Licenciatura en Químico Farmacobiólogo
Facultad de Ciencias Químicas
Laboratorio de bacteriología
NRC: 23903
Docente: León Tello Gloria
CARACTERIZACIÓN DEL GÉNERO Pseudomonas
Integrantes:
Álvarez Rodríguez Cinthia Jazmín
Hernández Rodríguez Erika Fabiola
08 de Febrero, Primavera 2021
CARACTERIZACIÓN DEL GÉNERO Pseudomonas
ÁLVAREZ RODRIGUEZ CINTHIA JAZMÍN Y HERNÁNDEZ RODRIGUEZ ERIKA
Benemérita universidad Autónoma de Puebla, Facultad de Ciencias Químicas, Departamento de
Microbiología
DOCENTE M.C GLORIA LEÓN TELLO
LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA I
Prueba Pseudomona Pseudomona Psudomona Ps. Burkholderi
s s s alcaligene a cepacia
Aeruginosa Flourescens Putida s
piocianin + - - - -
a
pioverdin + + + - -
a
Reducció V(74%) V(19%) - +/- -
n de
niratos
Desarroll + - - - +
o a 42 °C
O/F - o o o -
TSI k/k k/k k/k k/k k/k
MIO (+)(-)(+) (+)(-)(+) (+)(-)(+) (+)(-)(+) (+)(-)(+)
Cuestionario 1.
1. ¿Cuál es la importancia del género Pseudomonas?
Pseudomonas aeruginosa es una bacteria gram-negativa perteneciente a la
rama γ de las proteobacterias, misma a la que pertenecen las
enterobacterias. Dentro del género Pseudomonas se encuentran también
algunas otras especies como P. fluorescens, P. putida, P. syringae y P.
alcaligenes. P. aeruginosa se encuentra ampliamente distribuida en la
naturaleza, se puede aislar de muestras de suelo, aguas pristinas y
contaminadas, asi como de plantas y animales. Todas las cepas son
potencialmente patógenas para el hombre y algunas pueden infectar
también a plantas como Arabidopsis thaliana, y a invertebrados
como Caenorhabditis [Link] bacteria es capaz de utilizar una enorme
variedad de compuestos orgánicos como sustrato para crecer, capacidad
que le permite colonizar nichos en los que son escasos los nutrimentos que
otros organismos pueden asimilar. Se ha reportado el aislamiento de P.
aeruginosa de ambientes tan inhóspitos como son el combustible de avión,
soluciones de clorhexidina y el jabón.
Para empezar este capítulo es interesante mencionar que P.
aeruginosa tiene importancia para el hombre tanto porque le representa
problemas, como porque puede ser útil en el tratamiento de la
contaminación ambiental .Contrariamente a lo que parece, todos nosotros
estamos en contacto diariamente con Pseudomonas aeruginosa, ya que se
encuentra en bajas cantidades en nuestros alimentos y en algunos artículos
de [Link] hecho, se obtienen aislamientos de esta bacteria a partir de
entre el 2 y el 8% de las heces de personas sanas,lo que nos muestra que
nuestro contacto con esta bacteria es cotidiano y sólo representa una
amenaza para nuestra salud en condiciones especiales, como veremos a
continuación.
P. aeruginosa representa un problema importante de salud en centros
hospitalarios, especialmente cuando se trata de pacientes con cancer o
[Link] vez que se establece la infección, P. aeruginosa produce
una serie de compuestos tóxicos que causan no sólo daño tisular extenso,
sino adicionalmente interfieren con el funcionamiento del sistema
[Link] las proteínas que intervienen en la infección de P.
aeruginosa encontramos toxinas, como las exotoxinas A y S, así como
enzimas hidrolíticas que degradan las membranas y el tejido conjuntivo de
diversos órganos..Esta situación se ve agravada por la dificultad para tratar
las infecciones por P. aeruginosa, ya que esta bacteria presenta una muy
alta resistencia natural a distintos antibióticos y a desinfectantes.
2. ¿Qué pruebas de laboratorio permiten diferenciar una enterobacteria del
género Pseudomonas?
2.1 O-F (oxidación -fermentación): En condiciones aerobias las bacterias
pueden oxidar la glucosa hasta CO2 gas. El oxígeno es el aceptor final de
e- en el metabolismo respiratorio. en condiciones anaerobicas en ausencia
de un aceptor de e- como nitrato, las bacterias sólo pueden utilizar la
glucosa por vía fermentativa. En este test se evalúa la capacidad de las
bacterias para oxidar y/o fermentar produciendo ácido que se detecta
gracias al azul de bromotinol (indicador de pH) Es útil en la distinción de
pseudomonas y enterobacterias. Se inoculan tubos de medio con asas de
punta recta. Uno de los tubos se recubre con aceite de parafina para
aislarlo del oxígeno (tubo de fermentación) y otro no (tubo de oxidación).
2.2 Oxidasa: La presencia de citocromo C oxidasa en la cadena de trasporte de
e- puede detectarse utilizando un aceptor de e- artificial p-fenilendiamina.
Este test se usa para diferenciar pseudomonas (positivo) de enterobacterias
(negativo). Se impregnan discos de papel con parafenilandiamina y se
coloca en un cultivo creciendo en placas de agar nutritivo.
3. ¿Para qué es útil el medio O/F y cuál es su fundamento?
Permite evidenciar la acción de las bacterias sobre los carbohidratos. El
medio Hugh-Leifson es una basa a que, tras esterilizar, se añade un
azúcar, normalmente glucosa esterilizada por filtración. Por ello, si
decidimos que una batería es oxidante o fermentadora, se entiende con
respeto al metabolismo de la glucosa.
Se realiza en dos tubos con medio semisólido que inicialmente son de color
verde. Se inoculan por la picadura en el centro del tubo y unos de ellos se
cubre con parafina liquido estéril (que impide el contacto del medio con el
oxígeno atmosférico).
El indicador es azul de bromotimol, que en medo acido (el metabolismo de
los azucares produce ácidos, tanto en presencia como en ausencia de
oxígeno) es de color amarillo. Si el microorganismo es únicamente oxidante
(Pseudomonas, etc.), des puede de incubar solo estará amarillo el medio
sin cubrir con parafina, si es oxidante y fermentador (caso de las
enterobacterias), en ambos tubos el color virara a amarillo y si solo puede
utilizar el azúcar cuando no hay oxigeno seria fermentado (tubo con
parafina amarillo) si la bacteria no oxida ni fermenta azúcar añadido, los
tubos no viran.
Como todo medio de cultivo, el medio OF debe contener sustancias
nutritivas que garanticen el crecimiento bacteriano; estas sustancias son las
peptonas.
Por su parte, el carbohidrato proporciona energía y a la vez sirve para
estudiar el comportamiento del microorganismo frente a él, es decir, permite
clasificar a la bacteria como un organismo oxidativo, fermentativo o no
sacarolítico.
El medio OF contiene una relación de peptona/carbohidrato de 1:5 a
diferencia de los medios convencionales de 2:1. Esto garantiza que la
cantidad de aminas alcalinas formadas a partir de la degradación de las
peptonas no neutralice la formación de ácidos débiles.
Por otra parte, el medio contiene cloruro de sodio y fosfato dipotásico. Estos
compuestos estabilizan osmóticamente al medio y regulan el pH
respectivamente. El azul de bromotimol es el indicador de pH, el cual hace
virar el color del medio de verde a amarillo con la producción de ácido.
Algunos microorganismos pueden utilizar los carbohidratos por la vía
oxidativa o por la vía fermentativa, mientras que otros no toman ninguna de
las dos vías.
Esto depende de la característica de cada microorganismo. Por ejemplo,
algunos microorganismos aerobios estrictos pueden oxidar determinados
carbohidratos, y los anaerobios facultativos pueden oxidar y fermentar
dependiendo del ambiente que los rodee, mientras que otros no oxidan ni
fermentan los carbohidratos (asacarolíticos).
Finalmente, existe una modificación del medio OF recomendada por la CDC
que contiene una base especial OF con rojo fenol como indicador.
4. ¿Por qué es importante utilizar el medio Seller´s, en la identificación de
Pseudomonas?
Es un medio útil para identificar y diferenciar a Pseudomonas de otros no
fermentadores. La diferenciación se basa en fenómenos de fluoresencia,
oxidación de la glucosa, producción de nitrógeno gaseoso y cambios de pH.
Observados bajo la acción de la luz ultravioleta solamente fluorescen
Pseudomonas.
La fluorescencia se estimula por el magnesio y el manitol presentes en el
medio.
Algunas veces es necesario dos días para que Pseudomonas produzca una
reacción típicamente alcalina (color azul en el fondo).
Produce fluorescencia en la superficie amarillo-verdosa y gas nitrógeno a
diferencia de los demás que no la producen.
El Agar Sellers es un medio muy útil para identificar y diferenciar bacilos
gram negativos y no fermentadores, como Pseudomonas aeruginosa y
Alcaligenes faecalis. La diferenciación se basa en la detección de
fluorescencia, oxidación de la glucosa, producción de nitrógeno gaseoso y
cambios de pH, a partir de muestras clínicas y otros materiales.
5. ¿Qué pruebas de laboratorio son útiles para diferenciar especies de
Pseudomonas?
Agar cetrimida: Medio selectivo para el aislamiento de Pseudomonas
aeruginosa. Este medio promueve la producción tanto de piocianina como
la fluorescencia bajo la luz ultravioleta.
6.
Fundamento de la prueba de nitratos a nitritos
En esta prueba se detecta una respiración anaerobia: la que utiliza nitrato
como aceptor final de electrones. Los nitratos se reducen a nitritos y
algunas bacterias reducen los nitritos a productos gaseosos ( N 2 y N2O).
Las enzimas responsables de ambas reducciones se
denominan nitrato y nitrito reductasa, respectivamente.
El nitrito reacciona con dos reactivos: ácido sulfanílico y dimetil-a-
naftilamina (o a-naftilamina). La reacción de color se debe a la formación de
un compuesto diazonio, psulfobenceno-azo-αnaftilamina.
Cuando la prueba resulta negativa para nitritos se utiliza la prueba del zinc
para reducir químicamente los nitratos presentes a nitritos y formar con los
reactivos de Griess el compuesto colorido.
Bibliografía
1. Abdel-Haq NM1, Papadopol R, Asmar BI, Brown WJ. Antibiotic susceptibilities
of Yersinia enterocolitica recovered from children over a 12-year period. Int J
Antimicrob Agents. 2006;27:449-52.
2. Achtman M, Zurth K, Morelli G, Torrea G, Guiyoule A, Carniel E. Yersinia
pestis, the cause of plague, is a recently emerged clone of Yersinia
pseudotuberculosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 1999;96:14043-8
3. Altorfer R, Altorfer R, Altwegg M, Zollinger-Iten J, von Graevenitz A. Growth of
Aeromonas spp. on cefsulodin-irgasan-novobiocin agar selective for Yersinia
enterocolitica. J Clin Microbiol. 1985; 22: 478-80.
