Centrifugación
Centrifugadora de laboratorio de microplacas
La centrifugación es un método por el cual se pueden separar sólidos de líquidos
de diferente densidad por medio de una fuerza giratoria. La fuerza centrífuga es
provista por una máquina llamada centrifugadora, la cual imprime a la mezcla un
movimiento de rotación que origina una fuerza que produce la sedimentación de
los sólidos o de las partículas de mayor densidad.
Los componentes más densos de la mezcla se desplazan fuera del eje de rotación
de la centrífuga, mientras que los componentes menos densos de la mezcla se
desplazan hacia el eje de rotación. De esta manera los químicos y biólogos
pueden aumentar la fuerza de gravedad efectiva en un tubo de ensayo para
producir una precipitación del sedimento en la base del tubo de ensayo de manera
más rápida y completa.
Fundamento teórico
El objetivo de la centrifugación es separar sólidos insolubles (de partículas muy
pequeñas y difíciles de sedimentar) de un líquido. Para ello, se aplica un fuerte
campo centrífugo, con lo cual las partículas tenderán a desplazarse a través del
medio en el que se encuentren el más lento.
Velocidad angular2 x radio
Véase también: Aceleración centrífuga
Tipos de centrifugación
1- Centrifugación diferencial: Se basa en la diferencia en la velocidad de
sedimentación de las moléculas. Esta diferencia debe ser grande para que
sea observada al centrifugar. Las partículas que posean densidades
similares sedimentarán juntas. Este método es inespecífico, por lo que se
usa como centrifugación preparativa para separar componentes en la
mezcla (por ejemplo, para separar mitocondrias de núcleos y membrana)
pero no es útil para separar moléculas.
2- Centrifugación isopícnica: Partículas con el mismo coeficiente de
sedimentación se separan al usar medios de diferente densidad. Se usa
para la separación de ADN con mucha frecuencia.
3- Centrifugación zonal: Las partículas se separan por la diferencia en la
velocidad de sedimentación a causa de la diferencia de masa de cada una.
La muestra se coloca encima de un gradiente de densidad preformado. Por
la fuerza centrífuga las partículas sedimentan a distinta velocidad a través
del gradiente de densidad según su masa. Se debe tener en cuenta el
tiempo de centrifugación ya que si se excede, todas las moléculas podrían
sedimentar en el fondo del tubo de ensayo.
4- Ultracentrifugación: Permite estudiar las características de
sedimentación de estructuras subcelulares
(lisosomas, ribosomas y microsomas) y biomoléculas. Utiliza rotores
(fijos o de columpio) y sistemas de monitoreo. Existen diferentes maneras
de monitorear la sedimentación de las partículas en la ultracentrifugación,
el más común de ellos mediante luz ultravioleta o interferómetros.
Equipos para centrifugación
La centrifugación en el laboratorio se realiza por medio de un aparato
llamado centrífuga, en el cual se colocan tubos de ensayo que contienen la
mezcla; la centrífuga gira con tal velocidad que separa el sólido y lo deposita en
el fondo del tubo. Luego se efectúa una filtración o una decantación. Este
procedimiento, es muy útil cuando el sólido que está disperso en el líquido es
muy fino y no sedimenta.