestran
existieron puntos amarillos que indica un exceso de grasa Finalmente, se tiene el experimento realizado en el
proveniente de los cubos Maggi. Las condiciones de siembra laboratorio y sus resultados se muestran en la Figura 6.
no fueron las adecuadas por lo que no se descartó una mala
siembra por el instrumento de siembra utilizado o debido a
una posible contaminación del medio son otros factores que
pudieron afectar el adecuado crecimiento de las levaduras.
El segundo experimento de siembra de levaduras se realizó
por duplicado y los resultados se muestran en la Figura 4 y
Figura 5.
Figura 6.- Crecimiento de levaduras en condiciones de laboratorio.
En el laboratorio se uso un medio YPD que es el ideal para el
crecimiento de levaduras, se utilizó los equipos adecuados
para la siembra como un clip correctamente esterilizado en el
primer caso y un asa de siembra en el segundo caso, en
ambos casos se empleó un mechero para procesos de
Figura 4.- Crecimiento de levaduras en un medio casero del experimento 2 esterilización. Finalmente, después de la siembra se dejó
(primer frasco) dentro de una estufa a una temperatura constante de 30 °C,
que es una temperatura óptima para el crecimiento de
levadura, debido a que en el laboratorio se trabajo a las
mejores condiciones se obtuvo un crecimiento de levaduras
en ambos casos donde se evidencia claramente el rayado,
además que en ambos casos se presentan colonias aisladas,
sin embargo, la siembra con el asa de siembra nos dio una
mayor cantidad de biomasa producida por lo que es mejor la
siembra con este instrumento.
Otro parámetro importante es el pH, que el caso de los 2
primeros experimentos fue difícil de medir y controlar debido
a las condiciones que se realizó el cultivo, mientras que el
Figura 5.- Crecimiento de levaduras en un medio casero del experimento 2
medio YPD tiene el pH óptimo para el crecimiento de
(segundo frasco)
levaduras.
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Siembra y réplica de microorganismos
CONCLUSIONES
El experimento 1 no presento crecimiento de levaduras,
mientras que el experimento 2 si se evidenció el crecimiento
de levaduras, además se notó la presencia de colonias
aisladas.
La diferencia entre los experimentos fue el control de las
cantidades de los ingredientes y el control de la temperatura,
donde el experimento 2 se acerco a las condiciones óptimas
de crecimiento de levaduras, observándose un crecimiento de
levaduras en el experimento 2.
La mayor proliferación de levaduras y la presencia notoria de
colonias aisladas se tiene en los medios de cultivos realizados
en el laboratorio donde se pueden controlar parámetros como
temperatura y pH, a diferencia de los medios caseros.
REFERENCIAS
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Lleida.
CONDALAB. (2019). Agar YPD. Obtenido de:
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df. (diciembre, 2020).
CONDALAB. (2019). Agar Bacteriológico Europeo.
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Heredia, K. (2015). Aislamiento e Identificación de las taxa
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capacidad fermentativa y resistencia alcohólica.
Quito, Ecuador: Universidad Politécnica Salesiana.
Nápoles, M. (2006). EFECTO DE DIFERENTES MEDIOS
DE CULTIVO EN LA MULTIPLICACIÓN
CELULAR DE Bradyrhizobium elkanii. La Habana,
Cuba: Instituto Nacional de Ciencias Agrícolas.
Suárez, C. (2016). Levadura Saccharomyces cerevisiae y la
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Cubano de Investigaciones de los Derivados de la
Caña de Azúcar
